术中冰冻切片快速免疫组化在恶性肿瘤患者中的诊断价值分析.pdf

130 医药前沿 2024年5月 第14卷第13期 综合医学3 月2023 年 5 月 30 份通过冰冻切片快速免疫组化技术诊断为恶性肿瘤的标本，包括 11 份肺，3 份甲状腺，6 份乳腺及前哨淋巴结，1 份舌，3 份子宫，1 份颌下腺，1 份腮腺，4 份脑。对这些标本进行石蜡切片免疫细胞化进行诊断，以石蜡切片免疫组化结果作金标准，分析冰冻切片快速免疫组化的诊断准确率和耗时。本研究获得本院医学伦理委员会批准（K-20230141-W）。1.2 方法快速免疫组化方法：将手术切除的新鲜组织置冰冻切片机载物台上，22 快速冷冻后 4 6 m 厚切片，将切片贴附于涂有 3-氨丙基三乙氧基甲硅烷（3-aminopropyltriethoxysilane,APES）防脱剂的玻片上。经专用固定液固定后，在磷酸盐缓冲盐溶液（phosphate buffer saline,PBS）中漂洗 2 次，每次 15 s，用通用免疫组化封闭液封闭 60 s 后，辣根过氧化物酶多聚抗体室温孵育 3 min 后，用 PBS 漂洗 2 次，每次 15 s，用二氨基联苯胺（diaminobenzidine,DAB）工作液显色 3 min，水洗 2 次，每次 18 s，用苏木素复染 30 s，水洗 18 s，脱水，透明，并用中性树脂封片。石蜡切片免疫组化方法：在烘片箱中放置 20 min 化蜡，再经过 3 道二甲苯，每道 10 min，再进行梯度酒精水化，经PBS漂洗后，用微波炉或者高压锅进行抗原修复，用牛血清白蛋白（bovine serum albumin,BSA）试剂阻断非特异性结合，再进行一抗孵育，通常一抗孵育需要在4 状态下过夜，经 PBS 洗涤后，孵育二抗，用 PBS 将未结合的二抗去除，用 DAB 工作液显色 5 8 min，用苏木素复染 30 s，水洗，脱水，透明，并用中性树脂封片。恶性肿瘤的发病率逐年增高，是目前全国最重要的死亡原因之一1。病理诊断是多种疾病，尤其是恶性肿瘤的金标准。随着医学技术的发展，临床对于恶性肿瘤的诊断准确性和时效性有了更高的要求。为提高手术的精准性，在临床医生手术的同时，病理技术员将术中可疑组织制备成冰冻切片，并进行 HE 染色，交与病理医师，病理医师通过显微镜对冰冻切片进行观察，判断术中所取组织的良恶性，并发布诊断报告，术中快速冰冻切片的病理诊断结果是指导手术方案的一个重要指标2。因此，需要在术中标本切除后 30 min 之内给出术中病理诊断报告，以便后续临床开展手术工作。但是肿瘤的生物学行为很难判断，影响因素很多，单单依靠形态学是不够的，单纯应用冰冻切片 HE 染色进行病理诊断，对于病理医生而言，具有一定难度3-5，需要进一步借助免疫组织化学的各种标志物来辅助和鉴别诊断。石蜡切片免疫组化技术虽然诊断准确率高，但耗时过长，不宜在手术过程中开展，因此在临床病理诊断中需寻求更加便捷和快速的术中免疫组化手段提高检查效率。快速免疫组化试剂盒的应用，大大缩短了术中免疫组化所用时间。镇江市第一人民医院病理科从 2022 年 3 月开始开展冰冻切片的术中快速免疫组化技术研究，现选取2022年3月2023 年 5 月由冰冻切片免疫组化技术诊断的 30 例恶性肿瘤标本为研究对象，对冰冻切片快速免疫组化技术对恶性肿瘤诊断的准确率进行分析。1 资料与方法1.1 一般资料回顾性分析镇江市第一人民医院病理科 2022 年 术中冰冻切片快速免疫组化在恶性肿瘤患者中的 诊断价值分析唐伟红，陈方舟，耿 歆（镇江市第一人民医院病理科 江苏 镇江 212000）【摘要】目的：对比恶性肿瘤术中冰冻切片快速免疫组化和石蜡切片免疫组化的诊断准确率，以评估术中冰冻切片快速免疫组化在恶性肿瘤术中的诊断价值。方法：选取镇江市第一人民医院病理科 2022 年 3 月2023 年 5 月 30 例由术中冰冻切片快速免疫组化诊断为恶性肿瘤患者的组织样本，以这30例患者同样本的石蜡切片免疫组化诊断为金标准，对比 2 种方法的耗时和结果的诊断准确率，分析术中冰冻切片快速免疫组化的临床应用价值。结果：冰冻切片快速免疫组化与相应组织标本的石蜡切片免疫组化对比发现，冰冻切片免疫组化耗时（81036）s，短于石蜡切片免疫组化的耗时（68 0003 500）s,差异有统计学意义（P 0.05）；冰冻切片快速免疫组化的结果与石蜡切片免疫组化结果匹配度高达 96.67%，两者诊断准确率比较，差异无统计学意义（P 0.05）。结论：术中冰冻切片快速免疫组化能在更短的时间内对恶性肿瘤进行诊断，且诊断准确率与石蜡切片免疫组化技术无显著差异，提示术中冰冻切片快速免疫组化方法有望成为术中病理诊断的关键辅助手段，并在未来的临床实践中发挥关键性作用。【关键词】冰冻切片快速免疫组化；石蜡切片免疫组化；诊断准确率【中图分类号】R730【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2024）13-0130-04医药前沿 2024年5月 第14卷第13期 综合医学 131异有统计学意义（t=105.142，P 0.001）。2.2 冰冻切片快速免疫组化技术诊断准确率在所选择的 30 份标本中，检测的抗体包括 TTF1、CK19、CK、CK5/6、GFAP，以石蜡切片免疫组化结果为金标准，冰冻切片快速免疫组化与金标准结果符合 29 份，符合率为 96.67%。仅 1 份标本冰冻切片快速免疫组化显示为可疑阳性，石蜡切片免疫组化技术显示阳性两种诊断方法诊断结果比较，差异无统计学意义（2=1.017，P 0.313）。冰冻切片快速免疫组化和石蜡切片免疫组化检查结果图见图 1。1.3 结果判定通过 DAB 显色，棕褐色显色为表达阳性。1.4 统计学方法符 合 正 态 分 布 的 计 量 资 料 以 均 数 标 准 差（x s）表示，两样本比较采用 t 检验，利用 GraphPad Prism.5 软件进行数据分析。以 P 0.05 为差异有统计学意义。2 结果2.1 两种免疫组织化学染色技术消耗时间比较冰冻切片快速免疫组化所需时间为（81036）s，短于石蜡切片免疫组化所需时间（68 0003500）s，差（a）（a）（d）（d）（b）（e）（e）（c）（f）（f）（b）（c）注：（a）肺占位组织 TTF1 抗体的冰冻切片快速免疫组化图，（a）石蜡切片免疫组化图；（b）子宫内膜占位组织 CK 抗体的冰冻切片快速免疫组化图，（b）石蜡切片免疫组化图；（c）额叶占位组织 GFAP 抗体的冰冻切片快速免疫组化图，（c）石蜡切片免疫组化图；（d）乳腺占位组织 CK5/6 抗体的冰冻切片快速免疫组化图，（d）石蜡切片免疫组化图；（e）乳癌哨淋巴结 CK 抗体的冰冻切片快速免疫组化图，（e）石蜡切片免疫组化图；（f）甲状腺占位组织 CK19抗体的冰冻切片快速免疫组化图，（f）石蜡切片免疫组化图。图 1 冰冻切片快速免疫组化和石蜡切片免疫组化检查结果（HE 染色，20）132 医药前沿 2024年5月 第14卷第13期 综合医学时间才能得到具体的病理诊断结果，这可能增加患者的心理压力。为了解决这一问题，开展术中冰冻切片快速免疫组化技术成为一种可行方案，因为它能在短时间内提供新鲜组织的详细免疫组化结果，使病理医师在短时间内获得完整的组织鉴别诊断信息，显著缩短了病理诊断的时间，使病理诊断在保证准确率的前提下更加快速和高效。同时，冰冻切片快速免疫组化可在一定程度上降低冰冻切片诊断的失误率，提高冰冻切片病理诊断的准确率22-23。然而，这项技术也存在一定的不足：目前，该技术受制于抗体的技术垄断和高昂的费用，很多医院难以普遍采用。为了降低患者的费用负担，病理医生通常只选择几项关键性的指标来进行鉴别诊断，可能会使鉴别诊断结果存在一定的局限性。综上所述，肿瘤术中冰冻切片免疫组化技术用时短，准确率高，该项技术的应用有助于肿瘤的快速诊断和治疗。【参考文献】1 姜丹，王仲，刘德平国内恶性肿瘤的患病现状及分布特征 J现代泌尿生殖肿瘤杂志，2023,15(6):374-375,378.2 周凯华术中冰冻切片病理诊断早期肺腺癌的价值分析 J基层医学论坛，2024,28(4):130-132,135.3 中国抗癌协会胃癌专业委员会胃癌诊治难点中国专家共识（2020版）J中国实用外科杂志，2020,40(8):869-904.4 黄新乳腺硬化性腺病冰冻病理诊断分析 J/CD中西医结合心血管病电子杂志，2019,7(19):11-12.5 张洪海，李春德，蔡俊杰 冰冻切片诊断甲状腺滤泡性癌的探讨J诊断病理学杂志，1996,(3):143-144,99.6 徐有江研究快速免疫组化技术在乳腺癌冰冻切片诊断中的应用 J世界最新医学信息文摘，2019,19(87):109-110.7 KITAMuRA H,YAZAWA T,SATo H,et al.Small cell lung cancer:significance of RB alterations and TTF-1 expression in its carcinogenesis,phenotype,and biology J.Endocr Pathol,2009,20(2):101-107.8 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抗体的冰冻切片快速免疫组化结果与石蜡切片免疫组化结果一致，均为阴性，提示该患者为浸润性癌，而非导管原位癌11-12；前哨淋巴结的 CK 抗体冰冻切片快速免疫组化结果与石蜡切片免疫组化结果一致，提示患者未出现淋巴结转移13，甲状腺占位患者的病变甲状腺组织 CK19 抗体的冰冻切片快速免疫组化结果与石蜡切片免疫组化结果一致，均为阳性，提示患者为甲状腺乳头状癌14。上述结果提示本研究中使用的冰冻切片快速免疫组化方法的诊断准确率高，可以作为术中的辅助诊断手段，尤其对于快速鉴别疑难病变具有良好的价值。术中病理诊断对于临床治疗至关重要，尤其对于疑似恶性肿瘤患者15。如果冰冻切片快速免疫组化诊断结果不准确，会影响手术范围，甚至可能造成患者进行二次手术，给患者带来巨大的痛苦16。而免疫组化结果是病理医师对于送检组织进行鉴别诊断的重要因素，免疫组化技术在鉴别肿瘤良恶性17、恶性肿瘤分级与分期18、预后19和淋巴结转移20等中发挥着重要的作用，是病理技术质量控制的衡量标准之一21。但是石蜡切片免疫组化技术耗时长，程序繁杂，病理技术人员通常需要分批次处理免疫组化切片，患者和医师需要等待较长一段医药前沿 2024年5月 第14卷第13期 综合医学 133（上接第 129 页）良、恶性病变患者病理诊断中的价值分析 J浙江创伤外科，2023,28(6):1184-1187.18 朱蕾免疫组化检测在非肌层浸润性膀胱癌分期及病理分级中的应用价值 J中国民康医学，2020,32(10):4-6.19 易倩琳，蒋鹏，朱梦秋，等免疫组化标志物 p53 定量表达在期子宫内膜癌中的预后价值J中国实用妇科与产科杂志，2023,39(5):568-572.20 乐桂花，伍毓强，刘启榕，等甲状腺微小乳头状癌组织 CD56、CK19、TPo、HBME-1 的表达及与淋巴结转移的关系 J中国医药指南，2023,21(23):109-111,115.21 王晓宝，巨宏亚，孙璐瑛，等免疫组化染色对病理技术质量控制的影响分析 J贵州医药，2023,47(9):1461-1463.22 王大鹏快速免疫组化技术检测在前列腺穿刺组织冰冻切片诊断中的应用价值 J首都食品与医药，2019,26(18):27.23 胡淇术中冰冻诊断对乳腺癌检测价值分析 J中国社区医师，2023,39(6):93-95.12 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