流苏树花粉活力、柱头可授性和不同属间的远缘杂交初探.pdf

DOI:10.12171/j.10001522.20230292流苏树花粉活力、柱头可授性和不同属间的远缘杂交初探刘翠双李际红牛牧歌孙茂桐刘源刘来硕郭历阳王锦楠（山东农业大学林学院，山东泰山森林生态系统国家定位观测研究站，黄河下游森林培育国家林业和草原局重点实验室，山东泰安271018）摘要:【目的】探讨流苏树全雄花和两性花的花粉活力、柱头可授性的变化、有效授粉期和不同属间的远缘杂交，为改良流苏树花色和杂交育种提供依据。【方法】采用花粉离体培养法对流苏树、连翘和丁香进行花粉活力测定；利用联苯胺过氧化氢法检测流苏树两性花柱头可授性；以流苏树雪早花为母本，丁香、连翘为父本，利用蒙导法授粉，开展属间杂交研究；授粉后，通过荧光显微镜分别观察 2 个杂交组合与 2 个对照组合花粉管的伸长生长情况，并对果实的表型和杂种胚进行观察；授粉 70d 后胚开始固化时，进行杂种苗的培育。【结果】（1）流苏树全雄花和两性花的花粉活力差异显著，全雄花花粉活力（55.91%）显著高于两性花花粉活力（42.94%）。（2）新鲜连翘花花粉活力为 65.72%，20 条件下贮藏 28d花粉活力为 12.78%；新鲜丁香花花粉活力为 66.21%，20 条件下贮藏 15d 花粉活力为 26.35%。（3）流苏树柱头可授性在不同花发育时期呈现：盛花期始花期末花期花蕾期，最佳授粉时间为盛花期。（4）授粉后对花粉管的伸长进行荧光观察发现，蒙导授粉后 2 个杂交组合花粉管均能伸入胚珠完成授精。（5）2 种杂交组合授粉 37d 后胚开始形成，70d 后开始固化，胚结构快速生长，120d 果实发育成熟，最终获得蒙导丁香杂交组合的种子 121 粒，蒙导连翘杂交组合的种子 63 粒。（6）授粉 70d 后，选用每个杂交组合固化的 60 个杂种胚进行无菌苗培育，获得蒙导丁香杂交组合的杂种苗 18 株，连翘杂交组合的杂种苗 14 株。【结论】流苏树的全雄花花粉活力明显高于两性花；20 条件下能够较长时间地贮存连翘和丁香的花粉，保证流苏树花期授粉的需求；流苏树柱头可授性在盛花期最强，此时进行蒙导法授粉，可有效保证远缘杂交的顺利实施，并为获得不同花色流苏树新品种奠定基础。关键词：流苏树；蒙导法授粉；花粉活力；柱头可授性；远缘杂交中图分类号：S792.99；S685.99文献标志码：A文章编号：10001522(2024)04001414引文格式：刘翠双，李际红，牛牧歌，等.流苏树花粉活力、柱头可授性和不同属间的远缘杂交初探 J.北京林业大学学报，2024，46(4)：1427.LiuCuishuang,LiJihong,NiuMuge,etal.Preliminarystudyonpollenvitality,stigmareceptivityanddistanthybridizationbetweendifferentgeneraofChionanthus retususJ.JournalofBeijingForestryUniversity,2024,46(4):1427.Preliminary study on pollen vitality,stigma receptivity and distant hybridizationbetween different genera of Chionanthus retususLiuCuishuangLiJihongNiuMugeSunMaotongLiuYuanLiuLaishuoGuoLiyangWangJinnan(MountainTaiForestEcosystemResearchStationofNationalPositioningObservation,KeyLaboratoryofNationalForestryandGrasslandAdministrationforSilvicultureoftheLowerReachesofYellowRiver,CollegeofForestry,ShandongAgriculturalUniversity,Taian271018,Shandong,China)Abstract:Objective This paper aims to explore the pollen viability,stigma receptivity,effectivepollinationperiod,andinterspecificdistanthybridizationbetweenthemaleandhermaphroditicflowersof收稿日期:20231026修回日期:20231127基金项目:山东省重点研发计划“重大科技创新工程”项目（2021LZGC023），山东省农业科技资金“林业科技创新”（2019LY001）。第一作者:刘翠双。主要研究方向：林木遗传育种。Email：地址：271000 山东省泰安市泰山区岱宗大街 61 号山东农业大学。责任作者:李际红，博士，教授。主要研究方向：林木遗传育种。Email：地址：同上。本刊网址:http:/；http:/第46卷第4期北京林业大学学报Vol.46，No.42024年4月JOURNALOFBEIJINGFORESTRYUNIVERSITYApr.，2024Chionanthus retusus and provide a foundation for improving flower color and hybrid breeding ofChionanthus retusus.Method The pollen viability of Chionanthus retusus,Forsythia suspensa andSyringa oblatawasdeterminedbypolleninvitroculturemethod.ThestigmareceptivityofhermaphroditicflowersofChionanthus retususwasdetectedbybenzidine-hydrogenperoxidemethod.UsingChionanthusretususXuezaohuaasthefemaleparentandForsythia suspensaandSyringa oblataasthemaleparent,intergenerichybridizationresearchwascarriedoutbymentopollenpollinationmethod.Afterpollination,weobserved the elongation and growth of pollen tubes in two hybrid combinations and two controlcombinationsusingthebenzidinebluefluorescencemicroscopy,aswellasexaminedthecharacteristicsoftheresultingfruitsandhybridembryos.After70dofpollination,whentheembryobegantosolidify,hybridseedlingswerecultivated.Result(1)Therewasasignificantdifferenceinpollenviabilitybetweenthemaleflowerandhermaphroditeflower.Thepollenviabilityofthemaleflower(55.91%)wassignificantlyhigherthanthatofthehermaphroditeflower(42.94%).(2)ThepollenvitalityoffreshForsythia suspensapollenvitalitywas65.72%,andthepollenviabilityofForsythia suspensastoredfor28dat20was12.78%.ThepollenviabilityoffreshSyringa oblatapollenvitalitywas66.21%,andthepollenviabilityofSyringa oblatastoredfor15dat20was26.35%.(3)ThestigmareceptivityofChionanthus retususpresented in different flower development stages：full flowering stage initial flowering stage finalflowering stage bud stage,and the best pollination time was full flowering stage.(4)Fluorescenceobservationofpollentubeelongationaftermentopollenpollinationrevealedthatthepollentubesofbothhybrid combinations were able to extend into the ovule for fertilization.(5)After 37 d of pollination,embryosbegantoformintwohybridcombinations,andafter70d,thesolidifiedembryostructurebegantogrowrapidly.After120d,thefruitmatured.Finally,121seedsofthementopollenpollinationinSyringaoblata hybrid combination and 63 seeds of the mento pollen pollination in Forsythia suspensa hybridcombinationwereobtained.(6)After70dofpollination,60hybridembryossolidifiedfromeachhybridcombinationwereselectedforsterileseedlingcultivation,resultingin18hybridseedlingsfromthementopollenpollinationinSyringa oblatahybridcombinationand14hybridseedlingsfromthementopollenpollinationinForsythia suspensahybridcombination.ConclusionThepollenviabilityofmaleflowersintheChionanthus retususissignificantlyhigherthanthatofhermaphroditicflowers.StoringthepollenofForsythia suspensaandSyringa oblataat20foranextendedperiodensuresthepollinationrequirementsfortheChionanthus retusus.ThestigmareceptivityofChionanthus retususisstrongestduringthefullfloweringstage,andpollinationusingthementopollenpollinationmethodcaneffectivelyensurethesmoothimplementationofdistanthybridizationandlaythefoundationforobtainingnewvarietiesofChionanthusretususwithdifferentflowercolors.Key words:Chionanthus retusus;recognition pollen;pollen vitality;stigma receptivity;distanthybridization流苏树（Chionanthus retusus）为木犀科（Oleaceae）流苏树属（Chionanthus）落叶乔木，主要分布在中国、日本和朝鲜半岛等地，是我国优良的乡土树种，也是优良的园林绿化树种，盛花期时，满树白花，如覆霜盖雪，故称“四月雪”13。自然界中，流苏树属植物为雄全异株，有全雄花和两性花 2 种类型，全雄花仅有雄蕊，两性花同时具有雌蕊和雄蕊4。雄全异株在被子植物中所占比例较少，但在木犀科中却比较普遍，例如桂花（Osmanthus fragrans）、短丝木犀（O.serrulatus）等。在雄全异株植物研究过程中发现，两性株和雄株的花粉活力存在差异。郝日明等5在桂花的研究过程中发现：两性株产生的花粉有一定的活力，但较雄性株花粉活力差。杨国栋等6在短丝木犀中也发现，雄花花粉活力显著高于两性花。而雄全异株流苏树两性花和全雄花花粉活力的相关研究鲜见报道。杂交育种是新品种选育的一种重要的手段，在杂交过程中果实坐果依赖双受精过程的完成，其中花粉是植物的雄配子，柱头为花粉的附着及萌发、花粉管的伸长提供基础。花粉活力的保持、柱头的发育及可授性一直是研究者们关注的焦点7。柱头的寿命有限，并且因物种不同有很大差异，从花后数小第4期刘翠双等：流苏树花粉活力、柱头可授性和不同属间的远缘杂交初探15时到数天不等，如：百香果（Passiflora edulis）柱头可授性在开花 7h 较强，花后 20h 可授性降低，较弱8；而狭瓣辣木（Moringa stenopetala）的柱头活性可维持数天9。花粉在常温下的寿命更加有限：白丁香10（Syringa oblatavar.alba）花粉常温下保存 7d 后即失去活力；自然条件下，连翘（Forsythia suspensa）11花粉寿命仅可维持 10d。因此，探究花粉活力的保持方法和柱头可授性变化规律，对提高杂交育种效率具有重要的实际意义。研究学者进一步发现：属间杂交可以突破种的界限，获得特异性更加突出的新品种，但因父、母本亲和性差，仅能获得少量杂交种，如紫薇属（Lagerstroemia）与黄薇属（Heimia）属间杂交12，以及夏蜡梅（Sinocalycanthus chinensis）与光叶红蜡梅（Calycanthus floridusvar.oblongifolius）属间杂交13，均获得了极少量杂交种。为克服杂交不亲和性，常在具有生活力的不亲和花粉中混入一些被杀死的亲和花粉，使柱头被蒙骗，不能识别不亲和的花粉，从而实现受精。这种已丧失亲和力的花粉起到蒙导作用，故被称为蒙导花粉，这种方法因而被命名为蒙导授粉法。蒙导授粉法在杂交育种中被广泛应用14，如：在牡丹（Paeonia suffruticosa）和芍药（P.lactiflora）远缘杂交过程中，通过蒙导授粉将杂交种的结实率提高至 21.43%15；在三角枫（Acerbuergerianum）和金沙槭（Acer paxii）中，以蒙导授粉法进行杂交育种，从而获得了杂交种16。而孙博文等17在甜瓜（Cucumis melo）远缘杂交后，通过胚培养，有效提高了远缘杂交的结实率，获得了更多的杂种苗。流苏树作为优良的观赏树种，花色仅见白色，花部的相关研究主要集中在花香等方面18，其花粉活力、柱头的可授性和杂交育种等相关方面的研究鲜见报道19。本研究将对流苏树全雄花和两性花的花粉活力进行检测；并以流苏树两性株雪早花（Chionanthus retususXuezaohua）为母本，探究其柱头可授性的变化规律，以丁香（Syringa oblata）和连翘（Forsythia suspensa）的花粉为父本，采用蒙导法进行属间杂交，观察花粉管的伸长，统计坐果率，以及观察杂种胚和果实表型，后进行杂种苗培育，旨在探究流苏树属间杂交的可行性，为流苏树的花色改良奠定基础，为加快流苏树的种质创新进程提供依据。1材料与方法1.1 花粉材料20212023 年，3 月 2831 日于山东农业大学泮河校区收集连翘花粉；4 月 810 日于泰山林科院收集丁香花粉；4 月 20 日左右于山东农业大学泮河校区采取流苏树全雄花的花粉，于山东农业大学植保站采集流苏树雪早花两性花花粉；干燥后冻存，用于后续试验。流苏树全雄花和两性花的解剖结构如图 1 所示。ABA.全雄花解剖图；B.两性花解剖图。比例尺为 5mm。A,anatomicalmapofallmaleflowers;B,anatomicalmapofhermaphroditeflowers.Thescaleis5mm.图1流苏树全雄花和两性花解剖图Fig.1AnatomicalmapofallmaleandhermaphroditeflowersofChionanthus retusus1.2 研究方法1.2.1不同温度条件下花粉活力测定参照杨延红等20和纪文跃等21方法，离体培养连翘、丁香的花粉，设置室温、4、203 个温度条件，在 027d 的时间内，每隔 3d 各取 3 个温度条件下的花粉进行花粉活力测定。同样参照何艳霞等4对流苏树全雄花花粉和两性花雪早花花粉离体培养，温度设置如上，在 018d 的连续观察中，每隔 3d 各取 3 个温度条件下的花粉进行花粉活力测定，每次设置 3 个重复，每个重复观察 5 个视野。花粉活力为萌发花粉数量占花粉总数量的百分比，并取 3 年测定结果的均值。1.2.2雪早花柱头的可授性检测前期研究22发现：流苏树两性株雪早花花期分为花蕾期（4 月 1013 日）、始花期（4 月 1517 日）、盛花期（4 月 1923 日）、末花期（4 月 2530 日）16北京林业大学学报第46卷4 个时期。每天 09：0011：00，采集雪早花花蕾期12d，始花期 13d，盛花期 14d，末花期 1d的流苏树小花，每次采集 20 个柱头，后置于塑封袋中，带至实验室即刻进行柱头可授性检测。参照王其刚等23和孙建等24方法，利用联苯胺过氧化氢反应液检测柱头可授性，柱头可授性强弱依照柱头周围的反应液产生的气泡数量判断，并分为 4 级（1 级标记为/+；2 级标记为+；3 级标记为+；4 级标记为+）。1.2.3杂交组合和对照组合的设定连续 3 年以雪早花为母本，分别以丁香混合花粉（高温灭活的母本亲和花粉与丁香花粉质量比为11）和连翘混合花粉（高温灭活的母本亲和花粉与连翘花粉质量比为11）为父本，进行蒙导授粉，记为杂交组合 N1 和 N2，并设置 2 个对照组合 CK1和 CK2。N1 具体为：母本花药尚未开裂，柱头明亮时去雄，随即授丁香混合花粉，重复 3d，共授粉 2800朵小花。N2 具体为：母本花药尚未开裂，柱头明亮时去雄，随即授连翘混合花粉，重复 3d，共授粉 2000朵小花。CK1 具体为：母本不去雄，套袋，自花授粉，共授粉套袋保护 700 朵小花。CK2 具体为：不去雄，不套袋，开放式传粉，挂牌标记，共选择 300 朵小花。1.2.44 种组合的花粉管伸长观测连续 3 年分别采集 4 个组合（N1、N2、CK1、CK2）中授粉 3d 后 6、8、10、16、24、48、72h的雌蕊，每个时期分别采集 10 个雌蕊，用 FAA（50%乙醇、冰醋酸、甲醛体积比为 1811）固定 24h 以上，4 冰箱保存。参照薛志霞等25的方法并做了部分优化，将固定好的雌蕊依次放入 70%、50%、30%浓度的乙醇处理 5min，后用蒸馏水清洗 3 次，浸于2mol/LNaOH 溶液中，置于 60 水浴锅中软化30min，再用蒸馏水清洗 3 次，用滤纸吸去多余的水分，放入 0.1%苯胺蓝溶液中染色。将染色完全的材料去除花萼后压片，在荧光显微镜下观察柱头上的花粉萌发和花粉管生长情况，并拍照。每个组合每次选取 5 个雌蕊，3 次重复。观测结果取 3 年的均值。1.2.54 种组合的杂种胚发育、果实表型观察和坐果率统计连续 3 年，对 4 个组合（N1、N2、CK1、CK2）中授粉 7、14、21、30、60、90、120d 的果实表型特征进行拍照记录，并对 2 种杂交组合授粉 37120d 后杂种胚的变化过程进行观察，120d 时，对 4 个组合的坐果率进行统计，坐果率为坐果数占总授粉花朵数的百分比，结果取 3 年坐果率的均值。1.2.62 种杂交组合杂种苗培育参照李旭新等26的方法，于授粉后 70d 左右，杂种胚开始固化时，取 2 种杂交组合产生的杂交果实去除果肉，在流水下冲洗 30min，然后转移到超净台中，用 75%的乙醇浸泡 1min，浸泡结束后用无菌水冲洗 45 次，再用 0.1%升汞浸泡 5min，浸泡结束后用无菌水冲洗 45 次，摊开晾在无菌滤纸上吸干水分。用无菌解剖刀和镊子剥除种壳、种皮及胚乳，获取杂种胚。每个杂交组合采集 60 个胚。设置空白培养基和加入水解酪蛋白（0、300mg/L）的培养基，将无菌的杂种胚分别接入培养基中，每瓶接3 个，设置 3 个重复，共 40 瓶。统计胚的生长情况、杂种苗的成苗率，并将杂种苗进行移植驯化。1.3 数据统计分析采用 MicrosoftExcel2019 软件进行数据分析和图表的绘制；SPSSStatistics20.0 软件进行统计分析，包括单因素方差分析及多重比较。2结果与分析2.1 流苏树两性花和全雄花花粉活力的差异分析不同温度条件、不同贮藏时间下流苏树两性花、全雄花 2 类花粉的活力变化见表 1，其中，在同一温表1不同温度条件下贮藏不同天数两性花和全雄花的花粉活力Tab.1Pollenvitalityofhermaphroditeandmaleflowersstoredfordifferentdaysundervariedtemperatureconditions贮藏天数Storagedays花粉活力Pollenviability/%室温Roomtemperature420两性花Hermaphroditeflower全雄花Allmaleflowers两性花Hermaphroditeflower全雄花Allmaleflowers两性花Hermaphroditeflower全雄花Allmaleflowers042.943.30b55.911.03a42.943.30b55.911.03a42.943.30d55.911.03a322.712.84d31.042.68c31.632.19c41.482.69b37.082.63e50.772.12b614.241.83e22.701.06d22.121.59d32.221.42c31.723.18f46.712.52c96.670.76f13.110.93e14.002.77e22.922.37d25.491.42g40.183.94d1200g7.030.02f10.491.48fg12.870.98ef22.191.00h35.492.94e1500g00g00h7.511.00g17.721.90i21.931.93h1800h00h10.271.70j15.270.21i注：不同小写字母表示同一温度、同一贮藏天数下两类花粉活力差异显著（P0.05）。Note:differentlowercaselettersindicatesignificantdifferencesat0.05levelinthevitalityoftwotypesofpollenunderthesametemperatureandstoragedays.第4期刘翠双等：流苏树花粉活力、柱头可授性和不同属间的远缘杂交初探17度同一贮藏时间下，全雄花的花粉活力显著高于两性花花粉活力。室温条件下，贮藏 0d 的两性花、全雄花 2 类花粉活力分别为 42.94%和 55.91%，分别在贮藏 12d、15d 后失去活力；4 条件下，两性花、全雄花 2 类花粉分别贮藏 15d、18d 后失去活力；而20 条件下能够有效保存花粉的活力，贮藏 18d 的两性花、全雄花 2 类花粉活力仍高达10.27%、15.27%。以全雄花花粉萌发动态变化为例（图 2），室温条件下，贮藏 0d 时视野内有大量花粉萌发，贮藏 9d 花粉萌发数几乎为 0（图 2C），4 条件下贮藏 15d 后萌发数近乎为 0（图 2F），20 条件下贮藏 18d 仍可见部分花粉萌发（图 2I）。2.2 连翘和丁香的花粉活力测定为保证流苏树花期不同属间杂交的顺利进行，对父本（连翘和丁香）不同温度、不同贮藏时间条件下的的花粉活力进行观测，结果（表 2）显示：在连翘A50 m50 m50 m50 m50 m50 m50 m50 m50 mBCDEFGHI室温Roomtemperature4 20 AC.室温下贮藏 0、3、9d 的花粉萌发情况；DF.4 下贮藏 9、12、15d 的花粉萌发情况；GI.20 下贮藏 12、15、18d 的花粉萌发情况。AC,pollengerminationstatusafter0,3,and9dofstorageatroomtemperature;DF,pollengerminationstatusafter9,12,and15dofstorageat4;GI,pollengerminationafterstorageat20for12,15,and18d.图2不同贮藏温度下全雄花花粉萌发动态变化Fig.2DynamicchangesofpollengerminationofMaleflowersunderdifferentstoragetemperatures表2不同温度条件下贮藏不同天数连翘和丁香的花粉活力Tab.2PollenvitalityofForsythia suspensaandSyringa oblatastoredfordifferentdaysundervariedtemperatureconditions贮存天数Storagedays花粉活力Pollenviability/%室温Roomtemperature420连翘Forsythia suspensa丁香Syringa oblata连翘Forsythia suspensa丁香Syringa oblata连翘Forsythia suspensa丁香Syringa oblata065.723.65a66.212.79a65.723.65a66.212.79a65.723.65a66.212.79a342.302.10b38.443.03b58.523.65b57.683.67b62.574.12ab65.335.21ab610.100.92c9.200.75c45.712.67c40.562.79c55.302.63bc56.123.65bc900d00d27.601.02d30.500.65d46.911.65cd40.783.01c1212.320.69e15.601.01e35.161.32cde37.642.13cd159.320.75f8.960.12f27.921.12de26.351.56de1800g00g22.601.63def20.451.34ef2116.450.98ef17.601.05efg2414.300.91efg12.020.85fgh2712.780.74fh10.350.98ghi注：不同小写字母表示同一温度下同一物种花粉贮藏不同天数活力差异显著（PN1N2CK1，蒙导法授粉保证了 N1 和 N2 的花粉管正常伸长，并达胚珠授精，完成了不同属间的远缘杂交。2.5 杂交组合和对照组合授粉过程及果实表型特征的变化和坐果率统计分析授粉后对 2 种杂交组合和 2 种对照组合进行持续观察，坐果率和胚、果实的变化见表 5 和图 6图 7。表 5 显示：N1 共授粉 2800 朵小花，N2 授粉2000 朵小花，CK1 授粉 700 朵小花，CK2 授粉 300朵小花。4 个组合授粉时子房均呈黄绿色，柱头饱满呈黄色（图 6A1D1），授粉后 7d 柱头变褐，果实数量未发生变化，仍为 100%，（表 5，图 6A2D2）；授ABDEFGHIJKLCAB.花蕾期 1、2d；CE.始花期 1、2、3d；F.盛花期 1d；GH.盛花期 2d；IJ.盛花期 3、4d；KL.末花期 1d。箭头指向表示气泡。AB,buddingstage1,2d;CE,initialfloweringstage1,2,3d;F,fullfloweringstage1d;GH,fullfloweringstage2d;IJ,fullfloweringstage3,4d;KL,finalfloweringperiod1d.Arrowspointingtoindicatebubbles.图4雪早花不同花期的柱头可授性Fig.4StigmaacceptabilityofChionanthus retususXuezaohuaatdifferentfloweringstages表4杂交组合和对照组合花粉管伸长情况Tab.4Elongationofpollentubesinhybridandcontrolcombinations授粉时间Pollinationtime/h流苏树丁香混合花粉Chionanthus retususSyringaoblatamixedpollen（N1）流苏树连翘混合花粉Chionanthus retususForsythiasuspensemixedpollen（N2）自花传粉Selfpollination（CK1）自然状态下Innaturalstate（CK2）伸长位置Extendedposition该位置花粉管数量/条Numberofpollentubesatthislocation/piece伸长位置Extendedposition该位置花粉管数量/条Numberofpollentubesatthislocation/piece伸长位置Extendedposition该位置花粉管数量/条Numberofpollentubesatthislocation/piece伸长位置Extendedposition该位置花粉管数量/条Numberofpollentubesatthislocation/piece6nnn1/163081/15251/16161/1851/1036101/12301/15201/16121/840161/8351/10251/12131/645241/4201/8151/10101/226481/2161/4121/453/4247211511015120注：n.未萌发；分数表示花粉管长度与雌蕊长度的比值。Notes:n,notgerminating;thefractionrepresentstheratioofpollentubelengthtopistillength.20北京林业大学学报第46卷A1pgpgpgpgpgptptptptptptptptptptptptouououououptptptptpgpgpgB1C1D1A2B2C2D2A3B3C3D3A4B4C4D4A1A4.N1 授粉后 8、16、24、72h 的花粉管伸长情况；B1B4.N2 授粉后 8、16、24、72h 的花粉管伸长情况；C1C4.CK1 授粉后 8、16、24、72h 的花粉管伸长情况；D1D4.CK2 授粉后 6、16、24、72h 的花粉管伸长情况。pg.花粉粒；pt.花粉管；ou.胚珠。A1A4,pollentubeelongationat8,16,24,and72hafterN1pollination;B1B4,pollentubeelongationat8,16,24,and72hafterN2pollination;C1C4,pollentubeelongationat8,16,24,and72hafterCK1pollination;D1D4,pollentubeelongationat6,16,24,and72hafterCK2pollination.pg,pollengrains;pt,pollentubes;ou,ovules.图52 种杂交组合和 2 种对照组合花粉管伸长情况Fig.5Elongationofpollentubesintwohybridcombinationsandtwocontrolcombinations表5两种杂交组合和两种对照组合果实数量和坐果率Tab.5Numberandsettingrateoffruitsintwohybridcombinationsandtwocontrolgroups授粉天数Pollinationdays参数ParameterN1N2CK1CK27果实总粒数Totalnumberoffruits28002500700300坐果率Fruitsettingrate/%10010010010014果实总粒数Totalnumberoffruits17321368368213坐果率Fruitsettingrate/%61.8654.7252.5771.0021果实总粒数Totalnumberoffruits1279656192137坐果率Fruitsettingrate/%45.6826.2427.4345.6730果实总粒数Totalnumberoffruits3802288074坐果率Fruitsettingrate/%13.579.1211.4324.6760果实总粒数Totalnumberoffruits2591612630坐果率Fruitsettingrate/%9.256.443.7110.0090果实总粒数Totalnumberoffruits189792225坐果率Fruitsettingrate/%6.753.163.148.33120果实总粒数Totalnumberoffruits1216313.3724.51坐果率Fruitsettingrate/%4.312.511.918.17第4期刘翠双等：流苏树花粉活力、柱头可授性和不同属间的远缘杂交初探21粉 760d 后果实开始膨大，且出现大量落果，果实数量急剧下降，坐果率持续降低（图 6A2D5，表 5）；至授粉 120d 后 N1、N2 的果实成熟呈蓝紫色（图 6A6，B6），N1 剩余果实 121 粒，坐果率为 4.13%，A1A25 mm1 cm1 cm1 cm1 cm1 cm5 mm1 cm1 cm1 cm1 cm1 cm5 mm1 cm1 cm1 cm1 cm1 cm5 mm1 cm1 cm1 cm1 cmA3A4A5A6B1B2B3B4B5B6C1C2C3C4C5C6D1D2D3D4D5D6A1A6.授粉后 0、7、14、21、60 和 120dN1 果实表型变化；B1B6.授粉后 0、7、14、21、60 和 120dN2 果实表型变化；C1C6.授粉后 0、7、14、21、60 和 120dCK1 果实表型变化；D1D6.授粉后 0、7、14、21、60 和 120dCK2 果实表型变化。A1A6,phenotypicchangesinN1fruitsat0,7,14,21,60,and120daysafterpollination;B1B6,phenotypicchangesinN2fruitat0,7,14,21,60,and120daysafterpollination;C1C6,phenotypicchangesinCK1fruitat0,7,14,21,60,and120daysa