基因综合项目工程和细胞综合项目工程测试题可打印有答案.doc

基因工程和细胞工程测试题姓名 成绩一、选取题(每题5分，共50分)1小鼠杂交瘤细胞表达单克隆抗体用于人体实验时易引起过敏反映，为了克服这个缺陷，可选取性扩增抗体可变区基因(目基因)后再重组表达。下列有关论述对的是()A设计扩增目基因引物时不必考虑表达载体序列B用PCR办法扩增目基因时必要懂得基因所有序列CPCR体系中一定要添加从受体细胞中提取DNA聚合酶D一定要依照目基因编码产物特性选取适当受体细胞2从某海洋动物中获得一基因，其表达产物为一种抗菌性和溶血性均较强多肽P1。当前在P1基本上研发抗菌性强但溶血性弱多肽药物，一方面要做是()A合成编码目肽DNA片段 B构建含目肽DNA片段表达载体C根据P1氨基酸序列设计多条模仿肽D筛选出具备优良活性模仿肽作为目肽3某种极具观赏价值兰科珍稀花卉很难获得成熟种子。为尽快推广种植，可应用各种技术获得大量优质苗，下列技术中不能选用是()A运用茎段扦插诱导生根技术迅速育苗 B采用花粉粒组织培养获得单倍体苗C采集幼芽嫁接到适当其她种类植物体上D采用幼叶、茎尖等部位组织进行组织培养4如图是单克隆抗体制备流程简要示意图。下列关于论述，对的是()A是从已免疫小鼠脾脏中获得效应T淋巴细胞B中使用胰蛋白酶有助于杂交瘤细胞形成C同步具备脾脏细胞和鼠骨髓瘤细胞特性D是经筛选培养获得能分泌特异性抗体细胞群5某兴趣小组拟用组织培养繁殖一种名贵花卉，其技术路线为“取材消毒愈伤组织培养出芽生根移栽”。下列关于论述错误是()A消毒原则是既杀死材料表面微生物，又减少消毒剂对细胞伤害B在愈伤组织培养中加入细胞融合诱导剂，可获得染色体加倍细胞C出芽是细胞再分化成果，受基因选取性表达调控D生根时，培养基普通应含萘乙酸等生长素类调节剂6将胡萝卜韧皮部细胞培养成幼苗时，下列条件中不需要是A具备完整细胞核细胞 B一定营养物质和植物激素C离体状态 D导入外源基因7芥酸会减少菜籽品质。油菜有两对独立遗传等位基因(H和h，G和g)控制菜籽芥酸含量，下图是获得低芥酸油菜新品种(HHGG)技术路线。已知油菜单个花药由花药壁(2n)及大量花粉(n)等组分构成，这些组分细胞都具备全能性。据图分析，下列论述错误是()A、两过程均需要植物激素来诱导细胞脱分化B与过程相比，过程也许会产生二倍体再生植株C图中三种途径中，运用花粉培养筛选低芥酸植株(HHGG)效率最高DF1减数分裂时，H基因所在染色体会与G基因所在染色体发生联会8天然玫瑰没有蓝色花，这是由于缺少控制蓝色色素合成基因B，而开蓝色花矮牵牛中存在序列已知基因B。现用基因工程技术哺育蓝玫瑰。下列操作对的是()A提取矮牵牛蓝色花mRNA，经逆转录获得互补DNA，再扩增基因BB运用限制性核酸内切酶从开蓝色花矮牵牛基因文库中获取基因BC运用DNA聚合酶将基因B与质粒连接后导入玫瑰细胞D将基因B直接导入大肠杆菌，然后感染并转入玫瑰细胞9下图示植物组织培养过程。据图分析下列论述对的是()A植株根尖细胞全能性比植株根尖细胞强B试管培养基中具有植物生长调节剂，不具有有机物C试管中细胞能进行减数分裂D调节培养基中植物生长调节剂比例可诱导产生不同植物器官10下列是应用动物细胞工程获取单克隆抗X抗体详细操作环节，其中对单克隆抗体制备有关论述错误是()从患骨髓瘤小鼠体内获取骨髓瘤细胞将X抗原注入小鼠体内，获得能产生抗X抗体B淋巴细胞将杂交瘤细胞注入小鼠腹腔内培养筛选出能产生抗X抗体杂交瘤细胞运用选取培养基筛选出杂交瘤细胞从小鼠腹水中提取抗体运用促细胞融合因子促使细胞融合A实验顺序应当是B过程产生各种杂交瘤细胞过程称为克隆C过程获得细胞均可无限增殖D运用细胞融合生产单克隆抗体过程中普通要通过两次筛选二、非选取题(共50分)11绞股蓝细胞中具有抗烟草花叶病毒(TMV)基因，可以合成一种抗TMV蛋白，叶片对TMV具备抗感染性。烟草是重要经济作物，由于TMV感染会导致大幅度减产。研究人员运用转基因技术哺育出了抗TMV烟草，重要流程如下图所示。(1)科学家一方面从绞股蓝细胞中提取抗TMV基因转录RNA，然后合成目基因。图中过程表达_。(2)由图分析，在过程构建重组Ti质粒上应当具有标记基因是_基因，重组Ti质粒导入烟草体细胞办法是_。(3)在过程培养基中除具有卡那霉素及植物必须各种营养成分外，还必要添加_，以保证受体细胞能培养成再生植株。(4)过程可采用_办法，检测植株与否合成了抗TMV蛋白。在个体水平鉴定过程中，可通过_办法来拟定植株与否具备抗性。12单纯疱疹病毒I型(HSV1)可引起水泡性口唇炎。运用杂交瘤技术制备出抗HSV1单克隆抗体可迅速检测HSV1。回答下列问题：(1)在制备抗HSV1单克隆抗体过程中，先给小鼠注射一种纯化HSVl蛋白，一段时间后，若小鼠血清中抗_抗体检测呈阳性，阐明小鼠体内产生了_反映，再从小鼠_中获取B淋巴细胞。将该B淋巴细胞与小鼠_细胞融合，再通过筛选、检测，最后可获得所需杂交瘤细胞，该细胞具备特点是_。(2)若要大量制备抗该蛋白单克隆抗体，可在体外对杂交瘤细胞进行培养，也可将该杂交瘤细胞注射到小鼠_中使其增殖，再从_中提取、纯化获得。(3)通过上述办法得到单克隆抗体可精确地辨认这种HSV1蛋白，其因素是该抗体具备_和_等特性。13花椰菜易受黑腐病菌危害而患黑腐病。野生黑芥具备黑腐病抗性基因。用一定剂量紫外线解决黑芥原生质体可使其染色体片段化，并丧失再生能力。再运用此原生质体作为某些遗传物质供体与完整花椰菜原生质体融合，以获得抗黑腐病杂种植株。流程如下图。据图回答下列问题：(1)过程所需酶是_。(2)过程后，在显微镜下观测融合活细胞中如有有供体_（填细胞器）存在，依照这一特性可作为初步筛选杂种细胞标志。(3)原生质体培养液中需要加入适当浓度甘露醇以保持细胞具备一定渗入压，从而维持_。原生质体通过_再生，进而分裂和脱分化形成_组织。(4)若分析再生植株染色体变异类型，应剪取再生植株和_植株根尖，通过_、_、染色和制片等过程制成装片，然后在显微镜下观测比较染色体形态和数目。(5)采用特异性引物对花椰菜和黑芥基因组DNA进行PCR扩增，得到两亲本差别性条带，可用于杂种植株鉴定。下图是用该引物对双亲及再生植株14进行PCR扩增成果。据图判断，再生植株14中一定是杂种植株有_。(6)对杂种植株进行_接种实验，可筛选出具备高抗性杂种植株。14图表达具有目基因DDNA片段长度(bp即碱基对)和某些碱基序列，图表达一种质粒构造和某些碱基序列。既有Msp、BamH、Mbo、Sma4种限制性核酸内切酶，它们辨认碱基序列和酶切位点分别为CCGG、GGATCC、GATC、CCCGGG。请回答下列问题：(1)图一条脱氧核苷酸链中相邻两个碱基之间依次由_连接。(2)若用限制酶Sma完全切割图中DNA片段，产生末端是_末端，其产物长度为_。(3)若图中虚线方框内碱基对被TA碱基对替代，那么基因D就突变为基因d。从杂合子分离出图及其相应DNA片段，用限制酶Sma完全切割，产物中共有_种不同长度DNA片段。(4)若将图中质粒和目基因D通过同种限制酶解决后进行连接，形成重组质粒，那么应选用限制酶是_。在导入重组质粒后，为了筛选出含重组质粒大肠杆菌，普通需要用添加_培养基进行培养。经检测，某些具有重组质粒大肠杆菌菌株中目基因D不能对的表达，其最也许因素是_。答案一、选取题(每题5分，共50分)1小鼠杂交瘤细胞表达单克隆抗体用于人体实验时易引起过敏反映，为了克服这个缺陷，可选取性扩增抗体可变区基因(目基因)后再重组表达。下列有关论述对的是()A设计扩增目基因引物时不必考虑表达载体序列B用PCR办法扩增目基因时必要懂得基因所有序列CPCR体系中一定要添加从受体细胞中提取DNA聚合酶D一定要依照目基因编码产物特性选取适当受体细胞D 本题重要考查PCR技术关于知识。运用PCR技术扩增目基因前提是要有一段已知目基因核苷酸序列，以便依照这一序列设计引物，但不需懂得目基因所有序列，需要考虑载体序列；因PCR反映在高温条件下进行，故反映体系中需加入耐高温DNA聚合酶；因某些目基因编码产物需经特殊加工修饰过程，故一定要依照目基因编码产物特性选取适当受体细胞。2从某海洋动物中获得一基因，其表达产物为一种抗菌性和溶血性均较强多肽P1。当前在P1基本上研发抗菌性强但溶血性弱多肽药物，一方面要做是()A合成编码目肽DNA片段 B构建含目肽DNA片段表达载体C根据P1氨基酸序列设计多条模仿肽D筛选出具备优良活性模仿肽作为目肽C 由题中信息“在Pl基本上研发抗菌性强但溶血性弱多肽药物”可推知本题考查蛋白质工程有关知识。依照蛋白质工程基本途径：从预期蛋白质功能出发设计预期蛋白质构造推测应有氨基酸序列找到相相应脱氧核苷酸序列(基因)，可推知答案为C。3某种极具观赏价值兰科珍稀花卉很难获得成熟种子。为尽快推广种植，可应用各种技术获得大量优质苗，下列技术中不能选用是()A运用茎段扦插诱导生根技术迅速育苗B采用花粉粒组织培养获得单倍体苗C采集幼芽嫁接到适当其她种类植物体上D采用幼叶、茎尖等部位组织进行组织培养B 本题考核对获得大量优质苗各种技术手段分析。为了使优质苗生物性状不发生性状分离，可采用茎段扦插诱导生根技术迅速育苗，也可采用将幼芽嫁接到适当其她种类植物体上办法或用茎尖或幼叶等部位组织进行植物组织培养获得大量优质苗；花粉粒是减数分裂产物，运用花粉粒离体培养得到是单倍体苗，其高度不育，且会发生性状分离，因而B项方案不能选用。4如图是单克隆抗体制备流程简要示意图。下列关于论述，对的是()A是从已免疫小鼠脾脏中获得效应T淋巴细胞B中使用胰蛋白酶有助于杂交瘤细胞形成C同步具备脾脏细胞和鼠骨髓瘤细胞特性D是经筛选培养获得能分泌特异性抗体细胞群D 本题重要考查单克隆抗体制备有关知识。是从已免疫小鼠脾脏中获得浆细胞；中使用聚乙二醇或灭活病毒等，有助于杂交瘤细胞形成；同步具备浆细胞和骨髓瘤细胞特性；是经筛选培养获得能分泌特异性抗体细胞群。故D项对的。5某兴趣小组拟用组织培养繁殖一种名贵花卉，其技术路线为“取材消毒愈伤组织培养出芽生根移栽”。下列关于论述错误是()A消毒原则是既杀死材料表面微生物，又减少消毒剂对细胞伤害B在愈伤组织培养中加入细胞融合诱导剂，可获得染色体加倍细胞C出芽是细胞再分化成果，受基因选取性表达调控D生根时，培养基普通应含萘乙酸等生长素类调节剂B 本题重要考查植物组织培养有关知识。在愈伤组织中，因植物细胞具有细胞壁，阻碍了细胞融合，因此此时加入细胞融合诱导剂，不能获得染色体加倍细胞；消毒原则是既杀死材料表面微生物，又减少消毒剂对细胞伤害；愈伤组织出芽是细胞分化成果，而细胞分化实质是基因选取性表达；生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分化核心性激素，生根时，培养基普通具有萘乙酸等生长素类调节剂。故B项错误。6将胡萝卜韧皮部细胞培养成幼苗时，下列条件中不需要是A具备完整细胞核细胞 B一定营养物质和植物激素C离体状态 D导入外源基因D7芥酸会减少菜籽品质。油菜有两对独立遗传等位基因(H和h，G和g)控制菜籽芥酸含量，下图是获得低芥酸油菜新品种(HHGG)技术路线。已知油菜单个花药由花药壁(2n)及大量花粉(n)等组分构成，这些组分细胞都具备全能性。据图分析，下列论述错误是()A、两过程均需要植物激素来诱导细胞脱分化B与过程相比，过程也许会产生二倍体再生植株C图中三种途径中，运用花粉培养筛选低芥酸植株(HHGG)效率最高DF1减数分裂时，H基因所在染色体会与G基因所在染色体发生联会D 两过程是脱分化过程，培养基中需要加入生长素类和细胞分裂素类激素来诱导细胞脱分化，故A项对的；过程是运用植物花药离体培养获得植株过程，其中花药壁细胞属于正常二倍体体细胞，由其获得植株为二倍体正常植株，过程是运用花粉粒离体培养获得，花粉细胞只有一种染色体组，由其获得植株为单倍体植株，故B项对的；图中三种途径中，运用花粉培养获得只有四种品种，比例为1：1：1：1，易筛选出所需品种，故C项对的；H、h和G、g分别是两对独立遗传等位基因，故两者是位于非同源染色体上，在减数分裂时，H和G基因所在染色体不会发生联会，故D项错误。8天然玫瑰没有蓝色花，这是由于缺少控制蓝色色素合成基因B，而开蓝色花矮牵牛中存在序列已知基因B。现用基因工程技术哺育蓝玫瑰。下列操作对的是()A提取矮牵牛蓝色花mRNA，经逆转录获得互补DNA，再扩增基因BB运用限制性核酸内切酶从开蓝色花矮牵牛基因文库中获取基因BC运用DNA聚合酶将基因B与质粒连接后导入玫瑰细胞D将基因B直接导入大肠杆菌，然后感染并转入玫瑰细胞A 可以运用mRNA经逆转录合成目基因后再进一步扩增，A项对的；由于开蓝色花矮牵牛基因B序列是已知，因此该目基因宜采用化学办法合成或用聚合酶链式反映(PCR)扩增，而不是从开蓝色花矮牵牛基因文库中获取，B项错误；目基因必要与运载体结合后才干导入受体细胞，且需要DNA连接酶缝合，C、D项错误。9下图示植物组织培养过程。据图分析下列论述对的是()A植株根尖细胞全能性比植株根尖细胞强B试管培养基中具有植物生长调节剂，不具有有机物C试管中细胞能进行减数分裂D调节培养基中植物生长调节剂比例可诱导产生不同植物器官D 植株根尖细胞全能性与植株根尖细胞相似；试管培养基中具有植物生长调节剂和有机物等；试管中细胞进行分裂方式为有丝分裂；调节培养基中植物生长调节剂比例，可诱导产生根或芽。10 下列是应用动物细胞工程获取单克隆抗X抗体详细操作环节，其中对单克隆抗体制备有关论述错误是()从患骨髓瘤小鼠体内获取骨髓瘤细胞将X抗原注入小鼠体内，获得能产生抗X抗体B淋巴细胞将杂交瘤细胞注入小鼠腹腔内培养筛选出能产生抗X抗体杂交瘤细胞运用选取培养基筛选出杂交瘤细胞从小鼠腹水中提取抗体运用促细胞融合因子促使细胞融合A实验顺序应当是B过程产生各种杂交瘤细胞过程称为克隆C过程获得细胞均可无限增殖D运用细胞融合生产单克隆抗体过程中普通要通过两次筛选C 运用促细胞融合因子促使细胞融合，可获得各种融合细胞。其中B淋巴细胞与B淋巴细胞融合细胞不能无限增殖。二、非选取题(共50分)11绞股蓝细胞中具有抗烟草花叶病毒(TMV)基因，可以合成一种抗TMV蛋白，叶片对TMV具备抗感染性。烟草是重要经济作物，由于TMV感染会导致大幅度减产。研究人员运用转基因技术哺育出了抗TMV烟草，重要流程如下图所示。(1)科学家一方面从绞股蓝细胞中提取抗TMV基因转录RNA，然后合成目基因。图中过程表达_。(2)由图分析，在过程构建重组Ti质粒上应当具有标记基因是_基因，重组Ti质粒导入烟草体细胞办法是_。(3)在过程培养基中除具有卡那霉素及植物必须各种营养成分外，还必要添加_，以保证受体细胞能培养成再生植株。(4)过程可采用_办法，检测植株与否合成了抗TMV蛋白。在个体水平鉴定过程中，可通过_办法来拟定植株与否具备抗性。(1)逆转录 (2)卡那霉素抗性农杆菌转化法(3)植物激素 (4)抗原抗体杂交接种烟草花叶病毒(1)由图可知，表达逆转录(或反转录)。(2)由图示培养基中具有卡那霉素可知，Ti质粒标记基因是卡那霉素抗性基因，将基因表达载体(重组Ti质粒)导入植物细胞中惯用办法是农杆菌转化法。(3)将受体细胞培养成再生植株需要进行植物组织培养，培养基中除具有卡那霉素及植物必须各种营养成分外，还必要添加植物激素。(4)通过抗原抗体杂交办法，检测植株与否合成了抗TMV蛋白，在个体水平上，通过接种烟草花叶病毒办法可以拟定植株与否具备抗性。12单纯疱疹病毒I型(HSV1)可引起水泡性口唇炎。运用杂交瘤技术制备出抗HSV1单克隆抗体可迅速检测HSV1。回答下列问题：(1)在制备抗HSV1单克隆抗体过程中，先给小鼠注射一种纯化HSVl蛋白，一段时间后，若小鼠血清中抗_抗体检测呈阳性，阐明小鼠体内产生了_反映，再从小鼠_中获取B淋巴细胞。将该B淋巴细胞与小鼠_细胞融合，再通过筛选、检测，最后可获得所需杂交瘤细胞，该细胞具备特点是_。(2)若要大量制备抗该蛋白单克隆抗体，可在体外对杂交瘤细胞进行培养，也可将该杂交瘤细胞注射到小鼠_中使其增殖，再从_中提取、纯化获得。(3)通过上述办法得到单克隆抗体可精确地辨认这种HSV1蛋白，其因素是该抗体具备_和_等特性。(1) HSV1蛋白体液免疫(其她合理答案也可)脾脏(其她合理答案也可)骨髓瘤无限增殖且产生专一抗体(其她合理答案也可)(2)腹腔腹水 (3)纯度高 特异性强(其她合理答案也可)(1)制备单克隆抗体时，需要先给小鼠注射特定抗原(HSV1蛋白)，当小鼠血清中抗HSV1蛋白抗体检测呈阳性时，就可从小鼠脾脏中获取B淋巴细胞，将B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，通过筛选和克隆化培养，最后获得既能无限增殖又能产生专一抗体杂交瘤细胞。(2)单克隆抗体获取有两条途径，一是从体外细胞培养液中提纯获得，二是将杂交瘤细胞注射到小鼠腹腔中使其增殖，再从腹水中提取、纯化获得。(3)单克隆抗体具备特异性强、敏捷度高、纯度高等特点。13花椰菜易受黑腐病菌危害而患黑腐病。野生黑芥具备黑腐病抗性基因。用一定剂量紫外线解决黑芥原生质体可使其染色体片段化，并丧失再生能力。再运用此原生质体作为某些遗传物质供体与完整花椰菜原生质体融合，以获得抗黑腐病杂种植株。流程如下图。据图回答下列问题：(1)过程所需酶是_。(2)过程后，在显微镜下观测融合活细胞中如有有供体_（填细胞器）存在，依照这一特性可作为初步筛选杂种细胞标志。(3)原生质体培养液中需要加入适当浓度甘露醇以保持细胞具备一定渗入压，从而维持_。原生质体通过_再生，进而分裂和脱分化形成_组织。(4)若分析再生植株染色体变异类型，应剪取再生植株和_植株根尖，通过_、_、染色和制片等过程制成装片，然后在显微镜下观测比较染色体形态和数目。(5)采用特异性引物对花椰菜和黑芥基因组DNA进行PCR扩增，得到两亲本差别性条带，可用于杂种植株鉴定。下图是用该引物对双亲及再生植株14进行PCR扩增成果。据图判断，再生植株14中一定是杂种植株有_。(6)对杂种植株进行_接种实验，可筛选出具备高抗性杂种植株。(1)纤维素酶和果胶酶 (2)叶绿体 (3)原生质体完整性细胞壁 愈伤(4)双亲(或花椰菜和黑芥)解离漂洗 (5)1、2、4 (6)黑腐病菌本题考查植物细胞工程、染色体变异实验鉴定以及高抗性杂种植株筛选等有关知识。(1)去除细胞壁获得原生质体需要用纤维素酶和果胶酶解决。(2)叶肉细胞具有叶绿体，因而通过PEG诱导融合杂种细胞应具有叶绿体，以此作为初步筛选杂种细胞标志。(3)原生质体失去了细胞壁保护作用，因而原生质体培养液中需要加入适当浓度甘露醇，使原生质体处在等渗溶液中，以维持原生质体正常形态。原生质体通过细胞壁再生，进而分裂和脱分化形成愈伤组织。(4)要判断染色体变异类型，应剪取再生植株、花椰菜和黑芥植株根尖，通过解离、漂洗、染色、制片等过程制成装片，然后进行显微观测比较染色体形态和数目。(5)依照两亲本差别性条带，可知再生植株1、2和4既有花椰菜条带，又有黑芥条带，因而再生植株1、2和4一定为杂种植株。(6)要筛选出高抗性杂种植株，应进行相应病原体接种实验，即接种黑腐病菌。14图表达具有目基因DDNA片段长度(bp即碱基对)和某些碱基序列，图表达一种质粒构造和某些碱基序列。既有Msp、BamH、Mbo、Sma4种限制性核酸内切酶，它们辨认碱基序列和酶切位点分别为CCGG、GGATCC、GATC、CCCGGG。请回答下列问题：(1)图一条脱氧核苷酸链中相邻两个碱基之间依次由_连接。(2)若用限制酶Sma完全切割图中DNA片段，产生末端是_末端，其产物长度为_。(3)若图中虚线方框内碱基对被TA碱基对替代，那么基因D就突变为基因d。从杂合子分离出图及其相应DNA片段，用限制酶Sma完全切割，产物中共有_种不同长度DNA片段。(4)若将图中质粒和目基因D通过同种限制酶解决后进行连接，形成重组质粒，那么应选用限制酶是_。在导入重组质粒后，为了筛选出含重组质粒大肠杆菌，普通需要用添加_培养基进行培养。经检测，某些具有重组质粒大肠杆菌菌株中目基因D不能对的表达，其最也许因素是_。(1) 脱氧核糖、磷酸、脱氧核糖 (2) 平537 bp、790 bp、661 bp(3) 4 (4)BamH抗生素B同种限制酶切割形成末端相似，某些目基因D与质粒反向连接(1)在一条脱氧核苷酸链上，相邻两个脱氧核苷酸之间通过3,5磷酸二酯键相连，因此相邻碱基之间通过脱氧核糖、磷酸、脱氧核糖相连接。(2)Sma辨认并切割序列为CCCGGG，因此产生末端为平末端，经Sma切割后，DNA片段会形成三个小DNA片段，按切割位点计算分别是：534 bp3 bp537 bp；796 bp3 bp3 bp790 bp；658 bp3 bp661 bp。(3)杂合子基因型为Dd。用Sma切割基因D，会形成537 bp、790 bp、661 bp三种类型。题图中虚线方框内CG被TA替代，失去了一种酶切位点，则会被切割成534 bp796 bp3 bp1 327 bp，和658 bp3 bp661 bp。因此一共会得到4种类型片段。(4)如果要获得完整目基因可用BamH和Mbo切割，但是Mbo会破坏抗生素A抗性基因和抗生素B抗性基因，质粒会失去标记基因，无法筛选，因此只能用BamH切割。用BamH切割后破坏了抗生素A抗性基因，因此质粒上存在标记基因是抗生素B抗性基因，因而，在加入抗生素B培养基上进行培养、筛选，通过同种限制酶切割后会产生相似末端，某些目基因与质粒反向连接导致基因无法正常表达。