淡水生物调查关键技术标准规范.doc

一　浮游生物调查
1　采样
1.1　采样点布设
1.1.1　原则
依照水体面积、形态、浮游植物生态分布特点和调查目等决定采样点数量。采样点应有代表性，能反映整个水体浮游生物基本状况。采样点设立数量见表1。
表1　采样点设立数量
5～20
水体面积（km2）
＜2
2～5
20～50
50～100
100～500
＞500
5～7
采样点数（个）
3
3～5
7～10
10～15
15～20
20～30
1.1.2　湖泊、水库
湖泊应兼顾在近岸和中部设点，可依照湖泊形状在湖心区、大湖湾中心区、进水口和出水口附近、沿岸浅水区（有水草区和无水草区）分散选设；水库应在库心区（河道型水库应分别在上游、中游、下游中心区）及大库湾中心区、重要进水口、出水口附近、重要排污口、入库江河汇合处设点。
1.1.3　江河
在干流上游、中游、下游，重要支流汇合口上游、汇合后与干流充分混合处，重要排污口附近、河口区等河段设立采样断面。依照江河宽设立断面采样点，普通不大于50m只在中心区设点；50m～100m可在两岸有明显水流处设点；超过100m应在左、中、右分别设立采样点。
1.2　采样层次
1.2.1　浮游植物采样
水深不大于3m时，只在中层采样；水深3m～6m时，在表层、底层采样，其中表层水在离水面0.5m处，底层水在离泥面0.5m处；水深6m～10m时，在表层、中层、底层采样；水深不不大于10m时，在表层、5m、10m水深层采样，10m如下处除特殊需要外普通不采样。
1.2.2　浮游动物采样
由水体深度决定，每隔0.5m、1m或2m取一种水样加以混合，然后取一某些作为浮游动物定量之用。
1.3　采样频次和采样时间
采集次数依研究目而定，采样次数可逐月或按季节进行，普通按季节进行。样品瓶必要贴上标签，标明采集时间、地点。
采样时间尽量保持一致，普通在上午8：00～10：00进行。
1.4　采样办法
1.4.1　浮游植物采样
定量样品在定性采样之前用采水器采集，每个采样点取水样1L，贫营养型水体应酌情增长采水量。泥沙多时需先在容器内沉淀后再取样。分层采样时，取各层水样等量混匀后取水样1L。大型浮游植物定性样品用25号浮游生物网在表层缓慢拖曳采集，注意网口与水面垂直，网口上端不要露出水面。
1.4.2　浮游动物采样
原生动物、轮虫和无节幼体定量可用浮游植物定量样品，如单独采集取水样量以1L为宜；定性样品采集办法同浮游植物。
枝角类和桡足类定量样品应在定性采样之前用采水器采集，每个采样点采水样10L～50L，再用25号浮游生物网过滤浓缩，过滤物放入标本瓶中，并用滤出水洗过滤网3次，所得过滤物也放入上述瓶中；定性样品用13号浮游生物网在表层缓慢拖曳采集。注意过滤网和定性样品采集网要分开使用。

2　样品固定

浮游植物样品及时用鲁哥氏液固定，用量为水样体积1％～1.5％。如样品需较长时间保存，则需加入37%～40％甲醛溶液，用量为水样体积4％。
原生动物和轮虫定性样品，除留一瓶供活体观测不固定外，固定办法同浮游植物。枝角类和桡足类定量、定性样品应及时用37%～40％甲醛溶液固定，用量为水样体积5％。

3　水样沉淀和浓缩
固定后浮游植物水样摇匀倒入固定在架子上1L沉淀器中，2h后将沉淀器轻轻旋转，使沉淀器壁上尽量少附着浮游植物，再静置24h。充分沉淀后，用虹吸管慢慢吸去上清液。虹吸时管口要始终低于水面，流速、流量不能太大，沉淀和虹吸过程不可摇动，如搅动了底部应重新沉淀。吸至澄清液1/3时，应逐渐减缓流速，至留下含沉淀物水样20mL～25（或30～40）mL，放入30（或50）mL定量样品瓶中。用吸出少量上清液冲洗沉淀器2次～3次，一并放入样品瓶中，定容到30（或50）mL。如样品水量超过30（或50）mL，可静置24 h后，或到计数前再吸去超过定容刻度余水量。浓缩后水量多少要视浮游植物浓度大小而定，正常状况下可用透明度作参照,依透明度拟定水样浓缩体积见表2，浓缩原则以每个视野里有十几种藻类为宜。
表2　依透明度拟定水样浓缩体积
透明度（cm）
1L 水样浓缩后水量（mL）
＞100
30～50
50～100
100～50
30～50
500～100
20～30
1000（不浓缩）
＜20
＞1000（稀释）
原生动物和轮虫计数可与浮游植物计数合用一种样品；枝角类和桡足类通惯用过滤法浓缩水样。

4　种类鉴定
优势种类应鉴定到种，其他种类至少鉴定到属。种类鉴定除用定性样品进行观测外，微型浮游植物需吸取定量样品进行观测，但要在定量观测后进行。

5　计数
5.1　浮游植物计数
5.1.1　计数框行格法
计数前需先核准浓缩沉淀后定量瓶中水样实际体积，可加纯水使其成30mL、50mL、100mL等整量。然后将定量样品充分摇匀，迅速吸出0.1mL置于0.1mL计数框内（面积20mm×20mm）。盖上盖玻片后，在高倍镜下选取3行～5行逐行计数，数量少时可全片计数。
1L水样中浮游植物个数（密度）可用下列公式计算：
………………………………………（1）
式中：
N——1L水样中浮游生物数量，个/L；
N0——计数框总格数；
N1——计数过方格数；
V1——1L水样经浓缩后体积，mL；
V0——计数框容积，mL；
Pn——计数浮游植物个数。
5.1.2　目镜视野法
一方面应用台微尺测量所用显微镜在一定放大倍数下视野直径，计算出面积。计数视野应均匀分布在计数框内，每片计数视野数可按浮游植物多少而酌情增减，普通为50个～300个，依浮游植物数拟定计算视野数见表3。
表3　依浮游植物数拟定计算视野数
浮游植物平均数（个/视野）
视野数（个）
1～2
300
2～5
200
5～10
100
＞10
50
1L水样中浮游植物个数（密度）可用下列公式计算：
………………………………………（2）
式中：
N——1L水样中浮游生物数量，个/L；
Cs——计算框面积，mm2
Fs——视野面积，mm2
Fn——每片计数过视野数；
V——1L水样经浓缩后体积，mL；
V0——计数框容积，mL；
Pn——计数浮游植物个数。
5.2　浮游动物计数
5.2.1　原生动物：吸出0.1mL样品，置于0.1mL计数框内，盖上盖玻片，在10×20倍显微镜下全片计数。每瓶样品计数两片取其平均值。
5.2.2　轮虫：吸出1mL样品，置于1mL计数框内，在10×10倍显微镜下全片计数。每瓶样品计数两片，取其平均值。
5.2.3　枝角类、桡足类：用5mL计数框将样品分若干次所有计数。如样品中个体数量太多，可将样品稀释50mL或100mL，每瓶样品计数两片，取其平均值。
5.2.4　无节幼体：如样品中个体数量不多，则和枝角类、桡足类同样所有计数；如数量诸多，可把过滤样品稀释，充分摇匀后取其中某些计数，计数3片～5片取其平均值。也可在轮虫样品中同轮虫一起计数。
5.2.5　计数前，充分摇匀样品，吸出迅速、精确。盖上盖玻片后，计数框内无气泡，无水样溢出。
5.2.6　单位体积浮游动物数量按下式计算
……………………………………………（3）
式中:
N——1L水样中浮游动物数量，个/L；
V——采样体积，L；
Vs——样品浓缩后体积，mL；
Va——计数样品体积，mL；
n——计数所获得个体数，个。
5.3　注意事项
每瓶样品计数两片取其平均值，每片成果与平均数之差不不不大于±15％，否则必要计数第三片，直至三片平均数与相近两数之差不超过均数15%为止，这两个相近值平均数即可视为计算成果。
浮游植物计数单位用细胞个数表达。对不易用细胞数表达群体或丝状体，可求出平均细胞数。浮游动物计数单位用个数表达。
某些个体一某些在视野中，另一某些在视野外这时可规定只计数上半某些或只计数下半某些。
6　生物量测定
浮游植物比重接近1，可直接采用体积换算成重量（湿重）。体积测定应依照浮游植物体型，按近来似几何形状测量必要长度、高度、直径等，每一种类至少随机测定50个，求出平均值，代入相应求积公式计算出体积。此平均值乘上1L水中该种藻类数量，即得到1L水中这种藻类生物量，所有藻类生物量和即为1L水中浮游植物生物量，单位为mg/L或g/m3。
种类形状不规则可分割为几种某些，分别按相似图形公式计算后相加。量大或体积大种类，应尽量实测体积并计算平均重量。其她种类可参照表D1。微型种类只鉴别到门，按大、中、小三级平均质量计算。极小（＜5μm）为00001 mg/104个；中档（5μm～10μm）为0.002mg/104个；较大（10μm～20μm）为0.005mg/104个。
原生动物、轮虫可用体积法求得生物体积，比重取l，再依照体积换算为重量和生物量。甲壳动物可用体长一体重回归方程，由体长求得体重（湿重）。无节幼体可按0.003mg湿重/个计算。
轮虫、枝角类、桡足类及其幼体可用电子天平直接称重。即先将样本分门别类，选取30个～50个样本，用滤纸将其表面水分吸干至没有水痕，置天平上称其湿重。个体较小增长称重个数。

二　着生生物调查
只进行定性检查。重要刮取或剥离水中浸没物诸如石块、木桩、树枝、水草或硬底泥等表层藻膜、丝状藻和粘稠状生长物，用鲁哥试剂固定。室内显微镜下鉴定种类构成。
2.1　采样
2.1.1　采样点布设
采样点数量依着生生物分布及丰度而定，普通5个～6个。采样点布设在水体浅水区、沿岸带和大型水生植物分布区等水域，某些受污染等特殊点也需采样观测。
2.1.2　采样办法
水体中有大量大型水生植物分布，则采集整株水草，带回实验室。在室内从水草根部起，依次刮取植株上所有着生生物。除此外，水底石块、木桩、树枝等基质上着生生物可用刀片或硬刷刮（刷）到盛有蒸馏水样品瓶中，再将基质冲洗干净，冲洗液装入样品瓶中。现场来不及刮样时，可将基质带回室内刮取。
2.2样品解决
着生藻类样品解决：样品用鲁哥氏液固定，用量为水样体积1％～1.5％。
着生原生动物样品解决：将样本连同基质分别放入盛有采样点水样广口瓶内，其中一瓶用鲁哥氏液固定，另一瓶不加固定液，供活体观测用。
2.3　种类鉴定
优势种类须鉴定到种，其她种类至少鉴定到属。

三　水体初级生产力测定
1 浮游植物叶绿素a测定
1.1水样采集与保存
可依照工作需要进行分层采样或混合采样。湖泊、水库采样500rnl,池塘300m1，采样量视浮游植物分布量而定，若浮游植物数量较少，也可采样1000ml。采样点及采样时间同浮游杭物。
水样采集后应放在荫凉处，避免日光直射。最佳及时进行测定预解决，如需通过一段时间( 4～48h )方可进行预解决，则应将水样保存在低温( 0～4℃)避光处。在每升水样中加入1 %碳酸镁悬浊液lrnl，以防止酸化引起色素溶解。水样在冰冻状况下(-20℃)最长可保存30d。
1.2.仪器设备
①分光光度计。
②真空泵。
③离心机。
④乙酸纤维滤膜(孔径0.45)。
⑤抽滤器。
@组织研磨器或其她细胞破碎器。
⑦碳酸镁粉末。
⑧90%丙酮。
1.3实验程序
①以离心或过滤浓缩水样，在抽滤器上装好乙酸纤维滤膜。倒入定量体积水样进行抽滤，抽滤时负压不能过大(约为50kPa)。水样抽完后，继续抽I～2min，以减少滤膜上水分。如需短期保存1～2d时，可放入普通冰箱冷冻，如需长期保存(30d)，则应放入低温冰箱(-20℃)保存。
②取出带有浮游植物滤膜，在冰箱内低温干燥6～8h后放入组织研磨器中，加入少量碳酸镁粉末及2～3m1 90%丙酮，充分研磨，提取叶绿素a。用离心机(3000～4000r/min)离心10rnin。将上清液倒入5ml或l0ml容量瓶中。
③再用2～3ml90%丙酮，继续研磨提取，离心10min，并将上清液再转入容量瓶中。重复1～2次，用90%丙酮定容为5ml或10ml，摇匀。
④将上清液在分光光度计上，用lcm光程比色皿，分别读取750nm、663nm、645nm、630nm波长吸光度，并以90%丙酮作空白吸光度测定，对样品吸光度进行校正。
1.4 计算办法
叶绿素a含量按如下公式计算：

式中：V—水样体积(L)；
D—吸光度；
V1—提取液定容后体积(ml)；
δ—比色皿光程(cm)。

2 蓝绿藻蛋白测定
采用EX02多参数水质监测仪测定，每月测定1次。

附件1：浮游植物示例浮游植物.ppt
附件2：浮游动物示例浮游动物.ppt