大肠埃希菌的生物危害评估综合报告.doc

大肠埃希菌生物危害评定汇报
一、大肠埃希菌传输和致病
埃希菌属包含多个细菌，临床上以大肠埃希菌最为常见。大肠埃希菌（E.coli）通称大肠杆菌，是全部哺乳动物大肠中正常寄生菌，首先能合成维生素B及K供机体吸收利用。其次能抑制腐败菌及病原菌和真菌过分增殖。但当它们离开肠道寄生部位，进入到机体其它部位时，能引发感染发病。有些菌型有致病性，引发肠道或尿路感染性疾患。
大肠埃希菌所引发食源性疾病关键由动物性食品引发，常见中毒食品为：各类熟肉制品、蛋及蛋制品、生牛奶及奶制品、汉堡包、乳酪，其次为蔬菜、水果、鲜榨果汁、饮料等。中毒原因关键是食品未经根本加热，或加工过程中造成交叉污染，老人及婴幼儿为易感人群。
大肠埃希菌能够引发肠道外感染如泌尿系感染、菌血症、胆囊炎、肺炎及新生儿脑膜炎等，也会造成从轻微腹泻到霍乱样严重腹泻乃至引发致死性并发症如溶血性尿毒综合征（HUS），依据其不一样血清型别、毒力和所致临床症状不一样，能够将造成腹泻大肠埃希菌分为5类：（1）产肠毒性大肠杆菌（enterotoxigenic             E.coli,ETEC）：是很多发展中国家儿童及旅游者腹泻常见病原菌，热带尤为常见。由食入污染食物和水而致病。本菌可产生大量耐热和非耐热肠毒素，患者腹泻呈水样便，伴有恶心、腹痛、发烧等症。（2）肠致病性大肠杆菌（enteropathogenic E.coli,EPEC）：可引发婴儿肠炎，夏季腹泻及婴儿霍乱。本菌含有很强传染性，可引发院内暴发流行，也可引发成人腹泻。传染源来自食品操作人员或粪便污染供水设施。（3）肠侵袭性大肠杆菌（enteroinvasive E.coli,EIEC）：由人－人传染而致病（推测为粪－口路径）。因含有侵袭性，侵入人体肠粘膜上皮细胞后可快速繁殖，破坏肠粘膜及其基底膜，出现粘膜溃疡，发病多呈散在性。和痢疾杆菌相同，引发痢疾样腹泻。（4）肠出血性大肠杆菌（enterohemorrhagic E.coli,EHEC）：可引发暴发或散在性出血性结肠炎。患者常出现中度高热、恶心、呕吐，痉挛性腹痛、腹泻，早期为水样便，患者出现贫血、血小板降低，少数出现急性肾功效衰竭，溶血性尿毒综合征。（5）肠粘附性大肠杆菌（enteroadherent E.coli,EAEC）：是儿童连续性腹泻病因之一。
二、大肠埃希菌生物学特征
埃希菌属属于肠杆菌科
1、形态染色：为革兰氏阴性杆菌，有鞭毛，周身有菌毛。
2、培养特征 需氧或兼性厌氧。在一般培养基上生长良好，形成中等大小光滑型菌落；在判别培养基上因分解乳糖产酸，使指示剂变色，菌落被着色；在SS、中国蓝及伊红美蓝平板上分别呈红色、蓝色及紫黑色，借此可和沙门菌及志贺菌相判别，但应注意少数菌株分解乳糖缓慢。
3、生化反应：本菌生化反应活泼，能分解葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇等多个糖类，即IMViC反应++--）。
4、胆盐、煌绿染料等对大肠杆菌有显著抑菌作用。
5、抗原结构：大肠杆菌抗原结构较为复杂，关键有（1）菌体抗原（O抗原），为细菌细胞壁成份，化学成份属脂多糖，脂多糖反复寡糖单位在关键多糖外侧，是脂多糖分子最外层，决定O抗原特异性。O抗原耐热，加热100℃不能灭活，现在已知O抗原有171种，是血清学分型基础。（2）鞭毛抗原（H抗原），成份为鞭毛蛋白，不耐热，已知有56种，均为单相菌株。（3）荚膜或包膜（K）抗原，成份以多糖类为主，对热稳定。K抗原存在时能阻止O凝集，已知有100种，但不是每个菌株全部有K抗原。大肠埃希菌血清型按O：K：H次序，以数字表示，如肠出血性大肠杆菌血清型O157:H7。
6、致病因子：除内毒素、荚膜肠杆菌科共有毒力因子外，大肠埃希菌含有独特毒力因子有：黏附素——含有高度特异性，引发吸附-定植-致病；外毒素（由ETEC产生肠毒素），包含（1）不耐热肠毒素（LT），分LT-I和LT-Ⅱ两型，本质为蛋白质，对热不稳定，和霍乱肠毒素相同；2）耐热肠毒素（ST），分STa、STb两型，为低分子多肽，对热稳定，致病机制为激活细胞鸟苷酸环化酶，使cGMP↑造成腹泻，当LT和ST同时存在，致病性更强。
三、大肠埃希菌试验室检验及诊疗
1、样本采集  采集来自临床多种标本，如血液、尿液、体液、脓汁、痰和分泌物等
2、分离培养  将血液标本接种于肉汤，生长后再移种于血琼脂平板上，脓汁、痰和分泌物标本和体液（取离心后沉淀物）标本直接接种于血平板上。尿液标本应同时做菌落计数。于36±1℃培养18～24h，观察菌落。
3、判定培养  可将菌液深入接种于乳糖胆盐培养基或麦康凯、伊红美蓝琼脂平板于36±1℃培养18～24h，观察菌落。不仅要注意乳糖发酵菌落，同时也要注意乳糖不发酵和迟缓发酵菌落。　
4、生化试验
（1）自（判定）平板上直接挑取数个菌落分别接种三糖铁琼脂(TSI)或克氏双糖铁琼脂(KIA)。同时将这些培养物分别接种蛋白胨水、半固体、pH7.2尿素琼脂、KCN肉汤和赖氨酸脱羧酶试验培养基。以上培养物均在36℃培养过夜。
（2）结果：在TSI斜面产酸或不产酸，底层产酸，H2S阴性，KCN阴性和尿素阴性培养物为大肠埃希氏菌。TSI底层不产酸，或H2S、KCN、尿素有任一项为阳性培养物，均非大肠埃希氏菌。必需时做氧化酶试验和革兰氏染色。
5、血清学试验
（1）假定试验：挑取经生化试验证实为大肠埃希氏菌琼脂培养物，用致病性大肠埃希氏菌、侵袭性大肠埃希氏菌和产肠毒素大肠埃希氏菌多价O血清和出血性大肠埃希氏菌O157血清做玻片凝集试验。当和某一个多价O血清凝集时，再和该多价血清所包含单价O血清做试验。如和某一个单价O血清展现强凝集反应，即为假定试验阳性。
（2）证实试验：制备O抗原悬液，稀释至和Mac Farland3号比浊管相当浓度。原效价为1：160～1：320O血清，用0.5%盐水稀释至1：40。稀释血清和抗原悬液在10mm×75mm试管内等量混合，做单管凝集试验。混匀后放于50℃水浴箱内，经16h后观察结果。如出现凝集，可证实为该O抗原。
6、肠毒素试验：用酶联免疫吸附试验检测LT和ST。
（1）产毒培养：将试验菌株和阳性及阴性对照菌株分别接种于0.6mLCAYE培养基内，37℃振荡培养过夜。加入0IU/mL多粘菌素B0.05mL，于37℃1h，离心4000r/min 15min，分离上清液，加入0.1%硫柳汞0.05mL，于4℃保留待用。
（2）LT检测方法(双抗体夹心法) ：具体过程参见LT和ST酶标诊疗试剂盒，结果判定：以酶标仪在波长492nm下测定吸光度OD值，待测标本OD值大于阴性对照3倍以上为阳性，目测颜色为桔黄色或显著高于阴性对照为阳性。
（3）ST检测方法(抗原竞争法)：具体过程参见LT和ST酶标诊疗试剂盒，结果判定：以酶标仪在波长492nm下测定吸光度(OD)值：目测无色或显著淡于阴性对照为阳性。
综合以上生化试验、血清学试验、肠毒素试验作出汇报。
四、大肠埃希菌防治及生物安全防护
一、细菌防治
首先应正确地处理感染者粪便,良好卫生和用肥皂仔细洗手,有利于限制感染传输。
因为儿童和老人是易感人群，所以一旦出现感染，对其它人预防方法将是必需：应将已知感染大肠埃希菌患者集中看护；采取巴氏法消毒食品,可预防食物源性传输。
诊疗则关键依靠支持疗法.即使大肠埃希菌对绝大多数常见抗生素敏感,不过抗生素并不能减轻症状,降低带菌或预防HUS发生。在感染后一周内,对发生HUS高危患者(如不满5岁儿童,年老者),应该观察其早期症状.发生并发症患者需要精心照料,包含透析和其它特殊诊疗,这些能够在三级医疗护理中心进行。
五、细菌生物安全防护
依据《病原微生物生物试验室生物安全管理条例》中相关要求，人间传输微生物名目（待颁布）霍乱弧菌属于三类，BSL-2。