挥发性盐基氮(TVB-N)的测定.doc

肉新鲜度的实验室检验:肉新鲜度的实验室检验方法较多，如挥发性盐基氨的测定、纳斯靳（Nessler）氏试剂氨反应、球蛋白沉淀反应、pH值的测定、硫化氢的测定、细菌学检查等。但只有挥发性盐基氨的测定作为国家现行法定检测方法，其他的实验室检测方法只能作为肉品新鲜度的辅助检验方法，应根据情况选用。（一）挥发性盐基氮（TVB-N）的测定1. 半微量定氮法（1）原理：蛋白质在酶和细菌的作用下分解后产生碱性含氮物质，有氨、伯胺、仲胺等，此类物质具有挥发性，可在碱性溶液中被蒸馏出来，用标准酸滴定，计算含量。（2）试剂氧化镁混悬液 2%硼酸溶液（吸收液） 0.2%甲基红乙醇液 0.1%亚甲蓝水溶液临用时将等量混合为混合指示液 0.0100N盐酸标准溶液或0.0100N硫酸标准溶液（3）仪器半微量定氮装置：Markhan氏式 微量滴定管：最小分度0.01ml（4）操作方法样液的制备：将样品除去脂肪、骨头及筋腱后，切碎搅匀，称取10g于锥形瓶中，加100ml水，不时振摇，浸渍30min后过滤，滤液置于冰箱中备用。测定：预先将盛有10ml吸收液并加有5-6滴混合指示液的锥形瓶置于冷凝管下端，并使其下端插入锥形瓶内吸收的液面下，精密吸取5ml上述样品滤液于蒸馏器反应室内，加5ml 1%氧化镁混悬液，迅速盖塞，并加水以防漏气，通入蒸汽，待蒸汽充满蒸馏器内时即关闭蒸汽出口管，由冷并行管出现第一滴冷凝水开始计时，蒸馏5min即停止，吸收液用0.0100N盐酸标准溶液或0.0100N硫酸标准溶液滴定，终点呈蓝紫色。同时做试剂空白试验。（5）计算 （V1-V2）N114X1= 100 m15/100式中：X1样品中挥发性盐基氮的含量，mg/100gV1测定用样液消耗盐酸或硫酸标准溶液体积，mlV2试剂空白消耗盐酸或硫酸标准溶液体积，mlN1盐酸或硫酸标准溶液的摩尔浓度，mol/Lm1样品质量，g141N盐酸或硫酸标准溶液1ml相当氮的毫克数2. 微量扩散法（1）原理：挥发性含氮物质在碱性溶液中释出，在扩散皿中于37时挥发后吸收于吸收液中，用标准酸滴定，计算含量。（2）试剂饱和碳酸钾溶液：称取50g碳酸钾，加50ml水，微加热助溶，使用时取上清液。水溶性胶：称取10g阿拉伯胶，加10ml水，再加5ml甘油及5g无水碳酸钾（或无水碳酸钠），研匀。吸收液：混合指示液、0.0100N盐酸或硫酸标准溶液，与半微量定氮法相同。（3）仪器扩散皿（标准型）：玻璃质，内外室总直径61mm，内室直径35mm；外室深度10mm，内室深度5mm；外室壁存3mm，内室壁存2.5mm，回壁纱厚玻璃盖，如图1-1所示，其他型号亦可用。微量滴定管：最小分度0.01ml。（4）操作方法将水溶性胶涂于扩散皿的边缘，在皿中央内室加入1ml吸收液及1滴混合指示液。在皿外室一侧加入1.00ml按半微量定氮法制备的样液，另一侧加入1ml饱和碳酸钾溶液，注意勿使两滴接触，立即盖好；密封后将皿于桌面上轻轻转动，使样液与碱液混合。将扩散皿置于37温箱内放置2h，揭去盖，用0.01N盐酸标准溶液或硫酸标准溶液滴定，终点呈蓝紫色。同时做试剂空白试验。图1-1 微量扩散皿（标准型）（5）说明加碳酸钾时应小心加入，不可溅入内室。扩散皿应洁净、干燥，不带酸碱性。检样测定与空白试验均需各作2份平行试验。计算（V3-V4）N114 X2= 100 m1100/5式中：X2样品中挥发性盐基氮的含量，mg/100gV3测定用样液消耗盐酸或硫酸标准溶液体积，mlV4试剂空白消耗盐酸或硫酸标准溶液体积，mlN1盐酸或硫酸标准溶液的摩尔浓度，mol/Lm1样品质量，g141N盐酸或硫酸标准溶液1ml相当氮的毫克数2