T∕CI 008-2023 灵芝孢子和破壁灵芝孢子粉中药标准.pdf

ICS 11.120.10CCS C23T/CI 0082023灵芝孢子和破壁灵芝孢子粉中药标准TCM standard of Ganodermalucidum spores andsporoderm-broken Ganoderma lucidum spores中国国际科技促进会发 布CI团体标准2023-2-13 发布2022-2-13 实施1前言本文件按照 GB/T1.1-2020 标准化工作导则 第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本文件由中国国际科技促进会标准化工作委员会提出。本文件由中国国际科技促进会归口。本文件主要起草单位：北京中医药大学、武义寿仙谷中药饮片有限公司、北京采瑞医药科技有限公司、安利（上海）科技发展有限公司、云南中医药大学、北京大学、河北中医学院、浙江医院、安徽中医药大学、辽宁中医药大学、康奥科技集团有限公司、陕西功能食品工程中心有限公司。本文件主要起草人：张建军、王林元、李振皓、谷洪顺、陈亮、杨兴鑫、王淳、王卫茜、张宝旭、高学敏、倪健、李向日、王景霞、张一昕、万晓青、彭灿、刘立萍、杨溢、刘建书、刘葭、林清、汤如莹、宋明、赵子楠、刘尧等。本文件为首次发布。2引言灵芝孢子是传统中药灵芝干燥成熟的孢子。灵芝有几千年的应用历史，药用部位是真菌的子实体，而灵芝孢子是其子实体成熟后弹射出来的繁殖体，古籍中没有任何记载。上世纪八十年代随着栽培技术的发展灵芝孢子才能够得以收集，并进行了广泛的临床应用从而形成了中药新品种，但迄今没有统一的性味与归经，功能与主治，用法与用量等中药性能标准。灵芝孢子使用的早期由于没有中药性能只能按照其子实体灵芝的中药性能使用，但研究表明二者的药用部位、成分和作用，特别是临床用途和疗效都有较大差异。随着灵芝孢子的应用越来越广泛，从 2008 到 2022 年陆续出台了 9 个地方标准（包括 3 个中药材标准和 6 个中药饮片炮制规范）收载灵芝孢子和破壁灵芝孢子粉，不同地方标准对灵芝孢子中药性能表述存在差异，并且质量控制方法如标志性成分、含量测定方法及含测限度也不统一。因此灵芝孢子标准规范化是亟需解决的关键问题。本文件将分灵芝孢子和破壁灵芝孢子粉两部分介绍，明确灵芝孢子为药材及饮片，需煎煮后服用；破壁灵芝孢子粉为灵芝孢子的炮制品，可以直接服用。破壁灵芝孢子粉利用率更高，故临床用量比灵芝孢子低。赤芝种植面积大，孢子产量高，市场占比大，因此本标准明确了灵芝孢子的来源为多孔菌科真菌赤芝 Ganoderma lucidum(Leyss.ex Fr.)Karst.的干燥成熟孢子。将灵芝孢子来源定为单一基原也符合欧盟、美国等中草药的制定原则，有利于国际化的交流。本文件在地方标准基础上进行了质量提升，制定了水分、总灰分、酸不溶性灰分、重金属及有害元素、农药残留和微生物、黄曲霉毒素等指标。污染物的限量不仅符合国内标准要求，也符合美国、欧盟等对中草药的规定，便于国际贸易和交流。灵芝孢子经过破壁后多糖含量稳定可测，参照多个地方标准及本团队研究的结果制定破壁灵芝孢子粉多糖含量及限度。其他成分及指纹图谱的研究还存在争议，仍需进一步研究完善，暂不列入本标准。本文件采用“文献研究-理论探讨-药性验证-临床实践”的中药新品种药性研究策略明确了灵芝孢子的中药性能。对灵芝孢子临床研究文献整理分析，结合中医药理论进行探讨，并重点对各地方标准表述不一致的肾经、脾经进行药性综合研究，又结合临床实际对比分析含灵芝孢子及灵芝中成药、保健产品应用情况，将灵芝孢子的中药性能进行了统一规范。本文件有利于推动灵芝孢子的合理应用，对中医药与国际接轨进行国际贸易交流起到促进作用；有利于促进中药新品种的发展应用，为人类的健康事业注入新的力量。随着对灵芝孢子研究的深入，本文件将会在应用中吸收新技术新成果进行修改和完善。3第一部分灵芝孢子中药标准1 范围本文件制定了灵芝孢子的术语和定义、技术要求、试验方法、性味与归经、功能与主治、用法与用量、贮藏。本文件适用于灵芝孢子生产、检验、销售与应用以及国际贸易和交流。2 规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版权本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。中华人民共和国药典3 术语和定义下列术语和定义适用于本标准。3.1灵芝孢子多孔菌科真菌赤芝 Ganoderma lucidum(Leyss.ex Fr.)Karst.的干燥成熟孢子。灵芝弹射孢子时开始采收，除去杂质，干燥。3.2中药性能是对中药作用的基本性质和特征的高度概括。包括性味与归经、功能与主治、用法与用量、注意等。4 技术要求4.1 性状黄棕色至棕褐色粉末。体轻，手捻有滑腻感易附着手指上。气微，味淡或微苦。4.2 鉴别取本品，置显微镜下观察。孢子棕黄色至棕褐色，卵形，顶端平截，长 6-12m，直径5-8m，孢壁双层，外壁光滑，内壁具细小疣状突起。4.3 检查4.3.1 杂质显微镜下，不能检出菌丝、淀粉粒等异物。44.3.2 水分不得过 15.0%（中华人民共和国药典通则 0832 第二法）。4.3.3 总灰分不得过 6.0%（中华人民共和国药典通则 2302）。4.3.4 酸不溶性灰分不得过 4.0%（中华人民共和国药典通则 2302）。4.3.5 重金属及有害元素照 中华人民共和国药典 通则 2321 测定，铅不得过百万分之二；镉不得过千万分之五；砷不得过百万分之一；汞不得过千万分之一；铜不得过千百万分之二十。4.3.6 农药残留照中华人民共和国药典通则 2341 测定，符合（中华人民共和国药典通则 0212药材和饮片检定通则）规定的 33 种禁用农药的限度。另照中华人民共和国药典通则 2341 测定，还应符合表 1 的要求。表 1 农药残留指标农药名称残留物最大残留量 mg/kg丁硫克百威丁硫克百威0.01乐果乐果0.01杀扑磷杀扑磷0.05乙酰甲胺磷乙酰甲胺磷0.054.3.7 黄曲霉毒素 B1照真菌毒素测定法（中华人民共和国药典通则 2351）测定，本品每 1000g 含黄曲霉毒素 B1不得过 5g。4.4 浸出物照水溶性浸出物测定法（中华人民共和国药典通则 2201）项下的热浸法测定，不得少于 5.0%。5 中药性能5.1 性味与归经甘，微苦，平。归脾、肾、心、肺经。5.2 功能与主治健脾益气，补肾益精，养心安神，补肺止咳。用于虚劳体弱，病后体虚，倦怠食少、肾虚腰酸，心悸失眠，久咳虚喘。5.3 用法与用量6-12 克，煎服。建议破壁冲服，1-6g。56 贮藏密封，避光，阴凉干燥处。6第二部分破壁灵芝孢子粉中药标准1 范围本文件制定了破壁灵芝孢子粉的术语和定义、技术要求、试验方法、性味与归经、功能与主治、用法与用量、贮藏。本标准适用于破壁灵芝孢子粉生产、检验、销售与应用以及国际贸易和交流。2 规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版权本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。中华人民共和国药典3 术语和定义下列术语和定义适用于本标准。3.1破壁灵芝孢子粉灵芝孢子经灭菌，物理破壁，过筛制得。3.2中药性能同灵芝孢子。4 技术要求4.1 性状棕褐色粉末。干燥疏松细腻无结块，无沙粒感。气微，味淡或微苦。4.2 鉴别显微鉴别粉末棕褐色，置显微镜下观察，孢壁多破碎，可见多数黄褐色大小不等的微粒、孢子破碎程度不同的壳段或孢子破碎后里面的黄色至黄褐色的内容物，少见有未破壁的孢子。4.3 检查4.3.1 杂质同灵芝孢子。74.3.2 破壁率95%（检验方法见附录 A）。4.3.3 水分同灵芝孢子。4.3.4 总灰分同灵芝孢子。4.3.5 酸不溶性灰分同灵芝孢子。4.3.6 过氧化值不得过 0.20%（中华人民共和国药典通则 2303）。4.3.7 重金属及有害元素铅、镉、砷、汞、铜同灵芝孢子。铬和镍按照（中华人民共和国药典原子吸收分光光度法或电感耦合等离子体质谱法）测定；铬不得过百万分之二，镍不得过百万分之一。4.3.8 农药残留同灵芝孢子。4.3.9 黄曲霉毒素 B1同灵芝孢子。4.3.10 微生物照散剂（中华人民共和国药典通则 0115）微生物限度检查法测定，需氧菌总数104cfu/g，霉菌和酵母菌总数102cfu/g，大肠埃希菌不得检出（1g），沙门菌不得检出（10g），耐胆盐革兰阴性菌102cfu（1g）。4.4 浸出物照水溶性浸出物测定法（中华人民共和国药典通则 2201）项下的热浸法测定，不得少于 7.0%。4.5 含量测定本品按干燥品计算，含多糖以无水葡萄糖（C6H12O6）计，不得少于 0.90%（检测方法见附录 B）。5 中药性能5.1 性味与归经同灵芝孢子。5.2 功能与主治同灵芝孢子。5.3 用法与用量1-6g，开水冲服。6 贮藏密封，避光，阴凉干燥处。9附录 A（规范性附录）破壁率的测定A.1仪器A.1.1显微镜。A.1.2血球计数板（25 个中方格16 个小方格）。A.2试剂聚山梨酯 80。A.3测定A.3.1取试样 0.15，精密称定，置 100mL 容量瓶中，加聚山梨酯 80 0.1mL，加水至刻度，强力振摇 3min，使混匀。A.3.2取血球计数板，用吸管吸取混匀的孢子液滴于盖玻片边缘，使液体缓缓渗入，多余的液体用吸水纸擦净。A.3.3置 200 倍以上放大倍数显微镜下观察，计数任意个中方格中具完整形态的灵芝孢子个数。A.3.4应至少做次，计算平均数。每个中方格检出完整形态灵芝孢子总数不应超过 17 个，即破壁率不应少于 95%。孢子壁壳破裂、有缺口者均视为已破碎。10附录 B（规范性附录）多糖的测定B.1 试剂和材料B.1.1 硫酸（分析纯）B.1.2 葡萄糖（分析纯）B.1.3 无水乙醇（分析纯）B.1.4 硫酸蒽酮溶液：精密称取蒽酮 0.1 g，加硫酸溶液 100 mL 使溶解，摇匀，置于棕色瓶中即得。B.2 仪器和设备B.2.1 分析天平（感量 0.0001g）B.2.2 分光光度计B.2.3 玻璃回流装置B.2.4 电热恒温水浴锅B.2.5 容量瓶 25 mL，50 mL 容量瓶B.2.6 各规格移液管B.2.7 具塞试管 25 mLB.2.8 滤纸（中速定性滤纸）。B.3 标准曲线的制备B.3.1 对照品溶液的制备取无水葡萄糖对照品适量，精密称定加水制成每 1 mL 含 0.12 mg 的溶液，即得。B.3.2 标准曲线绘制精密量取对照品溶液 0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 mL，分别置于 10 mL 的具塞试管中，各加水至 2.0 mL，迅速精密加入硫酸蒽酮溶液 6 mL，立即摇匀，放置 15 min，立即置冰水浴中冷却 15 min，取出，以相应的试剂为空白，在 625 nm 处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。B.4 供试品溶液的制备取本品粉末约 2g，精密称定，置圆底烧瓶中，加水 60mL，静置 1h，加热回流 4h，趁热过滤，用少量热水洗涤滤器和滤渣，将滤纸和滤渣置圆底烧瓶中，加水 60mL，加热回流 3h，趁热过滤，合并滤液，置水浴锅上蒸干，残渣用水 5mL 溶解，边搅拌边缓慢加入乙醇 75mL，11摇匀，在 4放置 12h，离心，弃去上清液，沉淀物用热水溶解并转移至 50mL，放冷，加水至刻度，摇匀取溶液适量，离心，精密量取上清液 3mL，置 25mL 量瓶，加水至刻度，摇匀，即得。B.5 测定精密量取供试品溶液 2mL，置 10mL 具塞试管中，照标准曲线制备项下的方法，自“迅速精密加入硫酸蒽酮溶液 6mL”起，同法操作，测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中无水葡萄糖的含量，计算即得。B.6 结果计算8255023100cWm式中：W-多糖的含量，%；c-从标准曲线上查的样品的多糖浓度，mg/mL；m-样品质量，mg；82、253-表示稀释倍数。50-水提醇沉后获得的沉淀物经热水溶解定容的体积数值