中药药理实验方法学ppt课件.ppt

药理学实验基础知识 开开课目的：培养科学思目的：培养科学思维方法，方法，严肃的科学的科学态度，提高分析度，提高分析问题解决解决问题的的能力。掌握基本能力。掌握基本实验操作技能和操作技能和实验方方法，法，为今后科学研究打下基今后科学研究打下基础。要要 求：工作服、求：工作服、仪器器领取、取、卫生打生打扫、动物物处理。理。1.实验动物分物分类：按种系分三种情况按种系分三种情况 A A、按、按遗传学控制方法分学控制方法分为4 4类：近交系：近交系动物、突交系物、突交系动物、物、F1F1杂种种动物、封物、封闭群群动物。物。B B、未、未经遗传学控制的学控制的杂种种动物。物。C C、按微生物学控制方法分、按微生物学控制方法分5 5类：无菌：无菌动物、悉生物、悉生动物、无特殊病原体物、无特殊病原体动物、清物、清洁动物、普通物、普通动物。物。2.我国将实验动物分为四级：一一级动物：普通物：普通动物（物（CVCV）-普通自然普通自然环境中境中饲养繁殖的健康养繁殖的健康带菌菌动物。（教学和物。（教学和一般一般实验用）用）二二级动物：清物：清洁动物（物（CLCL）-用于一般用于一般动物物实验，除一，除一级标准外，准外，还需要不需要不带有有动物物传染病病原体。染病病原体。3.三三级动物：无特殊病原体物：无特殊病原体动物物（SPFSPF），在），在CLCL基基础上上还需不需不带有干有干扰实验的微生物。的微生物。按按纯系系动物的要求物的要求进行繁殖，在隔行繁殖，在隔离器内或离器内或层流室内流室内饲养，只有一些不养，只有一些不致病的致病的细菌菌丛，没有致病的病原体。，没有致病的病原体。4.四四级动物：无菌物：无菌动物（物（GFGF）和悉生）和悉生动物物（GNGN）。）。GFGF：全封：全封闭无菌条件下无菌条件下饲养的养的纯系系动物，体内不物，体内不带任何微生物和寄生虫（包括任何微生物和寄生虫（包括绝大部分病毒）；大部分病毒）；GN GN：要求在无菌：要求在无菌动物体内植入一种或数种已知的微物体内植入一种或数种已知的微生物。生物。三、四三、四级动物要求高，价格物要求高，价格贵，适用于特殊，适用于特殊目的和要求的目的和要求的实验。5.实验动物的物的选择：a.a.选对与人的机能、代与人的机能、代谢、结构、疾病构、疾病特点和机能反特点和机能反应相近似的相近似的实验动物。物。药物的反物的反应与人的反与人的反应相似的相似的动物。物。b.b.选用用遗传背景明确，模型指背景明确，模型指标显著且著且稳定，解剖、生理特点符合定，解剖、生理特点符合实验目的的目的的实验动物。物。6.7.NIH小鼠小鼠 BALB/c小鼠小鼠 远交系小鼠，国交系小鼠，国际上广泛通上广泛通用的用的实验动物，已物，已选为某些某些生物制品生物制品检定的法定的法规动物。物。近交系小鼠，毛色黑色；近交系小鼠，毛色黑色；补体活性高；体活性高；较易易诱发免疫耐免疫耐受性；受性；对结核杆菌敏感；干核杆菌敏感；干扰素素产量高。是量高。是肿瘤学、生瘤学、生理学、免疫学、理学、免疫学、遗传学研究学研究常用的品系。常用的品系。8.C57BL/6JC57BL/6J小鼠：近交系小鼠，小鼠：近交系小鼠，乳腺乳腺肿瘤瘤发生率低，但生率低，但对致致癌因子敏感。肺癌癌因子敏感。肺癌发病率雌病率雌性性2626，雄性，雄性2929。对放射放射性照射极性照射极为敏感。用于敏感。用于肿瘤瘤学、生理学、免疫学、核医学、生理学、免疫学、核医学和学和单克隆抗体等研究。克隆抗体等研究。BALB/c-nu裸鼠裸鼠：无毛，无毛，裸体，裸体，T T淋巴淋巴细胞缺胞缺损，可研究免疫功能和病毒可研究免疫功能和病毒细菌寄生虫感染机制等菌寄生虫感染机制等。9.SDSD大鼠大鼠WistarWistar大鼠大鼠 10.大鼠：大鼠：远交系大鼠，交系大鼠，对呼吸道疾病抵抗呼吸道疾病抵抗力力强，对性激素刺激性高，多用于生理、性激素刺激性高，多用于生理、营养、安全性养、安全性试验。WistarWistar大鼠大鼠：远交系大鼠，抗病力交系大鼠，抗病力强，自，自发性性肿瘤瘤发病率低，多用于病率低，多用于肿瘤、免疫、瘤、免疫、药理、内分泌理、内分泌。11.豚豚 鼠鼠对各种致病菌和病毒敏感，各种致病菌和病毒敏感，对组胺胺类药物有高度敏感性，自身不物有高度敏感性，自身不能合成能合成维生素，易于生素，易于过敏，耳敏，耳蜗管管对声波敏感，缺氧耐受性声波敏感，缺氧耐受性强，血清，血清中中补体丰富，皮肤体丰富，皮肤对毒物刺激敏感毒物刺激敏感等。等。12.新西新西兰兔兔 家家 兔兔血清量血清量较多，胸淋巴多，胸淋巴结明明显，耳血管粗大，耳血管粗大，诱发性排卵，眼球大，性排卵，眼球大，发热反反应典型恒定，典型恒定，对许多致病菌和病毒敏感，多致病菌和病毒敏感，颈部神部神经血管和胸腔适血管和胸腔适合做急性心血管合做急性心血管实验 ，皮肤皮肤对刺激反刺激反应敏感等。敏感等。13.14.BeagleBeagle犬犬15.16.果果 蝇 蚕蚕17.猴猴18.小鼠：常用于小鼠：常用于药物物筛选、急性毒性、急性毒性实验。价格便宜，繁殖周期短，易得。价格便宜，繁殖周期短，易得。（1822g1822g）大白鼠：常用于抗关大白鼠：常用于抗关节炎炎实验、利胆、利胆实验、子、子宫实验、长期毒性期毒性实验（150200g150200g）19.豚鼠：研究平喘豚鼠：研究平喘药和抗和抗组胺胺药常用，常用，对组胺特胺特别敏感。毒理学中敏感。毒理学中过敏敏实验（300500g300500g）家兔：常用于家兔：常用于观察察药物物对呼吸、心呼吸、心脏、血管、血管、肠肌运肌运动的影响，的影响，热源源检查、解、解热实验；雌兔用；雌兔用于避孕于避孕药研究和子研究和子宫实验。（。（1.52.5Kg1.52.5Kg）20.犬：常用于慢性犬：常用于慢性实验如高血如高血压、胃瘘、胃瘘、肠瘘、冠脉流量，瘘、冠脉流量，还有有长期期毒性毒性实验。其他其他动物：物：鸽子、蛙子、蛙类、果、果蝇、蚕、猴、猫、蚕、猴、猫、鸭等。等。21.分分组方法：方法：分分层分分组法法-按性按性别、体重、体重、测定指定指标（如基（如基础体温、痛体温、痛阈）先分）先分层，再分，再分组；随机数字表法：按随机数字表来分随机数字表法：按随机数字表来分组。编号号：标记常用苦味酸（常用苦味酸（3%5%3%5%）、中性）、中性品品红（0 0。5%5%）、硝酸）、硝酸银（2%2%）；方法）；方法见书，较大的大的动物如犬、猫等，可用号物如犬、猫等，可用号码牌挂在牌挂在动物物颈部或将特制的部或将特制的铝牌固定在耳壳上。牌固定在耳壳上。22.取血方法：取血方法：小鼠、大鼠小鼠、大鼠-断尾、断尾、眼底（内眦球后静脉眼底（内眦球后静脉丛，小鼠可取小鼠可取0.20.3cc,0.20.3cc,大鼠可取大鼠可取0.51cc)0.51cc)、断断头、颈动脉取血。脉取血。兔兔-耳耳缘静脉，静脉，心心脏，股股动脉脉 犬犬-后肢外后肢外侧小小隐静脉，静脉，前肢背前肢背侧皮下皮下头静脉，静脉，耳耳缘静脉静脉 豚鼠豚鼠-耳耳缘切割，切割，心心脏穿刺。穿刺。23.常用抗凝常用抗凝剂 草酸草酸钾 饱和液和液2 2滴于滴于试管中，管中，8080度以度以下烘箱烘干，可抗凝下烘箱烘干，可抗凝35ml35ml血液。若血液。若测定定钾、钙含量的不用。含量的不用。肝素肝素 1%1%肝素肝素0.1ml0.1ml于于试管中，管中，8010080100度烤干，可抗凝度烤干，可抗凝510ml510ml血液血液 枸枸橼酸酸钠 3.8%3.8%枸枸橼酸酸钠1 1份，可抗凝份，可抗凝9 9份血液。份血液。血血压实验用用57%57%的枸的枸橼酸酸钠抗凝。抗凝。24.实验报告或告或论文的文的书写写 实验报告格式：告格式：题目、目的、材料、方法、目、目的、材料、方法、结果（表或果（表或图）、）、讨论、结论。论文文书写格式写格式 题目、文摘、关目、文摘、关键词、序、序、实验材料、方法、材料、方法、结果（表或果（表或图）、）、讨论（含（含结论）。参考文）。参考文献献25.常用常用动物的捉拿和物的捉拿和给药方法方法捉拿捉拿 小鼠、大鼠、豚鼠的捉拿方法小鼠、大鼠、豚鼠的捉拿方法基本一致。家兔抓背部皮肤，另一基本一致。家兔抓背部皮肤，另一只手托起臀部。狗用狗只手托起臀部。狗用狗头夹夹住住颈部后再抓。部后再抓。26.给药：途径途径-口服或灌胃、皮下注射、肌肉注口服或灌胃、皮下注射、肌肉注射、腹腔注射、静脉注射。射、腹腔注射、静脉注射。静脉注射：家兔（耳静脉注射：家兔（耳缘静脉）、狗（后静脉）、狗（后肢小肢小隐静脉）、豚鼠（后脚掌外静脉）、豚鼠（后脚掌外侧的静脉的静脉或或颈外静脉）外静脉）27.给药剂量：量：根据根据单位体重位体重给药。28.处死和死和处理方法理方法小鼠、大鼠、豚鼠：小鼠、大鼠、豚鼠：颈椎脱位法椎脱位法处死。死。兔、狗、猫：静脉注射空气兔、狗、猫：静脉注射空气（1030ml1030ml）致死。）致死。实验完完毕后，后，动物按要求物按要求处死，送死，送到指定地点焚到指定地点焚烧。没有焚。没有焚烧条件的，条件的，用袋子装好，送至指定垃圾站。用袋子装好，送至指定垃圾站。29.影响中影响中药药理作用的因素理作用的因素 三大因素：三大因素：药物因素、机体因素、物因素、机体因素、环境因素境因素 药物因素物因素-品种、品种、产地、采集地、采集时节、贮藏、炮制、制藏、炮制、制剂（剂型）、不同入型）、不同入药部部位位 机体因素机体因素-年年龄、性、性别、体、体质、情志、情志、病理状病理状态、个体差异（种族、高敏、耐受、个体差异（种族、高敏、耐受、特异特异质、肠道微生物道微生物环境等）境等）环境因素境因素-气候、季气候、季节、时辰。辰。30.为减少差异，减少差异，应注意：注意：鉴定品种、一次性定品种、一次性计算出算出实验用用药物量后物量后购买药物物进行制行制剂加工（排除品种、加工（排除品种、产地、采集地、采集时节、贮藏、炮制、制藏、炮制、制剂等等带来的影响）来的影响）选择和和临床用床用药一致的一致的剂型（型（给药途径）（排除因途径）（排除因给药途径不途径不同同导致的差异致的差异-生物利用度不同）。生物利用度不同）。选择年年龄相同、批次相同、性相同、批次相同、性别体重均衡的体重均衡的动物，遵循随机分物，遵循随机分组的原的原则，减少，减少动物物带来的差异。来的差异。动物物连续给药时每天每天应在基本相同的在基本相同的时间进行。行。31.药效学研究注意事效学研究注意事项 新新药申申报资料中，和料中，和药理学理学实验内容相关的是内容相关的是药效学和毒理学两大效学和毒理学两大项内容。内容。药效学：效学：药物物对机体的作用研究。机体的作用研究。按新按新药研究指南的要求，根据功能研究指南的要求，根据功能主治来主治来设计实验项目。目。32.注意点：注意点：主要指主要指标确定，按新确定，按新药指南要求指南要求或咨或咨询药审中心确定。中心确定。如抗癌中如抗癌中药研究研究 模型的模型的选择：有文献依据、符合：有文献依据、符合中医中医临床床“证”的模型，方法要注意的模型，方法要注意体内、体外相体内、体外相结合。合。33.体外：重复性好，用体外：重复性好，用药量少，量少，节省省动物。物。但干但干扰因素多。因素多。体内：体内：结果接近果接近临床，必床，必须做。做。原原则-体内、体外体内、体外实验相相结合。合。药品：品：品种品种鉴定（赤芍）、定（赤芍）、稳定工定工艺，现在在要求用中要求用中试产品。量的品。量的问题。34.剂量：一般量：一般设三个三个剂量量 低低剂量量-临床等效量床等效量 中中剂量量-临床等效量的床等效量的2 2倍倍 高高剂量量-临床等效量的床等效量的4 4倍倍35.剂量量换算算 按人和按人和动物的体表面物的体表面积折算的等效折算的等效剂量比量比值换算算 小白鼠（小白鼠（20g20g）：人用量）：人用量*0.0026*500.0026*50 大白鼠（大白鼠（200g200g）：人用量）：人用量*0.018*50.018*5 按按“每公斤体重占有体表面每公斤体重占有体表面积相相对比比值”换算算 小鼠：人用量小鼠：人用量*1 1（小白鼠比（小白鼠比值）/0.08/0.08（50Kg50Kg人的比人的比值）大鼠大鼠:人用量人用量*0.470.47（大白鼠比（大白鼠比值）/0.08/0.08（50Kg50Kg人的比人的比值）36.临床常用床常用剂量折算法量折算法37.38.39.组的的设置置 一般一般设6 6个个组：空白：空白组、模型、模型组、模型、模型+小小剂量量组、模型、模型+中中剂量量组、模型、模型+大大剂量量组、模型、模型+阳性阳性对照照组。阳性阳性组设置的目的：置的目的：检验实验方法是否正确、方法是否正确、比比较同同类产品的品的优劣。劣。阳性阳性药：功效主治和：功效主治和实验药物一致，物一致，剂型尽型尽量一致；必量一致；必须是是药典典记载的、公的、公认的的疗效确切效确切的的药物。物。40.数据数据处理理 药理理实验数据必数据必须进行行统计学学处理。理。实验数据分数据分为计量量资料和料和计数数资料。料。41.计量量资料：尿量、料：尿量、时间、次数、心率、血、次数、心率、血压等等 计数数资料（料（发生率）：死或活、惊厥或不惊生率）：死或活、惊厥或不惊厥、翻正反射消失或不消失、扭体或不扭等厥、翻正反射消失或不消失、扭体或不扭等 。不同不同资料料统计方法不同，方法不同，现在多用在多用统计软件件包包处理。理。结果：果：P P0.05,0.05,说明两明两组间无无显著性差异著性差异 P P0.05,0.05,说明两明两组间有有显著性差异著性差异 P P0.01,0.01,说明两明两组间有非常有非常显著性差异著性差异 举例例:黄南星搽黄南星搽剂 42.药理理实验设计三原三原则 -随机、随机、对照、重复照、重复 随机分随机分组-将受将受试样本随机遇而分本随机遇而分组，以减少主以减少主观因素的影响和避免偏性因素的影响和避免偏性误差。差。对照：照：组间对照、自身照、自身对照照 重复：重复：实验的重复。如条件不允的重复。如条件不允许，可增加，可增加每每组的的样本数。本数。43.一般一般药理学研究：理学研究：神神经系系统：行：行为、流涎、肌、流涎、肌颤、瞳、瞳孔、自孔、自发活活动等；等；心血管系心血管系统：血：血压、心率、心、心率、心电图。呼吸系呼吸系统：呼吸的：呼吸的频率、深度。率、深度。剂量量-选用用产生主要生主要药效作用的效作用的2323个个剂量。区量。区别毒理学毒理学实验的的剂量。量。44.毒理学研究主要内容毒理学研究主要内容急性毒性急性毒性实验 实验目的：目的：观察察药物一次性物一次性给药对动物物带来来的毒性和死亡情况。的毒性和死亡情况。通常通常测定半数致死量。如果求不出（毒性低）定半数致死量。如果求不出（毒性低），可，可测最大最大给药量。量。半数致死量半数致死量-指一群指一群动物中半数物中半数动物死亡的物死亡的剂量。量。计算方法：比利氏法、算方法：比利氏法、孙氏改良氏改良蔻氏法等。氏法等。45.最大最大给药量量测定方法定方法 合格合格动物物(小白鼠小白鼠)分成分成2 2批，第一批分批，第一批分2 2组，药物物组和和对照照组，药物物组用最大用最大浓度、最大度、最大体体积给药，2323次次/24/24小小时。第二天停。第二天停药，连续7 7天，天，观察小鼠的体重、行察小鼠的体重、行为、分泌物、毛、分泌物、毛色及死亡情况。如有色及死亡情况。如有动物死亡，尸物死亡，尸检肉眼肉眼观察并与察并与对照照组小鼠小鼠进行比行比较。必要。必要时做做组织学学观察。察。为何要何要观察察7 7天？有可能是代天？有可能是代谢产物中毒或物中毒或迟发性中毒，几个小性中毒，几个小时看不出毒性。看不出毒性。结论：把一日累：把一日累计量除以人量除以人临床用量求出床用量求出相当于相当于临床人用量的多少倍。床人用量的多少倍。46.慢性毒性慢性毒性实验 实验目的：目的：观察察动物因物因连续用用药对机体造机体造成的成的损害、中毒开始的害、中毒开始的时间及停及停药后后组织受受损的的发展和恢复情况。展和恢复情况。实验动物：大白鼠（物：大白鼠（啮齿类）、犬（非）、犬（非啮齿类）。国）。国际上要求大鼠要上要求大鼠要SPFSPF级，犬用，犬用BeagleBeagle。大鼠：大鼠：5656周周龄；犬：；犬：612612月月龄。均雄、雌。均雄、雌各半。各半。分分组：低、中、高：低、中、高剂量量组、对照照组。（大。（大鼠鼠为每每组至少至少2020只，犬、猴只，犬、猴为雌雄各雌雄各3636只）只）47.给药时间：临床床疗程的程的2323倍。最倍。最长不超不超过半年。半年。给药途径：同途径：同临床床给药途径。途径。观察指察指标：末次：末次给药2424小小时后，后，处理一批理一批动物。物。一般一般观察：体重、察：体重、进食量、外食量、外观、行、行为活活动、粪便性状、分泌物（眼、鼻、肛便性状、分泌物（眼、鼻、肛门等），等），计算算脏器系数。器系数。脏器重量器重量 脏器系数器系数=体体 重重48.血液血液检查 血常血常规 血液生化血液生化 血常血常规：HbHb、RBCRBC、WBCWBC、PtPt、白、白细胞分胞分类、凝血、凝血酶原原时间。血液生化：天血液生化：天门冬氨酸氨基冬氨酸氨基转换酶、丙、丙氨酸氨基氨酸氨基转换酶、碱性磷酸、碱性磷酸酶、尿素氮、尿素氮、总蛋白、白蛋白、血糖、蛋白、白蛋白、血糖、总胆胆红素、素、总胆胆固醇、肌酸磷酸激固醇、肌酸磷酸激酶、甘油三、甘油三酯等。等。还可可测NaNa+、ClCl-、K K+浓度。度。49.系系统尸解和病理尸解和病理组织学学检查 测量量脏器系数器系数 病理切片：心、肝、脾、肺、病理切片：心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、甲状腺、胸腺、睾丸、附上腺、甲状腺、胸腺、睾丸、附睾、前列腺、卵巢、子睾、前列腺、卵巢、子宫、脑、胃、胃、肠等。等。附附报告、照片。告、照片。50.可逆性可逆性观察（恢复期）察（恢复期）第一批第一批动物物处理后，停止理后，停止给药，继续饲养养观察，半个月或一个月后察，半个月或一个月后处死，死，观察指察指标同第一批鼠。把第二批同第一批鼠。把第二批检测指指标和第一和第一批批检测指指标进行行统计对比，可看出停比，可看出停药后后损害的恢复和害的恢复和发展情况。展情况。犬的犬的长毒：毒：检测指指标多一个心多一个心电图。51.特殊毒理研究特殊毒理研究-刺激性、刺激性、过敏性敏性实验皮肤用皮肤用药：急毒、：急毒、长毒、刺激性毒、刺激性实验、过敏性敏性实验。动物用兔或豚鼠。物用兔或豚鼠。黏膜用黏膜用药：眼刺激性：眼刺激性实验。用兔。用兔。滴鼻滴鼻剂、吸入、吸入剂：毒性和刺激性：毒性和刺激性实验，用豚鼠，用豚鼠或大白鼠。或大白鼠。直直肠、阴道、阴道给药：毒性和刺激性：毒性和刺激性实验。用兔或。用兔或大白鼠。（大白鼠。（药物接触至少物接触至少4 4小小时，观察察2424小小时、4848小小时段全身症状和局部刺激）段全身症状和局部刺激）52.三致三致-致畸、致癌、致突致畸、致癌、致突变 基因突基因突变实验致突致突变 染色体畸染色体畸变实验 啮齿动物微核物微核实验53.微生物回复突微生物回复突变试验 基因突基因突变实验 哺乳哺乳动物培养物培养细胞基因突胞基因突变试验 果果蝇伴性伴性隐性致死性致死试验54.哺乳哺乳动物培养物培养细胞染色体畸胞染色体畸变试验染色体畸染色体畸变实验 啮齿类动物物显性致死性致死试验 精原精原细胞染色体畸胞染色体畸变试验 55.啮齿动物微核物微核试验啮齿动物微核物微核试验 程序外程序外DNADNA合成合成试验 SOSSOS显色反色反应 56.一般生殖毒性一般生殖毒性 生殖毒性生殖毒性 致畸敏感期毒性致畸敏感期毒性试验 围产期毒性期毒性试验 57.哺乳哺乳动物培养物培养细胞胞恶性性转化化实验 致癌致癌试验 短期致癌短期致癌试验 动物短期致癌物短期致癌实验 动物物长期致癌期致癌试验：大鼠：大鼠2 2年，小鼠年，小鼠1.51.5年年58.59.60.61.62.后面内容直接删除就行资料可以编辑修改使用资料可以编辑修改使用63.主要经营：网络软件设计、图文设计制作、发布广告等公司秉着以优质的服务对待每一位客户，做到让客户满意！64.致力于数据挖掘，合同简历、论文写作、PPT设计、计划书、策划案、学习课件、各类模板等方方面面，打造全网一站式需求65.感感谢您的您的观看和下看和下载The user can demonstrate on a projector or computer,or print the presentation and make it into a film to be used in a wider field66.