液质联用仪基本介绍及其应用技术.ppt

液液质联用用仪基本介基本介绍及其及其应用技用技术质谱仪基本介绍及其应用技术一一.概述概述二二.质谱分析原理质谱分析原理三三.仪器结构仪器结构四四.液质联用技术液质联用技术五五.质谱仪基本操作质谱仪基本操作六六.仪器维护及注意事项仪器维护及注意事项一一.概述概述 质谱法（法（，），）利用离利用离子化技子化技术，将物，将物质分子分子转化化为离离子子(分子离子和分子离子和碎片离子碎片离子)，按，按其其质荷比（）的荷比（）的差异分离、排列差异分离、排列成成谱图，从而，从而进行物行物质成分和成分和结构分析的方法。构分析的方法。质谱仪 是一是一种种测量量带电粒子粒子质合比的装置，合比的装置，利用利用带电粒子在粒子在电场和磁和磁场中运中运动（偏（偏转、漂移、漂移、震震荡）行）行为进行行分离与分离与测量。在量。在离子源中离子源中样品分品分子被子被电离和解离，离和解离，得到分子离子和得到分子离子和碎片离子，将分碎片离子，将分子离子和碎片离子离子和碎片离子引入到一个子引入到一个强的的电场中，使之中，使之加速，加速加速，加速电位位通常用到通常用到6-8,此此时所有所有带单位正位正电荷的离子荷的离子获得得的的动能都一能都一样，即即 =2/2 但是，不同但是，不同质荷比的离子具有荷比的离子具有不同的速度，利不同的速度，利用离子的不同用离子的不同质荷比及其速度差荷比及其速度差异，异，质量分析器量分析器可将其分离，然可将其分离，然后由后由检测器器测量量其其强度。度。记录后后获得一得一张以以质荷荷比（）比（）为横坐横坐标，以相以相对强度度为纵坐坐标的的质谱图。1.什么是质谱？什么是质谱？2.质谱质谱分析分析过过程程质谱分析过程可以分为四个基本环节：1.通过合适的进样装置将样品引入并进行气化;2.气化后的样品引入到离子源进行电离，即离子化过程;3.电离后的离子经过适当的加速后进入质量分析器，按不同的质荷比进行分离;4.经检测、记录，获得一张谱图.3、质谱质谱法的特点和用途法的特点和用途1.测定非常准确的分子量，确定分子式。定非常准确的分子量，确定分子式。2.分析速度快，灵敏度高分析速度快，灵敏度高(5)所需的，所需的样品品少。少。3.分析范分析范围广（气体、液体、固体）。广（气体、液体、固体）。4.根据根据质谱裂解裂解规律律对质谱图中的碎片离中的碎片离子子进行解析，可行解析，可鉴定或定或验证有机化合物。有机化合物。5.应用、等技用、等技术，可定性、定量地，可定性、定量地对有机有机混合混合样品品进行分析。行分析。样品导样品导入系统入系统离子源离子源质量分质量分析器析器 真空泵真空泵离子检离子检测器测器放大记放大记录器录器按大小不同按大小不同 进行分离进行分离质谱质谱图图二二.质谱分析原理分析原理质谱仪原理图质谱仪原理图1.气体扩散2.直接进样3.气相色谱4.液相色谱1.电子轰击2.化学电离3场致电离4.激光 1.单聚焦 2.双聚焦 3.飞行时间4.四极杆 5.离子阱 6.串列式多级三三.仪器结构仪器结构 质谱仪一般由进样系统、离子源、分析器、检测器组成。还包括真空系统、电气系统和数据处理系统等辅助设备。1.1.真空系统真空系统 质谱仪的离子源、质量分析器和检测器必须在高真空状态下工作，以减少本底的干扰，避免发生不必要的离子-分子反应,所以质谱反应属于单分子分解反应。利用这个特点，我们用液质联用的软电离方式可以得到化合物的准分子离子，从而得到分子量。由机械真空泵(前极低真空泵)，扩散泵或分子泵(高真空泵)组成真空机组，抽取离子源和分析器部分的真空。只有在足够高的真空下，离子才能从离子源到达接收器，真空度不够则灵敏度低。2.离子源离子源电离室原理与结构图根据离子化方式的不同分类：:电子轰击电离硬电离。:化学电离核心是质子转移。:场解吸目前基本被取代。:快原子轰击适合难挥发、极性大的样品。:电喷雾电离属最软的电离方式，通常只产生分子离 子峰。适宜热不稳定的极性分子，能分析小分子及大 分子(如蛋白质分子多肽等)。:大气压化学电离适宜做弱极性小分子。:大气压光喷雾电离适宜做非极性分子。:基体辅助激光解吸电离。通常用于飞行时间质谱和 ，特别适合蛋白质，多肽等大分子。其中，统称大气压电离()3.质质量分析器量分析器质量分析器的分量分析器的分类：1.单聚焦聚焦质量分析器量分析器 特点：具有特点：具有质量色散作用量色散作用2.双聚焦扇形磁双聚焦扇形磁场-电场串串联仪器器().3.四极杆四极杆质谱仪(Q).特点：特点：扫描速率快，描速率快，结构构简单，价格，价格较低。低。4.飞行行时间质谱仪().5.离子阱离子阱质谱仪（）（）6.傅里叶傅里叶变换-离子回旋共振离子回旋共振质谱仪().7.串列式多串列式多级质谱仪 ()：四极（）、三重四极杆（）、四极（）、三重四极杆（）、是质谱仪中将离子按质荷比分开的部分,离子通过分析器后,按不同质荷比()分开,将相同的离子聚焦在一起,组成质谱。四极杆质量分析器的示意 图 四级杆质量分析器 四极杆分析器由四根棒状电极组成，它们距离相等而且互相平行，这四个棒状电极形成一个四极电场。四极杆处于对角位置的两根杆被连接在一起，其中一对杆之间施加电压，同时在另外一对杆上施加大小相同、极性相反的直流电压和相位相反、振幅/频率相同的射频电压。为直流电压，为射频电压。直流电压与射频电压叠加在一起，且两对电极的极性不停进行快速切换，使得带电离子震荡通过四极杆。4.检测检测接收器接收器 接收离子束流的装置有：电子倍增器、光电倍增器、微通道板将接收来的电信号放大、处理并给出分析结果及控制质谱仪个部分工作。从几伏低压到几千伏高压。5.数据及供电系统数据及供电系统质谱仪的主要性能指的主要性能指标1.分辨率分辨率 即表示即表示仪仪器分开两个相器分开两个相邻质邻质量离子的能力，量离子的能力，通常用通常用R 表示，表示，实验实验室内的室内的 分分别别率率为为0.7。2.质质量范量范围围 四极四极质谱质谱：4000以内以内离子阱离子阱质谱质谱：6000飞飞行行时间质谱时间质谱：无上限无上限3.质质量量测测量精度量精度离子离子质质量量测测定的精度，一般定的精度，一般对质对质量几百的量几百的离子，离子，测测量量误误差差应应溶剂溶剂+溶剂溶剂溶剂溶剂+M+M+大气压化学电离源大气压化学电离源()的电离过程：的电离过程：2.大气压化学电离离子源技术大气压化学电离离子源技术毛细管碎片碰撞电压（）碎片碰撞电压（）Corona needle+锥孔透镜四极杆+八极杆热氮气热氮气液质联用的大气压化学电离源()接口高能打拿极/电子倍增器离子化方式不同 在溶液中进行离子化在气相中进行离子化分析样品类型不同 极性化合物和生物大分子弱极性化合物、小分子化合物(相对于方式而言)，并有一定的挥发性要求的流动相流速不同-0.001 0.3 0.2 2 和的区别和的区别其他事其他事项1.扫描模式的选择2.流动相的选择3.流量和色谱柱的选择4.辅助气体流量和温度的选择1.扫扫描模式的描模式的选择选择（1）正负离子模式:正离子模式：适合于碱性样品，可用乙酸或甲酸对样品加以酸化。负离子模式：适合于酸性样品，可用氨水或三乙胺对样品进行碱化。（2）全扫描方式（Q1 扫描）可以得到准分子离子，从而判断出其分子量，用于鉴别是否有未知物，并确认一些判断不清的化合物。（3）母离子扫描母离子分析可用来鉴定和确认类型已知的化合物，尽管它们的母离子的质量可以不同，但在分裂过程中会生成共同的子离子。（4）选择离子扫描（模式）（又叫子离子扫描）用于结构判断(得到二级谱图即碎片离子)和选择离子对作多种反应监测（）。该 模式对目标物质最为灵敏，干扰最低，一般用于定量分析。2.流动相的选择常用的流动相为甲醇、乙腈、水和它们不同比例的混合物以及一些易挥发盐的缓冲液，如甲酸铵、乙酸铵等，还可以加入易挥发酸碱如甲酸、乙酸和氨水等调节 值。3.流量和色谱柱的选择 不加热的最佳流速是150，目前多用l2.1微柱；源最高允许，建议使用200400；的最佳流速，常规的直径4.6柱最合适。为了提高分析效率，常采用 100 的短柱。4.辅助气体流量和温度的选择 操作中温度一般选择高于分析物的沸点 20 左右即可。对热不稳定性化合物，要选用更低的温度以避免显著的分解。五、五、质谱仪基本操作基本操作开机步骤以安捷伦6400系列质谱仪为例：关机步骤数据采集软件功能区、状态区介绍：方法建立打开采集软件界面 点击，如下图。或通过菜单创建一个新的方法。定性分析打开定性分析软件 ，主要功能区常用快捷键介绍如下：六、仪器维护及注意事项1.每天实验完成之后，使用1:1异丙醇-水溶液清洗或擦洗离子源，注意勿将溶液喷入毛细管入口。2.每周开启前级泵上的气振阀两次，每次半小时。开启时可以将气振阀开到最大后，向回转半圈。3.每天清洗雾化器组件，在清洗前应留出足够的时间让它冷却下来，防止烫伤。4.氮气发生器过滤装置必须定期更换，应每半年到一年更换干燥气的气体净化管。维护周期表维护周期表 注意事项1.因为任何原因造成的断电，请关闭仪器面板左下角的开关，等待供电恢复10分钟以上再开启电源，否则有可能烧毁电路板。2.在仪器开机（即使处于休眠）时如果长时间停止气体供应，会造成真空腔体内部污染。3.在仪器开始抽真空时，请不要打开前级泵上的气振阀，否则可能因为回油污染真空腔体内部。4.会产生离子化抑制的溶剂要慎用，如三氟乙酸、有机胺类。禁用的溶剂有：强酸强碱、不挥发性酸及相应的盐（如磷酸盐、硼酸盐、柠檬酸盐等）、表面活性剂、离子对试剂。5.质谱连接的电脑禁止更改网络设置，禁止安装防火墙。尽量避免使用U盘等移动存储设备。谢谢