外周血宏基因组二代测序诊断侵袭性肺曲霉病的运用.pdf

论著外周血宏基因组二代测序诊断侵袭性肺曲霉病的运用丁志荣 曾海文 林天来 陈伟文(福建医科大学附属泉州第一医院重症医学科,泉州 3 6 2 0 0 0)【摘要】目的 通过外周血宏基因组二代测序识别侵袭性肺曲霉病,证明其在侵袭性肺曲霉病临床诊断中的重要作用。方法 报道福建医科大学附属泉州第一医院重症医学科收住的3例通过外周血宏基因二代测序识别诊断的侵袭性肺曲霉病病例,分析总结外周血宏基因二代测序在诊断侵袭性肺曲霉病的可行性。结果 在3例病例中,病例1无基础疾病,病例2合并慢性阻塞性肺病,病例3存在T淋巴母细胞性淋巴瘤/白血病并化疗后粒细胞缺乏。通过支气管肺泡灌洗液(b r o n-c h o a l v e o l a r l a v a g e f l u i d,B A L F)培养、痰培养、外周血宏基因二代测序、血G试验、GM试验等方法,诊断为侵袭性肺曲霉病。结论 通过外周血宏基因二代测序检测曲霉c f D NA可用于侵袭性肺曲霉病的诊断,是一种快速、简单的诊断方法。【关键词】侵袭性肺曲霉病;诊断;外周血;宏基因组二代测序【中图分类号】R 5 1 9.8 【文献标志码】A 【文章编号】1 6 7 3-3 8 2 7(2 0 2 3)1 8-0 4 1 1-0 5A p p l i c a t i o n o f p e r i p h e r a l b l o o d m e t a g e n o m i c n e x t g e n e r a t i o n s e q u e n c i n g i n t h e d i a g n o s i s o f i n v a s i v e p u l m o-n a r y a s p e r g i l l o s i sD I NG Z h i r o n g,Z E NG H a i w e n,L I N T i a n l a i,CHE N W e i w e n(D e p a r t m e n t o f C r i t i c a l C a r e,Q u a n z h o u F i r s t H o s p i t a l A f f i l i a t e d t o F u j i a n M e d i c a l U n i v e r s i t y,q u a n z h o u 3 6 2 0 0 0,C h i-n a)【A b s t r a c t】O b j e c t i v e M e t a g e n o m i c n e x t g e n e r a t i o n s e q u e n c i n g w a s u s e d t o i d e n t i f y i n v a s i v e p u l m o n a r y a s p e r g i l l o s i s,w h i c h p r o v e d i t s i m p o r t a n t r o l e i n t h e c l i n i c a l d i a g n o s i s o f i n v a s i v e p u l m o n a r y a s p e r g i l l o s i s.M e t h o d s T h r e e c a s e s o f i n v a-s i v e p u l m o n a r y a s p e r g i l l o s i s w e r e i d e n t i f i e d a n d d i a g n o s e d b y p e r i p h e r a l b l o o d m e t a g e n o m i c n e x t g e n e r a t i o n s e q u e n c i n g i n t h e D e p a r t m e n t o f c r i t i c a l c a r e m e d i c i n e.T h e f e a s i b i l i t y o f p e r i p h e r a l b l o o d m e t a g e n o m i c n e x t g e n e r a t i o n s e q u e n c i n g i n t h e d i a g-n o s i s o f i n v a s i v e p u l m o n a r y a s p e r g i l l o s i s w a s a n a l y z e d a n d s u mm a r i z e d.R e s u l t s O f t h e t h r e e c a s e s,c a s e 1 h a d n o u n d e r l y-i n g d i s e a s e,c a s e 2 h a d c h r o n i c o b s t r u c t i v e p u l m o n a r y d i s e a s e,a n d c a s e 3 h a d T-l y m p h o b l a s t i c l y m p h o m a/l e u k e m i a w i t h a-g r a n u l o c y t o s i s a f t e r c h e m o t h e r a p y.I n v a s i v e p u l m o n a r y a s p e r g i l l o s i s w a s d i a g n o s e d b y b r o n c h o a l v e o l a r l a v a g e f l u i d(B A L F)c u l t u r e,s p u t u m c u l t u r e,p e r i p h e r a l b l o o d m e t a g e n o m i c n e x t g e n e r a t i o n s e q u e n c i n g,b l o o d G t e s t,GM t e s t a n d o t h e r m e t h-o d s.C o n c l u s i o n s D e t e c t i o n o f A s p e r g i l l u s c f D NA b y p e r i p h e r a l b l o o d m e t a g e n o m i c n e x t g e n e r a t i o n s e q u e n c i n g,w h i c h i s a r a p i d,a n d s i m p l e d i a g n o s t i c m e t h o d,c a n b e u s e d f o r t h e d i a g n o s i s o f i n v a s i v e p u l m o n a r y a s p e r g i l l o s i s.【K e y w o r d s】i n v a s i v e p u l m o n a r y a s p e r g i l l o s i s;d i a g n o s i s;p e r i p h e r a l b l o o d;m e t a g e n o m i c n e x t g e n e r a t i o n s e q u e n c i n gC h i n J M y c o l,2 0 2 3,1 8(5):4 1 1-4 1 5 从定植到侵袭性感染,曲霉与许多下呼吸道疾病有关。大多数这类疾病要么免疫反应过度(如过基金项目:泉州市医疗卫生领域科技计划项目(2 0 2 3 N S 0 3 7)作者 简 介:丁 志 荣,男(回 族),本 科,副 主 任 医 师.E-m a i l:1 3 3 8 5 9 5 1 9 7 81 8 9.c n通信作者:曾海文,E-m a i l:c c m z e n g h a i w e n 1 6 3.c o m敏),要么免疫反应不足 如侵袭性肺曲霉病(i n v a-s i v e p u l m o n a r y a s p e r g i l l o s i s,I P A)。I P A是最严重的曲霉相关感染类型,预后最差1-2,死亡率高达5 0%3。已知的I P A危险因素包括以下几种免疫抑制状态:长时间中性粒细胞减少症、T细胞缺陷、血液系统恶性肿瘤伴或不伴干细胞移植、获得性免114 中国真菌学杂志 2 0 2 3年1 0月 第1 8卷 第5期 C h i n J M y c o l,O c t o b e r 2 0 2 3,V o l 1 8,N o.5 疫缺陷综合征(艾滋病)、慢性肉芽肿病、实体器官移植和长时间大剂量类固醇治疗4-6等。I P A的发病率正在增加,且在非免疫功能低下患者中也有越来越多的报道,特别是在危重症患者中7-8,一项对尸检结果的研究显示,尽管诊断技术的改进,7 5%的侵袭性真菌疾病不能在死前诊断出来9。研究显示接受伏立康唑预防和未接受伏立康唑预防的血液病合并I P A患者9 0 d死亡率分别为4 6%和5 9.3%1 0,延迟诊断和治疗是I P A高死亡率的重要原因1 1。本研 究 通 过 外 周 血 宏 基 因 组 二 代 测 序(mNG S)识别I P A,证明其在I P A临床诊断中具有重要作用。现报道3例患者的临床症状、诊断、治疗及预后。1 资料和方法1.1 一般资料收集福建医科大学附属泉州第一医院重症医学科在2 0 2 0年9月9日至2 0 2 2年9月1 5日3例外周血mNG S检测曲霉阳性的患者,并记录人口学资料、临床症状、影像学检查结果、实验室检查结果、治疗和预后。根据2 0 1 9年欧洲癌症研究和治疗组织和真菌病研究小组(E O R T C/M S G)标准,我们将I P A分为确诊、临床诊断和拟诊。同时各病例检测血和支气管肺泡灌洗液(B A L F)1,3-D-葡聚糖(G)试验、半乳甘露聚糖(GM)试验,G试验阳性阈值为7 0 p g/m L,GM试验阳性 阈值为1.0 g/L1 2。所有数据在分析前均为匿名数据。本研究符合 世界医学协会赫尔辛基宣言 相关要求。1.2 mNG S操作步骤1 3-1 4临床样本按照严格的无菌处理标准采集。使用H o s t Z E R OTM M i c r o b i a l D NA K i t试剂盒提取D NA。文库构建和测序:使用KA P A H y p e r-P l u s L i b r a r y P r e p a r a t i o n K i t试剂盒,按照操作说明构建文库;使用A g i l e n t 2 1 0 0 B i o a n a l y z a r 对文库插入片段的长度进行质控分析,应用Q u b i t d s D-NA H S A s s a y K i t(T h e r m o F i s h e r S c i e n t i f i c I n c.)质控文库浓度;测序进行使用N e x t S e q C N 5 0 0平台。通过分析去除低质量和长度小于3 5 b p的序列进行生物信息分析;然后对比计算减去人类参考基因组使用B u r r o w s-Wh e e l e r,去除的低复杂度的序列的数据同时对比到病毒、细菌、真菌和寄生虫4个微生物基因组数据进行分类,生成高质量的测序数据。下载自国家生物技术信息中心数据分类参考(f t p:/f t p.n c b i.n l m.n i h.g o v/g e n o m e s/)。宏基因组分析解释的阈值标准:对于不同类型的微生物,阈值设置如下,细菌5 0;真菌/支原体/衣原体:序列数3;D NA病毒:序列数3;寄生虫:序列数1 0 0;结核分枝杆菌复合物(MT C):序列数11 5。2 结 果2.1 诊断流程3例经外周血mNG S检测为曲霉阳性的患者,其他检查结果均证实3例患者均有I P A。纳入患者的流程图如图1所示。图1 3例I P A诊断过程F i g.1 T h e d i a g n o s t i c p r o c e s s o f 3 c a s e s2.2 病例描述病例1,男性,4 1岁,2 0 2 0年9月9日,因“咳嗽、气喘伴发热4 d”急诊入院,2 0 2 0年9月5日开始出现咳嗽,可咳出少许白色稀痰,伴气喘无法平卧休息,发热体温最高达4 0,就诊当地医院予头孢替安、左氧氟沙星抗感染气喘未见改善,仍反复发热。否认任何基础性疾病,否认吸烟史,机会性饮酒,具体饮酒量不祥。实验室检查(见表1):白细胞计数1 4.2 71 09/L;红细胞计数4.8 41 01 2/L;血红蛋白1 6 2 g/L;血小板1 3 21 09/L;中性粒细胞1 3.2 11 09/L;淋巴细胞4.11 09/L;降钙素原0.3 n g/m l;C-反应蛋白6 0.5 m g/L;2 0 2 0年9月1 4日胸部C T:双肺纹理增多(见图2 A、B)。入院诊断:重症肺炎,呼吸衰竭。入院后给予无创呼吸机辅助通气,亚胺培南西司他丁抗感染、甲泼214 中国真菌学杂志 2 0 2 3年1 0月 第1 8卷 第5期 C h i n J M y c o l,O c t o b e r 2 0 2 3,V o l 1 8,N o.5 尼龙抗炎等处理。入院2 3 h后因呼吸衰竭加重转入重症医学科予气管插管接呼吸机辅助通气,并加左氧氟沙星抗感染等处理,同时进行了痰培养,B A L F培养,外周血mNG S、血G试验和GM试验等检查。呼吸衰竭未见改善,仍反复发热。2 0 2 0年9月1 2日,外周血mN G S检测提示烟曲霉感染(见表2)。2 0 2 0年9月1 3日,痰培养及肺泡灌洗液培养提示烟曲霉;2 0 2 0年9月1 4日血清G试验检测:3 1 6.7 p g/m L,GM试验:4.3 7 5 g/L;肺泡灌洗液G试验:2 7 2 p g/m L,肺泡灌洗液GM试验4.4 3 g/L。外周血mN G S检测阳性后予伏立康唑抗真菌治疗,4 d后因型呼吸衰竭死亡。病例2,男性,7 8岁,因“咳嗽、咳痰、气喘4 0年,加重并发热1 2 d”2 0 2 2年7月2 4日急诊入住重症医学科。有反复气喘发作住院治疗病史,并长期不规则布地奈德粉吸入剂(普米克都保)控制症状。既往有高血压病史2 0余年,未规则监测及控制血 压;吸 烟5 0余 年,2 0支/天。查 体:体 温3 8,呼吸4 0次/分,桶状胸,双肺呼吸音低,未闻及干湿性啰音。肺部C T提示双肺炎症,慢性支气管炎,肺气肿(见图2 C、D)。入院诊断:重症肺炎,呼吸衰竭,慢性阻塞性肺疾病急性加重。入院后予气管插管接呼吸机辅助通气,并与头孢哌酮/舒巴坦联合伏立康唑抗感染治疗及对症处理,同时送检痰培养、支气管肺泡灌洗液培养,支气管肺泡灌洗液G/GM试验,外周血G/GM试验,支气管肺泡灌洗液和外周mNG S。2 0 2 2年7月2 5日外周血mNG S提示烟曲霉及黄曲霉感染(见表2);肺泡灌洗液mNG S提示屎肠球菌、白念珠菌、烟曲霉、黄曲霉、单纯疱疹病毒1型;血G试验:4 8 9.1 p g/m L,血GM试验:3.4 9 g/L;肺泡灌洗液G试验:6 0 0 p g/m L,肺泡灌洗液GM试验4.2 1 g/L(见表1);2 0 2 2年7月2 7日痰培养结果为烟曲霉。经治疗病情未改善2 0 2 2年7月2 9日放弃治疗死亡。病例3,女性,6 2岁,2 0 2 1年7月2 6日诊断为T淋巴母细胞 淋巴瘤/白血病(T-L B L/L),给予CHO P方案(环磷酰胺+表柔比星+长春地辛+泼尼松)化疗8个疗程。2 0 2 2年8月2 5日再次入院予原方案化疗,化疗后出现骨髓抑制(见表1)。2 0 2 2年9月9日出现发热,最高体温4 0,血液内科给予哌拉西林/他唑巴坦抗感染治疗,未见改善,2 0 2 2年9月1 1日出现意识模糊,呼吸困难,血表1 实验室检查和治疗T a b.1 L a b o r a t o r y e x a m i n a t i o n a n d t r e a t m e n t病例1病例 2病例 3白细胞(1 09)1 4.32 1.10.1中性粒细胞(1 09)1 3.22 0.40.0淋巴细胞(1 09)4.11.1 00.0L DH(U/L)3 5 9.02 9 5.01 2 6.0C R P(m g/L)6 0.51 9 7.51 9 8.6P C T(n g/m L)0.36.71 3.4血G试验阳性阳性阴性血GM试验阳性阳性阳性B A L F G试验阳性阳性未送检B A L F GM试验阳性阳性未送检外周血 mN G S烟曲霉烟曲霉黄曲霉铜绿假单胞菌阴沟肠杆菌黄曲霉屎肠球菌B A L F mN G S未送检屎肠球菌白念珠菌烟曲霉黄曲霉单 纯 疱 疹病毒1型未送检血培养阴性阴性铜绿假单胞菌屎肠球菌痰培养烟曲霉烟曲霉黄曲霉B A L F培养烟曲霉烟曲霉不适用治疗伏立康唑伏立康唑氟 康 唑+伏 立康唑注:L DH,乳酸脱氢酶;C R P,C-反应蛋白;P C T,降钙素原;G试验,1,3-D-葡聚糖试验;GM试验,半乳甘露聚糖试验;mNG S,宏基因二代测序;B A L F,支气管肺泡灌洗液。压下降,行肺部C T提示:双肺炎症(见图2 E、F),考虑脓毒症,呼吸衰竭转入重症医学科。给予万古霉素联合亚胺培南西司他丁、氟康唑抗感染,同时送检痰培养、肺泡灌洗液培养、血G试验、GM试验,外周血mNG S等检查。2 0 2 2年9月1 3日外周血mNG S提示铜绿假单胞菌、阴沟肠杆菌、黄曲霉、屎肠球菌(见表2),调整氟康唑为伏立康唑抗真菌。2 0 2 2年9月1 2日血G试验3 7.5 p g/m L,血GM试验1.9 8 g/L。2 0 2 2年9月1 4日血培养提示铜绿假单胞菌、屎肠球菌,痰培养、支气管肺泡灌洗液培养结果为黄曲霉。2 0 2 2年9月1 5日因脓毒症休克、呼吸衰竭死亡。314 中国真菌学杂志 2 0 2 3年1 0月 第1 8卷 第5期 C h i n J M y c o l,O c t o b e r 2 0 2 3,V o l 1 8,N o.5 表2 外周血mN G S结果T a b.2 R e s u l t s o f p e r i p h e r a l b l o o d mN G S病例样本mN G S检测结果mN G S系列数1外周血烟曲霉7 6 52外周血烟曲霉黄曲霉4 7 81 93外周血铜绿假单胞菌阴沟肠杆菌黄曲霉屎肠球菌3 6 3 9 5 05 2 41 9 57 33 讨 论近年来,侵袭性曲霉病(i n v a s i v e a s p e r g i l l o s i s,I A)的发病率迅速增加,据估计,全世界每年的患者人数已从2 0万增加到3 0多万,年平均发病率为4.1例/1 0万人,易发生在免疫抑制患者,其中I P A占9 0%以上,并且死亡率也非常高1 6。目前临床上I P A常用的诊断方法包括胸部计算机断层扫描(C T)、半乳甘露聚糖试验、直接显微镜检查、真菌培养、血 浆、血 清、全 血 或 支 气 管 肺 泡 灌 洗 液(B A L F)聚合酶链式反应(P C R)和组织病理学等。I P A的胸部C T可表现为晕征、空气新月征、树芽征等,但在细菌感染、伴有组织性肺炎的闭塞性细支气管炎、伴有多血管炎的肉芽肿病、原发性或转移性癌症和局灶性肺损伤中也能观察到,图像往往是非典型的,很难通过影像学与其他感染相区分。1,3-D-葡聚糖试验、GM试验、直接镜检、真菌培养等也有敏感性低、特异性差的缺点1 7-1 8。尽管组织病理学是金标准,但血液病、重症患者的身体状况和凝血功能往往很差,有创获取组织标本的方法往往难以耐受。B A L F基因检测的敏感性和特异性均高于血液基因检测和培养1 7,患者病情危重时难以接受气管镜检查,使其临床应用受到很大限制,因此,非常需要一种快速且无创的方法来准确诊断I P A。宏基因组二代测序(mNG S)是一种无偏倚的方法,理论上可以检测临床样本中的所有病原体,特别适用于罕见、新颖和非典型的复杂传染病病因,比传统培养方法灵敏度更高1 9。虽然曲霉很难在外周血中生长,但生长在肺泡中的菌丝可以穿透空气和血液屏障,侵蚀毛细血管内皮细胞,侵入小动脉和肺实质,在这个过程中,D NA片段可能会图2 胸部C T表现:病例1胸部C T(A、B)双肺纹理增粗,可见树芽征;病例2胸部C T(C、D)双肺多发条索状、斑片状高密度影,双肺实质密度减低,可见多发囊泡状低密度影;病例3胸部C T(E、F)可见多发斑片状、条索状高密度影,右侧胸腔见少量胸腔积液F i g.2 F i n d i n g s o f c h e s t C T s c a n:C h e s t C T(A a n d B)o f c a s e 1 s h o w e d b i l a t e r a l l u n g t e x t u r e t h i c k e n i n g a n d t r e e-i n-b u d s i g n.T h e c h e s t C T o f c a s e 2(C,D)s h o w e d m u l t i p l e c o r d s a n d p a t c h y h i g h-d e n s i t y s h a d o w s i n b o t h l u n g s,a n d t h e d e n s i t y o f b i l a t e r a l l u n g p a r e n c h y m a w a s r e-d u c e d,w i t h m u l t i p l e v e s i c u l a r l o w-d e n s i t y s h a d o w s.C h e s t C T(E,F)o f c a s e 3 s h o w e d m u l t i p l e p a t c h y a n d c o r d-l i k e h i g h-d e n s i t y s h a d o w s,a n d a s m a l l a m o u n t o f p l e u r a l e f f u s i o n i n t h e r i g h t t h o r a x414 中国真菌学杂志 2 0 2 3年1 0月 第1 8卷 第5期 C h i n J M y c o l,O c t o b e r 2 0 2 3,V o l 1 8,N o.5 进入血液,所以外周血P C R检测可用于诊断I P A,P C R检测提高了曲霉早期诊断的可能性,P C R技术检测曲霉存在方法学标准化困难,对实验场地的配置、实验操作规范性、操作人员的要求较高,以及传统P C R、巢式P C R技术存在容易污染样本、假阳性率高、不能量化等缺点,未能大规模应用。已证实血浆mNG S可以识别重症细菌性肺炎患者呼吸道病原体进入血循环中D NA2 0,但血浆mNG S能否用于I P A的诊断尚不清楚。本研究3例患者均通过外周血mNG S及时被诊断为曲霉感染,病例2和病例3还发现为混合感染,治疗期间血培养未能培养出曲霉,我们的研究表明,外周血mNG S可以同时检测引起肺部感染的细菌和真菌感染,有助于快速明 确 病 情 和 调 整 治 疗 方 案。H o n g等2 1在2 0 1 8年首次使用血浆NG S技术,确诊的侵袭性真菌感染的病原体,包括曲霉菌属和非曲霉菌属,在9例患者中,7例血浆NG S上检测到活检中发现的相同真菌。我们的研究也证实了外周血mNG S可以用于I P A的诊断,但外周血mNG S的检测效率还需要大规模的临床试验来证实。本研究3例患者均在发热后采集外周血标本,病程中未再进行外周血mNG S检测,因此,曲霉c f D NA何时会存在于外周血中,何时采集外周血、外周血采血消毒标准怎么把握也尚不清楚,运用外周血mNG S诊断I P A仍然是需要进一步探索的课题。本研究有一定的局限性。首先,这是一项回顾性研究,可能存在一定的偏倚。第二,本研究3例患者因血小板低或身体状况不佳,不能耐受C T引导下经皮肺穿刺或气管镜下气管穿刺,没有病理结果,虽然3例病例都有微生物学证据且G试验、GM试验阳性,但它们毕竟不是I P A诊断的金标准,所以存在不是曲霉感染的可能性。第三,本研究样本量非常小,诊疗过程中也只进行了1次的外周血mNG S,无法确定曲霉c f D NA在外周血中的存在时间。综上所述,本研究证实了通过外周血mNG S检测曲霉c f D NA可用于I P A的诊断,且是一种快速、简单、无创的诊断方法,但目前mNG S检测费用昂贵,临床运用受到一定的限制。参 考 文 献1 KA S HE F I F I E,S E Y E D I S J,Z OMO R O D I AN K,e t a l.S u c c e s s f u l t r e a t m e n t o f p u l m o n a r y a s p e r g i l l o s i s d u e t o A s-p e r g i l l u s f u m i g a t u s i n a c h i l d a f f f f e c t e d b y s y s t e m i c l u p u s e r y t h e m a t o s u s:a c a s e r e p o r t f r o m N o r t h e a s t e r n I r a nJ.C l i n C a s e R e p,2 0 2 1,9(5):e 0 4 2 4 8.2 Z AN GAN EH E,Z A R R I N F A R H,R E Z A E E T A L A B F,e t a l.P r e d o m i n a n c e o f n o n-f u m i g a t u s A s p e r g i l l u s s p e c i e s a-m o n g p a t i e n t s s u s p e c t e d t o p u l m o n a r y a s p e r g i l l o s i s i n a t r o p i c a l a n d s u b t r o p i c a l r e g i o n o f t h e M i d d l e E a s tJ.M i-c r o b P a t h o g,2 0 1 8,1 1 6:2 9 6-3 0 0.D O I:1 0.1 0 1 6/j.m i c p a t h.2 0 1 8.0 1.0 4 7 3 HE R B R E C HT R,D E NN I N G D W,P A T T E R S ON T F,e t a l.V o r i c o n a z o l e v e r s u s a m p h o t e r i c i n B f o r p r i m a r y t h e r a p y o f i n v a s i v e a s p e r g i l l o s i sJ.N E n g l J M e d,2 0 0 2,3 4 7(6):4 0 8-4 1 5.4 G E R S ON S L,T A L B O T G H,HURW I T Z S,e t a l.P r o-l o n g e d g r a n u l o c y t o p e n i a:t h e m a j o r r i s k f a c t o r f o r i n v a s i v e p u l m o n a r y a s p e r g i l l o s i s i n p a t i e n t s w i t h a c u t e l e u k e m i aJ.A n n I n t e r n M e d,1 9 8 4,1 0 0(3):3 4 5-3 5 1.5 S OU B AN I A O,CHAN D R A S E KA R P H.T h e c l i n i c a l s p e c t r u m o f p u l m o n a r y a s p e r g i l l o s i sJ.C h e s t,2 0 0 2,1 2 1(6):1 9 8 8-1 9 9 9.6 S E GA L B H.A s p e r g i l l o s i sJ.N E n g l J M e d,2 0 0 9,3 6 0(1 8):1 8 7 0-1 8 8 4.7 D OM I N E L L I G S,S HA I P AN I C H T.U l c e r a t i v e t r a c h e o-b r o n c h i t i s d u e t o A s p e r g i l l u sJ.J B r o n c h o l o g y I n t e r v P u l-m o n o l,2 0 1 3,2 0(4):3 2 6-3 2 9.8 T AVA Z Z I G,V I A G,MA R Z AN I F C,e t a l.I n v a s i v e p u l-m o n a r y a s p e r g i l l o s i s a f t e r n e a r-d r o w n i n gJ.L a n c e t I n f e c t D i s,2 0 1 6,1 6(1 2):1 4 3 0.9 C HAM I L O S G,L UNA M,L EW I S R E,e t a l.I n v a s i v e f u n g a l i n f e c t i o n s i n p a t i e n t s w i t h h e m a t o l o g i c m a l i g n a n c i e s i n a t e r t i a r y c a r e c a n c e r c e n t e r:a n a u t o p s y s t u d y o v e r a 1 5-y e a r p e r i o d(1 9 8 9-2 0 0 3)J.H a e m a t o l o g i c a,2 0 0 6,9 1(7):9 8 6-9 8 9.1 0 B UD I N S,S A LMAN T ON-GA R C I A J,KO EHL E R P,e t a l.V a l i d a t i o n o f t h e E QUA L a s p e r g i l l o s i s s c o r e b y a n a l y-s i n g g u i d e l i n e a d h e r e n t m a n a g e m e n t o f i n v a s i v e p u l m o n a r y a s p e r g i l l o s i sJ.J A n t i m i c r o b C h e m o t h e r a p,2 0 2 1,7 6(4):1 0 7 0-1 0 7 7.1 1 A R D I P,D A I E-GHA Z V I N I R,HA S HEM I S J,e t a l.S t u d y o n i n v a s i v e a s p e r g i l l o s i s u s i n g g a l a c t o m a n n a n e n z y m e i mm u n o a s s a y a n d d e t e r m i n i n g a n t i f u n g a l d r u g s u s c e p t i b i l i t y a m o n g h o s p i t a l i z e d p a t i e n t s w i t h h e m a t o l o g i c m a l i g n a n c i e s o r c a n d i d a t e s f o r o r g a n t r a n s p l a n t a t i o nJ.M i c r o b P a t h o g,2 0 2 0,1 4 7:1 0 4 3 8 2.D O I:1 0.1 0 1 6/j.m i c p a t h.2 0 2 0.1 0 4 3 8 2.1 2 D ONN E L L Y J P,CHE N S C,KAU F FMAN C A,e t a l.R e v i s i o n a n d u p d a t e o f t h e c o n s e n s u s d e f i n i t i o n s o f i n v a s i v e f u n g a l d i s e a s e f r o m t h e E u r o p e a n O r g a n i z a t i o n f o r R e s e a r c h a n d T r e a t m e n t o f C a n c e r a n d t h e M y c o s e s S t u d y G r o u p E d-u c a t i o n a n d R e s e a r c h C o n s o r t i u mJ.C l i n I n f e c t D i s,2 0 2 0,7 1(6):1 3 6 7-1 3 7 6.(下转第4 2 2页)514 中国真菌学杂志 2 0 2 3年1 0月 第1 8卷 第5期 C h i n J M y c o l,O c t o b e r 2 0 2 3,V o l 1 8,N o.5 4 5 0-4 5 7.1 1 P E R R Y W A,P AU L U S J K,P R I C E L L,e t a l.A s s o c i a-t i o n b e t w e e n l y m p h o p e n i a a t 1 m o n t h p o s t t r a n s p l a n t a n d i n-f e c t i o u s o u t c o m e s o r d e a t h i n h e a r t t r a n s p l a n t r e c i p i e n t sJ.C l i n I n f e c t D i s,2 0 2 1,7 3(1 1):e 3 7 9 7-e 3 8 0 3.1 2 WE B B B J,B L A I R J E,KU S N E S,e t a l.C o n c u r r e n t p u l-m o n a r y A s p e r g i l l u s f u m i g a t u s a n d m u c o r i n f e c t i o n i n a 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