共轭亚油酸在干预大鼠胫骨骨折中对血生化的影响及放射学分析.docx

共轭亚油酸在干预大鼠胫骨骨折中对血生化的影响及放射学分析

（1青海省人民医院青海西宁810001）
（2苏州大学附属第一医院江苏苏州215006）
【摘要】目的：观察共轭亚油酸（CLA）对大鼠骨折愈合的影响。方法：体重200g左右的雌性Sprague-Dawley大鼠30只随机分成2组，每组15只:空白对照组（A）;CLA干预组(B)，将各组大鼠制作左胫骨中段骨折模型;A组给予生理盐水灌胃，B组给予共轭亚油酸灌胃干预(10g/Kg·diet)。于第2周、第4周、第6周检测碱性磷酸酶；行DR摄片并评分。结果：血清碱性磷酸酶（ALP）活性在骨折后2周时两组对比有显著性差异(P<0.01)，X线摄片评价显示共轭亚油酸干预组4周骨折线模糊，骨折端骨痂体积大、骨痂数量多，三名骨折医生对骨折后6周进行评分较空白对照组具有明显统计学差异。根据实验结果推测：①共轭亚油酸可以促进骨折愈合。②增强机体内成骨活动，提高ALP的活性。
【关键词】共轭亚油酸；骨折愈合；碱性磷酸酶；X线评分
R965A2095-1752（2015）07-0232-02
近年来的广泛研究证明，共轭亚油酸有多种生物学活性，例如减少动脉粥样硬化的严重程度，改善免疫不良刺激的影响，改善瘦素抵抗来发挥其降脂，CLA可以抑制肿瘤细胞繁殖、抑制肿瘤细胞向细胞外基质成分和纤维粘连蛋白粘附的作用且具既无毒又无任何副作用的生物安全性。目前国内、外没有关于CLA对骨折愈合方面的相关研究，故设计本实验研究CLA对骨折愈合的影响。
1.动物及主要材料
1.1实验动物
雌性Sprague-Dawley大鼠30只，清洁级，体质量(200±15)g［北京维通利华实验动物养殖中心，动物合格证号SCXK(京)2007-0001号］。
1.2试剂和仪器
共轭亚油酸(顺-9，反-11CLA，37.6%；反-10，顺-12CLA，39.3%；C18:1，10.1l%；c18:O，2.04%，青岛澳海生物有限公司)
2.实验方法
2.1动物分组
将30只雌性SD大鼠骨折造模后随机分成2组，每组15只，A空白对照组（Control）：给予生理盐水灌胃，B给予共轭亚油酸（CLA）灌胃干预(10g/Kg·diet)。
2.2骨折大鼠骨折模型的建立与给药方法
用10%水合氯醛以3mL/kg进行腹腔注射麻醉，将大鼠仰卧，四肢固定于手术台上，各组大鼠行左侧胫骨中段纵形皮肤切口，长约2cm，沿胫前肌肌间隙钝性分离达胫骨干，固定胫骨，在胫骨干中段用线锯锯断成横行骨折，此过程注意保护神经和肌肉组织，再以直径为0.8mm的克氏针逆行穿入骨折近端且从胫骨结节穿出，复位骨折后再将其顺行穿入骨折远段髓腔，生理盐水冲洗，逐层关闭伤口。不包扎，不固定。术后在大鼠尾部标记，待麻醉醒后放入笼中喂养，自由取食、饮水。
每天18：00灌胃一次，灌胃剂量为：A组给予生理盐水灌胃，B组给予共轭亚油酸灌胃干预(10g/Kg·diet)，其他食物统一给标准鼠粮。各组大鼠均自由进食饮水，12h光照周期。
2．3检测标本采集：
2.3.1血清碱性磷酸酶（ALP）测定：骨折造模后第2周、第4周和第6周，处死5只实验大鼠取1.5ml血，离心后取上清液测定。
2.3.2X射线检查大鼠胫骨骨痂的连续性及骨折愈合情况：在胫骨骨折造模后第2周、第4周和第6周将各组大鼠用10%水合氯醛以3mL/kg进行腹腔注射麻醉后计算机X射线摄相仪(DR)摄片，拍摄条件为50kV，2.5ms，观察大鼠胫骨骨痂的连续性及骨折愈合情况。
表1：骨痂形成的影像学分级量表
骨痂形成的影像学评分:每张片均由3名骨科医生分别评分，取平均值，对骨折断端愈合组织具体评分标准如下:
2.4统计分析
测定数据采用SPSS16.0进行数据处理，两组间比较采用t检验，设P<0.05为差异有显著性意义。
3实验结果
3.1血生化指标检测结果：
骨折2、4、6周后CLA干预组和空白对照组ALP浓度均有不同程度的升高，CLA干预组在2周时ALP浓度均明显高于生理盐水对照组（p=0.0126）;骨折后4周、6周CLA干预组血清ALP浓度均高于生理盐水A组，无统计学意义（图1）。
图1：空白与CLA两组在不同时间点对大鼠血清ALP浓度的测定，在2周时CLA干预组ALP浓度均明显高于生理盐水对照组（p=0.0126）。
3.2X线检查结果：
骨折2周空白组：0.83±0.19分；CLA干预组：1.08±0.16分。骨折4周空白组：3.0±0.33分；CLA干预组：3.66±0.33分、骨折6周空白组：3.38±0.36分；CLA干预组：4.43±0.57分。骨折6周时CLA干预组的评分明显较对照高。
4讨论
本实验结果提示CLA对骨折愈合有促进作用。通过对骨折不同时间点观察血清ALP和放射学检查说明经过CLA干预后的大鼠骨折愈合明显优于空白对照组。血清ALP在骨折后2周明显高于空白对照组P=0.0126，而且在术后第4、6周，CLA干预组的ALP均高于空白对照组，虽然两组对比无统计学意义，但是发现CLA干预组的ALP保持一定的水平，我们认为CLA可以提高ALP的活性，从而说明CLA有助于骨折早期愈合。放射学的检查同样证实这一点，选3名骨科医生对X线光片的评价，并应用统一的骨痂愈合评分标准，我们发现在术后第6周，CLA干预组的评分3.38±0.36分，空白对照组评分4.43±0.57分，CLA干预组明显优于空白对照组P<0.05，2、4周两组虽没有统计学意义，但是CLA干预组的评分均优于空白对照组。以上的结果说明CLA可以促进骨痂形成，有助于骨折愈合。

-全文完-