免疫组化在肿瘤病理诊疗中的应用PPT优质课件.ppt

免疫组化在免疫组化在肿瘤病理诊肿瘤病理诊疗中的应用疗中的应用 免免疫疫组组织织（或或细细胞胞）化化学学技技术术是是免免疫疫学学与与组组织织化化学学两两种种技技术术的的结结合合，它它的的基基本本原原理理是是应应用用抗抗原原与与抗抗体体的的特特异异性性结结合合，再再用用显显色色剂剂显显色色达达到到标标记记细细胞胞的的某某种种抗抗原原物物质质的的定定性性与与定定位位检检测测技技术术，是是一一种种方方法法简简单单，且且有有效效的的肿瘤标记技术。肿瘤标记技术。当前在免疫组化技术围绕着提高敏感性当前在免疫组化技术围绕着提高敏感性与特异性不断改进和发展，但它仍有其局限与特异性不断改进和发展，但它仍有其局限性性应用于蛋白水平，敏感性与特异性不应用于蛋白水平，敏感性与特异性不足，故应与其他组织化学、电镜及分子生物足，故应与其他组织化学、电镜及分子生物学技术相结合。学技术相结合。一、免疫组化在诊断中的应用原则一、免疫组化在诊断中的应用原则1防防止止假假阳阳性性与与假假阴阴性性，防防止止操操作作中中的的污污染染，规范操作，设阳性与阴性对照。规范操作，设阳性与阴性对照。2选选用用2种种以以上上同同类类抗抗体体：目目前前肿肿瘤瘤均均为为相相关关抗抗原原，特特异异性性不不足足，多多种种同同类类抗抗体体可可提提高高阳性率。阳性率。3正确评价免疫组化的结果：其结果受抗正确评价免疫组化的结果：其结果受抗体、特异性与质量、操作、标本固定等多种体、特异性与质量、操作、标本固定等多种因素影响。因素影响。4合合理理的的选选择择抗抗体体：既既要要符符合合设设计计的的要要求求，价廉物美，分价廉物美，分1、2、3线抗体。线抗体。5待待检检标标本本抗抗原原保保存存要要好好：要要求求快快速速、新新鲜鲜、充充份份的的固固定定，合合适适固固定定剂剂，福福尔尔马马林林液液固固定定标标本要修复抗原。本要修复抗原。二、免疫组化在肿瘤诊断中的应用二、免疫组化在肿瘤诊断中的应用（一）上皮性肿瘤标记（一）上皮性肿瘤标记1角蛋白（角蛋白（Keratin）：）：一种中间丝蛋白，分一种中间丝蛋白，分（1）表皮角蛋白（）表皮角蛋白（Epidermal keratin，EK）鳞状上皮或高分化鳞癌标记；（鳞状上皮或高分化鳞癌标记；（2）细胞角蛋白（细胞角蛋白（cytokeratin，CK）低分子低分子角蛋白，对腺癌、移行细胞部及低分化鳞癌角蛋白，对腺癌、移行细胞部及低分化鳞癌标记。一般用广谱型角蛋白抗体为好，常用。标记。一般用广谱型角蛋白抗体为好，常用。2 上上 皮皮 膜膜 抗抗 原原（Epithelial membrane antigen，EMA）：这这亦亦是是常常用用的的上上皮皮细细胞胞标标记记抗抗体体，细细胞胞膜膜阳阳性性，用用Zankers、Bouin或或B5固固定定液液中中固固定定为为好好。其其在在低低分分化化和和未未分分化化上上皮皮中中表表达达好好，但但亦亦可可在在间间变变性性大大细细胞胞淋淋巴巴瘤、恶性横纹肌样瘤中表达。瘤、恶性横纹肌样瘤中表达。3桥粒蛋白桥粒蛋白（Desmoplakin）：主要标记上）：主要标记上皮桥粒，皮桥粒，Desmo仅表达于复层上皮。仅表达于复层上皮。4癌癌胚胚抗抗原原（Carcinoembrgonic antigen，CEA）：是是从从结结肠肠癌癌中中分分离离而而得得一一种种球球蛋蛋白白，定定位位于于细细胞胞膜膜上上，对对肠肠、胃胃、肺肺、胰胰、肝肝、乳乳腺腺等等腺腺癌癌标标记记阳阳性性，但但个个别别非非上上皮皮肿肿瘤瘤也也可阳性。可阳性。5甲胎蛋白甲胎蛋白（Alpha Fetoprotein，AFP）：）：由胎肝细胞提取的一种酸性糖蛋白，细胞浆由胎肝细胞提取的一种酸性糖蛋白，细胞浆和膜上表达，它对肝细胞癌、卵黄囊癌的特和膜上表达，它对肝细胞癌、卵黄囊癌的特异性标记。睾丸异性标记。睾丸（二）间叶源性肿瘤免疫组化标记（二）间叶源性肿瘤免疫组化标记间间叶叶组组织织包包括括纤纤维维结结缔缔组组织织、脂脂肪肪、肌肌肉肉、血血管管、骨骨、软软骨骨及及外外周周神神经经等等，间间叶叶组组织织肿肿瘤瘤往往往往由由多多向向分分化化的的原原始始间间叶叶细细胞胞产产生生，存存在共性，标记抗体特异性不足，有交叉反应。在共性，标记抗体特异性不足，有交叉反应。1波纹蛋白波纹蛋白（Vimentin，Vim）：是一种细）：是一种细胞中间丝蛋白抗体，在多数软组织肿瘤均可胞中间丝蛋白抗体，在多数软组织肿瘤均可表达，但纤维细胞较明显，在一些上皮性肿表达，但纤维细胞较明显，在一些上皮性肿瘤也有阳性反应。常用作间叶源与上皮源肿瘤也有阳性反应。常用作间叶源与上皮源肿瘤的第一线鉴别抗体瘤的第一线鉴别抗体 2结结蛋蛋白白（Desmin，Des）：平平滑滑肌肌、横横纹纹肌均可阳性。肌均可阳性。3肌肌动动蛋蛋白白（Actin）：平平滑滑肌肌、血血管管内内皮皮、肌上皮细胞标记，肌上皮细胞标记，HHF35特异。特异。4 肌肌 球球 蛋蛋 白白（Myotlobin），肌肌 红红 蛋蛋 白白（myosin）：对横纹肌标记较好。）：对横纹肌标记较好。5第因子第因子，CD34：对血管内皮细胞肿：对血管内皮细胞肿瘤标记较特异。瘤标记较特异。6S-100蛋蛋白白：是是一一种种周周围围神神经经雪雪旺旺氏氏细细胞胞特特异异标标记记抗抗体体，后后发发现现对对脂脂细细胞胞、朗朗格格罕罕氏氏细细胞胞、肌肌上上皮皮细细胞胞、黑黑色色素素细细胞胞及及其其肿肿瘤瘤均均可阳性。可阳性。7酸性或碱性磷酸酶：酸性或碱性磷酸酶：对骨与软骨肿瘤标对骨与软骨肿瘤标记好。记好。（三）双向分化肿瘤标记（三）双向分化肿瘤标记 即有上皮与间叶两种细胞分化的肿瘤的即有上皮与间叶两种细胞分化的肿瘤的标记，如滑膜肉瘤、间皮肉瘤、脑膜瘤、癌标记，如滑膜肉瘤、间皮肉瘤、脑膜瘤、癌肉瘤、上皮样肉瘤等，一般采用肉瘤、上皮样肉瘤等，一般采用CK、EMA标记上皮，标记上皮，Vim等标记间叶细胞。另外有一种等标记间叶细胞。另外有一种恶性纤维组织细胞瘤，由纤维细胞、肌纤维恶性纤维组织细胞瘤，由纤维细胞、肌纤维母细胞和组织细胞混合组成的恶性肿瘤，故母细胞和组织细胞混合组成的恶性肿瘤，故应用应用Vim和组织细胞标记来诊断。和组织细胞标记来诊断。（四四）神神经经细细胞胞、胶胶质质细细胞胞及及神神经经内内分分泌泌肿肿瘤标记瘤标记1神神经经原原特特异异性性烯烯醇醇化化酶酶（Neuron Specific Enolase，NSE）：神经原肿瘤标记。）：神经原肿瘤标记。2 胶胶 质质 纤纤 维维 酸酸 性性 蛋蛋 白白（Glial Fibrillaly Acidic protein，GFAP）：脑脑胶胶质质细细胞胞特特异异性标记抗体。性标记抗体。CD34+F8血管血管3神经内分泌肿瘤标记：包括类癌、胰岛、神经内分泌肿瘤标记：包括类癌、胰岛、垂体瘤、甲状腺髓样癌、皮肤垂体瘤、甲状腺髓样癌、皮肤Merkel细胞癌、细胞癌、原始神经外胚层瘤（原始神经外胚层瘤（PNET）等，目前应用）等，目前应用NSE、嗜铬蛋白颗粒、嗜铬蛋白颗粒A（CgA）及触突素）及触突素（Syn）三种抗体同时或两种一起用，因）三种抗体同时或两种一起用，因NSE不够特异。不够特异。（五）淋巴网状组织肿瘤（淋巴瘤）标记（五）淋巴网状组织肿瘤（淋巴瘤）标记1B细细胞胞标标记记抗抗体体：CD20（L26），Ig重重链链（IgG、M、A、E）、轻链（）、轻链（、）、）、CD79a。2T细细胞胞标标记记抗抗体体：CD45RO（UCHL-1），CD3较好。较好。CD56 3组织细胞标记抗体：组织细胞标记抗体：Mac387、CD14、抗、抗溶菌酶（溶菌酶（lysozyme）、抗糜蛋白酶（）、抗糜蛋白酶（-1 Antichymotrypsin）等。）等。4霍霍奇奇金金淋淋巴巴瘤瘤（Hodgkins lymphoma，HL）R-S细细胞胞（Reed-Sternberg cell）标标记记抗抗体：体：CD15、CD305 白白 细细 胞胞 共共 同同 抗抗 原原（leucocyte common Antigen，LCA）：它它对对淋淋巴巴网网状状细细胞胞均均为为膜膜阳性，作第一线抗体为好。阳性，作第一线抗体为好。注注：（1）国国际际上上将将百百余余种种标标记记抗抗体体统统称称为为CD（Cluster Designation）系列。）系列。（2）淋巴细胞标记与）淋巴细胞标记与R-S细胞多数为膜细胞多数为膜阳性，而阳性，而Ig与组织细胞标记为胞浆阳性。与组织细胞标记为胞浆阳性。（六）肿瘤细胞增殖活性与细胞凋亡标记抗体（六）肿瘤细胞增殖活性与细胞凋亡标记抗体 瘤瘤细细胞胞增增殖殖指指数数反反应应细细胞胞增增殖殖活活性性，是是瘤瘤细细胞胞新新生生（恶恶性性）状状况况的的客客观观指指标标，与与凋凋亡亡指指数数呈反比关系。常用抗体有：呈反比关系。常用抗体有：1增增殖殖细细胞胞核核抗抗原原（proliferative neuclear Antigen，PCNA），核阳性。），核阳性。2Ki-67，Brdu抗体抗体：原要求新鲜组织，新：原要求新鲜组织，新近有近有Ki-67石蜡切片标记抗体问世。石蜡切片标记抗体问世。3细细胞胞凋凋亡亡（Apoptosis）标标记记抗抗体体：开开始始发发现现细细胞胞凋凋亡亡发发生生于于正正常常细细胞胞受受基基因因调调控控性性自自然然性性死死亡亡。后后发发现现肿肿瘤瘤细细胞胞亦亦可可发发生生，而而且且某某些些药药物物放放、化化疗疗亦亦可可诱诱发发细细胞胞凋凋亡亡，故故成成了了研研究究肿肿瘤瘤发发生生、发发展展、治治疗疗的的热热点点。其其标记抗体有：标记抗体有：（1）凋凋亡亡抑抑制制基基因因蛋蛋白白抗抗体体：Bcl-2、Bcl-XL、mtp53。（2）促凋亡基因蛋白抗体：）促凋亡基因蛋白抗体：Fas/FasL系统，系统，wtp53、Bax、Bcl-xs、Fas等。等。Tunel标记。标记。（七七）癌癌基基因因与与抗抗癌癌基基因因，促促转转移移与与转转移移抑抑制制基因蛋白抗体标记。基因蛋白抗体标记。目前应用很多，因方法比分子生物学技术目前应用很多，因方法比分子生物学技术简单，但是这种结果不能直接反应肿瘤基因的简单，但是这种结果不能直接反应肿瘤基因的活性，只能间接反应肿瘤基因代谢活性，要注活性，只能间接反应肿瘤基因代谢活性，要注意正确评价它的价值。意正确评价它的价值。