老年乳腺癌组织中PTBP3、USP28表达与术后复发转移的关系.pdf

202疑难病杂志2 0 2 4年2 月第2 3卷第2 期Chin J Diffic and Compl Cas,February 2024,Vol.23,No.2D01】10.39 6 9 /j.i s s n.16 7 1-6 450.2 0 2 4.0 2.0 15老年乳腺癌组织中PTBP3、U SP2 8 表达与术后复发转移的关系论著临床张小雪,刘晓婷,李阳，于韬,邬晓明，,高然基金项目：辽宁省科学技术计划项目（2 0 2 1-MS-070）作者单位：110 0 42 沈阳，中国医科大学肿瘤医院/辽宁省肿瘤医院超声科（张小雪、刘晓婷、于韬、邬晓明、高眉然），乳腺外科（李阳）通信作者：高尚然，E-mail:【摘要】目的分析老年乳腺癌组织中多聚嘧啶结合蛋白3（PTBP3）、泛素特异性蛋白酶2 8（USP28）表达与术后复发转移的关系。方法选择2 0 17 年2 月一2 0 2 0 年2 月辽宁省肿瘤医院乳腺外科诊治老年乳腺癌患者17 8 例。以免疫组化法检测组织中 PTBP3、U SP2 8 表达。随访3年,Kaplan-Meier生存分析不同PTBP3、U SP2 8 表达对老年乳腺癌术后复发转移的影响。Cox回归分析影响老年乳腺癌术后复发转移的因素。结果乳腺癌组织中 PTBP3、U SP2 8阳性率为6 5.17%（116/17 8）、6 7.42%（12 0/17 8），高于癌旁组织12.9 2%（2 3/17 8）、11.2 4%（2 0/17 8），差异有统计学意义(x=102.080、117.7 2 5,P均 0.0 0 1）。TNM分期期、中低分化程度乳腺癌组织中PTBP3、U SP2 8 阳性率高于TNM分期期、高分化程度癌组织，差异均有统计学意义（x/P=9.822/0.002，14.6 0 6/0.0 0 1，8.337/0.0 0 4，28.925/0.001）。3年无复发转移率PTBP3阳性组为7 0.43%（8 1/115），低于阴性组的9 3.55%（58/6 2）（LogRankX=12.521,P0.001）;3年无复发转移率USP28阳性组为7 2.2 7%（8 6/119），低于阴性组的9 1.38%（53/58）（LogRank=8.511,P=0.003）。Co x 回归分析结果表明,PTBP3阳性、USP28阳性、肿瘤分期期、中低分化程度是影响乳腺癌患者术后复发转移的独立危险因素0 R（9 5%C I）=1.50 2（1.0 54 2.142）,1.6 42（1.10 7 2.435），1.52 3（1.147 2.0 2 4）,1.513（1.159 1.9 7 5）,P均 0.0 5。结论老年乳腺癌组织中PTBP3、U SP2 8 表达升高,PTBP3阳性、USP28阳性是影响老年乳腺癌患者术后复发转移的危险因素。【关键词】乳腺癌；多聚嘧啶结合蛋白3；泛素特异性蛋白酶2 8；术后复发转移【中图分类号】R737.9The relationship between the expression of PTBP3,USP28 and postoperative recurrence and metastasis in elderlybreast cancer Zhang Xiaoxue,Liu Xiaoting,Li Yang,Yu Tao,Wu Xiaoming,Gao Kuiran.*Department of Ultrasound,Cancer Hospital of China Medical University/Liaoning Cancer Hospital,Liaoning Province,Shenyang 110042,ChinaCorresponding author:Gao Kuiran,E-mail:kuiran0304 Funding program:Liaoning Provincial Science and Technology Plan Project(2021-MS-070)Abstract Objective To analyze the relationship between the expression of polypyrimidine binding protein 3(PT-BP3),ubiquitin specific protease 28(USP28)and postoperative recurrence and metastasis in elderly breast cancer.MethodsFrom February 2017 to February 2020,178 elderly breast cancer patients were diagnosed and treated in the Breast SurgeryDepartment of Liaoning Cancer Hospital.Detect the expression of PTBP3 and USP28 in tissues using immunohistochemistry.Follow up for 3 years,Kaplan Meier survival analysis showed that different expressions of PTBP3 and USP28 had an impacton the recurrence and metastasis of elderly breast cancer after surgery.Cox regression analysis of factors influencing post-operative recurrence and metastasis of elderly breast cancer.Results The positive rates of PTBP3 and USP28 in breastcancer tissues were 65.17%(116/178)and 67.42%(120/178),higher than those in adjacent tissues 12.92%(23/178)and 11.24%(20/178),with a statistically significant difference(x=102.080,117.725,both P0.001).The positive rates of PTBP3and USP28 in TNM stage II and moderately and poorly differentiated breast cancer tissues were higher than those in TNMstage II and highly differentiated breast cancer tissues,and the differences were statistically significant(X/P=9.822/0.002,14.606/0.001,8.337/0.004,28.925/0.001).The 3-year no recurrence and metastasis rate in the PTBP3 positive group was70.43%(81/115),lower than the 93.55%(58/62)in the negative group(Log Rankx=12.521,P0.001).The 3-year recurrenceand metastasis free rate in the USP28 positive group was 72.27%(86/119),lower than the 91.38%(53/58)in the negative【文献标识码】A疑难病杂志2 0 2 4年2 月第2 3卷第2 期Chin J Diffic and Compl Cas,February 2024,Vol.23,No.2group(Log Rank x=8.511,P=0.003).Cox regression analysis showed that PTBP3 positive,USP28 positive,tumor stage I,and medium and low differentiation were independent risk factors for postoperative recurrence and metastasis of breastcancer patients OR(95%C)=1.502(1.054-2.142),1.642(1.107-2.435),1.523(1.147-2.024),1.513(1.159-1.975),all P 2 5%50%,2 分：50%）。两项乘积为最终免疫组化评分，2 分判定为阴性，2分判定为阳性。1.3.2随访：所有患者以门诊复诊及电话回访方式进行随诊，随访3年，第1年每3个月随访1次，第2 3年每6 个月随访1次。随访截止至2 0 2 3年3月1日。记录末次随访时间，患者出现复发、转移或死亡的时间。随访终点为患者出现肿瘤复发转移或随访时间结束。1.4统计学方法采用SPSS23.0统计软件进行数据统计分析。计数资料以频数或率（%）表示,2 组样本率（%）比较采用卡方检验。采用Kaplan-Meier法分析PTBP3、U SP2 8 表达对老年乳腺癌患者术后复发转移的影响;单因素及多因素 Cox 回归分析影响老年乳腺癌患者术后复发转移的因素。P0.05为差异有统计学意义。2结果2.1乳腺癌组织中PTBP3、U SP2 8 表达达乳腺癌组织PTBP3阳性组204中PTBP3棕褐色阳性染色主要位于细胞核;USP28棕褐色阳性染色主要位于细胞质。乳腺癌组织中PTBP3、U SP2 8 阳性率分别为6 5.17%（116/17 8）、67.42%（12 0/17 8），显著高于癌旁组织12.9 2%（2 3/178）、11.2 4%（2 0/17 8），差异有统计学意义（x/P=102.080/0.001,117.725/0.001)。癌组织PTBP3USP28图1乳腺癌和癌旁组织中PTBP3、U SP2 8 表达（免疫组化染色，2 0 0)Fig.1Expression of PTBP3 and USP28 in breast cancer and adja-cent tissues(immunohistochemical staining,200)2.2乳腺癌中PTBP3、U SP2 8 表达在不同临床病理参数中的差异乳腺癌组织中PTBP3、U SP2 8 阳性率在TNM分期期、中低分化程度高于TNM分期II期、高分化程度,差异有统计学意义(P均 0.0 1),见表1。2.3PTBP3、U SP2 8 表达对老年乳腺癌患者术后复发Tab.1Comparison of PTBP3 and USP28 expressions in different clinicopathological parameters in breast cancer临床病理参数年龄70岁70岁病理类型浸润性非浸润性TNM分期期期肿瘤分化程度高分化中分化低分化分子分型Luminal A 型Luminal B 型HER2 型三阴性型疑难病杂志2 0 2 4年2 月第2 3卷第2 期癌旁组织10080(%60F40F20F0100(%)806040200图2PTBP3、U SP2 8 表达对老年乳腺癌患者术后复发转移的影响Fig.2Effect of PTBP3 and USP28 expression on postoperative re-currence and metastasis of elderly breast cancer patients表1乳腺癌中 PTBP3、U SP2 8 表达在不同临床病理参数中的差异比较例(%)PTBP3 阳性例数(n=116)9960(60.61)7956(70.89)8856(63.64)9060(66.67)9250(54.35)8666(76.74)4016(40.00)6848(70.59)7052(74.29)5335(66.04)5030(60.00)3626(72.22)3925(64.10)月Chin J Diffic and Compl Cas,February 2024,Vol.23,No.2转移的影响17 8 例患者随访3年，失访1例,复发转移38 例。3年无复发转移率为7 8.53%（139/17 7）。3年无复发转移率PTBP3阳性组为7 0.43%（8 1/115），低于阴性组的9 3.55%（58/6 2）（LogRank=12.521,P0.001）;3年无复发转移率USP28阳性组为7 2.2 7%（8 6/119），低于阴性组的9 1.38%（53/58）(Log Rank x=8.511,P=0.003),见图2。1时间（月）USP28 阳性值P值2.0460.1530.1800.6719.8220.00214.6060.0011.4150.702-t.PTBP3阴性组112时间（月）USP28阳性组.1.USP28阴性组12(n=120)62(62.63)58(73.42)55(62.50)65(72.22)53(57.61)67(77.91)15(37.50)44(64.71)61(87.14)37(69.81)36(72.00)20(55.56)27(69.23)2424值P值2.3290.1271.9150.1668.3370.00428.9250.0012.9810.3953636疑难病杂志2 0 2 4年2 月第2 3卷第2 期Chin JDiffic and Compl Cas,February2024,Vol.23,No.22.4多因素 Cox回归分析影响老年乳腺癌患者术后复发转移的因素以老年乳腺癌患者是否发生复发转移为因变量（1=是,0=否）,以上述结果中P0.05项目为自变量进行多因素 Cox回归分析,结果显示：PTBP3 阳性、USP28 阳性、肿瘤分期期、中低分化程度是影响老年乳腺癌患者术后复发转移的独立危险因素,见表2。表2 多因素Cox回归分析影响老年乳腺癌患者术后复发转移的因素Tab.2Multifactor Cox regression analysis of factors affectingpostoperative recurrence and metastasis of elderly breastcancer patients.因素值SE值Wald值P值OR值95%CITNMII期0.4210.1458.430中低分化0.4140.1369.267PTBP3 阳性0.4070.2815.056USP28 阳性0.4960.2016.0893 讨 论乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤,是全球范围内女性癌症相关死亡的首要原因 7 。手术联合辅助化疗和放疗能够有效提高乳腺癌患者生存率，但老年乳腺癌患者具有重要器官功能衰退、合并基础疾病增多及手术耐受力变差等特点，容易发生术后肿瘤复发和转移 8 。因此，寻找能够准确预测老年乳腺癌预后的指标,对于选择个体化的治疗方案,减少术后肿瘤复发转移的发生，具有重要意义。PTBP3属于多嘧啶序列结合蛋白家族成员，其作为RNA结合蛋白,在转录和转录后调控中发挥重要的调节作用。近年来发现,PTBP3在胃癌、胶质瘤等多种恶性肿瘤中异常表达升高 9-10 ,其能上调TWIST等基因的表达,促进肿瘤增殖和转移。本研究中,乳腺癌组织中PTBP3阳性表达率更高,提示PTBP3参与乳腺癌的肿瘤发生。乳腺癌中PTBP3的表达受缺氧微环境的调节。有学者报道,乳腺癌中缺氧微环境能够促进长链非编码RNABCRT1的过度表达，其竞争性结合微小RNA-1303，阻止PTBP3mRNA的降解，导致乳腺癌中PTBP3蛋白表达升高,PTBP3一方面促进乳腺癌肿瘤细胞的恶性增殖和侵袭,还能够通过外泌体途径，介导巨噬细胞向M2型极化,降低机体抗肿瘤的免疫杀伤作用，促进乳腺癌肿瘤细胞的免疫逃逸，导致肿瘤过度增殖 。本研究中,PTBP3表达与乳腺癌不良临床病理特征有关,提示PTBP3的表达参与促进乳腺癌的肿瘤进展。有研究报道,PTBP3能够通过结合ZEB1205mRNA的3 非编码区,阻止其降解,ZEB1 作为转录因子,能够上调间质性标志物N-钙黏素及波形蛋白等的表达,诱导乳腺肿瘤细胞的上皮一间质转化,促进肿瘤细胞迁移、侵袭和干细胞特性形成,增强乳腺癌的增殖和转移能力,导致肿瘤 TNM分期增高,降低肿瘤细胞的分化程度 12 。本研究中,PTBP3 阳性老年乳腺癌患者术后复发转移率较高，表明PTBP3表达有助于评估老年乳腺癌患者预后。分析其原因，一方面是PTBP3阳性表达的肿瘤细胞侵袭和转移能力较强，肉眼难以分辨的微小转移病灶术中难以彻底切除,造成术后肿瘤复发转移,导致患者不良预后 13。另一方面可能是PTBP3 阳性表达的乳腺癌肿瘤细胞呈现干细胞特征,对紫杉醇等化疗药物的耐药性增强，老年乳腺癌患者术后辅助化疗治疗的敏感性降低。研究发现,PTBP30.051.5231.147 2.0240.051.513 1.159 1.9750.051.5021.054 2.1420.051.642 1.107 2.435能够与自噬相关蛋白-12 mRNA 的3-非编码区中的多个位点结合，导致自噬相关蛋白-12 的过度表达，促进细胞自噬,增加肿瘤细胞对吉西他滨等化疗药耐药性的形成 14。因此,PTBP3 可能是新的评估老年乳腺癌预后的肿瘤标志物。USP28基因位于人类11号染色体,具有N端泛素结合结构域，能够辅助识别和招募泛素链底物，发挥去泛素水解酶的活性。研究表明,USP28 在肺鳞癌、结直肠癌等恶性肿瘤中过度表达,其能够增强叉头盒 C1等癌基因的蛋白稳定性,促进肿瘤有氧糖酵解,促进肿瘤增殖和转移 15-16 。本研究中,乳腺癌组织中USP28阳性表达率较癌旁组织更高,与肿瘤TNM分期、肿瘤分化程度有关，表明USP28参与乳腺癌肿瘤发生发展。乳腺癌中USP28的表达受缺氧诱导因子1的调节。研究发现,乳腺癌缺氧环境会上调肿瘤细胞中缺氧诱导因子1的表达,缺氧诱导因子1能够通过激活 SUMO特异性蛋白酶1,在转录水平上调USP28的表达 17 。另外,USP28作为具有肿瘤促进作用的去泛素化酶,进一步促进缺氧诱导因子-1的去泛素化修饰,增加缺氧诱导因子-1的稳定性,激活下游血管内皮生长因子等促癌基因表达,导致肿瘤血管新生及肿瘤转移 17 。Chen 等 18 发现,肿瘤相关成纤维细胞衍生的外泌体显著促进了乳腺癌MDA-MB-231和MCF7细胞中miR-500a-5p的表达,miR-500a-5p与USP28结合协同促进肿瘤增殖。本研究中,USP28阳性老年乳腺癌患者术后复发转移风险明显增加,提示USP28是新的评估老年乳腺癌术后复发转移预后肿瘤标志物。研究表明,USP28的表达升高能够募集到DNA损伤位点,增强DNA 重组修复基因 Np63 的表达,降低对顺铂等化疗治疗的敏感性 19 。尚有研究证实，应用206USP28特异性抑制剂能够增强p53蛋白稳定性,促进DNA损伤中p53依赖的G2/M期阻滞，增加放化疗治疗的敏感性 2 0 。因此,乳腺癌中USP28 的表达促进肿瘤恶性进展,可能是评估老年乳腺癌患者预后的肿瘤标志物。综上所述，老年乳腺癌组织中PTBP3、U SP2 8 表达升高,与肿瘤 TNM分期、肿瘤分化程度有关,均参与老年乳腺癌的肿瘤进展。PTBP3阳性、USP28阳性是影响老年乳腺癌患者术后复发转移的独立危险因素，是新的评估老年乳腺癌患者术后复发转移的肿瘤标志物。本研究也存在局限,样本量有限,未能对不同临床特征的患者进行分层研究，有待今后设计大样本前瞻性多中心临床研究,进一步研究两者的临床价值。利益冲突：所有作者声明无利益冲突作者贡献声明张小雪：设计研究方案，实施研究过程，论文撰写；刘晓婷：实施研究过程，数据收集，分析整理；李阳：课题设计，收集病例,资料整理收集，分析试验数据；于韬：论文审核,论文修改；邬晓明：进行统计学分析，资料整理收集；高然：提出研究思路，课题设计，论文修改参考文献1刘雪薇,王媛，韦丹梅，等.19 9 0 2 0 19 年中国女性乳腺癌发病及死亡趋势的年龄-时期-队列模型分析 J.中国全科医学，2023,26（1):34-41.D 0 I:10.12 114/j.is s n.10 0 7-9 57 2.2022.0619.Liu XW,Wang Y,Wei DM,et al.Age-period-cohort analysis of trendsof breast cancer incidence and mortality among chinese females from1990 to 2019J.Chinese General Practice,2023,26(1):34-41.D01:10.12114/j.issn.1007-9572.2022.0619.2Desai P,Aggarwal A.Breast cancer in women over 65 years-a reviewof screening and treatment options J.Clin Geriatr Med,2021,37(4):611-623.D01:10.1016/j.cger.2021.05.007.3 Fang Z,Li P,Li H,et al.New insights into PTBP3 in human canc-ers:Immune cell infiltration,tmb,msi,pdcdl and m6A Markers J.Front 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