抗–M抗体对血型鉴定、输血相容性检测及临床输血的影响.pdf

深圳中西医结合杂志 2023 年 7 月第 33 卷第 14 期 73 文章编号 1007-0893(2023)14-0074-04 DOI：10.16458/ki.1007-0893.2023.14.023抗M抗体对血型鉴定、输血相容性检测及临床输血的影响魏典典曹丛雪李帅（河南宏力医院，河南 新乡 453400）摘要目的：分析抗 M 抗体对血型鉴定的影响，探讨提前识别其对输血相容性检测及临床输血的意义。方法：纳入 2018 年 2 月至 2022 年 2 月期间于河南宏力医院输血科行血型鉴定但于交叉配血时出现 O 型红细胞全凝集的受试者 12例，经反定型鉴定确定血型影响因素为抗M抗体，直接或间接抗人球蛋白试验（DAT、IAT）等方法进行抗体鉴定，证实抗M 抗体对血型鉴定的影响，并采用吸收、放散试验及凝聚胺等方法进行不规则抗体影响消除，后再采用正反定型确认已处理的红细胞和血清，患者的交叉配血采用盐水介质交叉配血试验、凝聚胺交配血试验和 DAT 卡式配血试验完成。其后回顾性分析手术围术期输血患者输血反应。结果：12 例受试者中正反定型不符 11 例，正反定型相符 1 例，但反定型 DAT 复查时发现 ABO 细胞管对照凝集，而自身细胞对照管均未见凝集现象。经抗体鉴定均检出抗 M 抗体，且其中 7 例检出免疫球蛋白（Ig）MIgG抗体。9例受试者交叉配血，其中4例均有输注血液成分，但无一例不良反应发生，且输血后均输注有效。结论：抗 M 抗体可引起正反定型不符或交叉配血不合，但这类血清在经吸收、放散试验及凝聚胺等方法处理后，可消除 抗 M 抗体带来的干扰，获得正确血型鉴定结果。在血型鉴定时增加 O 型红细胞对照管则可明显提高抗 M 抗体检出率。关键词抗 M 抗体；血型鉴定；输血相容性检测；临床输血中图分类号 R 457.1+1 文献标识码 B收稿日期2023-05-29作者简介魏典典，女，主管输血师，主要研究方向是临床输血技术。refined definition of preeclampsia：a populationbased studyJActa Obstet Gynecol Scand，2021，100（9）：1627-16356 MISHRA J，SRIVASTAVA S K，PANDEY K B CompromisedRenal and Hepatic Functions and Unsteady Cellular Redox State during Preeclampsia and Gestational Diabetes MellitusJArch Med Res，2021，52（6）：635-6407 中华医学会妇产科学分会妊娠期高血压学组妊娠期高血压疾病诊治指南（2020）J 中华妇产科杂志，2020，55（4）：227-2388 GUO J，BIAN W，JIANG H Puerarin attenuates preeclampsia-induced trophoblast mobility loss and inflammation by modulating miR-181b-5p/RBAK axisJAm J Reprod Immunol，2022，87（2）：13510-135139 ZOLFAGHARI M A，AREFNEZHAD R，PARHIZKAR F，et alT lymphocytes and Preeclampsia：The Potential Role of T cell Subsets and Related MicroRNAs in the Pathogenesis of PreeclampsiaJAm J Reprod Immunol，2021，86（5）：13475-1347710 SEDOR J R，BRUGGEMAN L A，OTOOLE J FAPOL1 and Preeclampsia：Intriguing Links，Uncertain Causality，Troubling Implications J Am J Kidney Dis，2021，77（6）：863-86511 MONICA Z，SIMONE M，WOICIECH S，et alAssociationof Preeclampsia with Myocardial Injury Among Patients Undergoing Noncardiac Surgery：the PREECLAMPSIA-VISION studyJCan J Cardiol，2021，37（12）：1934-194112 KBMR A，LMRG B，LCY A，et alApplication of the electronic nose in predicting preeclampsia in high-risk pregnancies Pilot study J Arch Med Res，2021，52（5）：561-56813 PYEVICH M，ALEXER L M，STANHEWICZ A EWomen with a history of preeclampsia have preserved sensory nerve-mediated dilatation in the cutaneous microvasculatureJExp Physiol，2022，107（2）：175-18214 XU Y，WU D，HUI B，et alA novel regulatory mechanism network mediated by lncRNA TUG1 that induces the impairment of spiral artery remodeling in preeclampsiaJMol Ther，2022，30（4）：1692-170515 GIBBONE E，SAPANTZOGLOU I，NUEZ-CERRATO M E，et alRelationship between ophthalmic artery doppler and maternal cardiovascular functionJUltrasound Obstet Gynecol，2021，57（5）：733-738Shenzhen Journal of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine July 2023 Vol.33.No.14 74 MNS 血型系统是除 ABO 血型系统外目前已被识别的另一人类血型系统，对应抗体均与输血反应关系密切1。其中抗M抗体可在自然条件下产生，通常情况下在37 C 的环境中并不活跃，对献血者本身并无影响，但在医院输血配血时由于冷反应性盐水凝聚，可对血型鉴定造成干扰，以致配血困难2。有研究指出3，抗 M 抗体最适反应温度为 4 C，在该温度环境中可见明显红细胞凝集现象，但依据笔者经验，不仅在这一温度环境中会出现凝集反应，多数含抗 M 抗体血清检验时，环境温度低于 37 C 均可能有反应。为分析抗 M 抗体对血型鉴定的影响，明确这类抗体提前识别对输血相容性检测及临床输血的临床意义，本研究对输血科行血型鉴定但于交叉配血时出现 O 型红细胞全凝集的受试者的抗 M 抗体各类检测结果进行了分析，旨在为临床输血安全保障提供参考，现总结如下。1资料与方法1.1一般资料选取 2018 年 2 月至 2022 年 2 月在河南宏力医院输血 科行血型鉴定但于交叉配血时出现 O 型红细胞全凝集的受试者 12 例，其中男性 3 例，女性 9 例，年龄 24 67 岁，平均（45.83 12.07）岁，其中体检 2 例、产前筛查 1 例、需手术病例 9 例（恶性肿瘤 7 例）。纳入标准：（1）O 型红细胞凝集影响因素确定为抗 M 抗体；（2）有血液疾病史。排除标准：（1）出现溶血现象；（2）血清上层清液不够清亮。1.2方法1.2.1血型鉴定于常温下采用瑞士 HAMILTON全自动微柱凝胶免疫检测卡分析仪及配套检测试剂盒（严格按照说明书操作）检测血液标本，采用手工试管法（严格按照医院实验室规程规定操作）进行 ABO、Rh（D）血型鉴定复查，即取抗凝血液样本 2 mL，于 转速 3000 rmin-1，半径 20 cm，离心 3 min 后取血浆 待用，其后自行制备 5%红细胞混悬液，将 5%红细胞混悬液与 Rh（D）免疫球蛋白（immunoglobulin，Ig）M血型定型试剂混均后转速 3400 rmin-1，半径 20 cm，离心 15 s，摇动后观察是否有肉眼可见的凝集现象，其后再以低倍镜观察是否有凝集现象，根据凝集情况进行反应强度判定，明确正反定型。1.2.2直接或间接抗人球蛋白试验取血液样本制备 5%三洗红细胞混悬液；（1）直接抗人球蛋白试验（direct antiglobulin test，DAT）（试管法），将 3%三洗红细胞悬液与直接抗人球蛋白试剂以 1:2 混匀后转速3400 rmin-1，半径 20 cm，离心 15 s，阴性试验结束，阳性则需采用抗人球蛋白检测卡继续开展定性检测。（2）间接抗人球蛋白试验（indirect antiglobulin test，IAT）（盐水法抗筛），将血清分别与 5%三洗红细胞混悬液、抗体筛选细胞 1#、2#、3#混合（2:1 的混合比例）均匀后转速 3400 rmin-1，半径 20 cm，离心 15 s，筛查不规则抗体。（3）凝聚胺法，将血清分别与 5%三洗红细胞混悬液、抗体筛选细胞 1#、2#、3#混合（2:1 的混合比例）均匀后，添加 0.65 mL 低离子液，混合均匀后再次添加 2 滴凝聚胺，混合均匀后再转速 3400 rmin-1，半径 20 cm，离心 15 s，倒掉上层液体，让管底残留 0.1 mL 液体，轻轻摇动试管，观察是否有凝集现象，添加 2 滴悬浮液后再次混合均匀，通过肉眼观察是否有凝集现象。（4）DAT 卡式配血试验，取低离子液稀释 5%三洗红细胞混悬液、抗体筛选细胞 1#、2#、3#，并将 50 L 0.8%三洗红细胞混悬液、抗体筛选细胞 1#、2#、3#加入抗人球蛋白检测卡，在添加 25 L 2Me 灭活患者血清，其后放于水浴箱中孵育（水温控制在37 C），900 rmin-1，半径 20 cm，离心 2 min，1500 rmin-1，半径 20 cm，离心 3 min，筛查不规则抗体。1.2.3放散吸收试验（1）热放散试验，室温下将1 mL 0.9%氯化钠注射液与 1 mL DAT 阳性标本压积红细胞置于水浴箱中放散（水温控制在 56 C），10 min 后转速 3400 rmin-1，半径 20 cm，离心 2 3 min 取放散液，开展 IAT 试验。（2）酸放散试验，根据试剂操作说明书取氯化钠、甘氨酸溶解于去离子水中，用盐酸调节氢离子浓度指数（pondus hydrogenii，pH）并定容，得1号溶液，同时取溴甲酚紫 0.1 g 溶于 20 mL 浓度为 0.02 molL-1的氢氧化钠溶液中，得 2 号溶液，其后将 1 号与 2 号溶液以 250300:1 比例混匀，制备放散液，开展 IAT 试验。（3）吸收试验，将标本血清与抗 M 抗体阳性 O 型压积红细胞混悬液混合均匀（1:1 的混合比例），静置低温 4 C 的环境下吸收 1 h，转速 3400 rmin-1，半径 20 cm，离心 4 5 min 取上层清液进行 ABO 反定型。1.2.4配血方法将患者与正常献血人的血清、5%三洗红细胞混悬液交叉混合（2:1 的混合比例），并用盐水介质交叉配血试验、凝聚胺交配血试验和 DAT 卡式配血试验完成交叉配血。1.2.5抗 M 抗体效价测定取 2 3 mL 抗凝静脉血转速 3400 rmin-1，半径 20 cm，离心 3 min，取上层清液，将 100 L 血清用 0.9%氯化钠注射液倍比稀释后加入 50 L 抗 M 抗体阳性红细胞混悬液，混合均匀后分成3 份，分别置于 4 C、24 C、37 C 环境中，静置 15 min 后转速 3400 rmin-1，半径 20 cm，离心 15 s，观察是否有凝集现象。1.3观察指标采用反定型鉴定血型影响因素为抗 M 抗体，并采用深圳中西医结合杂志 2023 年 7 月第 33 卷第 14 期 75 表 3ABO 血型鉴定结果序号病史ABORh(D)直抗抗体筛选抗体类型多抗抗 IgG抗 C3d盐水法PolyIAT 1体检A 0000IgM 2体检A 0000IgM 3骨折B 0000IgM 4胃癌A 000IgM IgG 5胃癌B 000IgM IgG 6产前筛查B 0000IgM 7食管癌B 000IgM IgG 8结肠癌AB 000IgM IgG 9直肠癌O 000IgM IgG10直肠癌B 000IgM IgG11子宫癌B 0IgM IgG12风湿性心脏病AB 0000IgM注：IAT 间接抗人球蛋白试验；Ig 免疫球蛋白。表 4抗 M 抗体在不同温度下的效价 n=12，n(%)温度1:11:21:41:81:161:321:641:256 4 C2(16.67)1(8.33)4(33.33)3(25.00)1(8.33)24 C2(16.67)1(8.33)4(33.33)3(25.00)1(8.33)37 C6(50.00)1(8.33)2.3交叉配血试验结果12 例标本中去除 1、2、6 号标本，其余 9 例标本申请备血，并采用盐水法、IAT 法及凝聚胺法完成 MNS 血型（NN、MM、MN）配血试验，其 MNS 血型为 NN，与 8 例 IAT 法及凝聚胺法配血相合，11 号标本 DAT 阳性，不过与 9 例标本盐水法配血结果均相合，而 MNS血型为 MM、MN 与 9 例标本上述三种方法配血试验均 不相合。2.4输血前后实验室检测结果3 号标本输注 2 U 悬浮红细胞；4 号标和 7 号标本术中均有输血（输注 4 U 去白悬浮红细胞），术后患者恢复良好；11 号标本术中未输血，术后突发咯血输注 2 U去白悬浮红细胞。4 例输血患者尿常规监测均未见异常，未出现输血不良反应，见表 5。DAT、IAT 等方法证实抗 M 抗体的存在，其后采用吸收、放散试验及凝聚胺等方法消除抗 M 抗体对血型鉴定的影响。本研究 12 例受试者中有 4 例手术患者围手术期有输注血液，回顾分析手术前和输血后 24 h、48 h、1 周患者间接胆红素（indirect bilirubin，IBIL）、总胆红素（total bilirubin，TBIL）、血红蛋白（hemoglobin，Hb）水平，记录是否有发生输血不良反应。2结果2.1血型鉴定结果12 例标本采用全自动微柱凝胶免疫检测卡分析仪鉴定血型，发现正反定型不符 11 例，正反定型相符 1 例，见表 1。ABO 细胞管和自身细胞对照管（标本自身细胞三洗后的状态）经反定型 DAT（试管法）复查，前者均为阳性，后者均为阴性，见表 2。经吸收试验完成 ABO反定型的结果与对应正定型试验结果一致。12 例标本中 11 号标本 DAT 显示阳性结果，对这例DAT 阳性标本的红细胞进行放散抗体鉴定，未见抗体特异性；而采用 IAT 盐水法、凝聚胺法及抗人球法鉴定，前者均为阳性，后两者检出 7 例阳性；继续采取上述 3 种抗体鉴定方法检测，前两者均检出抗 M 抗体，血清2Me 灭活后采取 IAT 法检出 IgG 型抗 IgM 抗体 7 例；且 12 例标本 MNS 血型均为 NN，见表 3。表 1全自动微柱凝胶免疫检测卡分析仪鉴定血型结果人数/例抗 A抗 B抗 Dct1A1 细胞B 细胞604 4 03 3 34 04 02 4 24 4 4 02 2 1004 04 4 表 2ABO 血型鉴定结果人数/例 抗A 抗 B 抗D O 细胞 A1 细胞 B细胞 自身对照604 4 3 3 3 034 04 2 2 4 024 4 4 2 2 2 01004 3 4 4 02.2抗 M 抗体效价结果12 例标本于 4 C、24 C 环境下其抗 M 抗体均可见不同程度的凝集梯度，而 37 C 环境中仅有 7 例出现反应强度，占比为58.33%，5例阴性，占比为41.67%，见表4。Shenzhen Journal of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine July 2023 Vol.33.No.14 76 3讨论MNS 血型系统是一种较为复杂的人类血型系统，对应抗体在低于 37 C 时可使红细胞凝聚而出现溶血，导致临床输血配血时配血不合、血型鉴定正反定型不符4。刁雪芹等5在类似研究中指出，抗 M 抗体主要有两种性质，非补体激活的 IgM 和同种免疫引起的 IgG，这 两种性质抗体鉴别需通过严格温度控制下开展科学检测。而抗 M 抗体与抗原反应更多取决于热振幅，热振幅越高的抗体，在手术患者限制体温的情况下极有可能诱导溶血，以致影响手术顺利进行6。本研究讨论产生 抗 M 抗体的主要包括孕妇、献血者、骨科手术者、肿瘤手术者和心脏手术者，这些患者均无输血史，但手术开展后可能存在核心体温降低情况，为规避冷抗体激活引起围术期灾难性溶血等不良事件的发生，术前提前邀请输血科医师会诊，制定更优的个体化手术方案。本研究在进行血型鉴定及交叉配血时发现，12例血型鉴定但于反定型时出现 O 型红细胞全凝集的受试者，有11 例正反定型不符，1 例正反定型相符，且 IAT 复查也提示受试者中存在不属于 ABO 系统的不规则抗体，而微柱凝胶卡并无 O 细胞孔，临床血型鉴定时反定型 O 细胞检测并不作为常规检测项目，这就导致 ABO 系统以外的含盐水类不规则抗体易出现漏检。而值得注意的是，抗 M 抗体可引起溶血性输血反应，这类抗体若不能提前识别可能增加临床输血不良反应发生风险7。有研究表明，血型检测时增加 O 细胞对照管可明显提高含盐水类不规则抗体检出率8。本研究经抗体鉴定 12 例受试者也均检出抗 M 抗体，且其中 7 例检出 IgM IgG 抗体。既往输血实践研究中也提出，不同条件下含盐水类不规则抗体的活性不同，对于患者抗体类别及热振幅等予以有效检测在临床输血实践中具有重要意义9。本研究 9 例受试者交叉配血，其中 4 例均有进行抗 M 抗体配合型输注 M 抗原阴性血液成分（其中 1 例 DAT 阳性），输注效果均良好，且无一例输血不良反应发生。可知，对有潜在具有临床意义抗体的患者，于临床输血时进行不含相应抗原红细胞输注，规避再次免疫应答十分重要10。总而言之，鉴于抗 M 抗体特性，提前识别这一抗体对献血者优选及临床输血选择均具有重要作用，根据患者血型鉴定结果规避不规则抗体所对应抗原进行配血，可有效保证输血的有效性和安全性。参考文献1 张良子，左琴琴，张泳，等1779 例疑难配血患者意外抗体分布特征及输血策略分析J中国输血杂志，2022，35（9）：963-9662 黄文娟，刘不尽，蒋玉林，等静脉注射人免疫球蛋白对输血相容性试验的影响J检验医学与临床，2022，19（13）：1778-17803 谢霞，崔效玮，杨世明，等微柱凝胶法输血相容性检测弱凝集现象的影响因素分析J细胞与分子免疫学杂志，2018，34（8）：736-7394 孟博，周春刚，臧荣发，等非 Rh 血型系统意外抗体血清学特征及临床意义J临床检验杂志，2021，39（7）：507-5105 刁雪芹，夏小叶，郝萧，等2016 2019 年济南市临床输血相容性室间质评结果分析J临床血液学杂志，2021，34（4）：278-2816 黄丽萍，杜波，罗随莉临床输血患者红细胞血型不规则抗体的分布规律及对输血过程的影响研究J山西医药杂志，2020，49（5）：595-5967 王琛，焦琴，杨世明，等81 例抗 M 抗体的鉴定及其对血型血清学检测的影响J细胞与分子免疫学杂志，2022，38（1）：74-778 李波，胡航，郑春梅临床输血患者红细胞血型不规则抗体检测的临床意义J海南医学，2019，30（15）：1981-19839 詹廷西，王静，徐丹丹，等输血前患者不规则抗体筛查及鉴定的临床意义探讨J中国免疫学杂志，2021，37（3）：335-34510 谢惠益，周载鑫，杨玥，等抗 M 抗体影响血型鉴定及对临床输血的影响J临床输血与检验，2022，24（6）：716-720表 5输血前后实验室检测结果序号输血前 Hb/gL-1输注悬浮 红细胞/UHb/gL-1IBIL/molL-1TBIL/molL-124 h48 h1 周后24 h48 h1 周后24 h48 h1 周后 311221081033.04.7 4.5 6.3 41194 99 941079.37.54.914.911.37.5 71074 82 73 856.04.73.614.0 9.98.911 712 76 67 795.77.13.911.213.08.8注：Hb 血红蛋白；IBIL 间接胆红素；TBIL 总胆红素。