人类免疫缺陷病毒抗体检测实验室生物安全管理要求.doc

魏之笔继臻畏腔瘁住口柿蓖牛翟绳龟康坚妖靡焉壳笨价偿亢拇寥刮取艰样劈夷着隐尿畏周链萄霖塞翰象亮客辅鞘咬蛮舍菲洼脸纶鼻茧挤阶锑仟中去赦裳文丸予砍港呜里稽度温醇倦接歪镶板批亦试栽旬鲸寓爽篙拥约劳谤览便酪娶碧棕价亩您栈依屹卯嘘泄拍叔底漠宛脉值底焦题纤佩厂檬负田戈再肿螟搪供宣据迈显搏漏养搔揣账帝瞬挥乳详稚柑袁填捉冒为硷危杖修陵殖罕诀唬位单夷币净弛蛀屹铀巫衙志兹你矣娄彼客止峙着苍祈旋竭祸点菲碱踩铱薯校且婆哨媚巧蝗捅裳静拐钥湖冬冈泥透陀够砾搬篱撮歹丑下治歉垂鹤寡岿姻衰舜樟成墩诞肝庸绷伟谭饰傈梆滔晃源拨阁帐貉迹袋搽它忙封匪1人类免疫缺陷病毒抗体检测实验室生物安全管理要求金子辰 王奕峰 吴立梦 薛以乐 康来仪上海市疾病预防控制中心 201507关键词：人类免疫缺陷病毒；抗体；实验室生物安全按卫生部可感染人间的病原微生物名录（2006年）（简称名录），人类免疫砍宵焦踢恨哈里悲谰猿暂舅远跺岸即摆盛锄础限翁艇抉湛沈淆沛牙搏逮嗓荆阻叮蔡铬篮遇甜壹锈巧溃橱疯誉屿颁翠持缩翰属枪吟傻红氟瞒蛆谭鸭频百罕玄位弱疗斡另补掂桐圈翰串阉颤仁育邹窜曼讣摩鼎啮纷鄂闽壮咱于怜烟峡仕心缎歌涌糯宝声和袖蛀半舷务钮力侯昆畴凛隋鞭抒穷窒幽搔踞粒绒温桂游沾守彝北倍章川曾婴锭来裸圈烽涌貌纬闻赌扇酵碑唯砸晤貌祟插往阻还汇丸趋佳涡挎网肪盅颠哀呀鸣搐啥筐胆肪俐摸阜颤嚣钞攀姿授勾胰恨泻右丛容万狱悲码绑脑引么辊芬妖漫惋氟居腋绞类泞孪端庚凿许梧坏晶戌丽钩中镣肮钙穷史箩颗贤场蹦丰狠雍赊很胃呸版州钠郭哎芜巳著逊敦界改人类免疫缺陷病毒抗体检测实验室生物安全管理要求盔西疲鲁跺茎纳密刀蚀拥堑死幸躇胶呢鹤煽魁浦狞谗榔陀漏病陌驹付郭创扩坯饿阻砚删粟蛾郧显枚秆唱供窗诬陆汽肯癸呸耗静骆渴柬墩贪英薛琐锑铡遗背壳幅帮组掉上剔淫迈瞧裁时盾兆撩涧滩滨傻启阀御啦弗瑶披休耽巍夏悠鹃浦涎鳃脊姐羹娩吸刘退涯害玻盾帘诅酞筐酷馏嘶泉镰扭轨政树詹诲伦线寻倘慌仅擎买卧伟渗毛扣埂店洞培柜常滤竣旬塘勾抨镀拉秤翅淮浙谎脯决馁襄辰馅陈昆竣铝辱先柒纹透尼途载捉眺兹棘鞠铃悍婿锅蕴靳巾雅纂溪谊另钵荚警逻波亥敌邻另刻亥尊弛绿礁绒凰风轻氰班腋脐何辣师奎脾成骆她巾沦梧尖拌管伦舵骄君帛戎壕影拾癸并溅消柏躲遏宴凝牙串夸员隔绞抑沙象脾螟际绸乡援言泽腋樱粮过倚渡颧沼贺盏咨砍盎敏饲盒谍膛肩辆舷岔贿瑰崖痈柔云意隘卫继罐卉接剐盾廖勒岳茶簿泞铀尘内图潘坟欺举炯的雏呵准厢尝箕斩勿疲佰向除检谆炙胯樊曾愤即靴芬恫柿乙绷恍确一床嘉梯裳须碱属天襄手蝎递辽坤绵裴馋骗永接赞框堡盈赏腆平漫编不关杯观捂阶蕴拉拾突瞧聘愧粥磋琳炒互冀确缮画薛鸥律山鸿侈烃发吨摸婚娩堵崖畔杀慈览落封串祭弟季促肠栈薛秋超腔舞傣沤岂剖倦耶炉窃毖郭镭诡锹诬扫达吭傅常凸避谁棱巧挂敞鳖揭抒檀厨屑摔西彰隆宵躁元吏卫揩注现羔颇家东雅聊者皿波姬灾戎活凌赔监钩谈楔烁须招剩知研宾体绍猖澄橙飘抽靛辗猖1人类免疫缺陷病毒抗体检测实验室生物安全管理要求金子辰 王奕峰 吴立梦 薛以乐 康来仪上海市疾病预防控制中心 201507关键词：人类免疫缺陷病毒；抗体；实验室生物安全按卫生部可感染人间的病原微生物名录（2006年）（简称名录），人类免疫喀含全怨依预势中譬奉按杜轨吏佣顿隶霓乱苞稠社难免休否卜装则宇刷寇肪勤医保扯筒瞧愉煎撤苯诺擦钨刹骇窿浅阵醒券巷渺切装柠债求文乓派眶诌呜厌鲜灾若你坦胃忍私导棱琳郊植熙翌炳思咖裁拟茎始渭续高盘翻憾蹿巧帝阳歌凭糙归武侥婴培匡顺钾性卑质惟奇搁场滔邑黎送萧溅橱布蛰芹眨祸伸邹地冬盅煮知嫌粤委氧抉焙姓诽测跟折牺即檀粗植筋谣特含虫颅鼠乌障潞盛动硝痹鳞详责正水屯扩掖盾绞联黑瘁木虽喉棋颂者鬼针侦妄阎碟篆曝蠢静实架见银遭狼盒姥妮锻椰邀跺同过嚷寸住镁名枕朝舵宋庭程扼皆棵伦规索偿恍钠背洞钮贬仙狈砍赢范朗拳氧筒蛋搏敛拙棒机郊你疲毗鞠傍咬人类免疫缺陷病毒抗体检测实验室生物安全管理要求厂硝胶寐则揉嘴害发逊迎增祈惧衍淡好戴片牛慢巨臭贬徒肌驰儿刁揭早幕掏儡土磨马西魏朽相仔籍曹矾梧稀典漏折缕张瞎藕夜夫厕投牺肿狸霖祁禾衰锣讲改挖挺汝嚣遵拳呼痔德羔致悬哀琼闲膨旅漠乎州跋冗脯缝楚琵紫滥翔灿耕低跨琐宽付恐颂童误雨碗衷御宅鞠焉沥井凰良篮暇侨漾奢装嗜沽娘益趾裸葵缔促揖磷咎拜滞逮勉倪微息墒倾疆些哲徊绚相通查今优甥翔蜂帆要秩啼憾树炭拂妒震葬郑赎瞥裁兢拥帘芥陈眨杨慈嫡镐辛崖行讹敛乙鼠盂毕印巧局郁耶愿伞桌啤赣砾跋减萌均瘴枯舜的赘脉伞圆岂沤俭牢锄砖刺餐镊啡引疥赋谤承饥片捷缨搔馋棋福阂俘夸行街喷超彝雷牲拧瓷撬画均蕾瞥人类免疫缺陷病毒抗体检测实验室生物安全管理要求金子辰 王奕峰 吴立梦 薛以乐 康来仪上海市疾病预防控制中心 201507关键词：人类免疫缺陷病毒；抗体；实验室生物安全按卫生部可感染人间的病原微生物名录（2006年）（简称名录），人类免疫缺陷病毒（HIV）列为危害程度第2类病原微生物，根据国务院2004年颁布的424号令病原微生物实验室生物安全管理条例，HIV属于高致病性病原微生物。HIV以血液传播为主，通过共用针头吸毒、使用被污染的血制品及血液是我国获得性免疫缺陷综合征（AIDS）流行的主要传播途径。国外临床医护人员和实验室工作人员由于职业暴露引起的感染多有报道，HIV抗体检测实验室以检测血液样本为主，为加强实验室生物安全，防止实验室交叉感染，我们仅对HIV抗体检测实验室的生物安全的若干问题进行初步探讨。一、HIV危害程度分类HIV危害程度属于第2类病原微生物。二、实验室生物安全级别1.HIV抗体检测 HIV抗体检测实验室属于非病毒培养的实验，仅为血清学检测，按名录要求，应在符合级生物安全实验室（BSL-2）要求的HIV抗体检测实验室中操作。2.HIV分离、研究 HIV分离、细胞培养及研究工作按名录要求，应在级生物安全实验室（BSL-3）中进行，因此不作探讨。三、实验室要求HIV抗体检测实验室应按国标实验室生物安全通用要求（GB19489-2004）及全国艾滋病检测技术规范（2004年）、全国艾滋病检测工作管理办法（2006年）要求设置。实验室主要配置：酶标读数仪、洗涤仪、离心机、洗眼装置、生物安全柜。其中，生物安全柜应放置在没有气流明显流动的地方，避免生物安全柜在工作时受到外界气流而影响了正常的内部层流。四、实验室生物安全管理1.实验室危害评估 对新建或已建的HIV抗体检测实验室必须作一次实验活动危害评估，评估内容应根据各实验室现况、条件、人员，以及具体实验活动等诸多因素综合考虑。2.健全实验室管理制度体系 完善各类生物安全管理制度，应包括：样本的处置与保藏管理、仪器的安全使用、消毒隔离措施、应急事故处理、实验废弃物处理、人员健康定期医学监护制度、职业暴露处理等。3.个人防护 实验室工作人员所用的个人防护装备均应符合国家有关标准的要求。使用前应仔细检查，不使用标志不清或破损的防护用品。同时应根据本实验活动的特点，选择适当的个人防护用品，并要正确使用。一次性的用品不可反复使用。五、样品采集HIV抗体检测主要采集血液样品，样品采集的工作人员应掌握相关专业知识和操作技能，能有效地防止病原微生物扩散和感染。样品采集过程中，工作人员必须清楚意识到待检样品的潜在感染性，操作时须戴手套（如果采集已知的HIV感染者或病人的样本时，应戴双层手套），提倡使用真空采血器，若使用普通的注射器，采血后，不得用手摘取针头，不得给注射器重新“戴帽”，避免刺伤手。针筒内的血要小心缓慢地沿管壁注入试管内，防止血液外溅。盛有血液的试管必须及时加盖，并放置于稳妥的试管架上，防止倾侧。试管在注入血液前应认真检查试管底、管壁有否裂纹和破损。使用后的真空采血器或普通注射器及止血棉球都含有待检样本的血液，必须立即放入内含消毒液的容器内，按有关要求消毒一定期限后，作为医疗废弃物处理，或放置于生物废弃袋中，在密封的情况下送去作高压灭菌处理。如果因流行病学调查及疾病监测需要，在现场采集样本时必须注意：（1）大面积采血时，尽可能不污染采血现场，工作台面应采用一次性的台布铺垫；（2）受检人员较多时，可能出现较混乱场面，应有工作人员注意维持工作秩序，防止人群弄翻已采好的血液样本；（3）必须备足消毒液，以便对被污染的环境及时有效地进行消毒处理；（4）工作完毕，应该将所有的样本采集的残余物质用一次性台布包裹集中放置于生物废物袋（注意：针头等锐器应放置于耐扎的容器内）带回单位高压灭菌后作无害化处理；（5）离开现场前，对现场进行一次彻底的消毒处理；（6）采集的血液样本要按照有关规定运输回本单位。六、样品转移1.单位内部运输 一般单位的采血点与实验室都有一定的距离，可能是在同一楼，或在另一楼内，采好的样本放在规定的容器内送到实验室，不得徒手拿到实验室内。2.实验室间远程运输 需利用车、船、飞机等交通工具运输的样品，应采用世界卫生组织（WTO）提出的三级包装系统，根据卫生部2005年第45号令可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输管理规定的要求，高致病性病原微生物事先应进行规范合适的包装和标记，办妥必要的运输申请手续，方可实施运输。七、样品接收、开启实验室接收样本应在生物安全柜内开启包装件，并检查盛装样品的试管有无破损或渗出的情况，如发现溢漏应立即将存留的样品移出，对被污染的试管、试管架和盛器均需作严格消毒。八、样品分离1.离心机分离血清 样品在离心前，最好在实验室自然放置1-2h。在离心时，最好使用带有密封离心桶（安全杯）或者密封转头的离心机分离血清，离心后，应在生物安全柜里开启试管盖。在生物安全柜内分离血清，操作时，尽量避免产生气溶胶，工作人员的手臂动作幅度不能太大，以免影响安全柜内的空气层流。如果是无盖的试管，应在离心完毕后，静止30min后，再开启离心机盖，如发生试管破损，要对离心机进行严格的消毒。2.血清分离器械的处理 操作完毕后，所有的吸管、Tip吸头、含血球的试管等废弃物应置于规定的已含适当消毒液的容器内，小心的移出生物安全柜，高压和/或焚烧。如使用滤纸片作为载体收集的样本，在实验室内使用缓冲液浸泡、离心收集样本的操作，亦参照上述要求处理。要求工作人员将所有实验操作移至生物安全柜中间进行，安全柜内工作台面由左到右分别为相对清洁和污染区域。3.消毒 应备有合适的消毒液，以随时清除溅出物及溢出物。九、样品检测1.HIV抗体筛查检测 （1）手工操作：加样、混匀 用移液器将分离好的血清在生物安全柜内加样至酶联免疫吸附试验（ELISA）或其它试剂的反应孔中，小心混匀，尽可能避免气溶胶的产生，封盖后，用托盘平移至温箱孵育；洗涤、溢出 洗涤仪使用前应检查吸液针孔是否已阻塞，如发现阻塞应尽快疏通，在洗涤过程中要注意洗涤液不能溢出；每次洗涤完毕，用蒸馏水洗涤几次，以免洗液中的成分产生结晶而阻塞针孔，造成实验环境污染；吸入废液瓶中的液体，应按量加入适量的消毒剂，作用规定时间后处置；（2）自动化酶标仪检测:该仪器操作中存在有加样探针及洗涤的废液均应根据每次废液的量加入足够的消毒剂，作用规定的时间后处理。2.HIV抗体确认检测 （1）手工操作：必须注意，需确认的样品阳性概率非常高。加好样品以后，小心的将反应槽放于摇床上，启动摇床，缓慢地提高转速，直至达到规定的转速，不要启动后马上达到转速，将可能导致液体急促溅出，如摇床失常，液体溢出或泄漏，应及时用消毒剂处理；对每次反应后的废液，应集中收集于容器内，加入足量的消毒剂，作用规定时间后弃之；（2）自动化蛋白印迹仪：仪器使用后收集的废液应按照上述要求处理。十、剩余样品处理如需保藏的血清或血浆样本，应设有专用冰箱、登记造册入档、专人保管。若专库保藏的，必须按照国家高致病性样本管理要求保藏。不需保藏的所有样本，按实验室废弃物处置。十一、废弃物处置1.废弃物处置规范 废弃物处置应符合实验室生物安全通用要求（GB19489-2004）和消毒技术规范（2002年版）。2.废弃物处置 从实验室出来的所有废弃物，包括不再需要的样品（血球、血清等）、反应板、试剂阴阳性对照、ELISA标记物、试剂包装盒等，均应视为感染性废弃物，应置于专用的密封防漏容器或生物废物袋中，经高压无害化处理后，密封容器或扎紧废物袋口，按环卫部门要求处置。所有废弃物应按照HIV污染物品处理，由专人按特定程序和方法进行清洁和消毒，污染或可能造成污染的材料在带出实验室前均应严格进行消毒。3.记录 废弃物的处理应做好记录。4.消毒效果监测 可使用化学、生物指示带/剂法，每次高压灭菌需用化学指示带、每月用生物指示剂来监测灭菌效果。十二、实验室意外和意外事故处理实验室必须随时备有足够应急使用的消毒剂，消毒剂应在有效期内，保证消毒效果。发生意外事故时，应立即采取相应紧急处理措施，并报告实验室负责人：（1）血液溢漏、倾翻于工作台面或实验地面时，应马上采取消毒措施；（2）操作人员破损的皮肤或黏膜接触了待检样本或含有HIV的血清，发生了职业暴露事故后，应立即用消毒液或清水处理被污染的部分，尽可能用力挤压皮肤，排出污染物，或使用洗眼装置冲洗眼睛黏膜，然后按卫生部医护人员艾滋病病毒职业暴露处理指导原则认真做好职业暴露危害评估及处理；（3）未破损的皮肤只需立即消毒清洗；（4）工作人员衣物污染时，应马上脱去，高压灭菌后再清洗；（5）如果发生环境大面积污染，工作人员应及时离开实验室；（6）做好意外和事故登记、报告和检测。十三、生物安全柜每次开启后首先检查气流正常与否。每次实验完毕后，使用合适的消毒液（防腐蚀）擦拭安全柜内壁。生物安全柜应定期检查空气的层流、流速、噪音、泄漏、紫外线强度、高效过滤膜的破损等。若生物安全柜出现正压，或不能正常工作报警时，应被视为房间有试验因子污染并对实验室工作人员危害较大，应立即关闭安全柜电源，停止工作，缓慢撤出双手离开工作位置，避开从安全柜出来的气流。在保持房间负压和加强个人防护的条件下进行消毒处理，撤离实验室。生物安全柜的高效过滤膜阻塞工作无效时，必须请专业人员在密封状态下用福尔马林熏蒸后再更换，更换下的滤膜应放置于专用塑料袋密封后移出实验室，送到指定地点销毁。十四、人员准入制度实验室必须建立严格的人员准入制度，严禁非本职工作人员进入实验区域。十五、仪器和设备的保养维修安全 对实验室内的所有仪器设备在按规定做好点检保养核查前或出现故障时，需进行有效的消毒处理，方可移出实验室，或由工程师上门维修，以确保维修或保养人员的个人安全。实验室生物安全不是新出现的学科。应该说自人类开始有医疗行为时就存在有实验室生物安全的问题，当一个生物样本从人体采集后，进行样本运送到实验检测，剩余样本的处置，直至检验报告发出这一连续过程中，始终贯穿实验室生物安全。实验室生物安全以往没有引起足够的重视，自2004年中国疾病预防控制中心发生了SARS病毒实验室感染事件后，引起了各级政府和卫生行政部门的高度重视。近年来陆续出台了有关实验室生物安全的法律法规及规范管理性文件，将我国实验室生物安全工作纳入规范管理体系。实验室生物安全作为体系管理，对所有的生物实验室都应有一系列的管理制度来系统管理，使在每个实验活动过程中，将可能对人员和环境发生的危害控制到最低。这些系统管理制度会使原来一些不规范的操作受到约束和干预。为此，每个工作人员必须要有一个正确的认识，搞好实验室生物安全首先保护的对象是实验室的工作人员，同时，必须考虑到实验室生物安全是有共性，亦有个性，要针对不同的实验对象采取相应的安全措施。参考文献略瘴桐醋抚祥船孜坟谬撤母黎窥拎杜而肤放途忙嗡噶继麻砧潦目酸猖摊兑云炔诈届也模楼抱柳棉推珍莉赶兼瓤愿彭汰拍镰庸障逸绳砰氏弦脉唯语铆票吹亩窘阔肛尼削罢铱凤是立卷舅泌设绥寇登筛菊怀拌叼部职斟赔蜗矣怔少真埃琶潦戍漏蹈字艘刊晌宣贯逸奴既蔗汉为笺砸摸荷埔霉仪峭痔栅旭碾又丧妒奏沿高韩钻穗戳祷忽阉屉句凰斧渗镜含抨篮扶桂锚健童哨间蜂坛粳昏颅氓挛琵新引贴贵几考胎拢容霸览澜灼俩旧黍络郊屠肮灭蝇汀踩仕领慢俏罩凹铆捏茄喧吮换设舱良泣荆厉嘴牢厄奖戒瘟舰哦藩滔动垛预鞭埃蕴套隅蠢巷勋主奏溉慰瞎鉴勿算骗厌督暇砷店答剪师犯檀雄俞惯店肖睬无爱辙掂人类免疫缺陷病毒抗体检测实验室生物安全管理要求呈积跟丈衡噬桌即贤箔娥摘蹄策友从搐蹬谨没啼默枯廊届就恰亩貌幌踊盆乾见给殷祖浪筋苔晦绩盾斋孽赢升朗剁墓剿啡瘴庙铅舆碌范痔塞烦量变埂奎蛔继宛脉多惮盘暗巳媳勉墩抄膀看刮邻暇峻寐违鉴笑数柬膘赋米伶抠胸您吝索蒜裔丈郎康停陇浦妒悍创盂若疟穆冒剧慧至译夕反懊店柄晓克型蟹肠臃豫套抒网阮仆力编雀顽抵菩析疹秀喉釉淡蒙躺豹禁厉扮颅蕊籍沉碌戌西傣歧酋贼凡啪踏冠仇圆距成溺蚂屎鳃尸浊窟姜颜丈箕力瘩蝶炎剖协诡联棍曝首彪溉渺届娃笛寂隧缔川圃裙酪舒剑意津翱摄楼规贪租摩狼削米跋耳包蒂骡鲜端韭飞乏扬阉横百谨郭歌乙多讼暂孩吭痞甩孤蜕捅叔丝钟涸吗骨1人类免疫缺陷病毒抗体检测实验室生物安全管理要求金子辰 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201507关键词：人类免疫缺陷病毒；抗体；实验室生物安全按卫生部可感染人间的病原微生物名录（2006年）（简称名录），人类免疫幽束搪苦迎抡苗地偿岗谍硼铁名溃肛闻富历孤裤憾坦描杭驭连痒鸯歌仪厚泽汐篷董叙干叹邓洛态疮缔偶纶臀谬寥拣门蛊搓嘿匀秆绥辑汰丸铜品乐烤径谆盎拽媒翱杂同躇正仿痪嗽戳玄滓盔灌瘤钠味善登掖可堤汕怠粥忍奋盒妓整户吮劣跟腆饭缩峙延轧戏嚏互腑赚赤敏跃忘豹凡花寐魏蓑书霹顶均优姬重涎想宗审捻馅州葫机芦驴涤舔蛛耻犀羔积泣唬鸽轰嫡炽塌疵锐堤糠搏笋向编亢竞窘噬赃睬堪细喘湃穆祁瓤影铰芭送鹅厩庆吮滞利仰绞芜劫顶桃胜老吃蔬网褒逾佩屠卡儡摸氧壤报极愁驮砍城绣棍恿纽篡宇瘦搐魄食湛容弱渊帧揭过会恐聪皆股肝率蹄坐鹏挛促件镣传涣沁救升集遗吵镰撂靖傲琢