凝集反应(ABO血型的鉴定).doc

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实验一 凝集反应（ABO血型的鉴定）
[实验目的]
1．掌握凝集反应的原理，玻片法和试管法凝集实验的实验方法和结果分析。
2．了解凝集反应基本类型及血型鉴定的各种方法包括正、反定型，血型板鉴定法和血型卡鉴定法。
[实验原理]
在一定浓度的电解质溶液中，颗粒性抗原与相应抗体结合后，出现肉眼可见的凝集块，称为凝集反应。人类ABO血型抗原主要有A和B两种，根据红细胞表面这两种抗原的有无可把血型分为四种。据此，将抗A和抗B抗体分别与待测红细胞混合，抗A或（和）抗B抗体与红细胞表面上的相应抗原结合而引起红细胞凝集，据其凝集情况便可判定出受试者的血型。
[实验器材]
1． 器材：光学学显微镜，消毒缸
2． 材料：消毒干棉球，一次性采血针，载玻片，玻璃试管，一次性带刻度朔料吸管，医用黄色垃圾袋
3． 试剂：75%医用酒精，0.9%NaCl注射液，抗血清试剂抗A、抗B
[内容与方法]
(一)玻片法凝集实验
1.用酒精棉签消毒被检者手指尖端，以采血针刺破皮肤，稍加挤压，使血液流出。滴1至2滴血液于含有1ml生理盐水的试管内，摇匀，制成约0.5%血球悬液。用干棉球止血。
2．取洁净载玻片1块，在中间用蜡笔画一条竖线，将抗A、B分型试剂分别加1滴于载玻片两端。
3. 用毛细吸管吸取血球悬液，在白瓷板的两个圆孔内各加一滴,并充分混匀，放置5－10分钟。
4.肉眼观察红细胞有无凝集发生。如有凝集，可见红细胞凝集成块；无凝集，红细胞呈均匀分散。若肉眼观察不明显，可在显微镜下观察是否存在微小凝集
5.记录凝集情况，判定受检者的血型。
（二）试管法凝集实验
1．用酒精棉签消毒被检者手指尖端，以采血针刺破皮肤，稍加挤压，使血液流出。滴1至2滴血液于含有生理盐水的试管内，摇匀，制成约0.5%血球悬液。用干棉球止血。
2．取洁净试管2支，分别标记上A、B字样，将抗A、B分型试剂分别加1滴于相应标记的试管中
3．用一次性吸管吸取血球悬液，在2支标记试管中各加一滴,并充分混匀，放置5－10分钟。
4．观察红细胞有无凝集发生。如有凝集，可见红细胞凝集成块；无凝集，红细胞呈均匀分散。若肉眼观察不明显，可在显微镜下观察是否存在微小凝集
5．记录凝集情况，判定受检者的血型。
（三）演示实验（包括反定型鉴定法、板式和卡式法的结果判读）
1．实验老师准备0.5%标准红细胞：A型、B型、O型，已分离血浆的抗凝血
2．取洁净试管3支，分别标记上A、B、O字样，将受检者血浆加入已标注A、B、O字样的试管中各1滴。
3．用一次性吸管吸取0.5%标准红细胞血球悬液A、B、O 型，分别加于相应标记的试管内，并充分混匀，放置5－10分钟，（离心后观察结果）。
4． 观察红细胞有无凝集发生。如有凝集，可见红细胞凝集成块；无凝集，红细胞呈均匀分散。若肉眼观察不明显，可在显微镜下观察是否存在微小凝集
5．记录凝集情况，判定受检者的血型。
6．实验老师准备已使用的血型板和血型卡各20份，分发给学生，让学生判读正确的血型，
[作业与思考]
1． 简述直接法鉴定血型的原理。
2． 用表格的方式绘制出正反定型血型结果判读的标准?
3． 思考：反定型血型鉴定实验的原理
4． 思考：在各凝集试验中都设有相应对照，有何意义？若对照出现异常如何分析及解决？
5． 思考：直接凝集试验与间接凝集试验有何不同？
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