HPV感染型别及多重感染与女性宫颈病变的关联性分析.pdf

收稿日期 2022-03-05摇 修回日期 2022-09-30作者单位 南京中医药大学附属南京医院,南京市第二医院 分子与基因诊断实验室,江苏 南京 210003作者简介 徐露露(1989-),女,技师.通信作者 孙摇 梅,硕士,副研究员.E鄄mail:文章编号 1000鄄2200(2023)05鄄0637鄄04检验医学HPV 感染型别及多重感染与女性宫颈病变的关联性分析徐露露,张摇 琴,孙摇 梅摘要目的:分析人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)感染型别及多重感染与女性宫颈病变的关联性。方法:选取行HPV 分型检查以及液基薄层细胞学检查(TCT)的 6 000 份检测样品进行回顾性分析。首先通过 TCT 检查对样本进行筛查,然后分析样本的 HPV 感染型别及多重感染情况。采用宫颈组织病理活检方法确定病人的宫颈病变情况,分析不同 HPV 感染型别病人的宫颈病变情况,观察单一感染和多重感染女性的宫颈病变情况,分析 HPV 感染型别及多重感染与女性宫颈病变的相关性。结果:6 000 份 HPV 检测样本中,1 034 份为 HPV 阳性,阳性率为17.23%;HPV 感染病人中检测出21 个基因亚型,其中高危型感染的前三位是 HPV16、HPV52 和 HPV56,低危型感染最多的是 HPV6。HPV 阳性病人中慢性炎症疾病 634 份(61.32%),宫颈上皮内瘤变(CIN)玉级 208 份(20.12%),CIN域 芋级 128 份(12.38%),宫颈癌 64 份(6.18%)。logistic 回归分析显示,HPV16 和 HPV18 感染与宫颈癌发生具有密切关联(P 0.01 和 P 0.05)。HPV 阳性病人中单一感染 761 份(73.60%),多重感染 273 份(26.40%);不同宫颈病变分级病人中大部分为单一感染,且随着病变严重程度的增加,单一感染占比明显上升,多重感染占比降低(P 0.01)。结论:HPV 感染型别中,HPV16 和 HPV18 是影响女性宫颈病变发展速度的高风险因素,是否为多重感染与女性宫颈病变具有明显关联性,宫颈病变病人以 HPV 单一感染为主。关键词 人乳头瘤病毒;基因型;多重感染;宫颈病变中图法分类号 R 711摇 摇 摇 文献标志码 A摇 摇 摇 DOI:10.13898/ki.issn.1000鄄2200.2023.05.020Analysis of the relationship between type of HPV infectionand multiple infection and female cervical lesionXU Lu鄄lu,ZHANG Qin,SUN Mei(Laboratory of Molecular and Genetic Diagnosis,Nanjing Hospital Affiliatedto Nanjing University of Traditional Chinese Medicine,Nanjing Second Hospital,Nanjing Jiangsu 210003,China)Abstract Objective:To analyze the relationship between type of human papilloma virus(HPV)infection and multiple infection andfemale cervical lesion.Methods:A total of 6 000 samples for HPV typing and thin鄄prep cytology test(TCT)were selected forretrospective analysis.First,the samples were screened by TCT,and then the type of HPV infection and multiple infection of the sampleswere analyzed.The cervical pathological biopsy method was used to determine the cervical lesions of patients,the cervical lesions ofpatients with different types of HPV infection were analyzed,the cervical lesions of women with single infection and multiple infectionwere observed,and the relationship between type of HPV infection and multiple infection and female cervical lesion.Results:Among the6 000 HPV test samples,1 034 were HPV鄄positive,with a positive rate of 17.23%.Among the patients with HPV infection,21 genesubtypes were detected,in which the top three high鄄risk types were HPV16,HPV52 and HPV56,and the most type of low鄄risk infectionwas HPV6.Among HPV鄄positive patients,634 cases(61.32%)were with chronic inflammatory diseases,208 cases(20.12%)withcervical intraepithelial neoplasia(CIN)grade 玉,128 cases(12.38%)with CIN grade 域-芋,and 64 cases(6.18%)with cervicalcancer.Logistic regression analysis showed that HPV16 and HPV18 infection were closely associated with cervical cancer(P 0.01 andP 0.05).Among HPV鄄positive patients,761 cases(73.60%)were single infection and 273 cases(26.40%)were multiple infection.Most of the patients with different grades of cervical lesions were single infection,and with the increase of the severity of the lesions,theproportion of single infection increased significantly,while the proportion of multiple infection decreased(P 0.01).Conclusions:Among the type of HPV infection,HPV16 and HPV18 are the high鄄risk factors affecting the development rate of female cervical lesions.Multiple infection or not is significantly associated with female cervical lesion.Patients with cervical lesion mainly have HPV singleinfection.Key words human papilloma virus;genotype;multiple infection;cervical lesion摇 摇 妇女宫颈癌的发病率在全球范围内仅次于乳腺癌,属于妇科最常见的生殖系统恶性肿瘤,严重威胁女性的健康和生命1-3。据统计,全球每年新增宫颈癌病例约 50 万例,死亡 28 万例,我国的新增宫颈736蚌埠医学院学报 2023 年 5 月第 48 卷第 5 期癌病例 13.5 万例,死亡 8 万余例4。宫颈癌的预防和治疗至关重要,是当今世界特别是发展中国家的研究热点5-6。不同宫颈病变中存在多种人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)感染是不争的事实,且 HPV 感染的发生比例较高。然而,宫颈癌的预防和治疗中,明确多发感染在宫颈癌病变、宫颈癌发展和预后中的作用是必要的,不仅需要确认多发性感染在宫颈病变中是否起着相同的作用,还要以更多病例及区域,从不同的方向进行研究分析7。掌握多重感染对宫颈病变发展和预后的影响,可以为宫颈癌的预防和治疗提供更多理论依据,制定更加完善的癌症预防计划,还可以为宫颈病变的预测以及预后评估提供可靠依据,为临床治疗方案的选择提供参考8-10。基于此,本研究选取接受 HPV分型检查以及液 基 薄 层 细 胞 学 检 查(thin鄄prepcytology test,TCT)的检测样品进行回顾性分析,观察 HPV 感染型别及多重感染情况,分析不同 HPV感染型别病人的宫颈病变情况,明确 HPV 感染型别及多重感染与女性宫颈病变的相关性。现作报道。1摇 资料与方法1.1摇 研究对象摇 选取2018-2020 年我院进行 HPV分型检查以及 TCT 的 6 000 份检测样本为研究对象。病人年龄 22 68 岁。入组标准:(1)对此次研究知情并签署研究同意书;(2)有性生活史;(3)非妊娠期或哺乳期。排除标准:(1)有妇科恶性肿瘤病史;(2)有子宫全切术、宫颈环形电切术史;(3)样本质量问题最终剔除。1.2摇 方法摇1.2.1摇 标本采集摇 由临床医生使用凯普 HPV 采样刷采集宫颈脱落细胞标本,将毛刷放入加有专用细胞保存液的收集管中,4 8 益冰箱保存,3 d 内完成检测。取材时要求月经干净期,48 h 内无性生活史,白带清洁度检查正常,检查前 3 d 不得使用阴道内药物或阴道冲洗。1.2.2摇 TCT摇由妇科医生使用窥器打开阴道暴露宫颈,并用宫颈刷在宫颈鳞柱交界部顺时针转动5 10 圈,获得宫颈脱落细胞,再将细胞样本送检,使用TCT 细胞学检测仪检查。根据国际癌症协会推荐的TBS 分类,分为:正常和炎症(WNL)、意义不明不典型鳞状上皮细胞(ASCUS)、腺原位癌(AIS)、未见上皮内病变或恶性细胞(NILM)、低度鳞状上皮内病变(LSIL)、高度鳞状上皮内病变(HSIL)、鳞状细胞癌(SCC)、反应性细胞改变,以上示 TCT 结果为阳性。1.2.3摇 HPV鄄DNA 分型摇仪器与试剂:HPV 基因分型检测试剂盒,由潮州凯普生物化学有限公司生产,对 HPV 基因型进行分型检测,包括 13 种高危型HPV(16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68)和 8 种低危型 HPV(6、11、42、43、44、66、81),共 21种。凯普全自动核酸提取仪,Applied BiosystemsPCR 仪(型号 Veriti DX96well),凯普医用核酸分子杂交仪。实验步骤和结果判读:(1)样本处理,使用凯普全自动核酸提取仪对样本核酸提取及 HPV 阳性和阴性质控品的处理。(2)试剂配制,用 PCR 反应液1 和 PCR 反应液 2 配制测试反应体系。(3)上样,在各对应的反应管中加入 1 滋L 的 HPV 阴性质控品、HPV 阳性质控品、样本处理上清液,盖紧反应管后进行检测,PCR 扩增条件为 20 益、10 min,95 益、9 min,各进行 1 个循环;95 益、20 s,55 益、30 s,72 益、30 s,进行 40 个循环;72 益、5 min,4 益、10 min,各进行 1 个循环。(4)杂交,按照说明书将杂交液与 PCR 产物在杂交仪内进行导流杂交;用酶标进行显色。(5)结果判读,根据芯片显色位点判断 HPV 基因型。1.2.4摇 宫颈病变常规诊疗及组织病理学检查摇在常规宫颈病变诊疗的基础上,对部分高危型病人采用宫颈组织病理检查确定,使用电子数码阴道镜(金科威公司)实施阴道镜下宫颈组织活检,以宫颈活检病理检查为金标准,具体检查方法:对病人的外阴阴道宫颈、活检钳进行消毒,依据病人的病变部位及情况,用活检钳于病变部位取几小块组织,将其置于浓度为 10%的甲醛溶液中固定,送病理科做切片染色后作出病理诊断。宫颈病变分为慢性炎症疾病、宫颈上皮内瘤变(CIN)玉级、CIN域 芋级和宫颈癌。1.3摇统计学方法摇采用 字2检验和 logistic 回归分析。2摇 结果2.1摇 HPV 感染基因型别及与宫颈病变情况摇 6 000份 HPV 检测样本中,1 034 份为 HPV 阳性,阳性率为 17.23%;HPV 感染病人中检测出 21 个基因亚型,其中高危型感染的前三位是 HPV16、HPV52 和HPV56,低危型感染最多的是 HPV6。2.2摇 HPV 阳性者 TCT 结果摇 1 034 例 HPV 阳性者中,ASCUS、LSIL、HSIL、NILM 以及反应性细胞改变分别为 697 例(67.41%)、125 例(12.09%)、91 例836J Bengbu Med Coll,May 2023,Vol.48,No.5(8.80%)、22 例(2.18%)、99 例(9.57%)。2.3摇 HPV 基因型与宫颈病变的关系摇经常规宫颈疾病诊疗及阴道镜下宫颈组织病理检查显示,1 034份 HPV 阳 性 标 本 中 慢 性 炎 症 疾 病 634 份(61.32%),CIN玉级 208 份(20.12%),CIN域 芋级 128 份(12.38%),宫颈癌 64 份(6.18%)。HPV感染基因型及宫颈病变分布情况见表 1。表 1摇 HPV 感染基因型别及宫颈病变分布情况(n)感染型别慢性炎症(n=634)CIN玉级(n=208)CIN域 芋级(n=128)宫颈癌(n=64)合计(n=1 034)高危型摇 HPV163358549154摇 HPV1885102198摇 HPV316105021摇 HPV3312107231摇 HPV35936018摇 HPV391157023摇 HPV456105223摇 HPV5191922353摇 HPV524149220112摇 HPV53111426051摇 PV563434361105摇 HPV583031356102摇 HPV59921012摇 HPV661984132摇 HPV68830011低危型摇 HPV67234180124摇 HPV111230015摇 HPV401752024摇 HPV4361007摇 HPV44740012摇 HPV81520062.4摇影响宫颈癌发生的 HPV 型别 logistic 回归分析摇排除年龄因素影响后,logistic 回归分析显示,HPV16 和 HPV18 感染与宫颈癌发生具有密切关联(P 0.01 和 P 0.05)(见表 2)。表 2摇 影响宫颈癌发生的 HPV 型别 logistic 回归分析危险因素BSEWald字2POR(95%CI)HPV161.084 0.4196.7280.01摇 5.519(1.819 7.326)HPV181.261 0.5425.4570.053.213(1.358 5.489)2.5摇 单一感染及多重感染与宫颈病变关联性分析摇1 034 份 HPV 阳性样本中,单一感染 761 份(73.60%),多重感染 273 份(26.40%)。不同宫颈病变中的单一感染和多重感染占比比较显示,不同宫颈病变分级病人中大部分为单一感染,且随着病变严重程度的增加,单一感染占比明显上升,多重感染占比降低(P 0.01)(见表 3)。摇 表 3摇 单一感染及多重感染与宫颈病变的关联性n;百分率(%)分组n慢性炎症(n=634)CIN玉级(n=208)CIN域 芋级(n=128)宫颈癌(n=64)字2P单一感染761457(72.08)145(69.71)101(78.91)58(90.63)多重感染273177(27.92)63(30.29)27(21.09)6(9.37)13.77 0.01合计1 034摇 634(61.32)208(20.12)128(12.38)64(6.19)3摇 讨论摇 摇 宫颈癌的发生是一个多因素、多基因、多阶段、多步骤协调的漫长而复杂的过程,其中生物因素是宫颈癌发生的主要原因11。世界卫生组织及我国卫生部门的调查统计资料显示,我国宫颈癌发病人数和死亡人数几乎占全球 1/5,近年来宫颈癌的发病率和死亡率还在持续上升,并呈现年轻化趋势,形势十分严峻12-13。TCT 是临床常用的宫颈癌早期筛查方法,也是目前最先进的细胞学检查技术。与传统的巴氏杀菌法相比,TCT 可以提高子宫颈癌细胞的样本质量和检出率。同时,TCT 还可以在癌前病变中发现一些细胞,并且可以显著减少巴氏杀菌的重复次数,因此病人接受度更好14。近几年针对宫颈癌发病因素的研究,多集中于 HPV 感染方面。检测 HPV 指标,已经成为宫颈癌的常规筛查手段。该检测方法的敏感度较高,且具有着较高的可重复性,针对低级别的 CIN 也具有较高的特异度。HPV 感染型别中,HPV16 和 HPV18 是影响女性宫颈病变发展速度的高风险因素,同时与多重感染、女性宫颈病变也有着明显相关性。宫颈病变病人中 HPV 多重感染发生较少,主要是以单一感染为主。HPV16 和 HPV18 是最常见的 HPV 致癌亚型。本研究中,HPV 感染病人中检测出的基因亚型为 21个,其中高危型感染的前三位是 HPV16、HPV52 和HPV56,低危型感染最多的是 HPV6;邓六六等15选取 22 234 例子宫颈癌筛查病人进行分析,发现最常见的 HPV 感 染 高 危 亚 型 是 HPV52、HPV58 和HPV16,这一结果与此次研究结果有一定一致性,也存在一定差异,这可能是受到研究对象地区等因素936蚌埠医学院学报 2023 年 5 月第 48 卷第 5 期的影响。陈炜等16选取广州地区作为研究地,通过基因芯片技术检测与病理活检分析 HPV 感染型别及其和宫颈癌的相关性,发现最常见的高危型基因分型是 HPV16,且证实 HPV 感染和宫颈癌具有密切相关性。这也与本研究结果具有一致性,本研究logistic 回归分析结果显示,HPV16 和 HPV18 感染型别与宫颈癌发生密切关联。尽管不同地区的HPV 基因型别可能存在一定差异,但总体来看,HPV16 是我国最为常见的 HPV 高危基因型别。另外,实际的临床检测与研究中,检测仪器设备等差异会对检测结果产生影响,采样器的长度不能到达子宫颈,会导致测试数据存在一定的误差,或是棉签取样的细胞数量低于刷子取样的细胞数量。这也是导致不同研究人员结果存在一定差异性的原因之一。有研究17表明,与 HPV16、HPV18 在宫颈癌中的比例相比,HPV16、HPV18 感染在宫颈癌前病变中的比例明显较低。也有研究18表明,多种 HPV 感染促进子宫颈癌的发生,不同 HPV 在子宫颈癌中的作用有待进一步阐明。综上所述,HPV 感染的数量与宫颈病变明显相关,HPV 基因型别与宫颈癌的癌变程度及宫颈疾病的进展密切相关,其中 HPV16 和 HPV18 感染型别与宫颈癌的发生关联更为密切,因此,强化 HPV 筛查及基因检测对于我国宫颈癌预防具有重要意义。参考文献1摇 舒敏.p16 蛋白及高危型 HPV 感染与宫颈病变的关系及二者的相关性研究J.中国妇幼保健,2019,34(9):1983.2摇 刘小花,龙红惠,陈宇宁,等.高危 HPV 感染与宫颈病变的相关性分析J.中国优生与遗传杂志,2020,28(8):100.3摇 CHAMBUSO R,RAMESAR R,KAAMBO E,et al.Age,absoluteCD4 count,and CD4 percentage in relation to HPV infection andthe stage of cervical disease in HIV鄄1鄄positive women J.Medicine,2020,99(9):e19273.4摇 WU P,XIONG H,YANG M,et al.Co鄄infections of HPV16/18with otherhigh鄄riskHPVtypesandtheriskofcervicalcarcinogenesis:a large population鄄based study J.GynecolOncol,2019,155(3):436.5摇 范永霞,王英,刘春燕,等.成都市 9142 例女性 HPV 感染状况,亚型分布及与宫颈病变的关系分析J.肿瘤预防与治疗,2020,25(7):584.6摇 刘静,邓朝红,巴德玛拉.库尔勒市妇女高危 HPV 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