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养殖与饲料 2024 年第 1 期饲料中添加抗菌肽对肉牛免疫机能的影响张婕，王法才山东省蒙阴县畜牧发展促进中心，山东临沂 276200摘要 目的 为抗菌肽在兽医临床上的使用剂量和使用方法提供理论参考。方法 采用随机数字表法将80头6月龄的西门塔尔牛分为4组，每组20头，分别为对照组、抗菌肽低剂量组、中剂量组、高剂量组。在试验第60天采集西门塔尔牛的静脉血，并应用酶标仪检测西门塔尔牛血清中IL-6、IL-10、TNF-、IgG、IgA和IgM含量。结果 在试验第60天，与对照组相比，抗菌肽低剂量组、中剂量组和高剂量组西门塔尔牛血清中IL-10含量分别显著提高30.33%、51.36%、60.85%，IgA含量分别显著提高15.94%、36.23%、43.48%；抗菌肽中剂量组、高剂量组西门塔尔牛血清中IgG含量分别显著提高45.03%、51.27%；各组血清中IgM含量无显著差异。结论 抗菌肽能够一定程度提升肉牛机体的体液免疫和细胞免疫功能。关键词 饲料；抗菌肽；肉牛；体液免疫；细胞免疫Effects of adding antimicrobial peptide to feeds on the immune Effects of adding antimicrobial peptide to feeds on the immune function of beef cattlefunction of beef cattleZHANG Jie,WANG FacaiAnimal Husbandry Development Promotion Center of Mengyin County in Shandong Province,Linyi 276200,ChinaAbstractAbstract Objectives To provide theoretical reference for the dosage and usage of antimicrobial peptides in veterinary clinic.Methods 80 Simmental cattle aged six months were divided into 4 groups using a random number table method,with 20 cattle in each group,namely the control group,group with low-dose of antimicrobial peptide,group with medium dose of antimicrobial peptide,and group with high-dose of antimicrobial peptide.The venous blood from Simmental cattle was collected on the 60th day of the experiment,and the enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA)was used to detect the content of IL-6,IL-10,and TNF-,IL-10,IgG、IgA and IgM in serum from Simmental cattle.Results The content of IL-10 in serum collected from Simmental cattle on the 60th day of the experiment was significantly increased by 30.33%,51.36%,and 60.85%in the low-dose,medium dose,and high-dose groups of antimicrobial peptides,respectively,compared to the control group.The content of IgA was significantly increased by 15.94%,36.23%,and 43.48%,respectively.The content of IgG in Simmental bovine serum of medium dose group and high dose group was significantly increased by 45.03%and 51.27%,respectively.There was no significant difference in content of IgM in 收稿日期：2023-06-08作者简介：张婕，女，1996年生，助理兽医师。34养殖与饲料 2024 年第 1 期the serum of all groups.Conclusions Antibacterial peptides can enhance the humoral and cellular immunity of beef cattle to a certain extent.KeywordsKeywords feeds;antimicrobial peptide;beef cattle;humoral immunity;cellular immunity由于抗生素具有强效的抗菌作用，在我国畜禽养殖中被广泛应用1。但抗生素的大量使用甚至是滥用，也给畜禽养殖带来了较多危害2，如细菌耐药性、毒副作用、畜禽机体免疫功能被抑制以及抗生素在畜禽体内的残留，到食物链的传送与蓄积，进而对畜禽机体和人体造成安全威胁等3。因此，寻找不易产生耐药性、无药物残留的抗生素替代物至关重要。抗菌肽作为一种具有广谱抗菌活性的小肽，不仅能够维持微生态均衡、杀灭有害菌，还可以诱导畜禽黏膜免疫功能，进而提升畜禽机体的自身免疫能力4。此外，王岩5报道了抗菌肽不易产生耐药性、无残留、可替代抗生素应用于畜禽和水产品中，提升畜禽的抗病能力和生长性能等。因此，本研究以西门塔尔牛作为研究对象，研究抗菌肽对肉牛机体的体液免疫和细胞免疫功能的影响，旨在为抗菌肽在兽医临床上的使用剂量和使用方法提供理论参考。1材料与方法1.1试验材料和设备1）试验动物。选择80头6月龄、身体健康、体重相近、体况膘情良好的西门塔尔牛进行试验，在试验前1周对西门塔尔牛进行适应性饲养。基础日粮配方参照2022年9月15日阿鲁科尔沁牛业协会发布的 西门塔尔牛全程饲养管理技术规程（T/ALKEQNY00032022）中的要求进行配制，饲料中不添加任何抗菌药物。2）试验药品。抗菌肽购自连云港广源生物科技有限公司。3）主要仪器设备。SF-TGL-16M型台式高速离心机购自上海菲恰尔分析仪器有限公司，BCD-209BCR型美菱冰箱购自长虹美菱股份有限公司，ST-360型酶标仪购自上海科华生物工程股份有限公司。4）主要试剂。免疫球蛋白 G（IgG）测试盒、免疫球蛋白A（IgA）测试盒、免疫球蛋白M（IgM）测试盒、白介素-6（IL-6）测试盒、白介素-10（IL-10）测试盒和肿瘤坏死因子-（TNF-）测试盒，均购自南京建成生物工程研究所。1.2试验方法1）试验前西门塔尔牛的临床检查。临床检查主要包括：一般检查，如体温、心率和呼吸等；整体状态：如体格、精神、姿势和行为等。2）试验动物分组与试验设计。采用随机数字表法将经过1周适应性饲养的80头西门塔尔牛均分成4个组，每组20头，分别为对照组、抗菌肽低剂量组、抗菌肽中剂量组、抗菌肽高剂量组。其中，对照组只饲喂基础日粮；试验组在每日基础日粮的基础上分别添加2、4、6 g抗菌肽（抗菌肽低剂量组、抗菌肽中剂量组、抗菌肽高剂量组），正式试验周期为60 d。3）待检样品的采集与制备。试验第60天，在西门塔尔牛晨饲前，采集试验各组西门塔尔牛的血液1015 mL置于4 冰箱中过夜固缩后，使用离心机在3 000 r/min的条件下离心5 min，收集血清，备用。4）西门塔尔牛血清中细胞因子指标检测。应用南京建成生物工程研究所生产的白介素-6（IL-6）测试盒、白介素-10（IL-10）测试盒和肿瘤坏死因子-（TNF-）测试盒检测西门塔尔牛血清中IL-6、IL-10和TNF-的含量。5）西门塔尔牛血清中免疫球蛋白指标检测。应用南京建成生物工程研究所生产的免疫球蛋白G（IgG）测试盒、免疫球蛋白A（IgA）测试盒和免疫球蛋白 M（IgM）测试盒检测西门塔尔牛血清中 IgG、IgA和IgM的含量。1.3 数据处理本试验数据采用 SPSS 17.0 软件进行方差分析，数据结果以“平均值标准差”表示。2结果与分析2.1西门塔尔牛血清中细胞因子指标检测结果由表1可知，随着抗菌肽在饲料中添加量的增35养殖与饲料 2024 年第 1 期加，西门塔尔牛血清中IL-10的含量逐渐升高，IL-6和TNF-的含量逐渐降低。与对照组相比，抗菌肽低剂量组、中剂量组和高剂量组西门塔尔牛血清中IL-10含量分别显著提高 30.33%、51.36%、60.85%，IL-6、TNF-含量显著低于对照组。2.2西门塔尔牛血清中免疫球蛋白指标检测结果由表2可知，随着抗菌肽在饲料中添加量的增加，西门塔尔牛血清中IgG、IgA和IgM含量逐渐升高。与对照组相比，抗菌肽中剂量组、高剂量组西门塔尔牛血清中 IgG 含量分别显著提高 45.03%、51.27%；抗菌肽低剂量组、中剂量组和高剂量组西门塔尔牛血清中 IgA 含量分别显著提高 15.94%、36.23%、43.48%。各 组 血 清 中 IgM 含 量 无 显 著差异。3讨 论畜禽血清中IgG、IgA和IgM可有效反映畜禽血清中免疫球蛋白的整体水平和体液免疫水平6。IgG在血清中的含量最高，其不仅能够作为畜禽血液和细胞外液中的主要功能性抗体来调节畜禽机体的免疫应答，而且还可以作为再次免疫应答的主要抗体7。IgA主要存在于畜禽的胃肠道和支气管分泌液、初乳、唾液和泪液中，参与畜禽机体黏膜局部免疫8。IgM作为分子质量最大的免疫球蛋白，其不仅是畜禽生长发育过程中最早合成和分泌的抗体，而且也是抗原刺激诱导的体液免疫应答中最早出现的抗体9。本试验结果显示，抗菌肽能够提升肉牛血清中IgG、IgA和IgM含量，其中肉牛血清中IgG和IgA含量变化显著。IL-6是1种由T细胞和成纤维细胞分泌的细胞因子，它可以刺激另一种细胞B细胞前体成为产生抗体的细胞。同时，它还能够促进原始骨髓源细胞的成长和分化，增强自然杀伤细胞的裂解能力10。IL-10是1种具有强大抗炎特性的多效细胞因子，其不仅能够抑制前炎症细胞因子产生，而且还可以抑制T细胞合成IL-2等细胞因子，可促进B细胞分化增殖11。TNF-为免疫细胞产生的多功能细胞因子，在细胞凋亡和存活以及免疫和炎症中发挥关键作用10。本试验结果显示，抗菌肽能够提升肉牛血清中IL-10的含量，降低肉牛血清中IL-6和TNF-的含量，抗菌肽能够有效提高肉牛机体的体液免疫和细胞免疫功能。参 考 文 献1严牡丹，万宁，许达先.中药在畜禽疾病防治中的应用J.中兽医学杂志，2023（1）：46-48.2张艳，孙武，李升升，等.浅析抗生素发展史及替抗时代下的应对措施J.中国畜禽种业，2023，19（1）：22-24.3唐文迪，佟丽鑫，于晶，等.简述畜禽养殖环境中抗生素及抗生素抗性基因的相关研究进展J.吉林畜牧兽医，2023，44（5）：153-154.4张丽慧，雷茹林，胡美忠.抗菌肽的来源、活性及作用机制最新研究进展J.食品安全质量检测学报，2023，14（9）：1-8.5王岩.抗菌肽饲料添加剂的规模化制备及其应用D.石家庄：河北科技大学，2016.6李雪，张红梅，翟伟，等.日粮中添加牛磺酸对断奶仔猪生长性能、血清生化指标和免疫功能的影响J.今日畜牧兽医，2023，39（5）：11-13.7卢晨阳.复合益生菌制剂对羔羊球虫感染、肠道菌群及免疫的影响D.郑州：河南农业大学，2022.8曹婷婷.IgA、IgG和IgM分泌细胞在家兔胃肠道的分布规律及其与年龄的关系D.兰州：甘肃农业大学，2016.9彭红艳，彭昊，张天豪，等.饲料中添加单原子添加剂对三黄鸡生长性能和免疫机能的影响J.饲料工业，2023，44（7）：46-53.10 郑梦荷，徐丽云，许子豪，等.枸杞多糖对犊牛生长性能、消化水平、免疫功能及抗氧化能力的影响J.饲料研究，2023，46（7）：1-5.11 王娜.花生衣原花青素制备及抗肠道炎症作用机制研究D.郑州：河南农业大学，2022.【责任编辑：胡敏】表1西门塔尔牛血清中细胞因子指标检测结果西门塔尔牛血清中细胞因子指标检测结果（n n=2020）ng/L指标IL-6IL-10TNF-对照组620.208.64180.4428.44380.7830.02低剂量组598.449.27*235.1631.56*332.1835.34*中剂量组544.4210.06*273.1132.62*298.7643.74*高剂量组520.788.54*290.2445.76*255.1041.19*注：“*”表示与对照组比较差异显著（P0.05），下同。表2西门塔尔牛血清中免疫球蛋白指标检测结果西门塔尔牛血清中免疫球蛋白指标检测结果（n n=2020）g/L指标IgGIgAIgM对照组4.330.840.690.062.750.10低剂量组5.150.880.800.08*2.820.15中剂量组6.280.80*0.940.08*2.950.25高剂量组6.550.84*0.990.07*3.020.3136