多囊卵巢综合征患者血清mi...-24水平变化及其临床意义_李正伟.pdf

山东医药2023 年第 63 卷第 19 期多囊卵巢综合征患者血清miR-24水平变化及其临床意义李正伟1，殷悦2，高蕊3，杨威2，刘静11 唐山市妇幼保健院妇六科，河北唐山063000；2 唐山市妇幼保健院产科；3 唐山市妇幼保健院预检分诊摘要：目的探讨多囊卵巢综合征（PCOS）患者血清微小RNA-24（miR-24）水平变化及其临床意义。方法选取107例PCOS患者作为PCOS组，同期另择体检卵巢功能正常的60例女性作为对照组。用ELISA法测定两组血清促卵泡生成素（FSH）、黄体生成激素（LH）、雌二醇（E2）、睾酮（T）；实时荧光定量PCR法检测血清miR-24表达；根据空腹血糖、空腹胰岛素计算胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）；用ELISA法检测血清白细胞介素1（IL-1）、白细胞介素6（IL-6）、肿瘤坏死因子（TNF-）；用Pearson相关法分析PCOS患者血清miR-24表达与HOMA-IR、IL-1、IL-6、TNF-水平的关系；绘制受试者工作特征曲线，用曲线下面积评估miR-24对PCOS的诊断价值。结果两组FSH水平比较差异无统计学意义（P0.05），PCOS组LH、E2及T水平均高于对照组（P均0.5），血清miR-24相对表达量低于对照组（P0.05），HOMA-IR及IL-1、IL-6、TNF-水平均高于对照组（P均0.05）。PCOS患者血清miR-24表达与HOMA-IR、IL-1、IL-6、TNF-水平均呈负相关（r分别为-0.641、-0.642、-0.658、-0.668，P均0.05）.The levels of LH，E2 and T in the PCOS group were higher than those in the control group（all P0.05）.The relative expression of serum miR-24 in the PCOS group was lower than that in the control group（P0.05）.The levels of HOMA-IR，IL-1，IL-6，and TNF-in the PCOS group were higher than those in the control group（all P0.05）.The expression of miR-24 in serum of patients with PCOS was negatively correlated with HOMA-IR，IL-1，IL-6 and TNF-（r=-0.641，-0.642，-0.658，and-0.668，respectively；all P0.05）.The AUC of serum miR-24 for diagnosis of PCOS was 0.885（P0.05）。两组均签署知情同意书，本研究获医学伦理委员会批准。1.2血清激素检测采集两组晨起空腹静脉血5 mL，置入未加抗凝剂的离心管中，4 000 r/min离心5 min，离心半径15 cm，将分离出的血清于-80 冰箱保存备用。ELISA 法测定血清促卵泡生成素（FSH）、黄体生成激素（LH）、雌二醇（E2）、睾酮（T）。1.3血清miR-24检测取300 L血清标本，严格按照 TRIzol试剂盒（美国 Invitrogen公司）说明书提取血清总RNA，紫外分光光度计确定RNA浓度及纯度，应用反转录试剂盒（日本TaKaRa公司）反转录得到模板单链cDNA。取cDNA加入引物，用实时荧光定量PCR试剂盒（日本TaKaRa公司）进行PCR扩增反应。反应条件：95 预变性10 min，95 变性5 s、60 复性30 s、72 延伸10 s共40个循环。miR-24上游引物 5-CTCCCGTGCCTACTGAGCT-3，下游引物 5-CCCTGTTCCTGCTGAACTGAG-3；U6 上游引物 5-CTCGCTTCGGCAGCACA-3，下 游 引 物 5-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3。用 2-CT法 计 算miR-24相对表达量。1.4胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）计算取血清标本，采用稳步血糖仪（美国强生公司）检测空腹血糖，并用 ELISA 法检测空腹胰岛素，计算 HOMA-IR。HOMA-IR=（空腹胰岛素空腹血糖）/22.5。1.5血清炎症因子检测取血清标本，采用ELISA法检测血清白细胞介素 1（IL-1）、白细胞介素 6（IL-6）、肿瘤坏死因子（TNF-）。IL-1试剂盒购自上海江莱生物科技有限公司、IL-6 试剂盒购自北京索莱宝科技有限公司、TNF-试剂盒购自北京百奥莱博科技有限公司，均严格按照试剂盒说明书操作。1.6统计学方法采用SPSS22.0统计软件。计量资料用-x s表示，比较采用t检验；相关性分析采用Pearson相关法；绘制受试者工作特征（ROC）曲线，用曲线下面积评估miR-24对PCOS的诊断价值。P0.05），PCOS组LH、E2及T水平均高于对照组（P均0.5）。见表1。2.2两组血清miR-24水平比较PCOS组、对照组血清miR-24相比表达量分别为0.04 0.02、0.12 0.06。PCOS组血清miR-24相对表达量低于对照组34山东医药2023 年第 63 卷第 19 期（P0.05）。2.3两组 HOMA-IR 及炎症因子水平比较PCOS组HOMA-IR及IL-1、IL-6、TNF-水平均高于对照组（P均0.05）。见表2。2.3PCOS患者血清miR-24水平与HOMA-IR、炎症因子水平的相关性PCOS患者血清miR-24水平与HOMA-IR、IL-1、IL-6、TNF-水平均呈负相关（r分别为-0.641、-0.642、-0.658、-0.668，P均0.05）。2.4血清miR-24水平对PCOS的诊断价值血清miR-24诊断PCOS的曲线下面积为0.885（P0.05LH（U/L）14.81 3.227.27 2.160.05E2（pmol/L）183.71 45.89168.34 38.950.05T（mmol/L）2.54 0.471.31 0.270.05表2两组HOMA-IR及炎症因子水平比较（-x s）组别PCOS组对照组Pn107 60HOMA-IR1.27 0.390.95 0.260.05IL-1（pg/mL）0.45 0.110.24 0.080.05IL-6（pg/mL）25.93 4.655.28 1.020.05TNF-（pg/mL）45.45 6.948.44 2.100.0535山东医药2023 年第 63 卷第 19 期本研究结果显示，PCOS患者血清miR-24水平显著下降。进一步分析显示，miR-24表达与HOMA-IR、IL-1、IL-6、TNF-水平均呈负相关。miR-24 可能通过抑制 IR 及炎症反应从而参与 PCOS 的发生发展。ROC曲线显示，血清miR-24水平对PCOS有较高的诊断价值。这为PCOS患者的治疗提供了新的研究方向。总之，PCOS患者miR-24水平低，且与IR及炎症反应有关，可能参与了PCOS的发生发展。但本研究存在局限性，仅以POCS患者血清miR-24作为观察指标，而miR-24可能在POCS患者其他组织、细胞中表达不一致。有待于后续更为严谨的大样本、多中心研究证实。参考文献：1HAJIVANDI L，NOROOZI M，MOSTAFAVI F，et al.A comprehensive interventional program for promoting eating behaviors in adolescent girls with polycystic ovarian syndrome（PCOS）：protocol for a mixed methods studyJ.Reprod Health，2018，15（1）：197.2YU Y，DU H，WEI S，et al.Adipocyte-derived exosomal miR-27a induces insulin resistance in skeletal muscle through repression of PPAR J.Theranostics，2018，8（8）：2171-2188.3张攀，孙艳美，张萍萍，等.miRNA在多囊卵巢综合征发病中的作用机制研究进展 J.山东医药，2018，58（3）：99-102.4ZARE M，BASTAMI M，SOLALI S，et al.Aberrant miRNA promoter methylation and EMT-involving miRNAs in breast cancer metastasis：diagnosis and therapeutic implicationsJ.J Cell Physiol，2018，233（5）：3729-3744.5刘凯鲁，胡梦婷，蔡令波，等.多囊卵巢综合征患者卵泡液中6种 miRNAs 表达的检测 J.国际生殖健康/计划生育杂志，2018，37（1）：5-10.6NANDA D，CHANDRASEKARAN SP，RAMACHANDRAN V，et al.Evaluation of 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