华中农业大学本科生物药物学课程考试试卷答案B.doc

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华中农业大学本科课程考试试卷答案

考试课程与试卷类型：生物药物学B卷 姓名：
考年学期：2005－2006－1 学号：
考试时间：2006－01 班级：

一、单项选择题（从下列各题四个备选答案中选出一个正确答案，并将其代号写在答题纸相应位置处。答案错选或未选者，该题不得分。每小题2分，共20分）
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
C
D
C
B
A
D
C
B
C
D

二、多项选择题（每小题有5个备选答案，其中正确答案为2-5个；不选、少选、错选或多选都不得分。每小题3分，共30分）
1
2
3
4
5
ABCDE
ABCD
ABCDE
BC
ABC
6
7
8
9
10
ABCD
ABCDE
ABCDE
ABCDE
ABCDE

三、判断题（正确的打“T”，错误的只打“F”，不必改正，每小题1分，共10分）
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
T
F
F
T
F
T
F
T
F
T

四、填空题（每个空0.5分，共16分）
1、载体能够独立自主复制，有多克隆位点和方便的筛选标记，应有很强的启动子，能为大肠杆菌的RNA聚合酶所识别，启动子可控诱导时才能转录，有很强的终止子，所产生的mRNA必须具有翻译起始信号
2、N，Asn-x-Ser/Thr，O，Ser-Thr-Pro
3、YEp（酵母附加体质粒）、YRp（酵母复制型质粒）、YCp（酵母着丝粒质粒）、Yip（酵母整合质粒）
4、分子量大难以穿透肿瘤组织，抗原性大容易引起人抗鼠免疫反应
5、脾-脾，瘤-瘤，脾-瘤及未融合的细胞
6、慢
7、将分泌性表达改变为细胞内表达，用N-糖苷酶 或其它酶去掉糖基，利用基因工程去掉N-糖基化位点
8、冷冻干燥法，干粉
9、产物蛋白质的不均一，信号肽加工不完全，内部降解，多聚体形成造成表达蛋白质在结构上的不一致，还时常遇到表达产物的过度糖基化情况。
10、对数期，对数后期
11、紫杉醇
12、发根农杆菌
13、蛋白酶

五、名词解释（每小题2分共10分）

1.甲醇酵母：指能利用甲醇作唯一碳源的一类酵母,其代谢甲醇的第一步是在醇氧化酶的作用下甲醇被氧化成甲醛，调节这种酶的启动子是强启动子并严格受甲醇诱导,因此可用于调控外源蛋白表达。
2.肽图分析：用酶法或化学法降解目的蛋白质，对生成的肽段进行分离分析，检测蛋白质一级结构中的细微变化。
3.单克隆抗体：一个B细胞针对一个抗原决定簇所产生的一种特异性抗体，称为单克隆抗体
4.贴壁培养：必须有给予贴壁的支持物表面，动物细胞依靠自身分泌或培养基中提供的贴附因子才能在该表面上生长、增殖。
5.植物抗体：利用基因工程技术在植物中表达或生产抗体, 即将编码全抗体或抗体片段的基因导入植物,在植物中表达出具有功能性识别抗原及结合特性的全抗体或部分抗体片段, 是抗体基因工程研究的一个新领域。

六、问答题（每小题6分，共24分）
1.增加原核表达产物稳定性的方法有哪些？
①组建融合基因，产生融合蛋白。（1.5分）
②利用大肠杆菌的信号肽或真核蛋白自身的信号肽，把真核基因产物运输到周质空间，使外源蛋白不易被酶降解。（1.5分）
③采用位点特异性突变的方法，改变真核蛋白二硫键的位置，可增加蛋白质的稳定性。（1.5分）
④选用蛋白酶缺陷型菌株为宿主细胞，有可能减弱表达产物的降解。（1.5分）

2.简述甲醇酵母表达系统的优点。
①具有强有力的、易控制的AOX启动子,可严格调控外源蛋白的表达; （1分）
②作为真核表达系统,可对表达蛋白进行翻译后的加工和修饰,即二硫键的形成、脂肪的酰化、蛋白磷酸化、折叠、信号序列加工、N-糖基化、O-糖基化,从而使表达出的蛋白具有生物活性; （1分）
③对营养要求低,生长快, 培养基廉价,便于工业化生产; （0.5分）
④可高密度发酵培养,蛋白产量高; （0.5分）
⑤表达量高,如破伤风毒素C 片段表达量高达12 g/ L; （1分）
⑥甲醇酵母自身分泌的背景蛋白少,表达产物较易纯化,表达的蛋白既可存在于胞内,又可分泌至胞外,如表达的重组水蛭素(HIR) 仅经过两步层析纯化,纯度就高达97 %以上; （1分
⑦糖基化程度低,和酿酒酵母相比,甲醇酵母中加到翻译蛋白的糖链每条长度为8～14 个甘露糖残基,较之酿酒酵母(50～150 甘露糖残基) 短得多。此外,酿酒酵母核心多糖末端存在α-1 ,3 糖苷键,使这些蛋白具有高度的抗原性,因而不适宜作治疗制剂,而甲醇酵母没有。（1分）

3.转基因植物制药有何优点？
（1）植物细胞培养条件简单,易于成活,便于进行遗传操作,利用植物细胞的全能性和组织培养,可以培育出稳定遗传的药用植物品种,通过田间种植生产药用蛋白。（0.5分）
（2）植物具有完整的真核表达系统,表达产物可糖基化、酰胺化、磷酸化,亚基的正确装配等翻译后的加工过程,使表达产物具有与高等动物细胞一致的免疫原性和生物活性。（1分）
（3）使用安全，植物不是人类病原体的宿主，故与动物细胞培养比较，利用重组植物生产药物不含威胁人类健康的病原微生物。（1分）
（4）经转化植物的种子易于贮存有利于生产和运输。（0.5分）
（5）投资小，成本低,生产成本低,不需要昂贵的培养基和复杂的纯化。利用转基因植物生产药用重组蛋白的成本，仅为利用大肠杆菌发酵生产成本的1/10-1/50。
（6）可将蛋白质富集在种子中，以种子油脂体作为蛋白质或肽类的载体，可以有效地降低下游的加工成本并可相应的提高产率。（1分）
（7）易于形成产业化生产,在筛选得到高效表达植株后,只需通过种植和扩大种植面积,就能形成“分子药田”,大规模生产。（1分）

4.简述基因工程药物生产的主要程序步骤。
（1）目的基因的克隆（1分）
（2）构建DNA重组载体（1分）
（3）将DNA重组体转入宿主菌构建工程菌（1分）
（4）工程菌发酵（1分）
（5）外源基因表达产物的分离纯化（1分）
（6）产品的检验。（1分）

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