金黄色葡萄球菌检查用培养基适用性检查验证专项方案.doc

1.概述:培养基是微生物实验基本，直接影响微生物实验成果。适当培养基制备办法、贮藏条件和质量控制是提供优质培养基保证。供试品微生物限度检查中所使用培养基应进行合用性检查。
2.验证目：本次验证目是确认金黄色葡萄球菌检查用培养基合用性检查用甘露醇氯化钠琼脂培养基质量，以及其制备程序、保存条件等与否满足微生物限度检查用规定。
3.验证根据：《中华人民共和国药典》四部“1106非无菌产品微生物限度检查：微生物控制菌检查”、“9203药物微生物实验室质量管理指引原则”。
4.验证项目：甘露醇氯化钠琼脂培养基合用性检查。
5.合用范畴：成品培养基、由脱水培养基或按处方配制培养基均应进行培养基合用性检查。
6.验证周期：除另有规定外，在实验室中，若采用已验证配制和灭菌程序制备培养基且过程受控，那么同一批脱水培养基合用性检查实验可以只进行一次。如果培养基制备过程未经验证，那么每一灭菌批培养基均要进行合用性检查实验。
7.验证小组人员及职责：
7.1验证小组人员:
小组人员职务
姓 名
签字
所在部门
职 务
组 长

质量部
质量总监
组 员

质量控制实验室
QC主任
组 员

质量控制实验室
微生物QC
7.2验证人员职责及规定
7.2.1按验证方案及有关文献实行验证。
7.2.2认真观测并做好验证原始记录。
7.2.3对实行验证成果负责。
7.3验证中各部门职责
7.3.1验证领导组职责
7.3.1.1制定验证总筹划，负责全公司验证工作管理。
7.3.1.2拟定验证项目及验证项目负责人。
7.3.1.3负责验证方案批准工作。
7.3.1.4负责验证资料及成果审核工作。
7.3.1.5负责验证报告批准工作。
7.3.2验证项目小组职责
7.3.2.1负责验证方案起草工作。
7.3.2.2参加验证方案讨论、确认工作。
7.3.2.3负责验证方案实行。
7.3.2.4负责验证成果分析、记录、报告工作。
7.3.2.5参加验证成果评价工作。
7.3.3质量部职责
7.3.3.1负责公司验证寻常管理工作。
7.3.3.2负责验证方案审核工作。
7.3.3.3负责验证过程中仪器、仪表、计量器具校验工作。
7.3.3.4负责检查仪器及检查办法验证。
7.3.3.5负责验证中各项检测工作，提供验证检查记录、检查报告，对验证过程中各项检查工作负责。
7.3.3.6负责对验证人员培训、考核工作。
7.3.3.7负责验证资料和报告审核工作。
7.3.3.8负责验证文献回收、归档管理工作。
8.合格原则：
被检固体培养基上菌落平均数与对照培养基上菌落平均数比值应在0.5-2范畴内，且菌落形态大小应与对照培养基上菌落一致。
9.验证明行条件
9.1验证方案培训：在验证明行前，应对参加验证人员进行验证方案以及与验证有关文献进行培训，保证有关人员掌握了验证有关规定与知识。
9.2微生物限度检测室：检查所使用检测室应通过HVAC系统确认，并符合规定。
9.3检查用水：验证过程使用纯化水其制备系统应通过确认并符合规定，纯化水质量应通过检查并符合《中华人民共和国药典》二部规定。
9.4检查仪器设备：验证涉及检查仪器（设备）与检查办法，应通过技术监督局校验合格或者公司确认/验证合格。
9.5验证菌种：验证所使用菌种，其种类与传代次数应符合《中华人民共和国药典》有关规定。菌种状况见附件2:菌种确认。
10.验证过程
10.1菌液制备
取经30-35℃培养18-24h金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌新鲜培养物1ml加入9ml0.9%无菌氯化钠溶液中，10倍递增稀释至10-6-10-8，约为≤100cfu/ml菌悬液备用。
10.2实验操作
10.2.1甘露醇氯化钠琼脂培养基：新鲜配制对照甘露醇氯化钠琼脂培养基，121℃灭菌15min，冷却至60℃倾注平皿，35℃培养箱预培8h后备用。取2个无菌甘露醇氯化钠琼脂平板，涂布接种大肠埃希菌1皿，接种菌液0.1ml（含菌≥100cfu），另一平板不接种菌作为空白对照，涂布均匀后于30～35℃倒置培养。被检培养基同法操作。72h分别观测成果。
10.2.2甘露醇氯化钠琼脂培养基：新鲜配制对照甘露醇氯化钠琼脂培养基，121℃灭菌15min，冷却至60℃倾注平皿，35℃培养箱预培8h后备用。取3个无菌甘露醇氯化钠琼脂平板，分别涂布接种金黄色葡萄球菌2皿，接种菌液0.1ml（含菌≤100cfu），另一平板不接种菌作为空白对照，涂布均匀后于30～35℃倒置培养。被检培养基同法操作。18h分别观测成果。
10.3.检查成果：见附件5：金黄色葡萄球菌检查用培养基合用性检查成果
11.异常状况与偏差解决：当浮现偏差时，应按《偏差解决管理规程》进行解决。
12.验证成果评估、结论与建议
验证小组组长负责收集各项验证、实验记录，依照验证、实验成果对验证效果进行综合评审，起草验证报告、做出验证结论。对验证成果评审应涉及如下内容：
12.1验证明验与否有漏掉？
12.2验证明行过程中对验证方案有无修改？修改因素、根据以及与否通过批准？
12.3验证记录与否完整？
12.4验证明验成果与否符合原则规定？偏差及对偏差阐明与否合理？与否需要进一步补充实验？
13.附件
13.1 附件1:验证明行条件确认
13.2 附件2:培养基确认
13.3 附件3:菌种确认
13.4 附件4:菌液浓度拟定
13.5 附件5:金黄色葡萄球菌检查用培养基合用性检查成果
13.6 附件6:验证成果审批表

附件1： 设施设备验证确认
设施设备名称
验证报告编号
验证成果
实验室HVAC系统

纯化水系统

LDZX-40A型立式自控电热压力蒸汽灭菌器

PSH-500A型生化培养箱

303AS-2型电热恒温隔水式培养箱

SW-CJ-1C型双人净化工作台

确认结论：
确认人： 确认日期：

附件2： 培养基确认
培养基名称
来源
批号
有效期至
甘露醇氯化钠琼脂培养基

对照甘露醇氯化钠琼脂培养基

确认结论：
确认人： 确认日期：

附件3： 菌种确认
培养基名称
来源
批号
大肠埃希菌CMCC(B)44102

金黄色葡萄球菌 CMCC(B)26003

确认结论：
确认人： 确认日期：

附件4：菌液浓度拟定

10-3
10-4
10-5
10-6
10-7
1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
3
大肠埃希菌
皿1

皿2

金黄色葡萄球菌
皿1

皿2

结论：
依照规定，菌数要控制在每1ml中含菌数在≤100cfu，因而，咱们拟定菌液制备浓度为：
大肠埃希菌： 金黄色葡萄球菌：
检查人

检查时间
年 月 日- 年 月 日
复核人

复核时间
年 月 日

附件5：金黄色葡萄球菌检查用培养基合用性检查成果

培养基
验证菌株
测试特性
皿号
被检培养基cfu/ml
对照培养基cfu/ml
成果
甘露醇氯化钠琼脂培养基
（30～35℃，18-72h）

大肠埃希菌
抑制能力
1

2

金黄色葡萄球菌
促生长能力+批示能力
1

2

空白
—
1

检查人

检查时间
年 月 日- 年 月 日
复核人

复核时间
年 月 日

表6:验证成果审批表
验证对象

验证开始日期

验证结束日期

评审意见（在方框中打√）

1、验证明验有否漏掉 □ 漏掉 □ 未漏掉
2、验证明行过程中对验证方案有无修改 □ 有修改 □ 无修改
3、方案修改因素 □ 通过批准 □ 未经批准
4、验证记录与否完整 □ 完整 □ 不完整
5、与否浮现偏差 □ 浮现偏差 □ 未浮现偏差
6、对偏差阐明与否合理 □ 合理 □ 不合理
7、与否需要作进一步实验 □ 是　　　　□ 否

验证项目小组组长：
年 月 日

验证领导小组组长：
年 月 日