高效液相色谱法测定橘红枇杷片中柚皮苷的含量.pdf

年 月云南化工 第 卷第 期 ，：高效液相色谱法测定橘红枇杷片中柚皮苷的含量张燕（楚雄技师学院，云南楚雄 ）摘要：（目的）建立用高效液相色谱法测定橘红枇杷片中柚皮苷含量的方法；（方法）除去橘红枇杷片糖衣后，研细，加入甲醇，加热回流，放冷，补足损失质量，过滤，取滤液进样。色谱仪为安捷伦 型，色谱柱为 柱，紫外测定检测波长选定为 ，流动相为乙腈 磷酸（体积比 ），流速为 。结果表明，在柚皮苷质量浓度为 范围内，线性关系良好（，），方法回收率为 （）。（结论）本方法准确、灵敏度高，重现性好，可作为橘红枇杷片质量控制的检测方法。关键词：高效液相色谱法；柚皮苷含量；橘红枇杷片中图分类号：文献标识码：文章编号：（）（，）：，（，），：（）（）：，：；橘红枇杷片成份为化橘红、陈皮、枇杷叶、桔梗、紫苏子、甘草六味药材，采用现代制剂工艺技术精心研制而成，具有止咳嗽、祛除咳嗽时痰多的功效。橘红枇杷片收载于 中华人民共和国卫生部药品标准 中药成方制剂第四册（标准编号：），无含量测定项。本文以柚皮苷为指标性成分，采用 法测定控制橘红枇杷片含量，该法简便、快速、准确可靠。仪器与试药 型高效液相色谱仪（带四元泵，检测器，自动进样装置，在线真空脱气设备，智能控制柱温箱及 化学工作站）。乙腈为色谱纯，所用水为二次重蒸馏水，其余试剂试药均为分析纯。含量测定指标成分柚皮苷对照品购于中国药品生物制品检定所，供含量测定用（采用面积归一法，进行对照品纯度检查，纯度为 ）；橘红枇杷片为市售产品。色谱条件参考 中华人民共和国药典 年版一部化橘红项下柚皮苷的含量测定方法 ，取柚皮苷对照品溶液进行紫外扫描，在 处有最大吸收，故选择 为检测波长。色 谱 柱（，），乙腈 磷酸（体积比 ）为流动相；检测波长 ；流动相流速设定为 ，进样量为 ；色谱柱温度 。溶液的配制 对照品（柚皮苷）溶液的配制取柚皮苷对照品，放入减压干燥器干燥至恒重，取适 量，精 密 称 定 其 质 量，加 入 甲 醇，配 制 成 的溶液作为对照品溶液。样品溶液（橘红枇杷片）的配制取待测样品（橘红枇杷片）片，去除表面包裹的糖衣，放入研钵中，用研钵研成粉末。取样约，精密称定其质量，放入带玻璃塞的 锥形瓶中，用移液管精密加入甲醇 ，塞上玻璃塞，称定整个锥形瓶的质量，记录数据。把锥形瓶放入电热套中，调节合适的功率加热回流 ，取出放冷至室温，再次称定具塞锥形瓶质量。加入甲醇补足在加 年 月云南化工 第 卷第 期 ，热回流过程中减失的质量，盖上玻璃塞，轻轻摇动锥形瓶使其混合均匀，用有机相微孔滤膜进行滤过，取续滤液作为样品溶液。方法与结果 系统适用性将对照品溶液与样品溶液按上述色谱条件进样。图 为对照品（柚皮苷）色谱图，图 为样品色谱图。结 果 显 示，柚 皮 苷 色 谱 峰 的 理 论 塔 板 数 大于 。图 对照品色谱图图 样品色谱图 提取方法的考察取本品 片，除去糖衣，研细，制成 份样品。分别取约 ，精密称定其质量，放入带玻璃塞的锥形瓶中。用移液管精密加入甲醇 ，塞上玻璃塞，称定整个锥形瓶的质量，记录数据。份超声处理 ，份加热回流提取 ，取出放冷至室温，再次称定具塞锥形瓶质量。加入甲醇补足在加热回流过程中减失的质量，轻轻摇动锥形瓶使其混合均匀，用有机相微孔滤膜进行滤过，放入自动进样器进样测定，结果见表 。表 提取方法考察表提取方法提取时间 取样量 （柚皮苷）超声提取 回流提取 从表 看出，样品溶液选用加热回流提取方法进行处理，样品溶液中柚皮苷含量明显较采用超声提取方法进行样品处理的含量高，故选择回流提取对样品进行处理，同时根据检测结果确定样品取样量为 。线性关系精密称取柚皮苷对照品适量，加甲醇分别制成 、的溶液作为样品溶液。放置自动进样器上，设置进样量 ，按确定的色谱条件进行检测，以柚皮苷对照品进样量为横坐标，对照品峰面积为纵坐标，得到标准曲线。统计学处理，得回归方程，表明所用对照品柚皮苷在 范围内呈良好的线性关系。精密度试验取制备好的对照品溶液，按含量测定的方法连续进样 针（进样量 ），以峰面积计算，为 （）。重复性试验取同一批号样品照含量测定方法项下样品溶液的制备方法同时制成 份供试液，进样测定，以峰面积计算含量，为 （）。中间精密度试验取样品，在同一试验室由不同人员按含量测定项下的方法试验，使用不同仪器进行含量测定，以峰面积计算含量，为 （）。稳定性试验取样品照样品测定项下的方法制成样品溶液，按照上述色谱条件分别于 、进样检测，考察其稳定性，结果表明样品在 内稳定，为 （）。回收率试验本试验采用加样回收法，精密称取柚皮苷对照品，加入适量甲醇溶解后，制备得到每 含对照品柚皮苷 的溶液。用移液管精密量取对照品溶液 ，放置于六个锥形瓶中，蒸干；取已测知含量的样品，研细，取约 ，精密称定，分别称取 份样品，放入带有玻璃塞的锥形瓶中；按 项制得样品溶液后，分别放入液相色谱自动进样器上，进样测定，计算回收率，结果表明平均回收率为 ，为 （）。详见表 。阴性及空白对照试验按照橘红枇杷片处方中各药材配比，除去化橘红药材，其余药材按制备工艺自配阴性样品，并按本文 项确定的样品溶液制备方法，进行阴性对照样品溶液的制备，进样检测，记录色谱图（图 为橘红枇 年 月云南化工 第 卷第 期 ，杷片阴性对照色谱图，图 为空白对照色谱图）。结果表明阴性及空白无干扰。表 加样回收率试验结果（）编号取样量 样品中相当于柚皮苷的量 柚皮苷对照品加入的量 测得值 回收率 图 橘红枇杷片阴性对照色谱图图 空白对照色谱图 样品测定取 批市售橘红枇杷，分别按上述方法操作。在上述色谱条件下，样品溶液与对照品溶液分别进样 ，测定，记录色谱图。以外标法测定计算样品中有效成分（柚皮苷）的含量，结果见表 。表 橘红枇杷片中柚皮苷的含量测定结果（）批号柚皮苷（片）平均值（片）结语橘红枇杷片的现行质量标准依据的是 中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第四册（质量标准编号：），无含量测定项。化橘红是方中君药，始于明万历年间的 高州府志物产。本草拾遗中记载，化痰止咳、风寒咳嗽为橘红的首要功效，无论寒咳或干咳，服用橘红均可见效。柚皮苷是化橘红中的指标性成分，用其控制橘红枇杷片质量合理可行。本试验采用高效液相色谱法，能快速准确地测定橘红枇杷片中柚皮苷的含量，方法简便、可靠，为橘红枇杷片的质量监控和生产控制提供了保证。参考文献：中华人民共和国卫生部药典委员会 中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂：第 册：北京：化学工业出版社，国家药典委员会 中国药典：年版：一部 北京：化学工业出版社，唐德智 橘红枇杷片中柚皮苷的含量测定 安徽医药，（）：黄咏梅，李红，邓子杰 高效液相测定橘红枇杷片中陈皮的橙皮苷的含量 江西中医药，（）：收稿日期：作者简介：张燕（），女，安徽太湖人，硕士，讲师，主要研究方向是药品分析检测。