甲泼尼龙治疗视神经脊髓炎谱系疾病患者后IL-6和Th17_Treg细胞平衡的关系.pdf

第 5 期Relationship between IL-6 and Th17/Treg cell balance in patients with neuromyelitis optic spectrum diseasetreated with methylprednisoloneSHAJing1，LIzhiwei2，ZHAOna2，3，MayinuerMaimaiti2，3，LIHongyan2，3*（1Xinjiang Medical University,Urumqi,830054,China;2Peoples Hospital of Xinjiang Uygur Autonomous Region,Urumqi,830001,China;3Xinjiang Clinical Research Center for Stroke and Neurological Rare Disease,Urumqi,830001,China）Abstract：ObjectiveTo investigate the effect of interleukin-6（IL-6）on thecell balance betweenhelper T cell type 17（Th17）and regulatory T cell（Treg）cell balance during acute phaseof Neuromyelitis Optica Spectrum Disorder（NMOSD）.MethodsA total of19 cases of NMOSD hospitalized in the Peoples hospital of Uygur Autonomous Region from January 2019 to December 2020 werecollected and treated with high-dose intravenous methylprednisolone（IVMP）shock therapy.After hormone shock therapy,the proportionof Th17 and Treg cells was detected by flow cytometry,the levels of IL-6,IL-17 and IL-10 in peripheral blood were detected by CBAmethod,and the acute disability status of NMOSD patients was assessed by EDSS.The changes of Th17,Treg and IL-6,IL-17 and IL-10 before and after IVMP treatment were compared,as well as the correlation between the changes of EDSS score before and after IVMPtreatment and the imbalance of Th17/Treg cells.ResultsIVMP not only reduced the level of IL-6 in peripheral blood of AQP4-igG-positive NMOSD patients at the acute stage,but also increased the proportion of Treg cells in the acute peripheral blood of NMOSDpatients,thus promoting the tilt of Th17/Treg ratio towards Treg,and promoting the increase of the cell proportion and achieving cellbalance.There was a certain correlation between the difference of EDSS score and Th17/Treg ratio in IVMP treatment of NMOSDpatients,and this correlation was more significant in AQP4-igG antibody positive NMOSD patients.ConclusionIVMP can reduce thelevel of IL-6 in peripheral blood of AQP4-igG-positive NMOSD patients at the acute stage,and also reverse the cellular imbalance ofTh17/Treg cells in NMOSD patients,and the degree of clinical disability improvement is correlated with the difference of Th17/Treg ratio.Key words：Neuromyelitis optica spectrum disorder；IL-6；Th17；Treg论著甲泼尼龙治疗视神经脊髓炎谱系疾病患者后 IL-6 和Th17/Treg 细胞平衡的关系沙晶1，李智伟2，赵娜2，3，玛依努尔 买买提2，3，李红燕2，3*（1新疆医科大学，乌鲁木齐 830054；2新疆维吾尔自治区人民医院，乌鲁木齐 830001；3新疆脑卒中与神经系统罕见病临床医学中心，乌鲁木齐 830001）摘要：目的探讨甲泼尼龙视神经脊髓炎谱系疾病（Neuromyelitis optica spectrum disorder，NMOSD）患者后白介素 6（Interleukin-6，IL-6）在 NMOSD 急性期中对辅助性 17 型 T 细胞（Helper T cell type 17，Th17）细胞/调节性 T 细胞（RegulatoryT cell，Treg）细胞平衡的作用影响。方法收集 2019 年 1 月-2020 年 12 月就诊于维吾尔自治区人民医院住院的 NMOSD共 19 例，采用大剂量静脉注射甲泼尼龙（high-dose intravenous methylprednisolone，IVMP）冲击治疗，激素冲击治疗结束后通过流式细胞术检测 Th17 和 Treg 细胞比例，CBA 法检测外周血 IL-6、IL-17 和 IL-10 水平，采用 EDSS 评估 NMOSD 患者急性期残疾状态，比较 IVMP 治疗前后 Th17、Treg 及 IL-6、IL-17 和 IL-10 的变化，以及治疗前后 EDSS 评分改变与 Th17/Treg 细胞失衡的相关性。结果IVMP 不仅可以降低 AQP4-IgG 阳性的 NMOSD 患者急性期外周血 IL-6 水平，还可以增加NMOSD 患者急性期外周血中 Treg 细胞比例，从而促进 Th17/Treg 比例向 Treg 倾斜，促使这一细胞比例的升高，达到细胞平衡状态。IVMP 治疗 NMOSD 患者的 EDSS 评分差值与 Th17/Treg 比值的差值存在一定的相关性，这一相关性在 AQP4-IgG 抗体阳性的 NMOSD 较为显著。结论IVMP 可以 降低 AQP4-IgG 阳性的 NMOSD 患者急性期外周血 IL-6 水平，还可以扭转NMOSD 患者 Th17/Treg 的细胞失衡状态，其临床残疾好转程度与 Th17/Treg 比值的差值存在相关性。关键词：视神经脊髓炎谱系疾病；甲泼尼龙；IL-6；Th17；Treg中图分类号：R744.5+2文献标识码：A文章编号：10015183（2023）0556109第 53 卷第 5 期2023 年 5 月新疆医学XINJIANG MEDICAL JOURNALVol.53No.5May.2023基金项目：新疆维吾尔自治区自然科学基金（项目编号：2019D01C150）。作者简介：沙晶，硕士，主治医师，研究方向：中枢神经系统脱髓鞘疾病。通信作者：李红燕，女，博士，主任医师，研究方向：帕金森病。E-mail：。新疆医学第 53 卷免疫系统可以为身体提供抵抗病原微生物的必要保护，但它也可以攻击身体自身的组织并引起自身免疫性疾病。活化的 CD4+T 细胞，分化成具有不同功能的效应细胞亚群，调节不同的免疫反应，包括有辅助型 T 细胞 1 型（Helper T cell type，Th1）、Th2、Th17、T 滤泡辅助细胞（T follicular helper，Tfh）和调节性 T 细胞（Regulatory T cell，Treg）等1。在这些亚群中，越来越多的研究集中在 Th17 细胞和 Treg 细胞在自身免疫中的作用。Th17 细胞，通过产生 IL-17、IL-22 和 IL-23 等细胞因子，在动员中性粒细胞和促进感染部位炎症反应的发展中发挥作用。相比之下，Treg 细胞会产生特异性抗炎细胞因子 IL-10 和 TGF-，从而抑制免疫细胞的活性，起到抑制过度的免疫应答。因此，需要重视 Th17/Treg 细胞失衡在自身免疫性疾病中的致病作用。IL-6 作为一种促炎的细胞因子，与初始 T 淋巴细胞表面的可溶性受体（IL-6 receptor，IL-6R）相结合，通过激活转录激活因子 3（Signal transducerand activator of transcription 3，STAT3）及后续极化转录因子 ROR 产生细胞内信号，可以抑制 TGF-的作用，促进初始 T 淋巴细胞向 Th17 细胞的转化2。在 IL-6 存在的情况下，会促进 Th17 的分化导致Th17/Treg 之间的细胞平衡被打破3，4。视神经脊髓炎谱系疾病（Neuromyelitis opticaspectrum disorder，NMOSD）是一类好发于视神经和脊髓的中枢神经系统（Central nervous system，CNS）自身免疫性疾病。临床上以视神经和脊髓同时或相继受累为主要特征，可导致失明、肢体无力、认知功能障碍，甚至死亡5。在 NMOSD 急性发作期，采用大剂量静脉注射甲泼尼龙（high-dose intravenousmethylprednisolone，IVMP）冲击疗法联合或不联合口服减量激素进行免疫抑制是目前的金标准治疗6。已有部分研究表明，IVMP 对 MS 急性期患者 Th17细胞有抑制作用7，有利于急性期 EDSS 评分的降低。然而 IVMP 是否可以通过 NMOSD 患者急性期外周血 IL-6 水平影响 Th17/Treg 细胞平衡，从而发挥降低患者残疾状况的作用不得而知。本研究采用流式细胞术、流式 CBA 等方法，检测 NMOSD 患者应用 IVMP 后 IL-6 水平的改变，Th17 细胞、Treg细胞及细胞因子 IL-17、IL-10 的水平改变，旨在揭示和探索甲泼尼龙是否可以通过调控 IL-6 的水平来影响 NMOSD 患者 Th17/Treg 细胞平衡的机制。1 资料与方法1.1 资料选择 2019 年 1 月-2020 年 12 月在新疆维吾尔自治区人民医院住院治疗并明确诊断 NMOSD急性发作期的患者 19 例，设置为 NMOSD 组。其中男性 8 例，女性 11 例，发病年龄 18 岁-64 岁，平均（35.21 13.04）岁，病程 0年-14 年，中位病程 0.00（0.00，5.00）年，复发次数中位数 0.00（0.00，2.00）次，发作期 EDSS 评分 3.791.68 分，视神经炎起病为 7例（36.84%），急性脊髓炎起病为 10 例（52.63%），极后区综合征为 1 例（5.26%），脑干综合征为 1 例（5.26%）。入 组 标 准：（1）NMOSD 诊 断 符 合 2015 年NMOSD 国际共识诊断标准6；（2）患者入院至采集血液标本时间24h，且在采集血液样本之前 1个月内未曾接受过皮质类固醇激素和免疫球蛋白治疗；（3）所有入组患者性别、年龄、诱因、临床症状和基线数据等临床资料完整；（4）新发神经功能缺损症状持续时间24h，且距前次发作30d。排除标准：（1）同时合并结缔组织病和（或）其他自身免疫性疾病、肿瘤、感染、获得性免疫缺陷综合征及其他传染性疾病；（2）临床和实验室数据不完整者。1.2 试剂与仪器淋巴细胞表面抗体标记物（美国 Biolegend 公司）；AQP4-IgG 检测试剂盒（间接免疫荧光法）（欧蒙医学诊断有限公司）；九项细胞因子检测试剂盒（多重微球流式免疫荧光发光法）（青岛瑞斯凯尔生物科技有限公司）；FACS Canto Plus 流式细胞仪（美国 BD 公司）。1.3 方法1.3.1 用药方法及样本采集入院 24h 内清晨空腹采集 NMOSD 组外周静脉血。NMOSD 组患者予以IVMP 治疗（1g/d 静脉点滴，3d 后减量为 0.5g/d 静脉点滴，3d 后减量为 250mg/d 静脉点滴，3 d 减量为 120mg/d 静脉点滴，3d 减量为 60mg/d 泼尼松口562第 5 期沙晶，等；甲泼尼龙治疗视神经脊髓炎谱系疾病患者后 IL-6 和 Th17/Treg 细胞平衡的关系服），静脉激素疗程结束即 12d 后再次予以采集外周静脉血。1.3.2 流式细胞术检测将每个待检样本分两管，分别吸取 100 L EDTA 抗凝血全血加入流式上样管底部。每个待检样本分两管，一管试验管内加入CD127-FITC 20L，CD183-PE-Cy7 5L，CD196-APC 5 L，CD3-PerCP 20 L，CD25-BV421 5 L，CD4-APC-Cy7 5 L 鼠抗人抗体。另一管对照管加入 CD3-PerCP 20L，CD4-APC-Cy7 5L，IgG1-BV421 5L，IgG1-PE-Cy7 5L，IgG1-APC 5L，IgG1-FITC 5L，IgG1-PE 5L。使用室温放置，避光孵育 15 min。每个待检样本加入 2 mL 的 FACSLysing Solution 红细胞裂解液，涡旋混匀后避光放置10min，1500rpm 离心 5min 后弃去上清。裂红后，加入 2mLPBS 洗涤，1500rpm 离心 5min 后弃去上清。加入 500 L PBS 重悬细胞后等待上机检测。使用FACS Diva，进行上机操作，使用 FlowJo 10.0 软件进行流式数据分析。使用 FSC 和 SSC 设门，圈出 FSC和 SSC 均偏小的淋巴细胞群。用 SSC 和 CD3 设门圈出 T 淋巴细胞群，在此基础上通过 CD3 和 CD4设门圈出辅助性 T 细胞亚群，继续在此门基础上用CD183 和 CD196 的十字门圈出 Th17 型辅助性 T 细胞亚群，将 CD3+CD4+CD183-CD196+的细胞定义为 Th17 细胞。Treg 细胞则用用 SSC 和 CD3 设门圈出 T 淋巴细胞群，在此基础上通过 CD3 和 CD4 设门圈出辅助性 T 细胞亚群，再使用 CD127 和 CD25设门，圈出 CD25 高表达，CD127 低表达的细胞群，即为 Treg 细胞群。1.3.3 流式 CBA 法检测细胞因子制备标准品：向校准品管中加入 25uL 试剂盒中的基质 B，再加入25uL 试剂盒内的校准品。从-80取出样本低温解冻，取样本管中加入 25 uL 实验缓冲液，再向样本管中加入 25uL 样本血清。所有管中加入 25uL 捕获微球抗体（按上述充分混合均匀），向所有管中加入 25uL 检测抗体，室温（251）避光震荡孵育 2h（400r/min-500r/min）。向所有管中加入 25uL SA-PE，室温（251）避光震荡孵育 0.5h（400r/min-500r/min），向每管中加入 300uL 1洗涤缓冲液，涡旋数秒，300 g-400 g 离心 5 min，缓慢倾倒出液体，倒扣于吸水纸上，向每管中加入 300 uL 1洗涤缓冲液，涡旋数秒，300g-400 g 离心 5 min，缓慢倾倒出液体，倒扣于吸水纸上。根据流式细胞仪上样需求，向每管中加入 150 uL-300 uL 洗涤缓冲液，涡旋 10s 将微球重悬，立即上机检测。1.3.4 神经功能缺损程度所有患者均于入院后 24h内和静脉激素疗程结束后采用扩展残疾状态量表（expanded disability status scale，EDSS）8进行残疾程度评价，包括视觉功能（6 分）、脑干功能（5 分）、锥体功能（6 分）、小脑功能（5 分）、感觉功能（6 分）、膀胱和直肠功能（6 分）、大脑功能（5 分）及行动（6.5 分）共 8 项内容，每项评分经转化后计为总评分，总评分 10 分，评分越高、残疾程度越严重。1.4 统计学方法采用 SPSS 23.0 统计软件进行数据处理与分析，用 GraphPad Prism 9.3.0 软件进行制图。呈正态分布的计量资料以均数标准差（xs）表示，采用两独立样本的 t 检验；呈非正态分布的计量资料以四分位间距 M（P25，P75）表示，采用两独立样本的非参数检验；计数资料以相对数构成比（%）或率（%）表示，采用 2检验。分析治疗前后细胞比例及细胞因子改变采用两相关样本的配对 t 检验，分析治疗前后 EDSS 差值与各指标之间的相关性分析采用 Pearson 相关分析。以 P 0.05 为差异具有统计学意义。2 结果2.1 NMOSD 组 AQP4-IgG（+）与 AQP4-IgG（-）患者指标对比本研究进一步分析了 AQP4-IgG 不同患者的临床指标，其中 AQP4-IgG（+）患者有 11 名，男性4 例，女性 7 例，发病年龄平均（35.73 14.42）岁，中位病程 2.00（0.00，7.00）年，复发次数中位数0.00（0.00，2.00）次，发作期 EDSS 评分（3.861.53）分，视神经炎起病为 5 例（45.45%），急性脊髓炎起病 为 5 例（45.45%），极 后 区 综 合 征 为 1 例（9.09%）。AQP4-IgG（-）患者有 8 名，男性 4 例，女性 4 例，发病年龄平均（34.5011.78）岁，中位病程0.00（0.00，3.00）年，复发次数中位数 1.00（1.00，7.00）次，发作期 EDSS 评分（3.691.96）分，视神经563新疆医学第 53 卷炎起病为 2 例（25%），急性脊髓炎起病为 5 例（62.5%），脑干综合征为 1 例（12.5%）。见表 1。2.2 IVMP 对 NMOSD 患者 IL-6 水平及 Th17/Treg细胞比值的影响为了评估 IVMP 对 NMOSD 急性期患者外周血IL-6 及 Th17/Treg 细胞比值的影响，本研究采取流式 CBA 法检测了 IVMP 后外周血 IL-6 的水平，采取流式细胞法检测了 IVMP 后外周血 Th17 和 Treg比例。结果发现，NMOSD 患者急性期治疗前后外周血 IL-6 水平差异无明显改变（t=1.452，P=0.164），Th17 比例差异也无明显改变（t=1.425，P=0.171），但治疗后的 Treg 细胞比例较治疗前升高（t=-4.152，P=0.001），治疗后的 Th17/Treg 细胞比值较治疗前下降（t=3.822，P=0.001）。见表 2、图 1、图 2。2.3 IVMP 对 AQP4-IgG（+）NMOSD 患者 IL-6 水平及 Th17/Treg 细胞平衡的影响为了明确 IVMP 对 AQP4-IgG 不同的 NMOSD患者 IL-6 水平及 Th17/Treg 细胞平衡的影响，本研究将 AQP4-IgG（+）与 AQP4-IgG（-）NMOSD 患者分别做了分析。结果显示，在 AQP4-IgG（+）患者中，IVMP 治疗后 IL-6 水平较治疗前有下降趋势（t=2.281，P=0.046），Th17 细胞比例较治疗前无明显改变（t=1.209，P=0.255），但 Treg 细胞比例较治疗前升高（t=-5.150，P=0.000），Th17/Treg 细胞比值较治疗前下降（t=4.089，P=0.000）。见表 3、图 3。2.4 IVMP 对 AQP4-IgG（-）NMOSD 患者 IL-6 水平及 Th17/Treg 细胞平衡的影响本研究又进一步分析了 IVMP 对 AQP4-IgG（-）NMOSD 患者 IL-6 水平及 Th17/Treg 细胞平衡的影响，结果显示在 AQP4-IgG（-）患者中，IVMP 治疗后IL-6 水平较治疗前无改变（t=0.541，P=0.605），Th17 细胞比例较治疗前无明显改变（t=0.729，P=0.490），但 Treg 细胞比例较治疗前升高（t=-2.542，P=0.039），Th17/Treg 细胞比值较治疗前无明显改变（t=2.028，P=0.082）。见表 4、图 4。2.5 IVMP 对 NMOSD 患者 IL-17、IL-10 及其比值的影响为了解 IVMP 治疗是否会影响 NMOSD 患者外周 Th17 和 Treg 细胞相关细胞因子水平，本研究用流式 CBA 法检测了 IVMP 治疗后的细胞因子 IL-17 和 IL-10。结果显示，与 IVMP 治疗前比较，治疗表 1 NMOSD 组患者临床资料EDSS 评分（xs，岁）AQP4-IgG（+）3.771.57人数（例）11性别（男/女）4/7AQP4-IgG（-）3.811.7384/42/t/UP-0.3530.5520.0520.959视神经炎（%）5（45.45%）2（25.00%）急性脊髓炎（%）5（45.45%）5（62.50%）年龄（xs，岁）35.7314.4234.5011.780.1970.846病程 M（P25，P75），年 2.00（0.00，7.00）0.00（0.00，3.00）29.0000.168复发次数（次）0.00（0.00，2.00）1.00（1.00，7.00）27.000.116极后区综合征（%）1（9.09%）0（0%）2.8840.410脑干综合征（%）0（0%）1（12.50%）表 2 NMOSD 患者治疗前后 IL-6 和 Th17 细胞、Treg 细胞及 Th17/Treg 比例（xs）改变IL-6（ng/mL）0.1643.251.392.931.22Th17（%）0.17113.645.4912.434.14Treg（%）Th17/Treg5.882.102.741.747.981.941.741.060.0010.0011.4521.425-4.1523.822分组P治疗前治疗后tn1919-图 1 NMOSD 患者治疗前后 IL-6 和 Th17 细胞、Treg 细胞及 Th17/Treg 比例（xs）改变注：A治疗前后 IL-6 水平改变，B治疗前后 Th17 比例改变，C治疗前后 Treg比例改变，D治疗前后 Th17/Treg细胞比例改变*P0.05，*P0.01，*P0.001。图 2 NMOSD 患者治疗前后 Th17 细胞和 Treg 细胞（xs）改变注：A 治疗前 Th17 比例，B 治疗前 Treg 比例，C 治疗后 Th17 比例，D 治疗后Treg 细胞比例改变*P0.05，*P0.01，*P0.001。564第 5 期沙晶，等；甲泼尼龙治疗视神经脊髓炎谱系疾病患者后 IL-6 和 Th17/Treg 细胞平衡的关系表 3 AQP4-IgG（+）患者治疗前后 IL-6 和 Th17 细胞、Treg 细胞及 Th17/Treg 比例（xs）改变IL-60.0463.181.402.761.50Th17（%）0.25515.834.4014.202.97Treg（%）Th17/Treg4.981.903.601.747.491.692.111.560.0000.0002.2811.209-5.1504.089分组P治疗前治疗后tn1919-图 3 AQP4-IgG（+）患者治疗前后 IL-6 和 Th17 细胞、Treg 细胞及 Th17/Treg 比例（xs）改变注：A治疗前后 IL-6 水平改变，B治疗前后 Th17 比例改变，C治疗前后 Treg比例改变，D治疗前后 Th17/Treg细胞比例改变*P0.05，*P0.01，*P0.001。表 4 AQP4-IgG（-）患者治疗前后 IL-6 和 Th17 细胞、Treg 细胞及 Th17/Treg 比例（xs）改变IL-6（ng/mL）0.6053.341.463.150.70Th17（%）0.49010.635.659.994.44Treg（%）Th17/Treg7.131.761.550.848.652.161.310.850.0390.0820.5410.729-2.5422.028分组P治疗前治疗后tn1919-图 4 AQP4-IgG（-）患者治疗前后 IL-6 和 Th17 细胞、Treg 细胞及 Th17/Treg 比例（xs）改变注：A治疗前后 IL-6 水平改变，B治疗前后 Th17 比例改变，C治疗前后 Treg比例改变，D治疗前后 Th17/Treg细胞比例改变*P0.05，*P0.01，*P0.001。后 IL-17 及 IL-10 水平均无明显改变（t=1.066，P=0.300；t=-1.888，P=0.075），然而二者的比值较治疗前明显下降，差异具有统计学意义（t=2.440，P=0.025）。见表 5、图 5。2.6 IVMP 对 AQP4-IgG（+）NMOSD 患者 IL-17、IL-10 及其比值的影响为了明确 IVMP 对 AQP4-IgG 不同的 NMOSD患者 IL-17、IL-10 的影响，本研究将 AQP4-IgG（+）与 AQP4-IgG（-）患者分别做了分析。结果显示，AQP4-IgG（+）患者经 IVMP 治疗后 IL-17 水平较治疗前下降，差异具有统计学意义（t=2.389，P=0.038），IL-10 水平较治疗前升高，差异具有统计学意义（t=-2.697，P=0.022），二者比值较治疗前明显下降（t=2.703，P=0.022）。见表 6、图 6。2.7 IVMP 对 AQP4-IgG（-）NMOSD 患者 IL-17、IL-10 及其比值的影响本研究进一步分析了 IVMP 对 AQP4-IgG（-）表 5 NMOSD 组治疗前后 IL-17、IL-10 水平及其比值的改变（xs）IL-70.3004.191.943.732.13IL-10（ng/mL）0.0752.601.093.100.97IL-7/IL-102.051.421.290.810.0251.066-1.8882.440分组P治疗前治疗后tn1919-图 5 NMOSD 组治疗前后 IL-17、IL-10 水平及其比值的改变（xs）注：A 治疗前后 IL-17 水平改变，B 治疗前后 IL-10 水平改变，C 治疗前后IL-17/IL-10 比例改变，*P0.05，*P0.01，*P0.001。表 6 AQP4-IgG（+）患者治疗前后 IL-17、IL-10 水平及其比值的改变（xs）IL-170.0385.331.634.162.17IL-10（ng/mL）0.0222.370.893.070.71IL-17/IL-102.691.471.440.830.0222.389-2.6972.703分组P治疗前治疗后tn1919-图 6 AQP4-IgG（+）患者治疗前后 IL-17、IL-10 水平及其比值的改变（xs）注：A 治疗前后 IL-17 水平改变，B 治疗前后 IL-10 水平改变，C 治疗前后IL-17/IL-10 比例改变，*P0.05，*P0.01，*P0.001。565新疆医学第 53 卷NMOSD 患者 IL-17、IL-10 的影响，结果显示，AQP4-IgG（-）患者经 IVMP 治疗后 IL-17 水平、IL-10 水平以及二者的比值较治疗前均无明显差异（t=-0.198，P=0.848；t=-0.399，P=0.700；t=0.869，P=0.410）。见表 7、图 7。2.8 IVMP 后 NMOSD 患者临床残疾改善程度与各项指标的相关性为明确临床残疾程度的好转程度是否与 IVMP治疗前后 IL-6 及 Th17/Treg 细胞的差值相关，本研究采用 Person 相关分析方法分析治疗前后 EDSS评分与各项临床指标的相关性。结果显示，IVMP 治疗前后 EDSS 评分的差值与 Th17/Treg 比值的差值具有正相关性（r=0.489，P=0.034），与 IL-6 水平的差值、Th17 的差值、Treg 的差值、IL-17 水平的差值、IL-10 水平的差值以及 IL-17/IL-10 比值的差值均无差异。见表 8、图 8。为了观察 AQP4-IgG 不同的 NMOSD 患者中，临床残疾程度的好转程度是否与 IVMP 治疗前后IL-6 及 Th17/Treg 细胞的差值相关。本研究将AQP4-IgG（+）与 AQP4-IgG（-）患者分别做了分析。结果显示，AQP4-IgG（+）患者中，IVMP 治疗前后 EDSS 评分的差值与 Th17 的差值有正相关（r=0.678，P=0.022），Th17/Treg 比值的差值具有正相关性（r=0.766，P=0.006），与 IL-6 水平的差值、Treg 的差值、IL-17 水平的差值、IL-10 水平的差值以及 IL-17/IL-10 比值的差值均无差异。见表9、图 8。而在 AQP4-IgG（-）患者中，IVMP 治疗前后EDSS 评分的差值与 IL-6 水平的差值、Th17 的差值、Treg 的差值、Th17/Treg 的差值、IL-17 水平的差值、IL-10 水平的差值以及 IL-17/IL-10 比值的差值均无差异。见表 10、图 8。3 讨论糖皮质激素常被用于治疗各种自身免疫性疾病，其庞大的抗炎和免疫抑制作用，是日常临床应用中最为广泛也最被大众所接受的药物9。甲泼尼龙，作为一种糖皮质激素的代表性药物，通常被用于治疗严重过敏反应、系统性红斑狼疮、溃疡性结肠炎和关节炎等自身免疫性疾病。关于 IVMP 治疗表 7 AQP4-IgG（-）患者治疗前后 IL-17、IL-10 水平及其比值的改变（xs）IL-70.8482.631.053.011.97IL-10（ng/mL）0.7002.921.313.031.27IL-7/IL-101.160.731.070.730.410-0.198-0.3990.869分组P治疗前治疗后tn1919-图 7 AQP4-IgG（-）患者治疗前后 IL-17、IL-10 水平及其比值的改变（xs）注：A 治疗前后 IL-17 水平改变，B 治疗前后 IL-10 水平改变，C 治疗前后IL-17/IL-10 比例改变，*P0.05，*P0.01，*P0.001。表 8 NMOSD 患者治疗前后EDSS 与其他指标的相关性IL-60.0650.432Th17%0.0600.438指标EDSSrpTreg%0.3700.110Th17/TregIL-17 IL-10IL17/IL-100.489-0.0240.0160.2090.0340.9230.9480.391注：EDSS 为治疗前后 EDSS 评分的差值，IL-6 为治疗前后 IL-6 水平的差值，Th17%为治疗前后 Th17%的差值，Treg%为治疗前后 Treg%的差值，Th17/Treg 为治疗前后 Th17/Treg 比值的差值，IL-17 为治疗前后IL-17 水平的差值，IL-10 为治疗前后 IL-10 水平的差值，IL17/IL-10 为治疗前后 IL17/IL-10 比值的差值。表 9 AQP4-IgG（+）患者治疗前后EDSS 与其他指标的相关性IL-60.4670.245Th17%0.0220.678指标EDSSrpTreg%0.4910.125Th17/TregIL-17 IL-10IL17/IL-100.7660.0190.3460.2980.0060.9560.2980.378注：EDSS 为治疗前后 EDSS 评分的差值，IL-6 为治疗前后 IL-6 水平的差值，Th17%为治疗前后 Th17%的差值，Treg%为治疗前后 Treg%的差值，Th17/Treg 为治疗前后 Th17/Treg 比值的差值，IL-17 为治疗前后IL-17 水平的差值，IL-10 为治疗前后 IL-10 水平的差值，IL17/IL-10 为治疗前后 IL17/IL-10 比值的差值。表 10 AQP4-IgG（-）患者治疗前后EDSS 与其他指标的相关性IL-60.2030.503Th17%0.6100.215指标EDSSrpTreg%0.3140.449Th17/TregIL-17 IL-10IL17/IL-100.382-0.130-0.1740.1190.3510.7590.6790.779注：EDSS 为治疗前后 EDSS 评分的差值，IL-6 为治疗前后 IL-6 水平的差值，Th17%为治疗前后 Th17%的差值，Treg%为治疗前后 Treg%的差值，Th17/Treg 为治疗前后 Th17/Treg 比值的差值，IL-17 为治疗前后IL-17 水平的差值，IL-10 为治疗前后 IL-10 水平的差值，IL17/IL-10 为治疗前后 IL17/IL-10 比值的差值。图 8 NMOSD 患者治疗前后EDSS 与Th17/Treg 的相关性注：A：NMOSD 患者治疗前后EDSS 与Th17/Treg 的相关性，B：AQP4-IgG（+）患者治疗前后EDSS 与Th17/Treg 的相关性，C：AQP4-IgG（-）患者治疗前后EDSS 与Th17/Treg 的相关性。EDSS 为治疗前后 EDSS评分的差值，Th17/Treg 为治疗前后 Th17/Treg 比值的差值。566第 5 期自身免疫性疾病机制存在几种假说：（1）免疫消融消除自身反应性 T 细胞克隆；（2）自身反应性 T 细胞克隆得到耐受；（3）调节网络控制自身反应性 T细胞和补体激活10。IVMP 作为 NMOSD 急性发作的一线治疗方案，已有多项研究证明其可能通过抑制炎症细胞因子的产生、T 细胞的活化和单核细胞的增加来抑制炎症级联反应11，具有其它药物无法代替的特殊性。NMOSD 的发病机制与很多细胞因子的功能相关，而这些细胞因子是由多种免疫细胞产生的12。在这些细胞因子，IL-6 被发现在 NMOSD 患者的血清和脑脊液中均有显著升高，被认为是 NMOSD的发病机制的关键13，14。IL-6 可以促进浆母细胞产生更多的 AQP4-IgG15，而进行 IL-6 阻滞治疗后可以有效预防 NMOSD 患者的复发16。作为多效性细胞因子，IL-6 可以调节白细胞招募，导致中性粒细胞浸润到局部病灶，并参与了疾病的发病机制17。Dunia Rassy 等学者发现，给自身免疫性脑脊髓炎模型小鼠鼻内和静脉内激素治疗后，其脑脊液中IL-6出现降低18。本研究发现，IVMP 治疗前后 NMOSD患者外周血 IL-6 水平未见明显改变。进一步分析AQP4-IgG 阳性和阴性的 NMOSD 患者，研究发现IVMP 治疗 AQP4-IgG 阳性的 NMOSD 患者后，外周血 IL-6 水平较前下降，IVMP 治疗 AQP4-IgG 阴性的 NMOSD 患者后，外周血 IL-6 水平未见改变。这可能提示，IL-6 水平的改变与 AQP4-IgG 的存在具有一定的相关性，有待