动物细胞培养.ppt

专题2.2动物细胞工程动物细胞工程常用的技术手段动物细胞工程常用的技术手段动物细胞培养动物细胞培养基础基础动物细胞融合动物细胞融合生产单克隆抗体生产单克隆抗体 核移植核移植纳纳归归题题问问一、动物细胞培养一、动物细胞培养为什么要进行动为什么要进行动物细胞培养？物细胞培养？材料一：在治疗烧伤病人时，通常是取病人材料一：在治疗烧伤病人时，通常是取病人的健康皮肤进行自体移植。对于大面积烧伤的健康皮肤进行自体移植。对于大面积烧伤的病人，自体健康皮肤非常有限，使用他人的病人，自体健康皮肤非常有限，使用他人皮肤来源又不足，且会产生排斥反应。怎样皮肤来源又不足，且会产生排斥反应。怎样才能获得大量的自体健康皮肤呢？才能获得大量的自体健康皮肤呢？材料二：许多动物细胞能分泌蛋白质，如抗材料二：许多动物细胞能分泌蛋白质，如抗体等。但是，单个细胞产生的蛋白质很少，体等。但是，单个细胞产生的蛋白质很少，怎样才能获得大量的分泌蛋白呢？怎样才能获得大量的分泌蛋白呢？境境情情设设创创、什么是动物细胞培养？、什么是动物细胞培养？、具体培养过程、具体培养过程（1 1）为什么要把动物组织分散成单个细胞？）为什么要把动物组织分散成单个细胞？完成完成4444页两个问号。页两个问号。（2 2）什么叫细胞贴壁？什么叫接触抑制？）什么叫细胞贴壁？什么叫接触抑制？（3 3）什么叫原代培养？什么叫传代培养？）什么叫原代培养？什么叫传代培养？（4 4）总结出具体的培养过程？）总结出具体的培养过程？习习学学主主自自任务：阅读教材第任务：阅读教材第44-4644-46页第一段页第一段时间：时间：4 4分钟分钟问题：问题：就是从动物机体中取出就是从动物机体中取出相关组织相关组织，将，将它分散成它分散成单个细胞单个细胞，然后，然后,放在放在适宜的培适宜的培养基养基中，让这些细胞中，让这些细胞生长和繁殖生长和繁殖。1 1、概念：、概念：一、动物细胞培养一、动物细胞培养纳纳归归题题问问2 2、培养过程：、培养过程：纳纳归归题题问问为什么要把动物组织分散成单为什么要把动物组织分散成单个细胞？怎样分散成单个细胞个细胞？怎样分散成单个细胞的？完成的？完成4444页两个问号页两个问号成块的组织中细胞与细胞靠在成块的组织中细胞与细胞靠在一起，彼此限制了细胞的生长一起，彼此限制了细胞的生长和增殖。另外，单个细胞所需和增殖。另外，单个细胞所需的营养容易供应，其代谢废物的营养容易供应，其代谢废物容易排出。所以分散成单个细容易排出。所以分散成单个细胞后培养。胞后培养。用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是蛋用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是蛋白质。胃蛋白酶作用的适宜白质。胃蛋白酶作用的适宜pHpH约为约为2 2，当，当pHpH大于大于6 6时，胃时，胃蛋白酶就会失去活性。胰蛋白酶作用的适宜环境蛋白酶就会失去活性。胰蛋白酶作用的适宜环境pHpH为为7.27.28.48.4。多数动物细胞培养的适宜。多数动物细胞培养的适宜pHpH为为7.27.27.47.4，胃蛋白，胃蛋白酶在此环境中没有活性，而胰蛋白酶在此环境中活性较酶在此环境中没有活性，而胰蛋白酶在此环境中活性较高，因此胰蛋白酶适宜用于细胞培养时的消化。高，因此胰蛋白酶适宜用于细胞培养时的消化。4444页两个小问题的答案页两个小问题的答案 胰蛋白酶除了可以消化细胞间的蛋白外，长时间的胰蛋白酶除了可以消化细胞间的蛋白外，长时间的作用也会消化细胞膜蛋白，对细胞有损伤作用，因此必作用也会消化细胞膜蛋白，对细胞有损伤作用，因此必须控制好胰蛋白酶的消化时间。须控制好胰蛋白酶的消化时间。纳纳归归题题问问3 3、几个重要的概念、几个重要的概念l细胞贴壁细胞贴壁悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上(单层单层)。要求：要求：培养瓶（皿）内表面光滑、无培养瓶（皿）内表面光滑、无毒、易于贴附。毒、易于贴附。纳纳归归题题问问l接触抑制接触抑制当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。制。纳纳归归题题问问l原代培养原代培养l传代培养传代培养贴满瓶壁贴满瓶壁的的细胞需要重新用细胞需要重新用胰蛋白酶胰蛋白酶等处理等处理让细胞继续培养，这样的培养过程通常被称让细胞继续培养，这样的培养过程通常被称为传代培养。（即从原培养瓶内转接到新的为传代培养。（即从原培养瓶内转接到新的培养瓶内过程。）培养瓶内过程。）通常将动物组织消化后的初次培养称为通常将动物组织消化后的初次培养称为原代培养。原代培养。纳纳归归题题问问l 细胞株细胞株 传到传到40-5040-50代后有代后有部分细胞遗传物质发生部分细胞遗传物质发生了变化了变化，具有癌细胞的特点，失去接触抑制，具有癌细胞的特点，失去接触抑制，可能在培养条件下无限制的传代下去。可能在培养条件下无限制的传代下去。从原代培养细胞群中筛选出进行传代从原代培养细胞群中筛选出进行传代培养的细胞，能传到培养的细胞，能传到40-5040-50代，其代，其遗传物质遗传物质没有发生变化没有发生变化。l 细胞系细胞系纳纳归归题题问问l注意注意目前使用的细胞通常为目前使用的细胞通常为1010代以内，以保持代以内，以保持细胞正常的二倍体核型。细胞正常的二倍体核型。动物动物动物动物胚胎胚胎胚胎胚胎或或或或幼龄幼龄幼龄幼龄动物的动物的动物的动物的组织、器官组织、器官组织、器官组织、器官胰蛋白酶胰蛋白酶剪碎剪碎单个细胞单个细胞单个细胞单个细胞加培养液加培养液细胞细胞细胞细胞 悬浮液悬浮液悬浮液悬浮液10101010代代代代细胞细胞细胞细胞部分细胞部分细胞“癌变癌变”，无限传代，无限传代动物细胞培养不能最动物细胞培养不能最终培养成动物体终培养成动物体50505050代细胞代细胞代细胞代细胞原原代代培培养养传代培养传代培养细细胞胞贴贴壁壁剥离、分瓶剥离、分瓶细胞细胞细胞细胞培养过程：培养过程：分化程度低，增殖能力强分化程度低，增殖能力强去掉组织去掉组织间蛋白间蛋白细胞细胞 悬浮液悬浮液1010代代细胞细胞5050代代细胞细胞无限无限传代传代原代培养原代培养传代培养传代培养细胞株细胞株细胞系细胞系细胞贴壁生长细胞贴壁生长随细胞增多，随细胞增多，出现接触抑制出现接触抑制部分细胞癌变，部分细胞癌变，失去接触抑制，失去接触抑制，无限传代无限传代纳纳归归题题问问动物细胞培养都需要满足什么条件？动物细胞培养都需要满足什么条件？习习学学主主自自任务：阅读教材第任务：阅读教材第4646页黑体字后面页黑体字后面时间：时间：4 4分钟分钟问题：问题：4 4、动物细胞培养条件、动物细胞培养条件l无菌、无毒的环境无菌、无毒的环境（添加一定量的抗生素，定期更换培养液）（添加一定量的抗生素，定期更换培养液）l营养营养（葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、（葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清、微量元素等动物血清、微量元素等）l温度和温度和PHPH温度温度36.536.5+0.50.5度，度，pH 7.2pH 7.27.47.4l气体环境气体环境O O2 2和和COCO2 2（95%95%空气和空气和5%5%COCO2 2）离体培养的细胞对微生物和离体培养的细胞对微生物和有毒物质没有防御能力。有毒物质没有防御能力。保证细胞顺保证细胞顺利的生长增利的生长增殖殖纳纳归归题题问问COCO2 2培养箱培养箱 哺乳动物离体细胞培养和体内细胞一样哺乳动物离体细胞培养和体内细胞一样,需需要在恒足温度下才能生存要在恒足温度下才能生存,温差变化一般不应超温差变化一般不应超过过0.50.5度，因此培养箱对温度应具有较高灵敏度。度，因此培养箱对温度应具有较高灵敏度。COCO2 2培养箱的优点在于能恒定地供应一定量培养箱的优点在于能恒定地供应一定量的的COCO2 2,一般一般5%5%即可即可维持培养液维持培养液PHPH值稳定值稳定。培养基的类型培养基的类型l天然培养基：天然培养基：l合成培养基：合成培养基：营养价值高，成分复杂。营养价值高，成分复杂。成分明确，便于控制试验条件。成分明确，便于控制试验条件。纳纳归归题题问问5 5、动物细胞培养技术的应用、动物细胞培养技术的应用（1 1）生产蛋白生物制品：）生产蛋白生物制品：病毒疫苗病毒疫苗、干扰素干扰素、单克隆抗体单克隆抗体等；等；（4 4）用于）用于检测有毒物质检测有毒物质；（2 2）获得大量自身的）获得大量自身的皮肤细胞皮肤细胞，用于植皮；，用于植皮；（3 3）作为基因工程的受体细胞。）作为基因工程的受体细胞。（5 5）用于生理、病理、药理等方面的研究，）用于生理、病理、药理等方面的研究，为治疗和预防疾病提供理论依据；为治疗和预防疾病提供理论依据；纳纳归归题题问问6 6、植物细胞和动物细胞培养的比较、植物细胞和动物细胞培养的比较比较项目比较项目植物组织培养植物组织培养动物细胞培养动物细胞培养原理原理培养基性质培养基性质培养基特有成分培养基特有成分培养结果培养结果培养目的培养目的获得细胞或获得细胞或 细胞分泌蛋白细胞分泌蛋白细胞的全能性细胞的全能性细胞株、细胞系细胞株、细胞系植物体植物体快速繁殖、培育快速繁殖、培育无病毒植株等无病毒植株等葡萄糖、动物血清葡萄糖、动物血清促生长因子促生长因子蔗糖、植物激素蔗糖、植物激素液体培养基液体培养基固体培养基固体培养基细胞增殖细胞增殖结结小小堂堂课课动物细胞培养动物细胞培养特点特点原理原理概念：概念：贴壁生长，接触抑制贴壁生长，接触抑制动动物物组组织织胰蛋白酶胰蛋白酶剪碎剪碎单单个个细细胞胞加培养液加培养液细细胞胞悬悬液液分瓶培养分瓶培养1010代代细细胞胞5050代代细细胞胞不不死死细细胞胞原代培养原代培养原代培养原代培养传代培养传代培养传代培养传代培养细胞株胞株细胞系胞系适宜条件适宜条件培养条件培养条件无菌无毒，营养，温度、无菌无毒，营养，温度、PHPH，气体环境，气体环境过程过程细胞增殖细胞增殖1 1、在动物细胞培养过程中遗传物质发、在动物细胞培养过程中遗传物质发生改变的细胞是（生改变的细胞是（）A A细胞系细胞系 B B细胞株细胞株 C C原代细胞原代细胞 D D传代细胞传代细胞2 2、动物细胞工程技术的基础是（）、动物细胞工程技术的基础是（）A.A.动物细胞融合动物细胞融合 B.B.单克隆抗体单克隆抗体 C.C.胚胎移植胚胎移植 D.D.动物细胞培养动物细胞培养A AD D习习练练馈馈反反3 3、用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自、用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织，胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织，其主要原因是这样的组织细胞（其主要原因是这样的组织细胞（）A.A.容易产生各种变异容易产生各种变异 B.B.具有更强的全能性具有更强的全能性C.C.取材十分方便取材十分方便 D D分裂增殖的能力强分裂增殖的能力强D D习习练练馈馈反反4.4.动物细胞培养与植物细胞培养的重要区别在动物细胞培养与植物细胞培养的重要区别在于（于（）A.A.培养基不同；培养基不同；B.B.动物细胞培养不需要在无菌条件下进行；动物细胞培养不需要在无菌条件下进行；C.C.动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能；动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能；D.D.动物细胞能够大量培养，而植物细胞能培养动物细胞能够大量培养，而植物细胞能培养成植株。成植株。A A业业作作置置布布1.预习体细胞核移植技术2.完成练习册及报纸相关习题