淡黄花百合C-带分析-n-n.doc

                                                   
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南京林业大学
本科毕业设计（论文)

题   目：  淡黄花百合C-带分析

学    院：   森林资源与环境学院  
专    业：       生物科学        
学    号：       0314129          
学生姓名：       周    丹        
指导教师：       刘 光 欣        
职    称：       讲    师        

二00七年五月二十日

18

摘要：百合是五种最重要的鲜切花之一。由于其花形硕大,花色艳丽，花形优美,香气宜人，百合在世界范围内都有栽培,在花卉市场上占有相当的比例。在中国具有49种百合野生种，其中36种为中国所特有。利用染色体组型分析进行种和种质资源的识别是一种有效的手段.C－本试验利用Gemisa C—带方法对淡黄花百合（L. sulphureum Baker apud Hook. f）进行了研究。结果表明淡黄花百合的染色体数目为2n＝24，带型公式可记为2n＝24＝10CI+＋10I+2I+＋2I+。每条染色体都显示出了可以明显区别的特征带。强带主要集中在染色体的着丝粒区域，在长短臂上也显示出可以相互识别的深浅不一的带纹.通过Gemisa C—带方法可以将淡黄花百合的每条染色体区分开来。
关键词：淡黄花百合，染色体，C—带分析

Abstract：Lily is one of the five fresh cutting flower species. With its big and colorful flowers, beautiful stature and fragrance， it is cultured extensively worldwide and occupies very important position in the floral market. In China， there are abundant wild resources of lily with a total of 49 species, in which 36 species and 18 variants are native species。 It is a efficiency way for the identification of different plant species by genome chromosome analysis。 The chromosomes from root tips of Lilium sulphureum were analysised by Giemsa C—banding. The result shown that， theC—banding karyotype is 2n＝24＝10CI+＋10I+2I+＋2I+, and the different C-banding points were shown on each chromosome。 There were four chromosomes of L. sulphureum to show strong centromeric bands。 There were different depth bands in contrasting between chromosome arms. Each chromosome of L. sulphureum can be distinguished by Gemisa C-banding.文档为个人收集整理，来源于网络个人收集整理，勿做商业用途
Key words： L. sulphureum, chromosome， Giemsa C-banding

目  录
1．前言 1
1.1本文研究的目的及意义 1
1.2 前言概述 1
2．文献综述 2
2。1 百合概述 2
2.1。1百合的用途 2
2.1。2世界观赏百合品系分类 3
2.1。3百合细胞学研究进展 4
2.2淡黄花百合的特征介绍 5
2.2.1分布范围 5
2。2。2 形态特征 5
2.2。3 利用价值 6
2.3带型分析 6
2.3.1染色体分带技术的建立 6
2.3.2 C-带原理 7
2。3.3 C-带分类 8
2。3。4 带型公式 8
3．研究报告 9
3。1材料与方法 9
3.2结果与分析 10
3.3讨论 12
致   谢 14
参考文献 15
附录:所用溶液的配制 17

1．前言
1。1本文研究的目的及意义
通过对淡黄花百合的带型分析的研究,使我们对淡黄花百合有了更微观的了解。研究淡黄花百合的主要目的是得到其标准的带型.
淡黄花百合主要是分布在我国的云贵川地区，其他地区只有缅甸少有分布，地区分布的局限性限制学者对她的研究。但淡黄花百合可以说作为中国的特殊物种，对其的研究是有重要意义的。从染色体分带技术来说，可在更微观水平上鉴定淡黄花百合的染色体，获得其遗传信息；获得淡黄花百合居群水平上与物种形成有关的信息和遗传变异的信息；确定淡黄花百合与系统发育有关的种间关系；为解决淡黄花百合繁殖系数低、繁殖速度慢、生产成本高的问题提供细胞学依据;可更进一步开发淡黄花百合的药用、食用和观赏价值。
1.2 前言概述
百合，我国古人就发现其具有丰富的营养价值和药用价值，同时更是将百合运用到庭院观赏中去，发掘出其的多种观赏途径.近年来，随着我国国民经济的持续、快速、健康发展，经济结构不断优化，综合国力不断提高，城乡居民收入和消费水平的迅速提高,花卉和观赏苗木的个体消费必将成为一种时尚，观赏花卉、苗木的需求也将越来越大，百合作为一种优秀的花卉品种其市场前景十分乐观。
淡黄花百合,主要分布在我国的四川、云南、贵州和广西，是中国特有的一个百合品种。其只要是作为淡黄色的切花百合和作为杂交百合的母系品种进行运用的，即主要是开发了淡黄花百合的观赏性。因为是一个特有百合品种，所以其药用价值的研究还刚刚起步，微观的如核型和带型还没有人进行研究。因此，淡黄花百合极具研究和开发的前景。
带型分析利用不同染色体上染色体臂的浅着色和着丝粒异染色质区的深着色的区别来鉴定区分染色体。比起简单的核型分析，带型分析因为染色体上有特征性的带纹更易鉴别。本文通过C-带分析来区分鉴定染色体的数目、形态等特征，为淡黄花百合的其他研究特别是切花开发提供基础条件。

2．文献综述
2.1 百合概述
百合是百合科百合属（Lilium)植物的统称，该属植物全世界约有96种，主要分布在北半球,北纬10～65度的亚热带到亚寒带地区均有分布［1].中国是世界百合种质资源的分布中心，约有47个种、18个变种，占世界百合属植物总数的一半以上。其中36个种、15个变种是我国特有的珍稀种类 .
2。1。1百合的用途
首先,百合具有悠久的使用历史和丰富的营养价值。秦汉年间成书的《神农本草经》中已有记述,鳞茎常作蔬菜食用，同时有养阴润肺、清心安神的药用价值［2］。宋代林洪在《山家清供》中提到食用方法“春秋仲月采百合根暴干，捣碎和面作汤饼，最益气血,又蒸熟可以佐酒”。[3]这些证明早在中国古代，人们就发现了百合的的食用功效，进一步研究并延续至今.
百合鳞茎含丰富营养，每100克鳞茎含蛋白质约3.36克、蔗糖10.39克左右、还原糖3.0克、果胶5.61克、淀粉11。46克、脂肪0.18克、钾0.49克、磷0。091克、钙0。009克、铁0.0009克、百合苷等抗癌性植物碱及维生素B等营养物质。[3]
百合自古就有很多的观赏用途了。
百合的优美的姿态引发了无数的的君主和诗人为它挥毫撒墨。南北朝时代后梁宣帝曾提尸赞美百合“接叶多重，花无异色，含露低垂,从风偃仰”;唐代黄缅著百合赋《百合花赋》：“荷春光之余照，托阳山之峻趾，比冥荚之能连，引芝芳而自拟”.宋代著名诗人陆游在暮年种植与欣赏百合中更焕发出无穷的青春情趣,题百合诗曰：“芳兰移取遍中林余地何妨种玉簪。更乞两丛香百合,老翁七十尚童心”.自古西方人把百合当作圣洁的象征，百合切花用于宗教礼仪活动有2000年以上历史［2].
百合也可种植在庭院中观赏。利用不同种类、品种自然花期之差异与植株高矮不同、花型花色的特点，精心设计栽植，可早自五月中旬，迟到八月下旬，在长达三个多月的时间内，尽情欣赏百合的绮丽花姿.在种植配置上,常用高大种类与灌木配置成从；中高种类则适宜于稀疏林下或林缘空地成片栽植或从植，亦可做花坛中心及花境背景，更显示出百合花朵娇艳的花色和壮丽豪放的雄姿。
除了把百合成片种植在庭院观赏外,也可把婀娜多姿的百合作为盆栽供室内或特殊场合观赏.但适宜盆栽的百合应具备以下条件①茎干强健矮而粗壮，叶片最好不产生叶烧现象；②花朵向上或上倾，花色明快鲜艳；③花朵能维持较厂的观赏时间；④对光照敏感度较小。[3]
百合的名称就意味着“百事合意"、“百年好合"等，象征着大吉大利的内涵.百合还是集温馨友爱、团结互助、思念回忆、祝愿期望的美好感情的花卉，在人们的生活中成为众多喜爱的花卉.百合花枝体量大,单枝花序上多朵花，依次由下向上开放，花期长。无论单枝瓶插还是2~3枝配置，或与其他花卉配插,都能得到极好的观赏效果。因此，百合作为切花而大放异彩。
还有，百合有极强的医药价值，将其开发成医药保健药品。
明·李时珍著《本草纲目》中对百合的药性作了详细的记述味甘平无毒,
主治邪气、腹胀、心痛，利大小便,补中益气。初浮肿胪胀，痞满寒热,通身疼痛，及乳难喉痹，止鼻涕。百邪鬼魅，涕泣不止，除心下急满痛，治脚气热咳。安心定胆益志，养五脏，治颠邪狂叫惊悸，产后血狂运，杀虫毒气，胁痈乳痈发背诸疮肿，心急黄,宜蜜蒸食之。治百种病，温肺止咳；捣粉作面食，最益人；和肉更佳。”而至今中医普遍确认百合入药具补中益气，养阴润肺,止咳平喘等功效。现代人将百合鳞片干燥后粉碎制成百合精粉，或将百合干粉加上适量的人参、西洋参制成奶白色结晶颗粒等现代保健品。［3]
2。1。2世界观赏百合品系分类
 目前商业广泛栽培的主要是通过杂交手段培育出的许多优良品种.英国皇家园艺学会和北美百合学会将世界百合杂交品种分为8个品系（陈俊愉;郭志刚）。
 第一类-亚洲杂种The Asiatic Hybrids：由卷月一、川百合、宾西法尼亚百合（L。pensylvanicum ）、大花卷丹(L。 leichtlinii var。 maximowiczii)、朝鲜百合(L, amabilc ) ，山月一(L。 concolor）与鳞茎百合(L. bulb）的种与杂种群中选育出来的。
  其品种根据花型、姿态可以分为3类:(1）花朵向上开放型，（2)花朵向外开放型，（3）花朵下垂，外瓣反卷型。
 根据花色又可以分为:白花品系，橘红花品系、黄花品系和粉花品系。
 第二类—纯白百合杂种The Candidum Hybrids，也称凯蒂达姆杂种品系
 第三类—欧洲百合杂种The Martagon Hybrids,也称马耳他恭杂种品系
 第四类—美洲百合杂种The American Hybrids，以美洲原产的百合为中心杂交而成的品种群.
 第五类—铁炮百合杂种The Longiflorum Hybrids:由廖香百合和台湾百合（（L。long沁rum））衍生出的杂种或杂交品种，但不包括它们的任何类型和多倍体.花朵喇叭状，水平伸展或稍下垂,花色主要为纯白色；
 第六类—喇叭百合杂种The Trumpet Hybrids:由喇叭百合杂种及亚洲百合种
（如湖北百合）衍生而来的奥瑞莲杂种Aurelian Hybrids，但不包括天香百合、鹿子百合、日本百合(L。 japonicum)和红花百合(L。 rubellum)衍生而来的杂种和品种。
 第七类—东方杂种The Oriental Hybrids:包括所有的天香百合、鹿子百合、日本百合(L。 japonicum ）、红花百合(L. rubellum）和它们与湖北百合的各种杂种。东方系百合品种均具有强烈的芳香。
 其品种根据花型可分为4组:（1）喇叭花型组;（2)碗花型组;③平花型组；（4)外弯花瓣花型组。
 根据花色又可以分为粉花品系和白花品系。
 第八类-其它杂种Miscellaneous Hybrids：上述系列中未能包括的所有杂种。
 目前，我国用于商业栽培的主要有:
 亚洲百杂种系:艾德琳娜(Adelina）、普丽安娜(Pollyanna）、多福（Toiler)、普瑞
特（Prato),歌德利亚(Cordelia)、精粹(Elite)
 东方杂种系：马可波罗(Marco polo）、白玛丽（White merostar)、西伯利亚（Siberia)，索邦（Sorbonne)、柏尼尼（Bernini),凝视星空（Stargazer)、元帅(Acapulco）、泰伯（Tiber)，芭芭拉（Barbaresco)、柏林（Berlin)、地中海（Mediterannee） ,娜托困（ettuno）、索莱亚（Solaia）、辛普隆（Simplon)、星球大战(Star fighter）
 铁炮杂种系:晶体（Gelria)、白狐(White Fox）·雪皇后(Snow Queen）、白天堂（White Heaven）、白色优雅(White elegance)
2.1.3百合细胞学研究进展
百合属世界名花，除观赏价值外还具食用、药用等多种价值.通过查阅大量相关资料可知，目前国内外有关百合的研究工作主要集中在分类学、繁殖及栽培生物学、细胞学、育种学等方面,并取得了可观的研究成果。在细胞学方面的研究也取得了一定的成果，这不仅为百合的分类提供了可靠的依据，而且对百合科植物的遗传和变异以及对染色体的变异和数量变异均有重要意义.
从20世纪50年代开始，日本学者对日本产的L. callosurn。 L. auraturr和L。 Maximowiczii进行了细胞学研究，绘出了它们的核型模式图。同时观察到L。 callosum有3种B染色体及L。 maxi－mowiczii有一对出现频率极高的、具近端着丝点的B染色体［4，5]，M. Shimizu（1987）描绘了日本产的19种百合的染色体核型，并对百合的起源与进化进行了探索。我国的李懋学深入研究了岷江百合的B染色体，对它在细胞分裂及繁殖过程中的行为进行观察并对其演化途径进行了讨论［6].李卫民对药百合进行了核型分析[7］，而在对中国东北产野生百合的染色体研究中发现，种内染色体数目为非整倍变化,百合属中B染色体出现的频率及数量可能与无性繁殖的方式及能力相关［8］.卷丹在中国几乎都是三倍体［7，9,10]对马以及韩国的济州岛和釜山市有二倍体存在［11]胞学及分布学分析表明，三倍体卷丹在我国为半野生种［10].
在细胞学研究中对引种较早的岷江百合，有珠芽种泸定百合研究较多,多数种的染色体核型资料缺乏较为细致的带型研究以及对多个种在染色体水平上的系统进化尚未见报道。建立我国百合资源的染色体数据库与深入研究百合染色体带型是今后资源研究的方向之一。
目前百合的核型分析方面的报道较多，但百合的许多染色体在基因组内和基因组间在核型上差异都不大，很难进行准确地区分，这给利用细胞学方法鉴定种及种间杂种带来了一定的困难.染色体C－带技术已经在许多的动植物研究中得到应用,但在百合中研究中应用很少,Ki－Byung Lim[12]对麝香百合进行过带型分析，但没有得到丰富的带纹。
2。2淡黄花百合的特征介绍
2。2.1分布范围
淡黄花百合隶属于百合科百合属,分布于四川、云南、贵州和广西，生长在草坡或山坡阴处疏林下［2—5］有分布［5］在云南海拔高度1 300m～1900m 的地区都有分布［4]地气候类型均属于亚热带范围[6］.
2.2。2 形态特征
淡黄花百合(Lilium sulphureum Baker apud Hook. f）的形态特征是:鳞茎球形，高3－5厘米,直径1.5－7厘米:鳞瓣卵状披针形至披针形，肉质，长1.5－3厘米,宽0。8－1.5厘米。茎高0.4－1。8厘米,地下部分长5－10厘米，生多数须根：地上部分先为淡绿色,后变成紫色，无毛，常有小乳头状突起.叶散生，条形,通常下部的叶较狭长,上部的叶较宽大，长3－16.8厘米，宽0。4－1。8厘米,上部叶腋间具珠芽，珠芽多为紫色，稀为绿色.苞片卵状披针形至椭圆形,长3－9厘米，宽18－23。5厘米.花芳香，花梗长4－12厘米，1－11朵，组成顶生总状花序；花冠内面基部淡黄色,基部以上及花冠外面的颜色变异式样丰富，有白色、黄色、红色、紫色以及它们之间的过渡颜色；花被片六枚，匙形，先端外翻，急尖或钝，外轮花被片3枚，长12。2－25。1厘米，宽1.8 －4.7厘米，内轮花被片3枚，长 11。9－24。2宽2.6－7.9厘米，蜜腺两边无乳头状突起：雄蕊6枚，花丝淡黄色，无毛或少有稀疏的毛，长10.7－18.7厘米,花药成熟时棕色,长1。3－1。5厘米;子房圆柱状，长4－4。5厘米，宽2－5厘米,花柱长11－12厘米,柱头膨大，浅3裂，径约1厘米。茹果黄褐色，长4－6厘米，粗2－3厘米，果梗长4－12厘米。种子淡褐色.花期7－8月，果期8－10月[2—5]。本文为互联网收集,请勿用作商业用途文档为个人收集整理,来源于网络
2。2。3 利用价值
中医传统应用的中药可以从不同的方面增强机体抗病机能，促进体内生理生化反应向有利于健康的方向发展,提高抗氧化酶的活性，抑制脂质过氧化反应,是中药保护机体免受伤害,延缓衰老的重要机制［7］ 。淡黄花百合中提取的天门冬具有多方面的抗衰老机制，主要是提高抗氧化酶GSH - Px 的活性,抑制脂质过氧化损伤［8].
百合栽培与应用的快速扩展是植根于育种的发展.近10多年来，百合育种飞速发展,以荷兰与美国为中心，已育出数以千计的百合品种， 几乎垄断国际百合种球市场。 而我国至今没有一个具自主知识产权的品种。由于缺乏具有知识产权的特色品种,购买知识产权花费大量的品种权使用费(约占销售额的70％-80％左右)，严重制约着我国百合鲜切花产业化的发展。淡黄花百合作为我国特有品种，研究其可为我国自主培育百合新品种提供优良的杂交母本,在国际切花市场中占有一席之地.同时,淡黄花百合也是优良的淡黄色的切花百合.淡黄花百合也可用于庭院布景中，起到美化和点缀作用［9]。
2.3带型分析
植物染色体的分带技术中，应用最为广泛的是C-带技术,这不仅表现在已进行过的C-带研究的植物种类最多，而且各种改进的C—带流程也最多，积累了丰富的经验。在技术操作上C—带也存在一些问题，其主要问题是可重复性低，这与压片的熟练程度有关[13］
2。3。1染色体分带技术的建立
从事植物分带研究的先导是Darlington和 La Cour（1983,1940）他们将重楼和延龄草的根尖在低温3-7℃冷冻(一般为48小时)，然后染色、压片。发现染色体有深浅不同的分化染色区。该方法虽然简单，但所显带纹很少.
Yamasaki（1956年)以一种杓兰的根尖为研究材料,不经固定,直接用1NHCL—45％冰乙酸(2：1)于60-80℃处理一段时间，后用乙酸洋红染色，染色体可以显示出一些深浅不同的带纹，该技术被命名为盐酸分带技术。其后,在蚕豆、葱属、茄科植物等曾应用过该技术。
60年代末，瑞典的细胞化学家T。Caspersson发明了Q-分带技术，并在中国仓鼠和蚕豆的染色体中成功进行了试验,随后，该技术又应用于人类染色体的研究并获得成功。Q—分带技术的出现标志着染色体的研究跨入了一个新的阶段。
1970年,Padrdure和Gal观察到小鼠染色体的着丝点异染色质富含SAT—DNA在原位杂交中，染色体经过固定,以NaOH和2SSC盐溶液处理，用Giemsa和确立染色体的Giemsa C—带显带流程.后来，Summer（1972)又加以改进，干燥的制片用氢氧化钡处理后，用2×SSC盐溶液处理Giemsa染色，这就是至今应用最为广泛的现实C—带的BSG技术。现在,百合的带型分析多应用此法。
1971年Evans等人用含乙酸的固定液固定人类染色体，以空气干燥法制片，然后,经2SSC盐溶液处理，Giemsa染色。结果发现在染色体的全长上显示出大小和深浅不同的带纹,即显示人类染色体G—带的最早的ASG技术。同年,Dtrillaux等人用胰酶处理人类染色体后，也可显示出G—带。在大卫百合、华山松、多叶重楼等植物染色体上均显示出了G-带。
1973年,Matsui等在做人类的压片时，经一系列的操作处理，然后,用Giemsa
染色，结果发现，只有核仁组成区被染色，即为N-带。
1973年,Natt等人发现,细胞培养在含有5-溴脱氧尿嘧啶核苷的培养基中，经两个周期之后，用荧光燃料Hoechst33258在荧光显微镜下，可观察到中期染色体的两个姊妹染色单体的互换情况.1974年，Matsui和Acridine Orang G代替Hoechst33258,也获成功。但荧光染料染色不能做永久制片，且需特殊设备。同年Perry等创用了FPG技术,也获成功，这成为后来常用的分染技术.1981年，Vosa创用了Feulgen—SCE染色技术,经5—溴脱氧尿嘧啶核苷处理的根尖，用5N HCL 于18℃处理的100min,Feulgen染色,同样显示出清晰的分染效果.
2.3.2 C-带原理
   有关染色体分带的机理现在还缺乏较为一致的看法，一般认为与C—带密切相关的明显特征是染色体上非C-带去的DNA被抽提，而C—带区DNA仍然被保留在染色体上，从而造成染色体臂的浅着色和着丝粒异染色质区的深着色。这或许是由于C-带区域富含异染色质，DNA高度浓缩、螺旋紧密,更能抵抗分带程序中各种处理作用所造成的。张自立(1980)以蚕豆和洋葱作材料,用胰酶处理后，异染色质区的核酸和蛋白质丢失比常染色质少，即可证明上述推测。
   也有人认为C-带的位置是高度重复顺序的DNA部位；C-带大小变化可能和重复顺序DNA的存在量有关；还有的人认为常染色质区比异染色质区更快得丢失DNA,是由于常染色质DNA更为广泛地含腺嘌呤,在腺嘌呤位置上DNA链容易断裂等。
2。3。3 C—带分类
C—带又称为着丝粒异染色质带，或组成异染色质带(constitutive heterochromatin)。该带的性质属于异染色质区的C—带范围。所谓植物染色体C—带，根据其分布位置的不同，主要分为如下5种带型:
Ⅰ。着丝粒带（centromeric band）—-指着丝粒及其附近的带,大部分植物染色体都显示这种带;
Ⅱ。中间带（intercalary band)-—分布在染色体两臂上的带,在同源染色体之间可能有多态带；
Ⅲ。末端带（telomere band)--位于染色体两臂末段的带；
Ⅳ.次缢痕带（secondary constriction band）-—位于次缢痕区的带纹，是
核仁染色体专一带;
Ⅴ.随体带——即随体的显带.
另外，还可以将植物染色体C-带分为两大类：一类是完全带类型，另一类是不完全带类型(N—带的染色体只有缢痕带,归于此类）。
2.3。4 带型公式
以一定的符号表示带纹的类型和分布,则可将带型以简明的公式表示。上述5种的带纹，分别以其英文大写字母表示,C、I、T、N、S。
为表示中间和末端带在染色体的分布可用“+”表示；如果带只分布在短臂上,则在字母的右上角划“+”：如果带只分布在长臂上，则在字母的右下角划“+"；如果长短臂都有带，则不标明“+”。
同类型的染色体数目，以符号前的数字表示,不显带的染色体则只以数字表示.
例，黑麦C带的带型公式可写为：2n=14=2CT+2CI+2T+6CI+T+2CI+T

3．研究报告
3.1材料与方法
3.1.1实验材料：
淡黄花百合，保存于南京林业大学苗圃。
3.1.2染色体C-带分析方法
⒈取材及预处理:
组织培养淡黄花百合，待淡黄花百合的根长至1.0 －2.0 cm时，剪根。并在0℃的冰水中处理22 – 24小时.
⒉固定：
将预处理过的淡黄花百合放入卡诺氏固定液中固定2 – 7天（25℃左右）。注意：做分带时，固定材料时间不宜过长，否则会影响分带的效果.
⒊解离：
将根从固定液中取出，放入45％的乙酸中解离2-3个小时。
⒋压片:
将解理好的根尖放在载片上，切去根冠后将分裂区切成3个薄片。滴一滴45％的乙酸，盖上盖玻片,用解剖针敲片，再用酒精灯烤一下片。最后用滤纸吸去多余的乙醇,并用力压一下片子。
⒌镜检：
压好的片子放在显微镜下对比,选出好的片子。检好的片子仍在显微镜下找到理想的分裂相,记下坐标。
⒍揭片:
镜检挑选出来具有理想分裂相的片子放入超低温冰箱过夜后揭片。
⒎显带处理
⑴ 酒精脱水。揭片后放入无水乙醇中脱水半小时以上，脱水后取出冻干。
⑵ 酸变性。将放在0.2N HCl中的片子放入60℃的水浴锅中变性2分30秒。
⑶ 碱变性。经过酸变性过的片子立即放入氢氧化钡饱和液中变性7分钟，同样是在60℃的水浴锅中。变性后的片子用流动的水冲4分钟，片子的背面也
要用流水冲一下.
⑷ 2×SSC复性。碱变性冲洗好的片子放入2×SSC中复性1小时，整个过程要在58℃水浴锅中进行.
⒏染色
直接从2×SSC 转入用1／15M 2份磷酸氢钠，1份磷酸二氢钾缓冲液稀释的Fisher Giemsa染液（浓度一般为1毫升加1滴染液），染色要适度。
⒐观察
用蒸馏水冲洗后，气干，再加二钾苯盖片后观察。如染色后颜色偏红，可增加在氢氧化钡中处理时间，或减少盐酸中处理时间：如果颜色偏蓝则与此相反。
⒑镜检拍照
完全处理好的片子可在显微镜（相差）下观察,找到好的分裂相即可拍照分析。
实验具体步骤参考了文献[14-21］
3。2结果与分析
淡黄花百合染色体C—分带如图版1。由图可见淡黄花百合染色体数目为2n＝24，淡黄花百合的大多数染色体上都能显示出的带纹，且带纹的深浅差异明显。借助于带型分析、染色体长度及臂比，淡黄花百合染色体带型分析如图2，转换成模式图如图3。
李懋学等将植物染色体C带，根据其分布位置，分为5种类型即着丝点带(Centromeric band）、中间带（Intercalary band)、末端带（Telomere band)、次缢痕带（Secondary constriction band）和随体带（Satellite band)，并分别记做C、I、T、N和S,若带位于长臂上则在字母的右侧下标为“＋”，若在短臂上有带,则在右侧上标为“＋”,若长短臂上都有带则,不需要注明［22］图2和图3,根据淡黄花百合各染色体的C—分带主要特征，可以描述为：2n＝24＝10CI+＋10I+2I+＋2I+。其中单套染色体的条带总数目为33条。

图1 淡黄花百合C-分带结果

L1     L2      L3  L4   L5     L6    L7  L8   L9     L10  L11    L12
图2 淡黄花百合C-分带分析图

图3 淡黄花百合C-带模式图
L1  L2   L3   L4   L5   L6   L7    L8   L9   L10  L11   L12

各条染色体C—分带带型特征分述于后。L1染色体为近中着丝粒染色体,且在稍长的臂上有三条比较明显的带纹，最靠近着丝粒的带纹最明显，另一臂上在靠着丝粒和臂中段有点状弱带.L2染色体也为近中着丝粒染色体,在着丝粒区域有较强的带纹。L3染色体为中着丝粒染色体，在两条臂靠末段上各有一条明显的带纹。L4染色体，在长臂靠着丝粒区域有一明显带纹、中部有一点状弱带，短臂中部和末端也各有一较强的带纹。L5染色体，在长臂末端有一很强的带纹，短臂的中部则有一条明显的带纹，同L2染色体相比，L5染色体的带纹更明显。L6染色体,着丝粒区域有较强的带纹,同时在长臂近着丝粒区域处有一弱带、末端有一较强的带纹和点状弱带。L7染色体近端着丝粒染色体，在长臂靠着丝粒区域有一很明显的带纹,短臂靠着丝点有两个并列点状弱带。L8染色体为近端着丝粒染色体，长臂末端有一明显的带纹，短臂的末端有两个点状的弱带。L9染色体是近端着丝粒染色体，其短臂上无带纹，但长臂上有两个明显的带纹,靠着丝粒区域的带纹微弱，靠其很近的带纹则很明显.L10染色体也近端着丝粒染色体，着丝粒区域也有较强的带纹,在靠近其的长臂上还有一点状弱带，同时长臂的末端有较强的带纹。L11染色体，其长臂上没有任何带纹标记，而短臂上则有一条很明显的带纹。L12染色体同近端着丝粒染色体，短臂靠着丝点处有一较强的点状带,长臂1/4处则有一条很强的带纹，末端有的微弱的点状带。每条染色体都表现出显著的特征带。文档为个人收集整理,来源于网络本文为互联网收集，请勿用作商业用途
3。3讨论
Giemsa C-分带主要显示染色体上的组成型异染色质,组成型异染色质主要由重复DNA序列组成，分布在染色体末端和着丝粒附近.由于C—带在同一物种中具有相对稳定性，而且在物种间具有丰富的多态性，因而可以作为物种鉴别的一种工具。
目前对于百合资源染色体组的研究仅仅集中于核型分析。核型分析主要是借助于染色体的长度，着丝点及次缢痕的位置来区分染色体.多个百合种染色体的核型分析表明，许多百合的染色体间在长度以及臂比方面差异并不大［23-26]用核型区分染色体带来了很大难度。而且通常情况下，仅仅利用核型分析无法对百合杂种后代中染色体的来源以及缺失易位等结构变异进行鉴定[23]2000年，Ki－Byung Lim曾经对L。 longiflorum和L。 rubellum进行了Giemsa C—分带分析，但是仅仅得到了很浅的11条很浅的带纹[27]但对于中国特有种淡黄花百合和其他百合的野生种尚未见Giemsa C-分带分析的报道.
本实验中，与其他植物如禾本科相比,淡黄花百合根尖染色体难处理好，因此我们将预处理时间增加了，在制片之前将固定好的根尖先解离2h用沸水配置饱和Ba(OH）2溶液等试验方法的改进，找到了适合于百合种的Giemsa C-分带方法，得到了覆盖整个淡黄花百合基因组染色体的特征带纹。试验结果说明利用Giemsa C-分带方法鉴定百合资源的染色体是可行的，这为百合野生种种群间进化关系的研究以及百合杂交育种中外源染色体的鉴定提供了快捷可靠的方法。
致   谢

本论文是在刘光欣老师的悉心指导下完成的。从论文的选题、研究方案的制定、实验方法的指导、到论文写作的完成，整个过程刘光欣老师都倾注了大量的心血.刘老师严谨求实的科学精神，精深渊博的学识修养，将使我受益终身。在此谨向刘老师表示最深诚的谢意和最美好的祝福！
在实验期间，我得到胡凤荣博士的大量指导与帮助，才能够顺利的完成各个实验，在此特表真挚的谢意与美好的祝福!
本人在此谨向给与关心和帮助的各位老师、同学致以最诚挚的谢意.
                                         作者:周丹
                                                  2007年5月

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