唾液淀粉酶实验.doc

唾液淀粉酶最适pH值的测定实验
实验目的
1．掌握设计性实验的基本思路，并完成设计报告。
2．掌握唾液淀粉酶最适PH的测定原理和方法。
3．熟悉影响酶促反应速度的因素。
实验原理
1．酶促反应速度受到许多因素的影响，如温度、PH、激动剂和抑制剂等。上述诸因素对唾液淀粉酶催化淀粉水解反应速度的影响，可用定性或定量的反应来观察。利用碘与淀粉机器不同程度纾解产物反应的颜色，来衡量酶促反应的速度的快慢。蓝色—紫红色—黄色，颜色由蓝变黄，表示酶促反应速度由慢到快。此为定性观察。
2.进一步利用郎伯—比尔定律来判定溶液的吸光度与溶液的浓度符合一定的比例关系。由于在被水解的程度也不一样。当唾液淀粉酶不能将完全水解时，淀粉遇碘呈蓝色，吸收波长位于660nm处。不同PH环境中唾液淀粉酶与淀粉的反应程度不同，吸光度值也不同。因此，通过测量660nm处的吸光度值，可以了解PH对酶促反应的影响，吸光度最小的溶液其PH即为唾液淀粉酶的最适PH。

A660
PH
最适PH

实验器材
仪器材料：方盘，试管架，中试管，毛刷，吸耳球，玻璃铅笔，小烧杯，白瓷板，坐标纸，漱口杯。0.1ml、0.5ml、1.0ml、2.0ml、5.0ml、10.0ml刻度吸管，胶头滴管，37 C恒温水浴箱，分光光度计，电磁炉。
试剂药品： 0.02％淀粉溶液. 0.2mol/L磷酸二氢钠溶液、0.2mol/L磷酸氢二钠溶液 碘液；称取碘1g,碘酸钾2g，溶于300ml蒸馏水中。

实验步骤：
1、 缓冲液的配置
pH   0.2mol/L 0.2mol/L
NaH2PO4(ml)   Na2HPO4(ml)
5.7           93.5                       6.5
5.8           92.0                       8.0
5.9           90.0                     10.0
6.0           87.7                     12.3
6.1           85.0                     15.0
6.2           81.5                     18.5
6.3           77.5                     22.5
6.4           73.5                     26.5
6.5           68.5                     31.5
6.6           62.5                     37.5
6.7           56.5                     43.5
6.8           51.0                     49.0

6.9           45.0                     55.0
7.0           39.0                     61.0
7.1           33.0                     67.0
7.2           28.0                     72.0
7.3           23.0                     67.0
7.4           19.0                     81.0
7.5           16.0                     84.0
7.6           13.0                     87.0
7.7           10.5                     89.5
7.8             8.5                     91.5
7.9             7.0                     93.0
8.0             5.3                     94.7
2、唾液的取法：
（1）先给备取者一杯纯净水让其漱口，将漱口液吐掉，再将一块消毒脱脂棉球用镊子放在备取者的舌下，过大约半分钟至一分钟，备取者感觉棉球湿透，用镊子将棉球取出，置于烧杯中，倒入蒸馏水，用玻璃棒充分搅拌，将棉球取出，即制成唾液实验备用液。

（2）让备取者下嘴唇抵住干净的杯子口，在备取者眼前放上一些话梅，这时，备取者的唾液会不停地流出来。
（3）准备一个干净的杯子，用手扯住嘴角，等待大约2分钟后，就可以获得唾液。
实验方案
（1）唾液的稀释：取10支试管，分别编上号00～09
编号 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
唾液 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1
蒸馏水 4.9 9.9 14.9 19.9 24.9 29.9 34.9 39.9 44.9 49.9
(2)最适唾液稀释倍数的选取
取上述稀释的唾液各1ml，分别加入另取的10支试管中，分别编上A~J号的试管里，向10支试管内同时加入1ml的0.02％的淀粉溶液，振荡混匀后放入37 C恒温水浴几分钟后取出，滴加1～2滴碘液，振荡混匀，观察颜色，选取颜色变为淡黄色最快的一支，记录其稀释倍数，作为下面实验的最适唾液稀释倍数。
（3）最适PH的测定
编号 1 2 3 4 5 6 7 8 9
PH

颜色
A660
A660

PH

实验结果
最适PH=？
实验分析
思考题
1）本实验为什么要寻找较合适的唾液稀释倍数？
答：为了跟好的找到唾液淀粉酶的合适浓度，是的最后测定的最适PH精确。
2）在研究PH对酶促反应速度的影响是，前提条件是什么？
答：温度，底物浓度，酶浓度保持恒定。
3）所测吸光度中，吸光度值最小溶液所对应的PH一定是唾液淀粉酶的最适PH吗？
答：不一定，最适PH值应当是根据A-PH的图来确定，图的最低点为最适PH，不一定就是所测最小的吸光度值。

4）总结本实验的注意事项
①使用分光光度计时要调零
②反应时必须是在37℃的水浴中。
参考文献
常东胜，潘洪明 医学化学实验 科学出版社

（注：专业文档是经验性极强的领域，无法思考和涵盖全面，素材和资料部分来自网络，供参考。可复制、编制，期待你的好评与关注）