AKT抑制剂NTQ1062与Olaparib在卵巢癌细胞中的联用研究.pdf

药学与临床研究药学PharmaceuticalandClinicalResearch研究AKT抑制剂NTQ1062与Olaparib在卵巢癌细胞中的联用研究李月楚,周秋华,苗雷,季晓君,马昌友,吴1江苏省中药资源产业化过程协同创新中心南京中医药大学，南京2 10 0 2 3；2南京正大天晴制药有限公司，南京2 10 0 46舰,李念光1m,徐丹2 W摘要目的：探讨AKT抑制剂NTQ1062和PARP抑制剂Olaparib的对卵巢癌细胞的联用增效可行性及作用机制。方法：研究NTQ1062和Olaparib联用对三种人卵巢癌细胞系（OVCAR-3、TOV-21G、A 2 7 8 0)增殖的影响，并通过Westernblot技术检测PI3K/AKT信号通路及同源重组修复、DNA损伤修复相关蛋白的表达，最后使用AnnexinV-FITC双染法检测细胞凋亡。结果：实验结果显示，NTQ1062对TOV-21G、A 2 7 8 0 细胞株具有较强的增殖抑制作用，对OVCAR-3细胞增殖的抑制作用较弱，并且联合处理会增加三株卵巢癌细胞的增殖抑制作用；Westernblot实验中NTQ1062增加卵巢癌细胞中AKT的磷酸化、抑制S6RP的磷酸化、增加H2AX蛋白表达、降低RAD51蛋白表达，并发现联合处理具有协同作用;进一步研究发现,联合用药会降低TOV-21G细胞中BRCA1蛋白的表达,但对A2780细胞影响不显著；细胞凋亡实验中,NTQ1062增加细胞凋亡群，并且联合处理显著增加了细胞凋亡效果。结论：NTQ1062可抑制OVCAR-3、T O V-2 1G、A2780细胞增殖，与Olaparib联用具有协同作用，通过抑制PI3K/AKT通路、DNA损伤、减少同源重组修复、降低BRCA1蛋白表达、增加凋亡来发挥作用。本研究可为临床制订AKT抑制剂NTQ1062与PARP抑制剂联合应用于卵巢癌治疗策略提供理论和技术依据。关键词卵巢癌;AKT抑制剂;PARP抑制剂；联用;DNA损伤；同源重组修复中图分类号R966文献标志码A文章编号16 7 3-7 8 0 6(2 0 2 4)0 2-9 7-0 6肿瘤的治疗一直是全世界关注的焦点之一，由于肿瘤细胞的特殊性质，常规化疗药物在治疗过程中容易产生耐药性,导致治疗效果不佳。目前,许多新型抗肿瘤药物正在研究和开发中，包括靶向治疗药物、免疫治疗药物、基因治疗药物以及多药联用等。卵巢癌是妇科恶性肿瘤死亡的主要原因之一，由于其异质性高，长期化疗可产生耐药和复发，几乎没有有效的治疗方案叫，因此药物联合使用已成为一种抗卵巢癌药物治疗策略,旨在提高治疗效果并克服耐药性挑战。聚（ADP-核糖）聚合酶（polyADP-ribosepolymerase,PARP）抑制剂可阻碍损伤DNA的修复，于2 0 14年获得了美国FDA和欧洲药品管理局的监管批准，主要用于治疗携带BRCA突变型的卵巢癌患者2.3。至今,全球范围内获批的PARP抑制剂共有6 个(Olaparib、Ni r a p a r i b、Ru c a p a r i b、T a-*基金项目江苏省自然科学基金（BK20210055）作者简介李月楚，女，在读硕士E-mail:*通信作者李念光，男，教授E-mail：l i n i a n g u a n g n j u c m.e d u.c n徐丹，男，正高级工程师E-mail:收稿日期2023-11-13修回日期2 0 2 4-0 3-0 6lazoparib、Pa m i p a r i b、Fl u z o p a r i b),其中Olaparib、Ni-raparib、Pa m i p a r i b 和Fluzoparib被获批用于卵巢癌且进人中国市场。然而，一些患者在接受PARP抑制剂治疗后会出现耐药性。因此联合使用PARP抑制剂与其他药物已成为卵巢癌治疗的一个重要发展方向。AKT也称蛋白激酶B(protein kinase B,PKB),是一种丝氨酸/苏氨酸激酶,位于PI3K-AKT-mTOR信号途径的核心位点,并且在细胞的增殖、存活、生长、迁移和能量代谢中起着重要的作用4.5。AKT信号通路的异常激活与卵巢癌的发生和耐药有关，AKT抑制剂可以抑制AKT信号通路的活性，从而抑制肿瘤细胞的生长和增殖4-。目前临床进展最快的AKT抑制剂有阿斯利康的 Capivasertib、罗氏的Ipatasertib以及来凯医药的Afuresertib，现已经进人期临床试验。NTQ1062是一款由南京正大天晴制药有限公司自主开发的小分子Pan-AKT抑制剂，于2021年7 月获得国家药品监督管理局临床试验默示许可，并于2 0 2 1年9月启动在晚期恶性实体肿瘤中的I期临床研究(CTR20211999)。972024Apr;32(2)AAKT抑制剂NTQ1062与Olaparib在卵巢癌细胞中的联用研究NTQ1062对AKT1/2/3的激酶活性有较好的抑制作用,IC5o分别0.410-6.310-0.110-mol.L-1，且对于AKT下游信号p-PRAS4O以及p-GSK-3表现出剂量依赖的抑制作用。此外，NTQ1062在体内外对多种肿瘤表现出显著的抑瘤作用。为探索NTQ1062对卵巢癌的效果,本文通过观察AKT抑制剂NTQ1062单药或与Olaparib联用对卵巢癌细胞的生长和细胞调亡的影响，旨在为NTQ1062在卵巢癌中的临床开发提供参考。1木材料与方法1.1材料1.1.1细胞卵巢癌 OVCAR-3.TOV-21G、A 2 7 8 0细胞株（Cat:CBP60294、CBP6 0 2 92、CBP6 0 2 8 3）购自南京科佰生物。1.12实验药物NTQ1062来源南京正大天晴制药有限公司。Olaparib(CAS号7 6 113-2 2-0)购自美国Selleckchem公司。1.1.3?试剂RPMI1640培养基(Gibico公司,批号61870036)；胎牛血清（Hyclone公司，批号SH30406.05）；胰蛋白酶（Vivacell，批号C3530-0500);Cell Counting-Lite 2.0、增强型ECL化学发光检测试剂盒（Vazyme公司，批号DD1101-2、E411-04);实验所用抗体P-AKT(Ser473）、A K T、P-S6RP(Ser235/236)、S6 RP、Ra d 51、H 2 A X(Se r 139)Cleaved PARP、A n t i -r a b b i t Ig G 和 Protease/Phos-phatase Inhibitor Cocktail（10 0 X)（Ce l l Si g n a l i n gTechnology，批号分别为40 6 0 s、92 7 2 s、48 51、2 2 17 s、8875s、97 18 s、56 2 5s、7 0 7 4s.58 7 2);A n n e x i n V-FI T C细胞调亡检测试剂盒、BCA蛋白浓度测定试剂盒（碧云天公司，批号C1062L、P0 0 0 9）;15%高分辨率预制胶（Hepes-Tris)、10%高分辨率预制胶（Hepes-Tris）（Ye a s e n 公司，批号36 2 46 ES1036248ES10)；牛血清白蛋白（Merck公司，批号V900933）；10 印迹膜转印缓冲液、10 电泳缓冲液、10 TBST缓冲液（生工生物工程公司，批号C520003-0001、C520001-0001,C520009-0001)。1.1.4实验仪器SSPARK多功能酶标仪、D300e微量滴定仪（上海Tecan公司）;Mini-PROTEANTetraCell垂直电泳仪（美国Bio-Rad公司）；52 0 0 Multi凝胶成像系统（上海Tanon公司）;CytoFlex流式细胞仪（美国Beckman公司）。1.2方法1.2.1细胞培养（OVCAR-3、T O V-2 1G、A 2 7 8 0 细胞分别采用含2 0%、15%、10%胎牛血清的RPMI-981640培养基，置于37、5%CO2的细胞培养箱中常规培养,每1 2 d更换培养液，细胞融合度达到80%90%时,用胰蛋白酶消化后传代。1.2.2细胞增殖抑制实验将OVCAR-3、T O V-21G、A 2 7 8 0 细胞分别按照510 3个/孔、2 10 3个/孔、2 10 3个/孔接种于96 孔板，每组设置1个复孔，细胞贴壁2 4h后采用微量滴定仪分别加人药物，NTQ1062和Olaparib的起始浓度分别为30 10molL-l和2 0 0 10 molL-l，均按3倍浓度梯度稀释，共10 个梯度浓度,DMSO含量为0.5%。联用组药物浓度平行加入，DMSO含量为0.5%。培养7 2 h后加人Cell Counting-Lite 2.0检测剂在多功能酶标仪上检测。1.2.3Westernblot检测将TOV-21G、A 2 7 8 0 细胞采用细胞裂解液裂解，提取细胞总蛋白,BCA蛋白定量试剂盒进行蛋白定量。定量后取2 0 g上样，进行SDS-PAGE电泳，分离后将胶转移至PVDF膜上，5%牛血清白蛋白封闭，4条件下于一抗（p-AKT、A K T、P-S6 RP、S6 RP、RA D 51按照1:150 0 稀释，H2AX、c l e a v e d-PA RP按照1:10 0 0 稀释）孵育过夜，1TBSTBuffer洗膜3次，室温条件下Anti-rabbit IgG、H RP-l i n k e d A n t i b o d y（按照1:2 0 0 0 稀释)孵育1h,洗膜,用ECL曝光。利用IamgeJ软件分析蛋白条带灰度值。1.2.4细胞凋亡检测将TOV-21G、A 2 7 8 0 细胞分别按照410 5个/孔、2 10 5个/孔接种于2 4孔板，细胞贴壁2 4h后分别加入终浓度为30 molL-的NTQ1062和2 0 0 molL-1的Olaparib，药物作用48h后,用胰蛋白酶消化细胞,用预冷的PBS洗涤细胞两次，4下10 0 0 g离心5min，弃上清，195L结合缓冲液重悬细胞，分别加入5L的AnnexinV-FITC和10 L碘化丙啶。混匀后室温避光孵育15min，采用流式细胞仪检测。其中Q2:AnnexinV+/PIt,此区域的细胞为晚期凋亡细胞,Q4:AnnexinV+/PI-,此区域的细胞为早期调亡细胞。1.2.5统计学分析所有数据均采用GraphPadPrism8.0软件拟合量效曲线，得到AKT抑制剂NTQ1062、PA RP抑制剂Olaparib和NTQ1062与Olaparib两药联用对OV-CAR-3、T O V-2 1G、A 2 7 8 0 细胞增殖抑制的ICso值。实验重复3次，每次实验均设置1个复孔。抑制率（%)=10 0-（化合物孔读值-空白组读值)/(阴性对照组读值空白组读值）10 0，其中化合物孔读值为NTQ1062单药组、Olaparib单药组、NTQ1062和Ola-parib联用组荧光信号均值（relativelightunit，药学与临床研究药学Pharmaceuticaland Clinical Research研究RLU)，空白组读值为培养基荧光信号均值；阴性对照组读值为细胞和培养基荧光信号均值。用Com-puSyn软件通过Chou-Talalay法计算细胞活力协同效应的联合指数（combination index,CI），以确定二者之间是否有联用增效作用,其中当CI1时,两药联用为协同效应。2结果2.1细胞增殖抑制作用结果表明,NTQ1062单药可抑制卵巢癌细胞增TOV-21GB120A2780OVCAR-310080(%)率佛6040200-2012345678 9.10/d图1NTQ1062单用或与Olaparib联用对卵巢癌细胞的增殖抑制情况(n=3)(A)NTQ1062对卵巢癌细胞的增殖抑制情况;NTQ1062和Olaparib联用对(B)OVCAR-3、(C)T O V-2 1G、(D)A 2 7 8 0 细胞的增殖抑制情况。2.2NTQ1062与Olaparib联用协同诱导卵巢癌细胞的凋亡为了确定AKT和PARP双重抑制对细胞调亡的影响，使用AnnexinV-FITC通过流式细胞仪对卵巢癌细胞进行了凋亡检测，并使用Western blot检测cleaved-PARP蛋白在卵巢癌细胞中的表达情ADMSOQ1(0.33%)Q2(0.25%03(97.65%)Q4(1.77%)01041105106FITC-ABDMSOQ1(0.17%)Q2(0.34%）Q3(97.92%）Q4(1.57%)102103104105106殖（图1A）,且OVCAR-3、T O V-2 1G、A 2 7 8 0 细胞的生长与NTQ1062药物浓度存在剂量依赖关系,ICs0值分别为（53.0 92 7.44）10-3、（2.391.30）10-3(1.890.87)10-3molL-l。在TOV-21G、A 2 7 8 0 细胞中,NTQ1062与Olaparib药物联用具有协同作用(CI1),而在OVCAR-3细胞中只有部分浓度的药物联用具有协同作用(CI1)(图1BD),其中药物联用后对TOV-21G、A 2 7 8 0 细胞增殖抑制作用较为明显，因此后续选用这两株细胞进行机制探索。合NTQ1062+NTQ1062A120-OlaparibNTQ1062+Olaparib10080(%)率伴6040200-2012345678910/dNTQ1062Q1(8.75%)Q2(10.25%）Q3(72.38%)Q4(8.62%)0104105106FITC-ANTQ1062Q1(12.39%)Q2(4.33%)Q3(79.34%)Q4(3.94%)102103104105106合NTQ10621201OlaparibNTQ1062+Olaparib10080(%）率伴6040200-2012345678910/d况。虽然抑制AKT或PARP单独治疗都在一定程度上增加了细胞调亡群以及上调cleaved-PARP蛋白表达，但与单一用药相比，联合用药显著增加了卵巢癌细胞的凋亡率(图2)和cleaved-PARP蛋白表达(图3)。结果表明,AKT和PARP双重抑制对卵巢癌具有潜在治疗效果。OlaparibNTQ1062+OlaparibQ1(0.36%)Q2(0.59%）901t01Q3(90.21%)0104105106FITC-AOlaparibQ1(0.44%)Q2(0.41%）901sO1tO103(96.20%102103104105106C(%）率6040200-2012345678910/dQ1(7.92%)Q2(27.06%)Q4(8.84%)Q3(46.45%)0104105106FITC-ANTQ1062+OlaparibQ1(7.27%)Q2(11.69%)Q4(2.95%)Q3(73.40%)1021033104105106120-olaparib100NTQ1062+Olaparib8050(%）率工40302010Q4(18.57%)0DN257(%)率72015104Q4(7.64%)0D中TOV-21GA2780O1aFITC-A2.3单一用药和联合用药抑制PI3K/AKT通路，增强DNA损伤Westernblot结果显示,NTQ1062单独使用或FITC-A图2NTQ1062单用或与Olaparib联用对卵巢癌细胞凋亡的影响（n=3)(A)TOV-21G细胞、(B)A2780细胞;P0.05,P0.01,*P0.001。FITC-A与PARP抑制剂联合用药时,PI3K/AKT信号通路的下游因子p-S6RP的信号显著减少，并且显著增加了卵巢癌细胞中p-AKT信号(图4)。为了评估DNA99FITC-A2024Apr;32(2)AKT抑制剂NTQ1062与Olaparib在卵巢癌细胞中的联用研究损伤程度，使用NTQ1062单一用药，显著增加了TOV-21G、A 2 7 8 0 细胞中DNA损伤标志物H2AXANTQ1062(30 mol L-1)Olaparib(200 mol:L-1)Cleaved-PARP-actinBNTQ1062(30 mol L-)Olaparib(200 mol L-1)Cleaved-PARP-actin图3NTQ106和Olaparib联用对卵巢癌细胞中Cleaved-PARP表达情况(n=3)NTQ1062和Olaparib 联用对(A)TOV-21G细胞、(B)A2780 细胞凋亡的蛋白表达;P0.05,*P0.01,*P0.001。口DMSO3.33 mol:L-1ATOV-21GNTQ106203.331030(mol L-1)PAKTAKTpS6RPS6RPRAD51H2AX-actinCTOV-21GNTQ1062(30 mol L-1)Olaparib(200 umol:L-l)PAKTAKTpS6RPS6RPRAD51H2AXBRCA1-actin图4NTQ1062单用或与Olaparib联用对卵巢癌细胞的PI3K/AKT通路、HR、D NA 损伤的影响（n=3）NTQ1062对(A)TOV-21G细胞和(B)A2780细胞及NTQ1062和Olaparib联用对(C)TOV-21G细胞和(D)A2780细胞的PI3K/AKT信号通路、HR、D NA 损伤的相关蛋白表达;P0.05，*P 0.0 1,*P 0.0 0 1。总之，研究结果表明,PI3K/AKT信号通路被阻断后,DNA损伤反应受损和同源重组修复不足，且BRCA的表达显著下调，可能是卵巢癌细胞对NTQ1062与Olaparib联合处理产生协同反应的潜在机制。3讨论研究表明,PARP抑制会激活PI3K-AKT通路,并且在非临床研究中，联合使用PI3K抑制剂与100TOV-21G+A2780+2.01.51.00.5001.51.00.51.51.00.50TOV-21G321OSWa1062NTQ1Olapal062+A27802.01.51.00.50DMSONTQ1Olapari432-01.51.00.50口DMSONTQ1062Olaparib062+0laDA2780NTQ1062+(30 mol L-1)1.5Olaparib1.0(200 mol.L-1)0.5PAKTAKTPS6RPS6RP2.0RAD51H2AX0.5BRCA1-actinPARP抑制剂在野生型PIK3CA卵巢癌细胞中表现出良好的协同作用,其机制在于PI3K抑制剂诱导DNA双链断裂和同源重组修复受损10-13。在临床试验中,PI3K/AKT通路抑制剂增强了PARP抑制剂的细胞抑制作用，进一步证实了这一概念的临床相关性14。基于上述报道，本研究探讨了AKT抑制剂NTQ1062与PARP抑制剂Olaparib在三种人卵巢癌细胞系（OVCAR-3、T O V-2 1G、A 2 7 8 0）上的联合蛋白的表达（图4AB)，并且与单药处理相比，NTQ1062和Olaparib联合处理会加剧两株细胞的DNA损伤(图 4CD)。为了检测药物处理对卵巢癌细胞修复双链DNA断裂能力的影响，对同源重组修复标志物RAD51蛋白进行了检测。观察到NTQ1062单药处理会显著减少TOV-21G细胞中RAD51蛋白表达（图4AB），表明AKT和PARP双重抑制导致同源重组修复受损。但单药和联合用rib药对A2780细胞的RAD51蛋白没有影响。根据已有研究报道,BRCA1/2下调可能是PIK3CA突变卵巢癌细胞对PI3K和PARP双重抑制治疗反应的潜在生物标志物。本次研究中,TOV-21G、A 2 7 8 0 细胞也表现出BRCA1蛋白表达水平下调（图4CD)。10 mol.L-130 mol.L-1BA2780NTQ106203.3310.30(mol L-1)PAKTAKTpS6RPS6RPRAD51H2AX-actin1.51.00.501.51.00.5+1.51.00.501.51.00.52.01.01.50.501.51.00.51.00.51.51.00.50.80.20药学与临床研究药学Pharmaceuticaland Clinical Research研究治疗效果。我们的研究重点是观察这种联合治疗如何影响细胞增殖、细胞凋亡,以及与PI3K-AKT通路相关的关键蛋白水平变化。NTQ1062作为一种AKT抑制剂，其主要通过抑制AKT激酶活性，影响下游的PI3K-AKT通路，从而阻断了肿瘤细胞的生存和增殖信号7。Olaparib作为PARP抑制剂，通过抑制PARP酶活性，阻碍DNA损伤的修复，特别是在那些依赖于PARP进行单链DNA断裂修复的细胞中2 。这两种药物的作用机制在卵巢癌细胞中的联合应用,提供了一种双重攻击策略,旨在增强抑制肿瘤增殖和促进细胞死亡的效果。实验结果显示，NTQ1062和Olaparib的联合使用显著抑制了卵巢癌细胞的增殖，并通过AnnexinV-FITC双染法观察到细胞凋亡的显著增加。这一结果与cleaved-PARP蛋白水平的增加相吻合，后者是细胞调亡过程中的关键标志物，进一步验证了细胞凋亡的增加。此外，H2AX蛋白水平的上调表明DNA受损增加，这与Olaparib抑制DNA损伤修复能力的作用机制相符合；而RAD51蛋白水平的下调则暗示同源重组修复能力受损，这可能是由于NTQ1062通过影响PI3K-AKT通路进而干扰了同源重组修复过程。PI3K-AKT通路的抑制与RAD51的功能密切相关，因为AKT可以调节多种与DNA损伤修复相关的蛋白4-10 。综上所述,NTQ1062与Olaparib的联合使用在卵巢癌细胞中通过抑制PI3K-AKT通路和阻断DNA损伤修复过程，协同促进细胞调亡并抑制细胞增殖。这种双重抑制策略不仅揭示了这两种药物在卵巢癌治疗中的潜在协同作用,也为未来的临床研究提供了重要的实验依据。未来研究应进一步探索这种联合疗法的最优治疗方案，以及如何克服潜在的耐药问题,从而为卵巢癌提供一个有效的治疗策略。参考文献1 YANG C,XIA BR,ZHANG ZC,et al.Immunotherapyfor ovarian cancer:adjuvant,combination,and neoadju-vantJ.Front Immunol,2020,11:577869.2 GROELLY FJ,FAWKES M,DAGG RA,et al.Target-ing DNA damage response pathways in cancer J.NatRev Cancer,2023,23(2):78-94.3 MURAI J,POMMIER Y.BRCAness,homologous re-combination deficiencies,and synthetic lethalityJ.Can-cer Res,2023,83(8):1173-4.4 HUA H,ZHANG H,CHEN J,et al.Targeting Akt in.cancer for precision therapyJ.J Hematol Oncol,2021,14(1):128.5 REVATHIDEVI S,MUNIRAJAN AK.Akt in cancer:mediator and more J Semin Cancer Biol,2019,59:80-91.6MA C,WU J,WANG L,et al.Discovery of clinicalcandidate NTQ1062 as a potent and bioavailable AKTinhibitor for the treatment of human tumors J.J MedChem,2022,65(12):8144-68.7SONG M,BODEAM,DONG Z,et al.AKT as atherapeutic target for cancer JJ.Cancer Res,2019,79(6):1019-31.8 ZHANG N,FU JN,CHOU TC.Synergistic combinationof microtubule targeting anticancer fludelone withcytoprotective panaxytriol derived from panax ginsengagainst MX-1 cells in vitro:experimental design anddata analysis using the combination index method J.Am J Cancer Res,2015,6(1):97-104.9GALLYAS F JR,SUMEGI B,SZABO C.Role of aktactivation in PARP inhibitor resistance in cancer JCancers(Basel),2020,12(3):532.10 SOUNG YH,CHUNG J.Combination treatment strate-giestoovercomePARPinhibitorresistance Biomolecules,2023,13(10):1480.11 BOUSSIOS S,KARIHTALA P,MOSCHETTA M,etal.Combined strategies with Poly(ADP-Ribose)Polymerase(PARP)inhibitors for the treatment ofovarian cancer:a literature review.Diagnostics(Basel),2019,9(3):87.12 WANG D,LI C,ZHANG Y,et al.Combined inhibi-tion of PI3K and PARP is effective in the treatmentof ovarian cancer cells with wild-type PIK3CA genesJ.Gynecol Oncol,2016,142(3):548-56.13 WANGD,WANG M,JIANG N,et al.Effective useof PI3Kinhibitor BKM120andPARPinhibitorOlaparib to treat PIK3CA mutant ovarian cancerJ.Oncotarget,2016,7(11):13153-66.14 NOOROLYAI S,SHAJARI N,BAGHBANI E,et al.The relation between PI3K/AKT signalling pathwayand cancerJ.Gene,2019,698:120-8.15 EDIRIWEERA MK,TENNEKOONKH,SAMARAKOONSR.Role of the PI3K/AKT/mTOR signaling pathway inovarian cancer:biological and therapeutic significanceJ.Semin Cancer Biol,2019,59:147-60.16 HUANG TT,LAMPERT EJ,COOTS C,et al.Targeting the PI3K pathway and DNA damageresponse as a therapeutic strategy in ovarian cancerJ.Cancer Treat Rev,2020,86:102021.1012024Apr;32(2)AKT抑制剂NTQ1062与Olaparib在卵巢癌细胞中的联用研究Effects of Combined AKT Inhibitor NTQ1062 and PARP Inhibitor Olaparibin Ovarian Cancer Cells*LI Yuechu,ZHOU Qiuhua,MIAO lei,JI Xiaojun,MA Changyou,WU Jian,LI Nianguang,XU DanJiangsu Collaborative Innovation Center of Chinese Medicinal Resources Industrialization,Nanjing Universityof Chinese Medicine,Nanjing 210023,China;2Nanjing Chia-Tai Tianqing Pharmaceutical Co.,Ltd.,Nanjing210046,ChinaABSTRACT Objective:To investigate the synergism and mechanism of AKT inhibitor NTQ1062 andPARP inhibitor Olaparib in ovarian cancer cells.Methods:The effects of NTQ1062 and Olaparib on theproliferation of three ovarian cancer cell lines(OVCAR-3,TOV-21G,A2780)were studied.The expressionof proteins related to PI3K/AKT signaling pathway,homologous recombination repair and DNA damage re-pair were detected by Western blot.Apoptosis were detected by Annexin V-FITC double staining.Results:The results showed that NTQ1062 had strong inhibitory effects on proliferation of TOV-21G and A2780cell lines,but had a weak inhibitory effect on proliferation of OVCAR-3 cells,and the combined treatmentcould increase the proliferation inhibition of the three ovarian cancer cell lines.In Westerm blot experi-ments,NTQ1062 increased the phosphorylation of AKT,inhibited the phosphorylation of S6RP,increasedthe expression of H2AX protein and decreased the expression of RAD51 protein in the ovarian cancercells,and the combination treatment had synergistic effects;Further studies found that the combinationtreatment decreased the expression of BRCA1 protein in TOV-21G cells,but had no significant effect onA2780 cells.In apoptosis experiments,NTQ1062 increased apoptosis and the combination treatment signifi-cantly increased the effects of apoptosis.Conclusion:NTQ1062 can inhibit OVCAR-3,TOV-21G andA2780 cell proliferation,and has synergistic effects when combined with olaparib,which may be effectivein inhibiting PI3K/AKT pathway,reducing DNA damage and homologous recombination repair,decreasingBRCA1 protein expression and increasing apoptosis.This study can provide theoretical and technical basisfor the clinical formulation of AKT inhibitor NTQ1062 combining with PARP inhibitor olaparib in thetreatment of ovarian cancers.KEY WORDS Ovarian cancer;AKT inhibitor;PARP inhibitors;In combination;DNA damage;Homolo-gous recombination repair102