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肝癌患者组织中非编码微核糖核酸-375的表达情况分析

章萍

[摘要]目的 研究肝癌患者组织中非编码微核糖核酸-375（miR-375）的表达情况。方法 选取2014年7月～2018年12月在我院进行手术切除治疗的77例肝癌患者作为研究对象，提取患者癌组织标本中的非编码微核糖核酸（miRNAs）进行考察，以癌旁正常组织作为对照。观察肝癌组织、癌旁组织中的miR-375表达水平并进行比较。结果 77例肝癌患者的癌组织中miR-375相对表达水平低于癌旁正常组织，差异有统计学意义（P0.05）。肿瘤直径≥5 cm肝癌组织中的miR-375相对表达水平低于肿瘤直径
[关键词]肝癌;组织;miR-375;表达水平
[] R735.7          [] A          [] 1674-4721（2019）12（c）-0029-04
Expression analysis of non-coding microRNA-375 in tissues of patients with liver cancer
ZHANG Ping
Department of Pathology， the Ninth Hospital of Nanchang City， Jiangxi Province， Nanchang   330002， China
[Abstract] Objective To study the expression of non-coding microRNA-375 （miR-375） in tissues of patients with liver cancer. Methods Seventy-seven patients with liver cancer who underwent surgical resection in our hospital from July 2014 to December 2018 were selected as subjects in this study. The non-coding microRNAs （miRNAs） from these cancer patients were extracted. The normal tissues near to cancer ones were selected as control. The expression levels of miR-375 in liver cancer tissues and normal tissues were observed and compared. Results The relative expression level of miR-375 in the cancer tissues of 77 patients with liver cancer was lower than that in the normal tissues， the difference was statistically significant （P0.05）. The relative expression level of miR-375 in liver cancer tissues with tumor diameter ≥5 cm was lower than that of tumor diameter
[Key words] Liver cancer Tissue; miR-375; Expression level
肝癌是恶性肿瘤中发病率较高的一种[1]，且具有较高的恶性程度，病情发展快且治疗难度大，会对患者的生命安全构成极大的威胁。非编码微核糖核酸（microRNAs，miRNAs）是一类内源性非编码单链小分子RNA[2]，其在多种生理、病理过程中，如细胞发育、增殖、分化等，均发挥着显著作用。miRNA具有癌基因、抑癌基因的作用（可扮演癌基因和抑癌基因的角色），其参与了肿瘤的发生及发展[3]。在肝癌患者的肝细胞、外周血清中，有多种miRNA表达的改變存在，异常表达miRNA的发现为临床丰富对肝癌发病机制的认识、探索新的基因靶向治疗方案提供了指导[3]。另外miRNA表达同肝癌的病理类型、恶性程度、分期、分级等病理过程存在密切关系，但不同的miRNA类型在肝癌中所发挥的作用存在差异，本研究选取在我院进行手术切除治疗的77例肝癌患者作为研究对象，旨在分析肝癌组织中非编码微核糖核酸-375（miR-375）的表达情况，现报道如下。
1资料与方法
1.1一般资料
选取2014年7月～2018年12月在我院进行手术切除治疗的77例肝癌患者作为研究对象，提取患者癌组织标本中的miRNAs进行考察，以癌旁正常组织作为对照。77例肝癌患者中，男73例，女4例;年龄26～70岁，平均（43.34±2.86）岁;肝功能Child-Pugh分级：A级62例，B级15例;体力状况（ECOG）评分：0分47例，1分22例，2分5例，3分3例;肿瘤直径：≥5 cm 61例，
纳入标准：①所有患者均经临床评估、影像学检查、病理检查明确诊断为原发性肝细胞癌，存在肝炎后肝硬化病史;②所有患者均进行肝癌切除手术，术前未接受任何抗肿瘤治疗;③所有患者术后自愿接受随访，且随访资料完整。排除标准：①患有继发转移性肝癌、恶性肿瘤的患者;②存在严重感染、血液系统疾病的患者;③处于妊娠期、哺乳期的患者。本次研究已通过医院医学伦理委员会的批准。所有患者均自愿签署了知情同意书。
1.2方法
1.2.1仪器、试剂盒  试剂盒包括miRNA提取分离试剂盒及扩增试剂盒，仪器主要包括荧光定量聚合酶链式反应（PCR）仪。
1.2.2肝癌组织标本中miRNA提取方法  采用miRNA提取分离试剂盒，按照标签的加入量，加入无水乙醇去盐的漂洗液（RW）、去蛋白液的漂洗液（MRD）中。注意采集的癌组织与正常肝组织应距离3 cm以上。
1.2.3检测方法  应用逆转录和实时荧光定量PCR法进行检测，逆转录miR-375、U6;逆转录体积为155 μl，在42℃的条件下孵育30 min，在85℃的条件下孵育5 min。之后进行实时荧光定量PCR，得到循环阈值（Ct），内参为U6，以2-ΔΔCt法计算miR-375的相对表达量。
1.3观察指标及评价标准
观察肝癌患者的miR-375表达情况以及临床病理参数情况，通过相关性分析探讨miR-375表达情况与临床病理参数之间的关系。
肝功能Child-Pugh分级是一种对肝硬化患者肝脏储备功能进行评估的分级标准，等级越高，提示患者的肝脏储备功能越差，预后越差。ECOG评分，是从患者的体力来了解其一般健康状况和对治疗耐受能力的指标。ECOG体力状况评分分值越低，提示患者的体力状况越好。BCLC分期是一种肝癌临床分期系统，A期是指早期，B期是指中期，C期是指晚期。
1.4统计学方法
采用SPSS 21.0统计学软件进行数据分析，计量资料用均数±标准差（x±s）表示，两组间比较采用t检验，多组间比较采用方差分析;采用Pearson系数进行相关性分析，以P<0.05为差异有统计学意义。
2结果
2.1 miR-375表达情况
77例肝癌患者的癌组织中miR-375相对表达水平为（4.50±1.38），癌旁正常组织中的miR-375表达水平为（13.67±3.52）。患者的癌组织中miR-375相对表达水平低于癌旁正常组织，差异有统计学意义（t=21.283，P=0.001）。
2.2肝癌组织miR-375表达水平与患者临床病理参数的关系
不同性别、年龄、肝功能Child-Pugh分级、ECOG评分、病灶数量、BCLC分期肝癌组织中的miR-375相对表达水平比较，差异无统计学意义（P>0.05）。但肿瘤直径≥5 cm肝癌組织中的miR-375相对表达水平低于肿瘤直径<0.05）（表1）。
2.3 miR-375相对表达水平与肝癌肿瘤直径的相关性分析
Pearson相关性分析结果显示，miR-375相对表达水平与肝癌肿瘤直径成负相关（r=-4.521，P<0.05），即miR-375相对表达水平越低，肿瘤直径越大。
3讨论
miRNAs是在真核生物中发现的一类内源性的、具有调控功能的非编码RNA，其参与了各种各样的调节途径，包括发育、病毒防御、造血过程、器官形成、细胞增殖和凋亡、脂肪代谢等[4-6]，其通过结合靶基因3端非翻译序列来对靶基因降解、抑制目标mRNA翻译过程进行抑制，进而对靶基因表达进行抑制[7];其还能对丝氨酸/苏氨酸激酶（AKT）-细胞外调节蛋白激酶（ERK）通路、促癌基因（IGF）-Ⅱ和肿瘤细胞胰岛素样生长因子受体（ICF-IR）表达等调节肿瘤细胞的增殖、分化、凋亡进行调控[8-9]，与肿瘤的发生、发展存在密切关系。
miR-375是一种抑癌基因，其与多种恶性肿瘤的发生、发展以及预后存在密切的关系[10-11]。miR-375在恶性肿瘤中呈低水平表达会促进恶性肿瘤细胞的增殖、分化、侵袭以及转移，临床将miR-375作为癌症治疗靶点以及判断预后的重要标志之一[12]，在癌症治疗中具有重要意义。以往认为miR-375能够调节胰岛细胞发育和胰岛素分泌，之后发现miR-375在消化系统、泌尿生殖系统、妇科、口腔等肿瘤组织中呈低表达，且均比癌旁组织中的miR-375表达水平低，少数肿瘤组织的miR-375表达水平高于癌旁组织[13]。通过分析发现，miR-375具有诸多的作用：①其可以抑制肝癌新生血管的生成[14]：miR-375过表达会导致新生血管管腔形成密度减少;同时减少微血管出芽数目，进而能够对细胞的增殖、克隆形成、迁徙或侵袭能力进行抑制。②miR-375可对肝癌细胞中血小板源性生长因子（PDGFC）的表达进行抑制，miR-375过表达、下调表达可对PDGFC基因表达进行有效抑制、促进[15]。③miR-375在血小板源性生长因子非编码端（PDGFC3′-UTR）上特异性靶位点沉默PDGFC基因上直接作用，进而对PDGFC基因表达进行抑制，且能够抑制肿瘤细胞在低氧状态下清除损伤的线粒体。miR-375同PDGFC基因在肝癌组织中的表达为负相关[16-17]，能够对肝癌细胞的生长进行抑制miR-375通过靶向关键性的自噬相关分子抑制了低氧诱导的肝癌细胞的自噬[18-19]，并削弱其在低氧状态下的活性，说明通过调控miR-375干预低氧状态下肝癌细胞的自噬有望成为一种潜在的抗肝癌新策略。
本研究结果显示，77例肝癌患者的癌组织中miR-375相对表达水平低于癌旁正常组织，差异有统计学意义（P0.05）。肿瘤直径≥5 cm的肝癌组织中的miR-375相对表达水平低于肿瘤直径<0.05）。这是因为miR-375水平的降低会导致肿瘤细胞的增殖、分化，无法较好地抑制肿瘤细胞向周围正常组织侵袭、转移，因此会增加肿瘤体积和直径。徐晓宏等[20]在其文章中提到，miR-200a、miR-148b、miR-375在原发性肝癌组中的表达水平显著下调，且miR-375会对p53、p21、PTEN等重要生物学途径产生影响。本研究还发现，随着乙肝表面抗原（HBsAg）表达水平的升高，miR-375表达水平会随之下降，另外在肝癌的诊断中，血清miR-375的诊断敏感性、特异性比癌抗原19-9（CA19-9）高。结合本研究结果，可知调高miR-375表达水平有助于手术治疗效果的提高，能够有效抑制肿瘤细胞的生长，从而降低复发率;当肝癌患者体内抑癌基因miR-375表达水平降低时，可通过分子靶向治疗来恢复患者体内组织的miR-375正常表达量，有助于患者生存期的延长，可将其作为肿瘤的治疗靶点之一。
综上所述，miR-375在肝癌中呈低表达水平，参与了肝癌的发生与发展，通过检测miR-375水平，可为临床治疗、诊断、预后判断提供有效的帮助。但本次研究中由于随访时间短，未对miR-375表达水平与肝癌患者生存率的关系进一步研究，有待于今后进行考察。
[参考文献]
[1]张小路，杜梅红，陈红跃，等.miR-375靶向调控YAP表达对肝癌细胞增殖和侵袭能力的影响[J].中国肿瘤生物治疗杂志，2019，26（1）：79-84.
[2]安阳，赵文超，夏念信，等.miR-375在原发性肝癌血清中的表达与患者预后的关系[J].标记免疫分析与临床，2019， 26（1）：10-12，27.
[3]黄波，肖影群，罗达亚，等.肝细胞癌中microRNA-375调控的基因网络分析[J].中国病理生理杂志，2016，32（2）：363-370.
[4]王涛，李东，彭晶晶，等.miR-375调控PDGFC基因表达抑制肝癌血管生成[J].中国肿瘤临床，2017，44（20）：1007-1013.
[5]王涛.索拉非尼诱导miR-375的表达上调抑制肝癌新生血管生成的功能和机制研究[D].泸州：西南医科大学，2017.
[6]付婷.miR-375在乙肝相关性肝癌的疾病进程中的表达及其临床意义[D].西安：第四军医大学，2016.
[7]张洪亮，杨海霞，吴睿，等.肝癌患者组织中miR-122、miR-375表達分析[J].医药论坛杂志，2015，36（10）：95-97.
[8]李俊，郭旭利，黄维甄.miR-375、miR-146a在原发性肝癌患者预后评估中的价值[J].肝脏，2019，24（3）：268-271.
[9]喻兆阳，薛慧颖，裘琳，等.脂质-中空介孔硅联合递送盐酸多柔比星及miR-375治疗肝癌的研究[J].药学学报，2019， 54（1）：151-158.
[10]王焱，唐博.miRNA与肝癌密切关系的研究进展[J].世界最新医学信息文摘，2018，18（94）：27，30.
[11]周典伟，郑萍，郭芬，等.外泌体miR-222对进展期胃癌接受FOLFOX新辅助化疗疗效评价的意义[J].现代消化及介入诊疗，2019，24（7）：707-712.
[12]邹绮明，张玲.miRNA在乙肝相关性肝癌发生发展中的作用研究进展[J].山东医药，2018，58（9）：89-91.
[13]张新杰，饶智国.MicroRNA在肝癌基因治疗中的研究进展[J].临床误诊误治，2017，305）：113-116.
[14]范银萍.脂质体纳米联合递送miR-375和阿霉素协同治疗肝癌并抑制其耐药性的研究[D].武汉：华中科技大学，2017.
[15]薛慧颖.脂包被中空介孔硅联合递送阿霉素及miR-375治疗肝癌的研究[D].武汉：华中科技大学，2017.
[16]杜同心.miR-21与miR-375在维吾尔族、哈萨克族及汉族食管鳞癌患者组织和血浆中的表达差异[D].乌鲁木齐：新疆医科大学，2017.
[17]张伟，董政，荣义辉.MicroRNA与肝癌诊治研究进展[J].肝脏，2017，22（2）：159-162.
[18]陈剑.miR-21、miR-375在胰腺癌组织中的表达与临床关系的研究[D].杭州：浙江大学，2016.
[19]安然，刘鸣.miR-375与癌症的相关性研究进展[J].医学综述，2016，22（5）：911-914.
[20]徐晓宏，高守宝，王玥，等.miRNA表达与免疫细胞因子相关性在原发性肝癌早期诊断和预后中的作用[J].中国免疫学杂志，2018，34（1）：104-108.
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-全文完-