LINC01138通过靶向miR-559调控结直肠癌SW620细胞增殖、迁移及侵袭的机制研究.pdf

医学分子生物学杂志,2024,21(3):280-286 J Med Mol Biol,2024,21(3):280-286DOI:10.3870/j.issn.1672-8009.2024.03.015通讯作者:周雪峰(电话:[phone],E-mail:ZhouX)Corresponding author:ZHOU Xuefeng(Tel:[phone],E-mail:ZhouX)LINC01138 通过靶向 miR-559 调控结直肠癌 SW620 细胞增殖、迁移及侵袭的机制研究高冬蕴1,孙婷1,陈平2,周雪峰11东台市人民医院肿瘤科 江苏省盐城市东台市,2242002盐城市第一人民医院肿瘤科 江苏省盐城市,224006【摘要】目的 探讨 LINC01138 通过靶向 miR-559 调控结直肠癌 SW620 细胞增殖、迁移及侵袭的机制研究。方法 本研究采用 RT-qPCR 分别检测人正常结直肠黏膜细胞 FHC、结直肠癌细胞 SW620 中 LINC01138与 miR-559 的表达,将体外培养的 SW620 随机分为 Blank 组、si-NC 组、si-LINC01138 组、si-LINC01138+si-miR-559 组、mimic NC 组、miR-559 mimic 组、LINC01138 mimic+miR-559 mimic 组,CCK-8、划痕实验、Transwell 用于检测细胞增殖、迁移和侵袭。LINC01138 和 miR-559 之间的相互作用使用双荧光素酶实验进行验证。结果 与 FHC 相比,在 SW620 细胞中 LINC01138 的表达水平上升,miR-559 的表达水平下降。抑制 LINC01138 或上调 miR-559 可以减弱 SW620 细胞的增殖、迁移和侵袭能力。结论本研究验证了LINC01138 与 miR-559 在结直肠癌细胞中的相互作用,发现 LINC01138 通过靶向 miR-559 来调控结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭,这些结果可为结直肠癌的治疗提供了新的靶点和策略。【关键词】结直肠癌;LINC01138;miR-559;细胞增殖;侵袭【中图分类号】R735.3LINC01138RegulatesProliferation,Migration,andInvasionofSW620 Colorectal Cancer Cells through Targeting miR-559GAO Dongyun1,SUN Ting1,CHEN Ping2,ZHOU Xuefeng11Department of Oncology,Dongtai Peoples Hospital,Dongtai,Yancheng,Jiangsu,224200,China2Department of Oncology,Yancheng First Peoples Hospital,Yancheng,Jiangsu,224200,China【Abstract】Objective To investigate the effect of LINC01138 on the proliferation,migration,and invasion of SW620 colorectal cancer cells and its mechanism.Methods RT-qPCR was used todetect the expression levels of LINC01138 and miR-559 in the human normal colonic mucosal cells(FHC)and the colorectal cancer cells(SW620).SW620 cells cultured in vitro were randomly di-vided into 6 groups:si-NC,si-LINC01138,si-LINC01138+si-miR-559,mimic NC,miR-559mimic and LINC01138 mimic+miR-559 mimic.CCK-8 assay,wound-healing assay,and transwellassay were performed to evaluate cell proliferation,migration,and invasion,respectively.The in-teraction between LINC01138 and miR-559 was validated using a dual-luciferase reporter as-say.ResultsThe expression level of LINC01138 was upregulated,while the expression level ofmiR-559 was downregulated in the SW620 cells when compared to those in the FHC.Inhibition ofLINC01138 or upregulation of miR-559 attenuated the proliferation,migration,and invasion abili-ties of SW620 cells.Conclusion This study confirms the interaction between LINC01138 and miR-559 in colorectal cancer cells and reveals that LINC01138 regulates the proliferation,migration,and invasion of colorectal cancer cells through targeting miR-559.These findings provide new targetsand strategies for the treatment of colorectal cancer.【Key words】colorectal cancer;LINC01138;miR-559;cell proliferation;invasion 结直肠癌(colorectal cancer,CRC)作为全球第二大致死癌症,每年导致约 90 万人死亡1。虽然该疾病主要发生在 50 岁以上的人群,但近年来年轻人的患病率也呈上升趋势2。肥胖、高脂饮食、缺乏运动、酗酒、吸烟、家族遗传等被认为是CRC 的风险因素,其发生发展的过程涉及了多种分子机制。近年来越来越多的研究揭示了长非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)和 微 小RNA(microRNA,miRNA)在 CRC 中扮演重要的调控角色。有研究发现 miR-559 的低表达与 CRC患者的淋巴结转移、肿瘤分期进展和不良预后相关8。miR-559 已被报道在多种癌症中作为一种抑制肿瘤的 miRNA,其诱导的 CD81 缺陷可能与增强免疫反应相关,从而在胃肠道肿瘤中表现出肿瘤抑制作 用。miR-559 还 通 过 靶 向 基 因 分 割 缺 陷-3(partition-defective 3,PARD3)抑制肝细胞癌细胞的增殖、自噬和血管生成10,以及直接靶向细胞周期蛋白 B1(cyclin B1,CCNB1)的 mRNA 的 3UTR,并在 mRNA 和蛋白质水平上降低 CCNB1 的表达来抑制卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭。尽管对 miR-559 在 CRC 中的作用已经有了一定的认识,但仍需要进一步的研究来探索其具体的调控机制、靶向基因及信号通路,明确 miR-559 在 CRC 治疗中潜 在 的 治 疗 意 义。使 用 miRDB(https:/mirdb.org/)进行预测,发现 LINC01138 与 miR-559 之间存在结合位点,而 LINC01138 作为 miR-559 的上游作用分子,可能通过与 miR-559 结合,发挥调控 CRC 细胞生物学行为的作用。已有研究表明 LINC01138 在肝癌、肾癌、胃癌等恶性肿瘤中的高 表 达 与 促 进 癌 细 胞 增 殖 和 转 移 相 关12。LINC01138 的高表达状态可能导致肿瘤相关信号通路的激活,促进癌细胞的生长和转移能力,从而促进肿瘤的发展,但目前在 CRC 中的研究尚少。LINC01138、miR-559 在 CRC 的发生和发展过程中都起到了重要的调控作用,其表达的异常可能成为CRC 诊断和治疗的潜在标志。本研究旨在深入探究 LINC01138 与 miR-559p 之间的相互作用,并进一步阐明它们在 CRC 细胞增殖、迁移和侵袭过程中的作用及相关机制。1 材料与方法1.1 细胞与试剂人正常结直肠黏膜细胞 FHC 和结直肠癌细胞SW620 均购自美国 ATCC。本实验中使用的实验试剂和产品来源如下:胎牛血清(SH30070.03)(FBS,Hyclone,Logan,UT,USA)、胰蛋白酶(15090046)(Gibco,GrandIsland,NY,USA)、Lipofectamine3000 试剂(L3000150)(Thermo Fisher Scientific,Pittsburgh,PA,USA)、Trizol(9109)(Takara,Ja-pan)、CCK-8 试剂盒(C0037)(Beyotime,ShangHai,China);si-NC、si-LINC01138、si-miR-559、mimicNC、LINC01138 mimic、miR-559 mimic、由南京博恩医药科技有限公司合成;pcDNA3.1(+)载体质粒(addgene,Watertown,Massachusetts,USA);pHelper1.0、pHelper 2.0 辅助质粒、吉凯转染试剂(GENE,ShangHai,China);SsoFastTMEvaGreenSupermix(1725200 AP)、iScript cDNA 合成试剂盒(1708891EDU)(Bio-Rad,Hercules,CA,USA);DNase I(EN0523)、RNase-free(EN0523)(Thermo Fisher Sci-entific,Pittsburgh,PA,USA);焦 碳 酸 二 乙 酯(DEPC)(97062-650)(Amresco,Ohio,USA);细胞miRNA 提取试剂盒(B1802)、一步法 miRNA 反转录试剂盒(D1801)、SYBR Green miRNA 荧光定量 PCR试剂盒(AP1501)(Haigene,Harbin,China);Dual-LumiTM双萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG088 S)(Beyotime,Shanghai,China)。1.2 实验分组本实验使用6 孔板进行分组,每个孔接种 1 104个 SW620 细胞,当细胞融合至 80%时使用脂质体转染法进行转染,其中转染质粒均由上海吉玛公司提供,将 si-NC、si-LINC01138、si-LINC01138 及si-miR-559、mimic NC、miR-559 mimic、LINC01138mimic 及 miR-559 mimic 分别转染至 SW620 细胞,分别 记 为 Blank、si-NC 组、si-LINC01138 组、si-LINC01138+si-miR-559、mimic NC 组、miR-559 mi-mic 组、LINC01138 mimic+miR-559 mimic。1.3 qRT-PCR 法检测 FHC 及 SW620 细胞中 LINC01138和 miR-559 表达 从各个细胞组中收集细胞样本,然后使用 Tr-izol 试剂提取细胞总 RNA。从提取的 RNA 中,使用反转录试剂盒合成 cDNA。实验所用引物如下:LINCO1138 正向5-TATTTACGAAAGCTGAAAGCG-3,反向 5-CTGCATGGGATAGGAGAAAC-3;GAPDH 正向5-GGAGCGAGATCCCTCCAAAAT-3,反 向5-GGCTGTIGTCATACTTCTCATGG-3;miR-559 正向 5-ACAGTGCCAACAAAGGAACCTC-3,反向 5-GACCT-GGACTTTGTAGGCCAGT-3;U6正 向5-ATTG-GAACGATACAGAGAAGATT-3,反 向 5-GGAAC-GCTTCACGAATTTG-3。所有引物均来自上海生工生物公司。使用合成的 cDNA 作为模板,在 PCR182医学分子生物学杂志,2024,21(3):280-286 J Med Mol Biol,2024,21(3):280-286反应中扩增目标基因,PCR 反应的条件是:95 2 min 的初始变性步骤,然后进行40 个循环,每个循环包括 95 30 s 变性步骤,60 30 s 退火步骤,72 30 s 延伸步骤。LINCO1138 以 GAPDH为内参,miR-559 以 U6 为内参。使用 2-Ct法计算LINCO1138 和 miR-559 的相对表达量。1.4 CCK-8 法检测细胞活力在培养细胞贴壁后的 48 h 内,使用 CCK-8 试剂进行细胞活力的测定。首先,将旧的培养基吸去,再用 PBS 进行 3 次冲洗。每孔添加 100 L 含有10%CCK-8 工作液的培养基,并轻轻摇晃均匀,使 CCK-8 试剂均匀地分布在细胞上。然后将孔板放入细胞培养箱进行孵育,经过孵育 2 h 后,使用酶标仪在波长450 nm 处检测各孔中的吸光度值,其吸光度值进行相应分析,以反映细胞的活力。1.5 划痕实验检测细胞的迁移能力在 6 孔板的每个孔中接种 2 105个 SW620 细胞。待细胞长满后,用一个无菌的 200 L 移液器吸头,在孔板中间划一条宽度均匀的划线。用显微镜观察孔板,在划痕的位置测量和记录划痕的宽度。将孔板放入培养箱内,保持细胞在 37,5%CO2下继续培养,培养时间为 24 h。测量和记录 24 h 后划痕的宽度,使用以下公式计算细胞划痕的愈合率:(0 h 划痕宽度-24 h 划痕宽度)/0h 划痕宽度 100%。1.6 Transwell 实验检测细胞的侵袭能力使用预冷培养液与体积比为 81 的 Matrigel 基质胶稀释,制备稀释液,在 Transwell 小室的上室中加入40 L 的 Matrigel 稀释液,将实验板置于37 的恒温培养箱中培养5 h;选取对数生长期的细胞,使用 2.5 g/L 胰蛋白酶进行细胞消化。单细胞悬液用含 10%胎牛血清的 DMEM 培养液制备,将细胞密度调整为 5 104个/mL,细胞悬液接种于 Tran-swell 小室的上室中,每孔加入 200 L 细胞悬液。向 Transwell 小室的下室中加入含有600 L 10%胎牛血清培养基,将实验板置于 37、5%CO2的培养箱中培养 24 h。用 PBS 洗涤细胞,然后加入多聚甲醛进行固定,固定时间为 10 min。再次用PBS 洗涤细胞,并使用结晶紫染液染色,染色时间为 10 min。用显微镜在 200 倍视野下随机选择 5 个视野,统计迁移细胞的数量,擦拭掉未迁移的细胞。通过以上步骤,完成细胞侵袭实验。1.7双荧光素酶报告实验检测 LINC01138 和 miR-559 的靶向关系 利用 Starbase 网站预测 LINC01138 和 miR-559之间的结合位点,根据预测结果,使用基因突变技术构建了含有结合位点的野生型荧光素酶报告基因载 体(LINC01138-WT)以 及 突 变 型 载 体(LINC01138-MUT)。收集对数生长期的 SW620 细胞,按照 Lipofectamine2000 转染试剂的说明书进行转染实验。将 miR-559 mimics、mimics NC 以及LINC01138-WT、LINC01138-MUT共 同 转 染 到SW620 细胞中。转染后,细胞继续培养 24 h,根据荧光素酶活性检测试剂盒的说明书进行荧光素酶活性检测。1.8 统计学方法本研究使用 SPSS21.0 统计学软件对收集的数据进行分析,计量资料的统计结果以 x s 形式表示。对于组间均数比较,采用独立样本检验来评估不同组之间的差异。而对于多组间均数比较,使用单因素方差分析来进行统计分析。在统计分析中,我们将 P 值小于 0.05 作为差异具有统计学意义。2 结果2.1 LINC01138 与 miR-559 在 FHC 及 SW620 细胞中的表达为了探究 LINC01138 和 miR-559 在 CRC 发展中的表达差异,使用 qRT-PCR 技术分别对 FHC 和SW620 细胞中的 LINC01138 和 miR-559 表达进行了定量 分 析。与 FHC 细 胞 比 较,SW620 细 胞 中LINC01138 表达升高,miR-559 表达降低,(P均0.05)(图 1)。结果提示 LINC01138 与 miR-559 在 SW620 细胞中存在差异表达,LINC01138 表达上调与 miR-559 表达下调可能与 CRC 的发展有关。与 FHC 组比较,P0.05。图 1 LINC01138(A)与 miR-559(B)在 FHC 及SW620 细胞中的表达水平2.2 沉默 LINC01138 对 SW620 细胞的 miR-559 表达以及增殖、迁移和侵袭能力的影响 为了特异性敲低 LINC01138 和 miR-559 的表达,通过脂质体转染法将包含不同 siRNA 的质粒282高冬蕴,等.LINC01138 通过靶向 miR-559 调控结直肠癌 SW620 细胞增殖、迁移及侵袭的机制研究转染到 SW620 细胞中,使用 qRT-PCR 技术测定各组细胞中 LINC01138 和 miR-559 的表达水平。与si-NC 组相比,si-LINC01138 组和 si-LINC01138+si-miR-559 组细胞中的 LINC01138 表达下降,被明显敲低。与 si-NC 相比,si-LINC01138 组的 miR-559 的表达增加,si-LINC01138+si-miR-559 组中miR-559 的 表 达 明 显 下 降。与 si-NC 组 和 si-LINC01138+si-miR-559 组相比,si-LINC01138 组细胞的活力降低,迁移和侵袭细胞数量明显减少(P均0.05)(图 2,3)。当敲低 LINC01138 的表达后,miR-559 的表达明显增加,同时 SW620 细胞的增殖、迁移和侵袭能力都明显降低,这说明LINC01138 在正常状态下会抑制 miR-559 的表达,并推动细胞的增殖、迁移和侵袭,即 LINC01138 可能在 CRC 的发展中起着促进作用。当同时敲低了LINC01138 和 miR-559 的表达,结果显示,尽管 si-LINC01138+si-miR-559 组中 LINC01138 的表达仍然下降,但 miR-559 的表达也明显下降,与单独敲低 LINC01138 的 si-LINC01138 组相比,这个组的细胞活力并未明显降低,迁移和侵袭细胞数量也没有明显减少。这可能表明,当 miR-559 也被敲低时,敲低 LINC01138 对细胞增殖、迁移和侵袭的抑制效果被抵消了,这进一步证实 LINC01138 可能通过抑制 miR-559 的表达来促进 CRC 的进程。1:Blank 组;2:si-NC 组;3:si-LINC01138 组;4:si-LINC01138+si-miR-559 组。与 si-NC 组比较,P0.05;与si-LINC01138 比较,#P0.05。图 2 沉默 LINC01138 对 SW620 细胞的 LINC01138(A)、miR-559(B)表达以及活力(C)的影响A:细胞侵袭(100);B:细胞迁移(40);C:侵袭细胞数;D:相对迁移能力。1:Blank 组;2:si-NC 组;3:si-LINC01138 组;4:si-LINC01138+si-miR-559 组。与 si-NC 组比较,P0.05;与 si-LINC01138 组比较,#P0.05。图 3 沉默 LINC01138 对 SW620 细胞迁移和侵袭能力的影响2.3 上调 miR-559 对 SW620 细胞以及增殖、迁移和侵袭能力的影响 本研究细致探讨了过表达 miR-559 对结直肠癌SW620 细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响,并进一步分析了同时过表达 LINC01138 和 miR-559 时的细胞行为变化。实验通过脂质体介导的转染方法,将 miR-559 mimic、mimic NC 以及 LINC01138 mimic与 miR-559 mimic 共转染至 SW620 细胞中,模拟miR-559 的过表达及其与 LINC01138 共表达的生物学效应。使用 qRT-PCR 技术,首先验证 miR-559mimic 转 染 后,与 mimic NC 组 以 及 LINC01138mimic+miR-559 mimic 组相比较,miR-559 在 miR-382医学分子生物学杂志,2024,21(3):280-286 J Med Mol Biol,2024,21(3):280-286559 mimic 组细胞中的表达水平显著增加,确认了过表达的效果。接下来,通过 CCK-8 实验、划痕实验和 Transwell 侵袭实验评估细胞活力、迁移能力和侵袭能力的变化。结果显示,与 mimic NC 组和 LINC01138 mimic+miR-559 mimic 相比,miR-559 mimic 组的 SW620 细胞活力降低,迁移及侵袭细胞数量显著减少(P均 0.05)(图 4,图 5)。结果提示 miR-559 在 CRC 的发展中起着抑制作用,过表达 miR-559 可能通过抑制细胞增殖、迁移和侵袭来抑制结直肠癌的发展。此外,实验结果还显示,与单独过表达 miR-559 的组相比,同时过表达LINC01138 和 miR-559 的组(LINC01138 mimic+miR-559 mimic 组)中,细胞的活力以及迁移和侵袭细胞的数量并未明显减少。这可能表明,当LINC01138 同时被过表达时,过表达 miR-559 对细胞增殖、迁移和侵袭的抑制效果被抵消了,再次验证了 LINC01138 与 miR-559 在 CRC 中的作用关系。1:Blank 组;2:mimic-NC 组;3:miR-559 mimic 组;4:LINC01138 mimic+miR-559 mimic 组。与 mimic NC组比较,P0.05;与 miR-559 mimic 组比较,#P0.01。图 4 上调 miR-559 对 SW620 细胞的 miR-559 表达(A)和活力(B)的影响A:细胞侵袭(100);B:细胞迁移(40);C:侵袭细胞数;D:相对迁移能力。1:Blank 组;2:mimic-NC组;3:miR-559 mimic 组;4:LINC01138 mimic+miR-559 mimic 组。与 mimic NC 组比较,P 0.05;与 miR-559mimic 组比较,#P0.01。图 5 上调 miR-559 对 SW620 细胞迁移及侵袭能力的影响2.4 LINC01138 与 miR-559 的靶向关系验证基于生物信息学分析预测,LINC01138 与 miR-559 结合位点如图,并据此构建了 LINC01138-WT和 LINC01138-MUT 荧光素酶报告基因载体,将miR-559 mimics 或对照 mimic NC 与上述构建的LINC01138-WT 或 LINC01138-MUT 载体共转染入SW620 细胞中,观察 miR-559 与 LINC01138 直接相互作用时对荧光素酶活性的影响。实验结果显示,与对 照 组 相 比,miR-559 和 LINC01138 野 生 型(LINC01138-WT)共转染组的荧光素酶活性明显降低(图 6)。研究结果表明,LINC01138 与 miR-559之间存在相互作用,并且这种相互作用导致荧光素酶活性受到了抑制。A:LINC01138 与 miR-559 结合位点;B:相对荧光素酶活性。1:LINC01138-WT+mimic NC;2:LINC01138-WT+miR-559 mimics;3:LINC01138-MUT+mimic NC;4:LINC01138-MUT+miR-559 mimics。与 LINC01138-WT+mimic NC 组相比,P0.05。图 6 LINC01138 靶向调控 miR-559 的表达482高冬蕴,等.LINC01138 通过靶向 miR-559 调控结直肠癌 SW620 细胞增殖、迁移及侵袭的机制研究3 讨论miRNAs 是一类短链非编码 RNA 分子,具有约20 25 个核苷酸的长度,它们通过与 mRNA 相互作用,参与基因表达的调控。miRNAs 在细胞过程中扮演重要的角色,对细胞增殖、分化、凋亡以及细胞周期等生物学过程具有调节作用,在结直肠癌研究中,已有大量的 miRNAs 被鉴定出参与该疾病的发病机制14-15。lncRNAs 是一类长度超过 200 个核苷酸的 RNA 分子,虽然不具备蛋白质编码能力,但参与基因表达的调节、染色质重塑、转录调控和细胞器功能调节等16。在结直肠癌研究中,许多miRNAs 和 lncRNAs 已被发现参与了该疾病的发生和发展过程,这些 miRNAs 和 lncRNAs 可以通过不同的机制调控结直肠癌细胞的增殖、转移、凋亡等生物学过程。通过深入研究这些 miRNAs 和 lncR-NAs 的功能和机制,我们可以更好地了解结直肠癌的发病机制,并为该疾病的治疗提供新的靶点和策略。研究表明,LINC01138 可以通过与一些关键的调控分子相互作用,如通过激活肝细胞癌中的精氨酸甲基转移酶 5(protein arginine methyltransferase5,PRMT5)来驱动恶性肿瘤18-19。此外,LINC-01138 作为竞争性内源性 RNA(competing endoge-nous RNA,ceRNA),与一些 miRNAs 结合并抑制其 对 靶 基 因 的 调 控 作 用20。有 研 究 发 现LINC01138 通过与 miR-375、miR-1273e 等 miRNAs相互作用,增加促肿瘤生长和转移的靶基因的表达水平7,21。目前有大量研究表明,LINC01138 在多种癌症组织及细胞中表达上调22-23,但在 CRC 中具体功能的报道较少。本研究结果表明,与 FHC相比,在 SW620 细胞中 LINC01138 的表达水平上升,miR-559 的表达水平下降。沉默 LINC01138后,SW620 细胞的活力降低,迁移和侵袭能力减弱,而 miR-559 的 表 达 显 著 增 加。研 究 证 明LINC01138 在 SW620 细胞中扮演促进细胞增殖、迁移和侵袭的角色,其沉默会导致细胞活力下降以及 迁 移 和 侵 袭 细 胞 数 量 的 明 显 减 少,提 示LINC01138 可能参与了调控这些细胞行为的过程。双荧光素酶实验证明,LINC01138 可靶向结合 miR-559,LINC01138 可能作为 miR-559 的调控因子,通过与 miR-559 相互作用,负调控其表达水平。而LINC01138 的沉默导致 miR-559 的解除抑制,从而增加 miR-559 的表达。Yang 等24的研究发现,miR-559 在胶质母细胞瘤组织和细胞系中的表达较低,并且与胶质母细胞瘤患者的 Karnofsky 表现评分和肿瘤大小显著相关,过表达 miR-559 能抑制胶质母细胞瘤细胞增殖、迁移和侵袭并促进细胞凋亡。Mu 等25证实 miR-559 在 CRC 细胞中下调,上调其表达能抑制 CRC 细胞的增殖。在本研究中,与 mimic NC 组比较,miR-559 mimic 组的 SW620细胞活力降低,迁移及侵袭细胞数量也明显减少,SW620 细胞增殖、迁移及侵袭的能力被过表达的miR-559 所减弱,而同时过表达 LINC01138 能抵消这些作用。研究结果表明 LINC01138 可能通过与miR-559 在 SW620 细胞中的相互作用,参与调控肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭能力,影响结直肠癌的发展。综上所述,LINC01138 与 miR-559 之间的相互调控关系以及 LINC01138 在多种癌症中的高表达,为我们深入理解肿瘤发生和发展的分子机制提供了重要线索。进一步的研究将有助于揭示 LINC01138和 miR-559 在 CRC 以及其他恶性肿瘤中的具体作用机制,并为开发相关的治疗策略和靶向治疗提供新的方向。参考文献1DEDIEU S,BOUCH O.Clinical,pathological,and mo-lecular characteristics in colorectal cancerJ.Cancers(Basel),2022,14(23):5958.2 DONE J Z,FANG S H.Young-onset colorectal cancer:AreviewJ.World J Gastrointest Oncol,2021,13(8):856-866.3 KRIGEL A,TATONETTI N P,NEUGUT A I,et al.No in-creased risk of colorectal Adenomas in spouses of patientswith colorectal neoplasiaJ.Clin Gastroenterol Hepatol,2020,18(2):509-510.4 RYCHTER A M,YKOWSKA-SZUBER L,ZAWADA A,et al.Why does obesity as an inflammatory condition pre-dispose to colorectal cancer?J.J Clin Med,2023,12(7):2451.5 LULLI M,NAPOLI C,LANDINI I,et al.Role of non-cod-ing RNAs 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