miR-26a-5p基于PHD2_HIF-1α通路对慢性心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡作用的研究.pdf

基础研究m i R a p基于P H D/H I F 通路对慢性心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡作用的研究赵洁,李嘉,赵小丹,丁鹏,苗昌荣(唐山市协和医院心内科,河北 唐山 )D O I:/b j m y i s s n 收稿日期:;修回日期:基金项目:河北省医学科学研究课题(编号:)作者简介:赵洁(),女,本科,研究方向:心力衰竭.T e l:;E m a i l:z h a o j i e c o m通讯作者:苗昌荣(),本科,副主任医师,研究方向:心力衰竭.E m a i l:z h a o j i e c o m摘要:目的通过缺氧诱导信号通路P H D/H I F 探究m i R a p对慢性心力衰竭(C H F)模型大鼠心肌细胞凋亡的影响.方法将大鼠随机分为假手术组、C H F组、N C组和m i R a p组,每组 只.C H F组、N C组与m i R a p组建立大鼠C H F模型,假手术组除不进行结扎外其他操作相同.N C组和m i R a p组分别尾静脉注射 n m o lN C a g o m i R和m i R a p a g o m i R,每天次,连续注射周,假手术组和C H F组通过尾静脉注射给予等量生理盐水.对大鼠心肌组织进行m a s s o n染色,实时定量P C R法检测大鼠心肌组织m i R a p表达水平,T u n e l法检测大鼠心肌组织进行凋亡检水平,E L I S A法检测心肌组织氧化损伤因子超氧化物歧化酶(S O D)和丙二醛(MD A)水平,实时定量P C R法和W e s t e r nb l o t t i n g法检测心肌组织脯氨酸羟化酶(P H D)及低氧诱导因子 (H I F )m R N A及蛋白表达水平.结果与假手术组相比,C H F组和N C组出现心肌肥大并伴有大量纤维细胞出现,m i R a p组大鼠心肌肥大有所缓解,纤维细胞减少;C H F组和N C组心肌组织m i R a p表达水平有降低趋势,m i R a p组表达显著上升(P );C H F组和N C组心肌细胞显著增加(P ),m i R a p组心肌细胞凋亡与C H F组和N C组相比显著降低,但仍高于假手术组(P );C H F组和N C组大鼠心肌组织S O D显著降低、MD A表达显著升高(P ),与C H F组和N C组相比,m i R a p组S O D显著升高、MD A表达显著降低(P );C H F组和N C组P H D m R N A和蛋白均有上调趋势,H I F 有下调趋势,与C H F组和N C组相比,m i R a p组P H D m R N A及其蛋白表达下调,H I F 表达上调(P ).结论m i R a p可以抑制C H F大鼠心肌细胞凋亡,提高S O D表达,降低MD A表达,降低氧化损伤,其机制与缺氧诱导信号通路P H D/H I F 的调控相关.关键词:m i R a p;慢性心力衰竭;凋亡;氧化损伤;P HD/H I F 信号通路中图分类号:R 文献标识码:AA p o p t o s i s I n h i b i t i o nE f f e c t o fM i R a po nC a r d i a cF u n c t i o n i nR a t sw i t hC h r o n i cH e a r tF a i l u r eb yR e g u l a t i n gP H D/H I F S i g n a l i n gP a t h w a yZHAOJ i e,L I J i a,ZHAOX i a o d a n,D I NGP e ng,M I AOC h a ngr o ng(I n t e r n a lM e d i c i n e C a r d i o v a s c u l a rD epa r t m e n t,T a ngs h a nU n i o nM e d i c a lC o l l egeH o spi t a l,T a ngs h a n ,C h i n a)A b s t r a c t:O b j e c t i v eT oe xpl o r et h ee f f e c to fm i R a po nc a r d i o myo cyt eapopt o s i s i nr a t sw i t hc h r o n i ch e a r t f a i l u r e t h o ughP H D/H I F pa t h w ay M e t h o d s S P FW i s t a r r a t sw e r e r a n d o m lyd i v i d e d i n t o t h e s h a mope r a t i o ngr o up(n ),C H Fgr o up(n ),N Cgr o up(n)a n dm i R a pgr o up(n)C H Fgr o up,N Cgr o upa n dm i R a pgr o upw e r eu s e dt oe s t a b l i s ht h er a tm o d e l o fc h r o n i ch e a r t f a i l u r e T h eL a b e l e dI mm u n o a s s a y s&C l i nM e d,M a r ,V o l ,N o s h a mope r a t i o ngr o upr e c e i v e dt h es a m eope r a t i o ne x c ept l iga t i o n N Cgr o upa n dm i R a pgr o upw e r ei nje c t e dw i t h n m o lN Cago m i Ra n dm i R a p ago m i Rt h r o ughc a u d a lv e i nr e spe c t i v e ly,o n c ee v e ryd ays f o r w e e k s T h e s h a mope r a t i o ngr o upa n dC H Fgr o upw e r e i nje c t e dw i t ht h es a m ea m o u n to f s a l i n et h r o ughc a u d a lv e i n M a s s o ns t a i n i ngw a spe r f o r m e do nt h e myo c a r d i u m o fr a t si ne a c hgr o up T h ee xpr e s s i o nl e v e lo f m i R a pw a sd e t e c t e dbyr e a l t i m equ a n t i t a t i v eP C R,w h i l et h eapopt o s i sw a sd e t e c t e dbyT U N E L,a n dt h el e v e l so fo x i d a t i v e d a m agef a c t o r ss upe r o x i d e d i s m u t a s e(S O D)a n dm a l o n d i a l d e hyd e(MD A)w e r ed e t e c t e dbyE L I S A R e a l t i m equ a n t i t a t i v eP C Ra n dw e s t e r nb l o tw e r eu s e dt od e t e c tpr o l i n ehyd r o xyl a s e(P H D)a n dhy po x i ai n d u c i b l ef a c t o r i nmyo c a r d i a l t i s s u e(H I F )R e s u l t sC o mpa r e dw i t ht h e s h a mope r a t i o ngr o up,myo c a r d i a l hy pe r t r ophya n da l a rgen u m b e r o f f i b r o b l a s t sap pe a r e d i nC H Fgr o upa n dN Cgr o up,w h i l em i R a pgr o up,myo c a r d i a lhy pe r t r ophyr e l i e v e da n df i b r o b l a s t s r e d u c e d T h ee xpr e s s i o no fm i R a pd e c r e a s e di nC H Fgr o upa n d N Cgr o up,w h i l et h ee xpr e s s i o no fm i R a pi n c r e a s e ds ign i f i c a n t lyi n m i R a pgr o up(P )T h ee xpr e s s i o no fc a r d i o myo cyt e s i nC H Fgr o upa n dN Cgr o upi n c r e a s e d s ign i f i c a n t ly(P )C a r d i o myo cyt eapopt o s i s i nm i R a pgr o upw a ss ign i f i c a n t lyl o w e rt h a nC H Fgr o upa n dN Cgr o up(P )S O Dd e c r e a s e ds ign i f i c a n t lya n dMD Ai n c r e a s e d s ign i f i c a n t ly(P ),c o mpa r e dw i t hC H Fgr o upa n dN Cgr o up S O Di nm i R a pgr o upi n c r e a s e ds ign i f i c a n t lya n dMD Ad e c r e a s e ds ign i f i c a n t ly(P )P H D m R N Aa n dpr o t e i nw e r eup r egu l a t e da n dH I F d o w n r egu l a t e di nC H Fgr o upa n dN Cgr o up,c o mpa r e dw i t hC H Fgr o upa n dN Cgr o up P H D m R N Aa n dpr o t e i nw e r ed o w n r egu l a t e da n dH I F up r egu l a t e d i nm i R a pgr o up C o n c l u s i o n m i R a pc a ni n h i b i tc a r d i o myo cyt eapopt o s i s,i n c r e a s eS O De xpr e s s i o na n dr e d u c eMD Ae xpr e s s i o n,r e d u c eo x i d a t i v ed a m age i nr a t sw i t hc h r o n i ch e a r t f a i l u r e I t i spo t e n t i a l lyr e l a t e dt ot h er egu l a t i o no fhy po x i a i n d u c e ds ign a lpa t h w ayP H D/H I F K e yw o r d s:m i R a p;C h r o n i ch e a r t f a i l u r e;Apopt o s i s;O x i d a t i v ed a m age;P H D/H I F s ign a lpa t h w ay慢性心力衰竭(c h r o n i ch e a r t f a i l i n g,CH F)是常见的慢性病之一,是由心肌损伤或心脏负荷过重引起的心脏结构和(或)功能改变,导致心脏射血功能和(或)充盈功能异常的一组临床综合征.CH F的发展具有不同原因,氧化损伤是造成慢性心力衰竭过程中持续性心肌损伤的重要原因之一.研究证实m i c r o R N A在C H F中发挥重要作用,如M i R 可以通过抑制C D 促进的心脏血管生成而加重慢性心力衰竭,m i R a p通过调节糖原合成酶激酶(G l y c o g e nS y n t h a s eK i n a s e ,G S K)促进心肌细胞自噬.除表观遗传学调控外,慢性心力衰竭过程中还伴随着氧化应激及缺氧诱导信号通路P H D/H I F 信号通路的调控,心肌氧化应激增加衰竭心脏中磷酸二酯酶(P D E)的表达降低超氧化物歧化酶(s u p e r o x i d ed i s m u t a s e,S O D)水 平,选 择 性 抑 制P D E 可以保护心脏免受压力超负荷引起的左心室肥厚和C H F,E G L N 突变可能通过P H D/H I F A途径调节先天性心脏病的缺氧反应.本研究拟通过建立大鼠心衰模型探究m i R a p在慢性心衰过程中的变化,研究m i R a p对大鼠心肌细胞凋亡水平及氧化损伤的影响及机制,为m i R a p的临床应用提供分子基础.材料和方法实验材料S P F级W i s t a r大鼠 周龄S P F级W i s t a r大鼠 只,雌雄各 只,体重 g,购于北京天诚医药科技有限公司,许可证号:S Y X K(京),适应性饲养周,雌雄各半,饲养环境温度 ,湿度 ,/h昼夜照明.药品与试剂戊巴比妥钠购于上海科丰化学试剂有限公司,P H D、H I F 、m i R a p、a c t i n及U 引物由生工生物工程(上海)股份有限公司提供;T r i z o l购于美国i n v i r t o g e n公司,m i R a p a g o m i R及N C a g o m i R购于锐博生物有限公司;大鼠超氧化物歧化酶(S O D)E L I S A检测试剂盒和大鼠丙二醛(M D A)E L I S A检测试剂盒购于上海创祥生物科技有限公司;标记免疫分析与临床 年月第 卷第期A n t i P HD a n t i b o d y(a b ,稀释比 ),A n t i H I F a n t i b o d y(a b ,稀释比 ),A n t i GA P DHa n t i b o d y(a b ,稀释比 )及G o a tA n t i R a b b i t I g G H&L(HR P)(a b 稀释比 )购于美国A b c a m公司.主要仪器设备镊子、棉球、纱布、手术剪等手术器械购于上海医疗器械(集团)有限公司手术器械厂,m L注射器购于郑州康佳医疗器械有限公司,切片机为德国莱卡公司(RM );台式低速冷冻离心机为H E R E X I公司(T D L M);光学显微镜为日本O L YMP U S公司(C K X );实时定量P C R检测仪为美国B I O R A D公司(B I O R A DC h r o m o),多功能酶标仪为美国B i o t e k公司(S y n e r g yH MF D),转移脱色摇床为海门其林贝尔有限公司(T S /T S S);W e s t e r n电泳仪为美国B i o R a d公司.实验方法大鼠C H F模型建立大鼠分为组,假手术组,C H F组,N C组,m i R a p组,各组大鼠均采用注射 戊巴比妥钠(m g/k g)进行麻醉,大鼠麻醉后行气管切开术并进行气管插管,通气机行正压通气,潮气量为 m L/m L.打开胸骨左边缘,将大鼠心脏暴露,在冠状动脉左前降支,主动脉根部 mm左右处用眼科缝合线进行冠状动脉结扎,按照参考文献判断建模,建模成功条件为:动脉收缩压和舒张期动脉压下降至基础值的 ,且左心室发展压最大变化速率均维持在基础值的 ,假手术组大鼠除了不进行结扎外,其他操作均与其他组大鼠相同.建模成功标准为:多普勒超声心动图检查显示左心室射血分数(l e f tv e n t r i c u l a re j e c t i o nf r a c t i o n,L V E F),S c r水平是造模前的倍及以上,则提示CH F大鼠模型制备成功.h后N C组尾静脉注射给与 n m o lN Ca g o m i R,m i R a p组尾静脉注射给与 n m o lm i R a pa g o m i R,每天次,连续周.鼠心肌组织m a s s o n染色断颈处死大鼠后取出大鼠心脏并使用预冷的生理盐水灌洗,滤纸干燥后制作心肌组织石蜡切片后,铬化处理脱蜡后的切片,依次用自来水和蒸馏水清洗,用R e g a u d苏木精染液染核 m i n,蒸馏水清洗,用M a s s o n丽春红酸性复红液 m i n,以冰醋酸水溶液浸洗片刻,磷钼酸水溶液分化 m i n,不经水洗,直接用苯胺蓝或光绿液染 m i n,以冰醋酸水溶液浸洗片刻,酒精、无水酒精、二甲苯透明、中性树胶封固,显微镜 下观察,拍照分析大鼠心肌病理情况.各组大鼠m i R N A p、P H D 及H I F m R N A表达水平的检测采用m i R NAc D NA S y n t h e s i sK i t试剂盒和T r i z o l分别提取m i R NA和mR NA,和S Y B RG r e e nP C RM a s t e rM i xK i tP C R试剂盒反转录并进行m i R a p、P H D 及H I F m R N A表达水平的检测.以U 和 a c t i n分别作为m i R N A和m R N A的内参,所有操作在冰上进行并避免R N A酶污染,P C R反应条件为 预变性 m i n,个循环,变性 s,退火 s,延伸至 m i n,最后在 延伸 m i n.引物序列为:m i R a p F G G A TC C G C A G A A A C T C C A G A G A G A A G G A ,m i R a p R A A G C T T G C C T T T A G C A G A A A G G A G G T T ,P H D F C A G T C C G T C C G T C T G G C ,P H D R C C T C C C C A G A T G C T C C T G A A ,H I F F G T T T A C T A A A G G A C A A G T C A C C ,H I F R T T C T G T T T G T T G A AG G G A G ,a c t i n F A C C C A C A C T G T G C C C A T C T A T G A ,a c t i n R C A T C G G A A C C G C T C A T T G C C G A T A G ,U F C T C G C T T C G G C A G C A C A a mU R A A C G C T TC A C G A A T T T G C G T a m以C t计算m i R a p、P H D 及H I F 相对表达量.T U N E L染色检测细胞凋亡将各组大鼠心脏切片用二甲苯浸洗次,每次 m i n,用 、的乙醇分别浸洗次,m i n/次,用P r o t e i n a s eK工作液处理组织 m i n,通透液处理 m i n(室 温),P B S漂 洗次,每 个 切 片 加 LT U N E L反应混合液,孵育 h,P B S清洗次,荧显微镜下 随机选择个视野,计数并统计细胞凋亡比例.E L I S A检测心肌组织S O D及MD A水平大鼠心肌组织进行匀浆,r/m i n离心 m i n,获取上清,加入样本后按照E L I S A试剂盒说明书进行,于 n m波长处测定各孔的O D值.W e s t e r nb l o t t i n g检测心肌组织P H D 及H I F 蛋白表达液氮中研磨心肌组织,匀浆后提取总蛋白并进行S D S P A G E电泳 V m i n,V h,P V D F膜转膜,脱脂奶粉室温封闭 h,T B S T清洗次,按照各抗体稀释浓度稀释抗体后分别加入L a b e l e dI mm u n o a s s a y s&C l i nM e d,M a r ,V o l ,N o P H D a n t i b o d y(稀释比 )、H I F a n t i b o d y(稀释比 )、G A P D H(稀释比 )一抗,冰箱中孵育过夜,二抗G o a tA n t i R a b b i t I g GH&L(H R P)(稀释比:)在室温条件下孵育 m i n,T B S T漂洗次,E C L显色,曝光后于发光仪拍照并对蛋白灰度进行统计,统计次.统计学处理采用S P S S 软件进行统计学分析,计量资料以xs表 示,多 组 间 比 较 采 用 单 因 素 分 析 方 差A N O V A分析方法,两组间比较采用S N K q检验,以P 为差异具有统计学意义.结果 大鼠心肌组织M o s s o n染色比较假手术组心肌细胞形态正常,排列整齐,无或含有罕见的胶原纤维,在C H F组和N C组中,细胞排列混乱,出现心肌细胞肥大的现象并且有大量绿色胶原纤维,而m i R a p组细胞纤维化及细胞肥大有所缓解.见图.图 大鼠心肌组织M o s s o n染色比较()大鼠心肌组织m i R a p表达水平如图所示,与假手术组相比,C H F组和N C组心肌组织m i R a p表达水平显著降低,与C H F组和N C组相比,m i R a p组表达水平显著升高(P ),C H F组和N C组差异无统计学意义(P ),分别为 、和 .注:与假手术组相比,P,P;与C H F组相比,P 图大鼠心肌组织m i R a p表达比较组大鼠心肌细胞凋亡的比较如图所示,与假手术组比较,C H F组和N C组心肌细胞凋亡率显著上升,m i R a p组显著降低(P ),C H F组和N C组差异无统计学意义(P ),分别为 、和 .标记免疫分析与临床 年月第 卷第期注:ATUN E L染色检测细胞凋亡,;B细胞凋亡比例统计.与假手术组相比,P;与C H F组相比,P 图心肌细胞凋亡的比较大鼠心肌组织氧化损伤指标S O D及MD A的水平比较与假手术组比较,C H F组和N C组大鼠心肌组织S O D水平显著降低,MD A水平显著升高(P );而与C H F和N C组比较,m i R a p组S O D水平显著升高,MD A水平显著降低(P ),C H F组和N C组差异无统计学意义(P ).见表.表大鼠心肌组织氧化损伤指标S O D及MD A的水平(xs)组别nS O D(U/m L)MD A(m o l/mL)假手术组 C H F组 N C组 m i R a p组 注:与假手术组相比,P,P;与C H F组相比,P,P 大鼠心肌组织P H D 及H I F m R N A表达水平与假手术组比较,N C组和C H F组P H D m R N A表达水平降低,H I F mR NA表达水平上调(P);与N C组和C H F组相比,m i R a p组大鼠心肌组织的P H D m R N A表 达 显 著 上 升,H I F m R N A表达水平显著降低(P ),C H F组和N C组差异无统计学意义(P ).见表.表大鼠心肌组织P HD 及H I F mR NA表达水平(xs)组别大鼠数量(只)P HD H I F 假手术组 C H F组 N C组 m i R a p组 注:与假手术组相比,P,P;与C H F组相比,P,P 组大鼠心肌组织P H D 及H I F 蛋白表达与假手术组比较,N C组和C H F组P H D 蛋白表达水平上升,H I F 蛋白表达水平下降(P );与N C组和C H F组比较,m i R a p组大鼠心肌组织的P H D 蛋白表达显著下降,H I F 蛋白表达水平显著上升(P ),C H F组和N C组差异无统计学意义(P ).见图.L a b e l e dI mm u n o a s s a y s&C l i nM e d,M a r ,V o l ,N o 注:与假手术组相比,P,P;与C H F组相比,P,P 图四组大鼠心肌组织P HD 及H I F 蛋白表达分析讨论慢性心力衰竭是一种常见的临床综合征,其特征是呼吸困难、疲劳、外周水肿和肺部罗音等.慢性心力衰竭的发病率和死亡率很高,尤其是在老年人中.许多疾病如冠状动脉疾病、高血压、瓣膜性心脏病和糖尿病可导致C H F .心肌细胞死亡是导致慢性心力衰竭的主要因素,与缺血和再灌注损伤等多种心脏病理相关,预防心肌细胞坏死是C H F的有效治疗策略.m i c r o R N A是表观遗传学的重要调控分子,参与多种生理和病理过程,研究m i R N A的血浆浓度与年龄和N YHA分级呈负相关,m i R N A水平与R o s s评分评估的临床慢性心力衰竭程度呈负相关,是慢性心力衰竭精准的新型生物标志物 .C H F不仅受表观遗传学调控,还受活性氧(R O S)积累的影响.R O S引起的氧化应激与细胞死亡有关.在一项新生儿相关的研究中C a s e y、A r t h u r和B o g o y e v i t c h证实,高浓度过氧化氢(HO)会导致培养的新生儿心肌细胞晚发性死亡,死亡细胞表现出坏死的超微结构特征,乳酸脱氢酶延迟泄漏,质膜完整性受损.在大鼠研究表明活性氧和肾上腺素可以诱导新鲜分离的大鼠心肌细胞蛋白质组和能量代谢修饰发生变化,其中氧化还原调节蛋白,特别是S O D发挥重要作用,C H F过程中心肌细胞导致线粒体复合物活性显著降低,丙氨 酸/乳 酸 比 率 升 高,具 有 较 低 的 细 胞 溶 质N A D H/N A D()比率,S O D活性降低.本研究通过冠状动脉结扎建立了大鼠C H F模型,发现大鼠C H F过程中m i R a p出现低表达,病理结果表明大鼠出现心肌细胞肥大,心肌细胞纤维化增加,并出现显著的心肌细胞凋亡的现象,提示C H F过程发生心脏功能减退,心肌泵血能力不足的现象,而m i R a p过表达后,心肌细胞肥大有所缓解,心肌细胞纤维化降低,心肌不良症状的缓解,心肌细胞凋亡显著降低,提示m i R a p具有抗心肌细胞凋亡的心肌保护的作用.同时本研究表明大鼠C H F过程中S O D活性降低,MD A显著上升,提示出大鼠C H F过程中心肌抗氧化能力降低,组织氧化损伤增加,与组织学M a s s o n染色结果一致.通过激活m i R a p表达可以提高心肌组织S O D的释放降低MD A水平,提高心肌组织抗氧化能力,降低心肌组织的氧化损伤,提示m i R a p可能通过抑制氧化损伤引发的心肌细胞凋亡发挥心肌的保护作用.在CH F、心肌梗死和中风等疾病等以组织缺氧为显著特征疾病中,靶向P HD/H I F信号通路是的一种策略,H I F的积累通常与氧的可用性有关,氧依赖性翻译后修饰标志着H I F 亚单位的泛素化和破坏,种酶(P HD、P HD 和P HD)能够催化该反应,其中P HD 是最主要的脯氨酰羟化酶,同时也有研究针对P HD 进行s h R NA调控,在体外实验和体内试验中证实调控P HD 可以使保护心脏免受急性心肌梗死 .本研究显示在大鼠慢性心力衰竭过程中,P HD 表达水平上升,H I F 表达下降,而m i R a p组大鼠P HD 表达水平下调,H I F 表达上调,提示出m i R a p可能通过下调P HD 水平而导致H I F 的积累,促进了氧的可用性,发挥心肌抗氧化损伤的作用.本文研 究尚有不足,m i R a 与P HD 和H I F 的表达量是否具有相 关 性,以 及m i R a 是 否 可 直 接 靶 向 调 控P HD 和H I F 没有进一步研究.综上,本研究表明m i R a p可以抑制心肌组织的氧化损伤,降低心肌细胞凋亡,发挥心肌保护作用,其机制可能与P HD/H I F 信号通路的调控相关.本研究可以进一步通过基因敲除鼠实验探究P HD/H I F 信 号 通 路 的 调 控 关 系,深 入 揭 示m i R a p的调控机制.参考文献王枚,杜小琴,侯静雯心力衰竭患者血清S C F A、TMAO表达与肠道菌群及代谢综合征的相关性研究J标记免疫分析与临床 ,():H E I D E N R E I C HPA,B O Z K U R TB,A G U I L A R D,e ta l 标记免疫分析与临床 年月第 卷第期AHA/A C C/H F S AG u i d e l i n e f o r t h eM a n a g e m e n t o fH e a r tF a i l u r e:E x e c u t i v eS u mm a r y:A R e p o r to ft h e Am e r i c a n C o l l e g eo fC a r d i o l o g y/Am e r i c a n H e a r t A s s o c i a t i o nJ o i n t C o mm i t t e eo nC l i n i c a lP r a c t i c eG u i d e l i n e sJ C i r c u l a t i o n,():e e Z HAOY,YAN M,C HE N C,e ta l M i R a g g r a v a t e sf a i l i n gh e a r t sb ys u p p r e s s i n gC D f a c i l i t a t e da n g i o g e n e s i si nh e a r tJ O n c o t a r g e t,():TAN GL,X I EJ,YU X,e ta l M i R a pi n h i b i t sG S K e x p r e s s i o na n d p r o m o t e sc a r d i a c h y p e r t r o p h yi n v i t r oJP e e r J,:e P E I K E R TA,MA R T I N E ZFA,V A D U G A N A T HA N M,e ta l E f f i c a c ya n ds a f e t yo fd a p a g l i f l o z i ni nh e a r tf a i l u r ew i t hm i l d l yr e d u c e do rp r e s e r v e de j e c t i o nf r a c t i o na c c o r d i n gt oa g e:T h eD E L I V E Rt r i a lJ C i r cH e a r tF a i l,():e D IL O D O V I C OE,F A C O N D OP,D E L B A R B A A T e s t o s t e r o n e,h y p o g o n a d i s m,a n dh e a r tf a i l u r eJ C i r cH e a r tF a i l,():e 礼海,刘晓蕾,王懿,等参草通脉复方对慢性心力衰竭大鼠心肾功能的影响研究J实用心脑肺血管病杂志,():白延平,陈俊民,刘智娜伊伐布雷定通过调控T I MP 表达对冠心病大鼠抗心肌纤维化和心肌保护作用的机制 J西部医学,():唐群,吴华,张熙,等六味地黄汤对慢性肾衰模型大鼠P HD 和H I F 表达的影响 J北京中 医药大学学报,():刘宁,黄 宇玲,刘 杰,等 E N T R E S T O对 心 力 衰 竭 大 鼠 血 清c AMP、B N P、G a l 及生存时间的影响J标记免疫分析与临床 ,():,R E NY,C HE N X,L IP,e ta l S i M i a o Y o n g A nd e c o c t i o na m e l i o r a t e sc a r d i a c f u n c t i o n t h r o u g h r e s t o r i n g t h e e q u i l i b r i u mo fS O Da n dNO X i nh e a r t f a i l u r em i c eJP h a r m a c o lR e s,():M E H R A B IN A S A BE,H A S S A N Z A D E HM A K O E IR,A G H A J A N IH,e ta l I L /S T p a t h w a ya su p p e r h a n do fi n f l a mm a t i o ni na l l e r g i ca s t h m ac o n t r i b u t e sa sp r e d i c t i v eb i o m a r k e ri n h e a r tf a i l u r eJ E S CH e a r tF a i l,():K I N G M,K I N G E R YJ,C A S E YB D i a g n o s i s a n de v a l u a t i o no fh e a r t f a i l u r eJ AmF a mP h y s i c i a n,():Y I NJ,L UX,Q I A NZ,e t a l N e wi n s i g h t s i n t ot h ep a t h o g e n e s i sa n dt r e a t m e n t o f s a r c o p e n i ai n c h r o n i c h e a r tf a i l u r eJT h e r a n o s t i c s,():T AV E RNA R AK I SN C a r d i o m y o c y t e n e c r o s i s:a l t e r n a t i v em e c h a n i s m s,e f f e c t i v e i n t e r v e n t i o n sJB i o c h i mB i o p h y sA c t a,():E N D OK,N A I T OY,J I X,e t a l M i c r o R N A a sab i o m a r k e r f o rc o n g e s t i v eh e a r tf a i l u r eJ B i o lP h a r m B u l l,():YAOY,S ON GT,X I ON G G,e t a l C o m b i n a t