毕业论文-维聚酮碘与戊二醛对结核杆菌杀灭效果的试验观察动物医学.doc

本科毕业论文（设计）

题 目 聚维酮碘与戊二醛对结核杆菌杀
灭效果的试验观察

系 别 动物医学系
专 业 动物医学
年 级 2009级
学 号 XXXXXXXXXX
姓 名 XXX
指 导 教 师 XXX
成 绩

二○一三年五月二十日
目 录
任务书 1
文献综述 3
开题报告 4
正 文 6
摘 要 6
前 言 6
材料与方法 6
试验结果 6
分析与讨论 7
结 论 7
参考文献与附录 7
致 谢 8
指导教师评阅表 9
交叉评阅表 10
答辩记录表 11

西南大学本科毕业论文（设计）任务书
论文（设计）题目 聚维酮碘与戊二醛对结核杆菌杀灭效果的试验观察
系别、专业 动物医学系 动物医学 学生姓名 XXX 学号 XXXXX
指导教师姓名 XXX 开题日期 2012年4月27日
论文（设计）的主要内容（技术指标）与要求：
主要内容：
1、收集文献资料，研究试验方案。
2、进行消毒剂对牛型结核分支杆菌的杀灭试验。
3、 收集相关文献资料，并写出综述报告。
4、 独立完成毕业论文的撰写。
技术指标：
1、根据研究内容，提出课题的研究方案（开题报告）。
2、正确使用各种试验仪器。
3、试验过程中要着重培养发现问题、分析问题及解决问题的能力。
4、能够独立完成毕业论文撰写。

进 度 安 排

2012年5月 查阅整理资料；
2012年10月至12月 试验过程；
2013年3月至5月 撰写论文；
2013年5月 论文答辩。

系意见：

文献综述
牛结核病的防控及风险分析

XXX
XX大学XX校区动物医学系

摘要：牛结核病是由牛分支杆菌引起的一种慢性人兽共患传染病，其临床症状是咳嗽、病程缓慢、渐进性消瘦、心力衰竭而死。该病目前在牛群中很常见，以奶牛养殖业发达国家最为常见，给养殖业造成较大的经济损失。文章主要从该病的现状、流行病学、临床症状、病理变化和防控措施，对该病进行风险分析。
关键词：牛结核病；牛分支杆菌；诊断；防治；风险分析

1 牛结核病的现状
牛结核病(Bovine tuberculosis，BTB)主要是由牛分支杆菌(Mycobacterium bovis)引起的一种严重的人畜共患慢性、消耗性传染病。以病牛贫血、消瘦、精神萎靡不振和生产力下降等为特征[1]。其特点是在多种组织器官形成结核结节和干酪样坏死[2]。
牛结核病(Bovine tuberculosis)在世界各国均有发生，是危害我国养牛业的主要疫病之一。该病可导致患病牛寿命缩短、产奶量显著减少、不孕，尤其是奶牛最为敏感。给养牛业带来的经济损失巨大[3]。据调查散养牛患结核病率为1%一5%,而圈养奶牛因畜舍通风差互相接触密切,若不加强管理其传播速度将非常迅速[1]。世界动物卫生组织(World Organization for Animal Health，OIE)将牛结核病列为B类动物疫病，我国将其列为二类动物疫病。
2 流行病学
2.1 易感动物
牛结核病主要由牛分枝杆菌引起，牛分枝杆菌具有广泛的宿主范围，感染不同种属的温血动物，包括有蹄动物、食肉类动物、灵长类等在内的50多种哺乳动物和包括类鹦鹉鸟、石鸽、北美洲乌鸦在内的20多种禽类[4]。导致该病的易感动物很多，常见的有牛，羊，猪，犬等动物，其中奶牛易感性最高，实验动物以兔为最好。
2.2 传染源
病牛和病人常常相互感染。病人可通过痰液等传染牛群，而牛群也会通过乳汁、粪便传染给人。其他动物也有可能因撕咬，舔舐鼻液等感染疾病[5]。
2.3 传播途径
成年牛只要因为病原菌在空气中的传播经呼吸道而感染，也可能会因为饲料、食物、饮水等经消化道而感染。犊牛主要因吮吸带病原菌的母乳而感染该病，也可能因空气中的病原菌而感染[6]。
2.4 流行形势及因素
牛结核病无明显的季节性和地区性，各个年龄阶段的牛均可感染。饲养管理不当、圈养而缺乏运动、营养不良、劳役过重以及饲养环境的恶劣，如：牛舍通风不良、潮湿阴暗等都能诱发该病[5]。
3 临床症状
牛结核病的潜伏期一般为16-45天，也会延长达数月或数年，常为慢性经过。临床中以肺结核最为常见[7]。
3.1 肺结核
肺结核以长期的干咳为特征，且以清晨最为明显[7]，经常会误以为是感冒。病初患牛易疲劳、无食欲、反刍无明显变化，常出现短而干的咳嗽，当患牛起立、运动和吸入冷空气时易发咳嗽。随病情发展，咳嗽加重、频繁，并转为湿咳，咳嗽声音较弱，且患牛咳嗽时表现痛苦，呼吸次数增加，严重时发生气短。胸部听诊常有哕音和摩擦音。患牛逐渐消瘦、贫血。病情恶化时，患牛体温升高(达40℃以上)，呈弛张热或稽留热呼吸更加困难，最后可因心力衰竭而死亡[7]。
4 病理变化
在患牛的肺脏或其他器官常见有很多突起的白色结节，切面为干酪样坏死。胃肠黏膜可能会出现大小不等的结核结节或溃疡[8]。
5 诊断方法
结合其流行病学、临床症状、病理变化及微生物检查作出判断。
6 防控
6.1 检疫
若发现感染牛群，需定期对疫区健康牛群进行检疫，在疫区，对健康牛群应每年定期检疫2次，对经过定期检疫污染率在3％以下的假定健康牛群，用结核菌素皮内注射法每年检疫4次；对未经检疫的牛群及阳性反应检出率在3％以上的牛群，应用结核菌素皮内注射、点眼法每年进行4次以上检疫[9]。
6.2 隔离
对检查出的已被感染的牛应该立即隔离饲养，并定期检疫。发现开放性结核病患牛时，应该立即扑杀。并对该疫区的疑似感染牛群分开隔离，一个月后复查，如仍为疑似牛群则继续隔离饲养，一个月后复查，若仍没有好转则可进一步检查做出相应的处理[10]。
6.3 消毒
首先要对饲养的环境进行彻底的消毒，防治病原菌的传播，可采用漂白粉，生石灰等消毒剂进行消毒[11]。粪便进行发酵处理，病牛尸体要深埋或者焚烧。
6.4 加强饲养管理
奶牛场要认真执行奶牛场消毒防疫制度，对饲养管理人员要定期体检，严禁互相串岗，非工作人员不得随意出入牛场。检疫部门要督促牛场及时扑杀病牛，不留隐患，指导并监督消毒和防疫措施的实施[5]。
7 风险分析
7.1 结核病的分布状况
牛结核病在我国随着牛羊饲养量急剧增加，发病率上升。全国奶牛结核病阳性率由2000年的0.2%上升到2007年的0.69％，疫情范围扩大。上世纪90年代前，主要集中于五大牧区，内蒙古、新疆、青海、宁夏和西藏。90年代后，随着内地畜牧业的迅猛发展，疫情在半农半牧和农区省份疫情明显上升。如黑龙江、山西、吉林等省区的畜间阳性率及患病率皆与牧区相近，甚至有的已超过牧区。
7.2 结核病造成的危害
由于目前奶牛“两病”（结核病和布病）监测范围比较窄，对于个体养殖户因其饲养的奶牛少，饲养分散广，流动性大特点，难以开展奶牛“两病”监测，只能将监测重心转移至规模化养殖场[12]。对私下交易奶牛等易传播疫病的活动更是无从管理。
另外，阳性牛的扑杀是开展奶牛“两病”监测的瓶颈。目前，一头奶牛的市场价在1万元左右，而扑杀一头奶牛的补贴则相对较低，个体养殖户要承担大部分经济损失，从而出现养殖户不愿接受奶牛“两病”检疫，甚至出现逃避检疫的情况。于是就导致了病牛无法及时被处理，传染源无法被及时切断，牛群的感染率急剧上升。损失也愈来愈巨大。
由于牛与人类的关系极为密切，每天都要喝牛奶，食用牛肉制品等而有可能感染结核病，导致人类健康也受到严重的威胁，据报道，世界上结核病人中约有15％是通过饮用结核病牛奶而感染的[13]。在非洲的亚萨哈拉地区的国家生产的90%的原奶和被这些国家的人直接消费的奶要么是新鲜的要么是发酵的，但都没有经过巴氏消毒[14]。
并且有相关研究指出，如果人是通过吸入的方式感染牛分枝杆菌，感染人会发展成典型的肺结核[15]。近年来，全球范围内结核病又卷土重来并有上升和蔓延趋势[16]。因此，人类必须建立更加简便有效的牛结核病的检验检疫新方法和完善的牛结核病的监测体系和防控措施，对提高畜产品的品质和经济价值、提高并增强产品的市场竞争力，保护全人类的健康将会发挥十分重要的作用[17]。

参考文献：

[1]王云霞，于三科，翟军军.牛结核病的现状及诊断研究进展[J].动物医学进展，2006，27(6)：
　38-41.
[2]阿地力·比不来西肯，王一明，等．牛结核病的屠宰鉴定和处理[J].中国畜禽种业，2010，(7)：40-41.
[3]高辉，达来．牛结核病的防控[S].畜牧与饲料科学，2011,32(5)：106-107.
[4]Oreilly LM, Daborn CJ. The epidemiology of Mycobacterium bovis infections in animals and man: a review[J]. Tuber Lung Dis, 1995，76(l1)：1-46.
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[6]陆承平．兽医微生物学(第四版)[M].北京：中国农业出版社，2007，204-208.
[7]东北农业大学．兽医临床诊断学（第三版）[M].北京：中国农业出版社，2009:101-105.
[8]赵德明．兽医病理学（第二版）[M].北京：中国农业出版社，2005，108-110.
[9]贾伍有.奶牛结核病及其防治[J].畜牧与饲料科学，2009，30(1)：122-191.
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[11]马秀玲．奶牛结核病的发病特点及防控对策[J].现代农业科技,2007，24168-169.
[12]魏敏，李妮，何永福,等. 奶牛两病的检测与思考[J].中国动物检疫，2004，21(9)：25-27.
[13]Livingstone PG.Ryan TJ, Hancox NG,eta1. Regionalization:a strategy that will assist with bovine
tuberculosis control and facilitrate trade[J].Veterinary Microbiology. 2006，112： 291-301.
[14]Cosivi O,Grange JM, Daborn CJ,eta1.Zoonotic tuberculosis due to Mycobacterium bovis in developing countries[J]. Emerg Infect Dis, 1998，4：59-70.
[15]Johnston WT, Gettinby G, Donnelly CA, eta1. Herd-level risk factors associated with tuberculosis
rculosis breakdowns among cattle herds in England before the 200l foot-and-mouth disease epidemic [J].
Biol Lett, 2005，1：53-56.
[16]王海艳，刘中学，石新华,等．牛结核病现状与未来研究方向[S].检疫科学，2007，17（3）：853-853.
[17]卫龙兴，成建忠．牛结核病流行病学与诊断技术研究进展[J]. 现代农业科技，2010,(21)： 345-348.

西南大学本科毕业论文（设计）开题报告

论文题目
聚维酮碘与戊二醛对牛型结核分支杆菌杀灭效果的研究
系别专业
动物医学系 动物医学
年 级
2009级
开题日期
2012年4月
学 号
XXXXXXXX
姓 名
XXX
指导教师
XXX
1. 本课题研究意义：
近年来，随着我国养殖业的发展，牛结核病发病率急剧上升。牛结核病是一种人兽共患病，是危害我国养牛业的主要疫病之一，尤其是奶牛最为敏感。该病可导致患病牛寿命缩短、产奶量显著减少、不孕，给养牛业带来的经济损失巨大。由于牛与人类的关系极为密切，导致人类健康也受到严重的威胁。国内对含氯复方消毒剂杀灭结核杆菌效果，以及“84”消毒液对结核杆菌的杀灭效果均有研究，而对聚维酮碘与戊二醛对结核杆菌的杀灭效果还未曾报道。本研究采用养殖场常用的卤素类消毒剂聚维酮碘、醛类消毒剂戊二醛进行杀菌试验，试验通过观察不同浓度消毒剂、不同消毒时间对结核杆菌的杀菌效果，为养殖场在开展对牛结核病的的预防工作选择消毒剂时提供理论依据。

2.研究内容：
1、做预试验，设计试验方案
2、准备试验材料并做好准备工作
3、进行不同浓度的聚维酮碘与戊二醛、不同作用时间对牛型结核分支杆菌的杀灭效果的试验。

3.技术路线、研究方法和研究进度：
3.1 技术路线
消毒剂稀释为所需各个浓度对牛型结核分支杆菌进行杀灭作用，观察作用时间不同下，消毒剂对牛型结核分支杆菌的杀灭效果。
3.2 研究方法
1) 试验准备
2) 改良罗-琴培养基的制作
3) 细菌的鉴定
4 ) 麦氏标准比浊管的配制　
5) 菌液的制备及接种
6 ) 结果的观察与判定
3.3 研究进度
2012年5月 查阅整理资料；
　　 2012年10月至12月 试验过程；
2013年3月至5月 撰写论文；
2013年5月 论文答辩。

4.导师意见：

指导教师（签名）：
年 月 日
5.系意见：

系（盖章）
年 月 日
正文
聚维酮碘与戊二醛对牛型结核分支杆菌杀灭效果的研究

XXX
XX大学XX校区动物医学系

摘要：目的：研究聚维酮碘和戊二醛在不同浓度、不同作用时间对牛型结核分支杆菌的杀灭效果。方法：用浓度从0.01%到5%的聚维酮碘和0.01%到2%的戊二醛，作用时间从10min到12h分别对牛型结核分支杆菌进行杀菌试验，接种培养观察长菌情况。结果：5%的聚维酮碘作用10min、2%的聚维酮碘作用2h、1%浓度的聚维酮碘作用6h后均可杀灭牛型结核分支杆菌，而1%浓度以下的聚维酮碘对牛型结核分支杆菌没有杀灭效果；2%的戊二醛对结核杆菌没有杀灭作用。该试验结果为养殖场选择消毒剂对环境进行净化提供了理论依据。
关键词：牛型结核分支杆菌；聚维酮碘；戊二醛；杀菌作用；消毒剂

Observation on the Effect of Povidone Iodine and Glutaraldehyde Ddisinfectant for Killing the Bovine Mycobacterium

XXX
Department of Veterinary Medicine, XX University

Abstract: Objective: To study the effect of povidone iodine and germicidal efficacy of glutaraldehyde in different concentrations, different time on bovine type of Mycobacterium tuberculosis.Method: concentration from 0.01% to 5% povidone iodine and 0.01% to 2% glutaraldehyde, time from 10min to 12h germicidal experiments were conducted on the type of Mycobacterium tuberculosis, bacterial culture was inoculated.Results: 5% povidone iodine 10min, 2% povidone iodine 2h, 1% concentration of povidone iodine 6h can kill Mycobacterium bovis, and 1% concentrations povidone iodine on the type of Mycobacterium tuberculosis without killing effect; 2% glutaraldehyde has no killing effect on Mycobacterium tuberculosis.The test results for the farms to select disinfectants to purify the environment provides a theoretical basis.
Key words: Bovine Mycobacterium ; povidone-iodine; glutaraldehyde; germicidal efficacy; disinfectant

1前言
牛结核病(Bovine tuberculosis，BTB)主要是由牛分支杆菌(Mycobacterium bovis)引起的一种严重的人畜共患慢性、消耗性传染病。以病牛贫血、消瘦、体虚乏力、精神萎靡不振和生产力下降等为特征[1]。其特点是在多种组织器官形成结核结节和干酪样坏死[2]。
牛结核病为一种人兽共患病，不进给养殖业带来巨大损失，还严重威胁人类健康，经调查，在非洲的亚萨哈拉地区的国家生产的90%的原奶和被这些国家的人直接消费的奶要么是新鲜的要么是发酵的，但都没有经过巴氏消毒[3] ，导致这些地区大部分人都感染了结核病。并且有相关研究指出，如果人是通过吸入的方式感染牛分枝杆菌，感染人会发展成典型的肺结核[4] 。利用消毒剂对畜禽及其周围环境进行消毒以杀灭病原体、切断传染途径，已成为预防和控制畜禽传染病流行的重要措施[5]。选出能有效杀灭结核分枝杆菌的消毒剂，是控制其感染的一个有力途径[6]。对结核杆菌的杀灭效果研究已经相继有了报道，如：“84”消毒液对结核杆菌的杀灭效果研究[7]，含氯复方消毒剂杀灭结核杆菌效果的试验观察[8]，以及碘伏对3株分支杆菌标准菌株杀灭效果的研究[9]。聚维酮碘作为目前畜禽养殖场常用的碘制剂之一，可杀死大部分细菌、真菌和病毒[10]，是一种高效、广谱的消毒杀菌剂。杀菌范围广，作用强能杀死病毒、细菌、芽孢、繁殖体、真菌、原虫。无刺激性，毒性低。低浓度效果好，成本低[11]。夏勇等的研究结果显示聚维酮碘消毒剂安全无毒[12]。而戊二醛作为养殖场常用消毒剂之一，是一种广谱、高效的灭菌剂，对芽胞、一般的细菌繁殖体、分枝杆菌、病毒、真菌等都有良好的杀灭作用[13]。但是，聚维酮碘和戊二醛对牛型结核分枝杆菌的杀菌效果还未见报道。
本研究采用养殖场常用的卤素类消毒剂聚维酮碘、醛类消毒剂戊二醛进行杀菌试验，试验通过观察不同浓度消毒剂、不同消毒时间对结核杆菌的杀菌效果，为养殖场在开展对牛结核病的的预防工作选择消毒剂时提供理论依据。
2 材料与方法
2.1 试验药品
戊二醛、聚维酮碘、磷酸二氢钾、枸橼酸镁、硫酸镁、谷氨酸钠、丙三醇、马铃薯淀粉、新鲜鸡蛋、孔雀石绿、NaCl、蒸馏水等。以上试剂均购自国产分析纯。
2.2细菌材料
试验所需细菌由实验室提供。
2.3主要试验器材
高压灭菌锅、离心机、水浴锅、无菌操作台、生化培养箱、移液枪等。
2.4 试验方法
2.4.1细菌的鉴定
吸取少量生理盐水置于载玻片上，用接种环适量挑取在改良罗-琴培养基上生长的单菌落于载玻片上，涂抹均匀，用齐-尼二氏染色法染色，在光学显微镜下观察，如可见红色、抗酸性、短杆状、微弯、团状聚集菌体, 偶见分枝即为牛结核分枝杆菌。
2.4.2 改良罗氏培养基的制作
磷酸二氢钾14g，枸橼酸镁0.6g，硫酸镁0.24g，谷氨酸钠7.2g，丙三醇12mL，溶解于600mL水中，加马铃薯淀粉30g，混匀，沸水浴煮1h成糊状，待冷后加经消毒纱布过滤的新鲜鸡卵液1000mL，再加入无菌的2%孔雀绿水溶液20mL，混匀后分装于无菌试管内，85℃间歇灭菌2次，冷却后经37℃无菌试验24h备用。
2.4.3消毒液的配制
试验室提供给5%的聚维酮碘和2%的戊二醛。试验所需其他浓度均以原浓度为基础，加入灭菌蒸馏水配制。每个浓度消毒剂均为2ml。
2.4.4 标准麦氏比浊管的制备
表1: 麦氏标准管的制备
Table Ⅰ: preparation of McFarland standard tube
麦氏标准管号
体积（ml）
细菌数×108/ml
BaCl2(1.175%)
H2SO4(1%)
0.5 0.5 99.5 1.5
1 1.0 99.0 3.0
2 2.0 98.0 6.0
3 3.0 97.0 9.0
4 4.0 96.0 12.0
5 5.0 95.0 15.0
6 6.0 94.0 18.0
7 7.0 93.0 21.0
8 8.0 92.0 24.0
9 9.0 91.0 27.0
10 10.0 90.0 30.0
麦氏标准比浊管的制备可按照表1给出的数据，由实验室提供药品自行按照比例配制。
本试验所需0.1麦氏单位浑浊度，按照表中比例则用0.5ml的BaCl2（1.175%）加入99.5ml的H2SO4（1%）反应所产生的浑浊度。
2.4.5 菌液的制备
在无菌操作室台，取出试验室提供的细菌，取适量灭菌蒸馏水浸润试管内细菌，用接种环刮取菌体。所刮菌体倒入预先准备好的灭菌试管内。加入适量灭菌蒸馏水，边加水边与麦氏标准管比对，直到浑浊度相似时停止加入蒸馏水，塞好塞子，置于无菌操作台内备用。
2.4.6接种培养
在装有不同浓度消毒液的试管内加入已经比对为一个麦氏单位浓度的菌液100ul，在加入第1个浓度时就开始计时，并且每加入一管都要计时，必须准确的记录每一管加入菌液的时间。
在每个浓度消毒液作用时间分别为10min、20min、30min、1h、2h、6h、12h时，使用移液枪取出300ul的混合液体置于标有对应浓度序号的离心管内，离心管中预先加入适量生理盐水，再次混匀。将装有取出液和生理盐水相混合的离心管按顺序置于离心机内，5000r/min离心20min。
将离心完的离心管按照顺序轻轻置于无菌操作台内的试管架，弃去上清液，用200ul移液枪搅动离心管底部，使沉淀于底部的菌体与剩余液体混匀，然后吸取200ul的混合液置于培养基斜面按顺序放好，最后在培养基试管上注明消毒剂名称，作用时间及消毒剂浓度，置于37℃的恒温箱培养14天。
2.5 试验的观察与结果判定
恒温箱37℃连续培养14天后观察各个培养基的长菌情况，并记录实验结果。长菌的即为没有杀菌效果，没长菌的即为有杀菌效果。通过各个消毒剂不同浓度长菌情况的对比即可得出最适杀菌浓度与最适消毒时间；通过观察分析即可得出各个消毒剂对结核杆菌杀灭效果。
3 试验结果
3.1 聚维酮碘的杀菌实验结果
聚维酮碘的杀菌试验结果如表2所示。表中显示结果为：10min至12h，5%浓度的
培养基都没有长出结核杆菌，20min和1h的5%浓度的试管被污染；2%浓度的则是在杀菌试验进行2h后不长出结核杆菌，2h以前均长了菌；1%浓度在杀菌试验进行6h后不长菌，6h以前均长菌；0.5%浓度分别在试验进行1h、6h后没有长结核杆菌，其余的试验反应时间均长菌；0.5%以下浓度在杀菌试验进行的每个时间段后仍然长菌。

图1：聚维酮碘作用10min的杀菌试验结果
Fig I: Germicidal test results of povidone iodine for 10 minutes
聚维酮碘作用10min，5%浓度的对结核杆菌有杀菌效果，其余浓度均无杀菌效
果。
表2：聚维酮碘的杀菌实验结果
Table Ⅱ: the experimental results of povidone iodine for bacteriostasis
时间
浓度（%）
0.01
0.02
0.1
0.5
1
2
5
10min + + + + + + -
20min + + + + + + /
30min + + + + + + -
1h + + + - + + /
2h + + + + + - -
6h + + + - - - -
12h + + + + _ _ _
表中“+”代表培养基上长出结核杆菌；“-”代表培养基上没有长出结核杆菌；“/”代表该试管被污染

图2：聚维酮碘作用6h杀菌试验结果
Fig Π: Germicidal test results of povidone iodine for 6 hours
聚维酮碘作用6h，5%到0.5%浓度的聚维酮碘对结核杆菌有杀菌效果，0.2%到0.01%浓度的聚维酮碘对结核杆菌没有杀菌效果。
聚维酮碘的杀菌试验结果为：5%浓度的聚维酮碘作用10min对结核杆菌有杀菌作用；2%聚维酮碘作用2h对结核杆菌有杀菌作用；1%聚维酮碘作用6h对结核杆菌有杀菌作用；0.5%及以下浓度聚维酮碘对结核杆菌没有杀菌作用。
3.2 戊二醛的杀菌实验结果
戊二醛的杀菌试验结果如表3所示：2%浓度到0.01%浓度的戊二醛均对结核杆菌没有杀灭效果。

图3：戊二醛作用2h的杀菌实验效果
Fig. Ш: Germicidal test results of Glutaraldehyde for 2 hours
2%浓度到0.01%浓度的戊二醛作用2h，培养基上长满结核杆菌，戊二醛对结核杆菌没有杀灭效果。

图3：戊二醛作用6h的杀菌实验效果
Fig. IV: Germicidal test results of Glutaraldehyde for 6 hours
戊二醛作用6h，6个培养基中都长满了结核杆菌，即：2%浓度到0.01%浓度的戊二醛对结核杆菌均没有杀灭效果。
表3：戊二醛的杀菌实验结果
Table Ш:the experimental results of glutaraldehyde for bacteriostasis
时间
浓度（%）
0.01
0.02
0.1
0.5
1
2

10min + + + + + +
20min + + + + + +
30min + + + + +
1h + + + + + +
2h + + + + + +
6h + + + + + +
12h + + + + + +
表中“+”代表培养基中长出细菌
4 讨论
结核杆菌的细胞结构特殊，细胞壁含有多糖，蛋白质复合物以及脂类（多为磷脂、蜡质和脂肪酸[14]，脂类的3种主要成分与蛋白质和多糖发生结合，使细胞壁的密度增大，增强细胞壁的保护效果，防止多种杀菌药液渗入[15]，导致结核杆菌对化学消毒剂的抵抗力较其他细菌强，从而消毒效果更难[7]。
聚维酮碘(Povidone Iodine，PVP-I)是碘和1-乙烯基-2-吡咯烷酮[16]结合形成的络合物[17],是中效消毒剂,主要通过其亲和剂接触细菌细胞，释放游离碘直接卤化卤体蛋白质, 产生沉淀, 破坏细胞膜，使微生物死亡，从而达到杀灭细菌的作用[18-19] 。
有研究报道，聚维酮碘对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌作用3min，平均杀灭率可达99.98%，对白色念球菌作用5min，杀灭率可达99.98%[20]。
在本研究中，5%的聚维酮碘作用10min对牛型结核分支杆菌即有杀灭效果，说明牛型结核分支杆菌对聚维酮碘的抵抗力较其他细菌强。聚维酮碘毒性小、刺激性小[21],但是碱性环境、还原性物质会降低碘消毒剂的消毒效果[22] ，所以在需要较强消毒效果的试验中，要注意含碘类消毒液所处环境。
戊二醛是一种双醛类合成消毒剂[23]。主要通过2个活泼的醛基在适当的条件下[24]与菌体蛋白质中的氨基结合使其变性或使蛋白质分子烷基化，或者与胞壁脂蛋白发生交联、和胞壁磷壁酸反应形成侧链，从而封闭细胞壁，阻碍微生物对营养物质的吸收和废物的排出[25]，达到杀灭一切微生物的作用。
有研究报道，戊二醛对金黄色葡萄球菌和白色念球菌作用10min，对大肠杆菌作用7min，杀灭率即可达到>99.9%[26]。本研究中，戊二醛对牛型结核分支杆菌没有杀灭效果。
2%碱性戊二醛极不稳定，在pH大于9时很快聚合失效[23]， 在碱性溶液中，戊二醛杀菌效果特别明显，但稳定性较差[27]。国内医学报导，在PH为7.4时戊二醛对病毒的灭活能力是pH为5.0时的10倍，但戊二醛pH值>9时即迅速聚合失效[28]。
本试验所用戊二醛为酸性戊二醛消毒液，戊二醛酸性溶液中只有少量戊二醛单体[29]，产生的自由醛基较少，对细菌的杀灭效果较差。对于本身就抗酸且对消毒剂具有较强抵抗力的牛型结核分支杆菌来说消毒效果更是微乎其微，所以导致本试验的试验结果为全部长菌。
5 结论
本研究表明，1%浓度以上的聚维酮碘作用12h后均可杀灭牛型结核分支杆菌，而1%浓度以下的聚维酮碘对牛型结核分支杆菌没有杀灭效果；2%浓度到0.01%浓度的戊二醛对结核杆菌均没有杀灭作用。
建议养殖场根据不同的情况选择合适的消毒剂做好环境的消毒净化，防治牛结核病的感染。

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