注射剂无菌保证基本工艺研究应用与验证常见关键技术问题.doc

注射剂无菌保证工艺研究与验证常用技术问题（一）注：如下均为第一期讲习班（注射剂无菌保证工艺研究与验证技术规定）参会代表所提问题，本期讲习班讲习组依照当前关于技术规定，通过认真梳理、分析、总结后，现予以发布，并就有关问题进行讨论与交流。 1、按照欧盟决策树规定，不能达到121，15分钟灭菌，可选取F08残存概率法。请问，若产品能达到121，12分钟灭菌，与否就不能选取121，10分钟，同样，能达到10分钟，就不能选取8分钟，都是F08状况。 答：从微生物杀灭数学模型可知，在初始污染相似状况下，灭菌F0值越大，无菌保证水平越高。因而，显然为减少产品残留微生物风险，尽量选取高F0值是顺理成章。 2、在产品质量稳定条件下，均能满足121，8分钟和115，30分钟，哪个条件应当优先选取呢？ 答：不考虑产品理化质量稳定性，理论上这两种条件达到F0值几乎相等，无所谓优选哪个。但实际生产中，还要考虑灭菌器内产品中热穿透状况，灭菌器内不同部位产品实际获得F0值差别，不同灭菌批次间产品F0差别等。应当选取热分布差别小，产品F0值差别较小灭菌工艺。 3、申报资料中灭菌条件为“1012，灭菌30分钟”，这种表达法与否规范？ 答：暂不说灭菌条件为“1012，灭菌30分钟”与否规范，“1012，灭菌30分钟”自身不能称为终端灭菌，因“1012，灭菌30分钟”几乎不能计算F0值。灭菌条件表达可以参照中华人民共和国药典二部附录168灭菌法，12115min或11640min。 4、同品种10ml、20ml注射剂，采用相似灭菌方式与否适当？ 答：同品种10ml、20ml注射剂，可以采用相似灭菌方式，但应进行热穿透实验，考察不同体积样品热穿透与否有一致，同步考虑采用灭菌方式应能保证大体积产品无菌保证水平。 5、选取最高无菌保证水平灭菌工艺，也许会与产品质量，如关于物质、稳定性等方面有冲突，如何平衡这一矛盾？此外，国外上市是粉针剂，国内申报时与否还需要进行灭菌工艺选取研究？ 答：事实上，在进行灭菌工艺选取研究过程中就应当进行不同灭菌条件下样品质量变化研究，选取灭菌工艺过程也是平衡无菌保证水平和（样品质量）理化指标过程，在产品有临床需求状况下，灭菌工艺选取应以其自身能达到最高无菌保证水平为原则。对国外上市粉针剂，国内申报时也应对其采用粉针剂型进行研究，如主药确系对热、对水分不稳定，则可以采用与国外相似粉针剂；如果主药不是对热、对水分不稳定，则应依照主药性质选取无菌保证水平高剂型。 6、最后灭菌工艺选取原则是首选F012，而不是F08；还是只要达到F08即可？ 答：可参照欧盟灭菌工艺选取决策树。 7、决策树中残存概率法与否亦优先选取121温度条件？ 答：不一定，要依照产品稳定性拟定，如果采用更高温度和更短时间能满足残存概率法时，也许比较低温度，更长时间灭菌条件对产品更有利。如果产品不能耐受121高温，则可以减少温度，并保证微生物残存概率不大于10-6。 8、对热不稳定药物（如蛋白质类、生物制品等），应当直接进行无菌生产工艺验证。 答：对热不稳定药物（如蛋白质类、生物制品等），一方面应对采用无菌工艺进行研究，是采用除菌过滤+无菌生产工艺，还是采用无菌组装工艺；然后再对无菌工艺进行验证。 9、与否在产品注册申报时就已形成本产品完整工艺规程中规定各项参数验证？ 答：药物注册管理办法规定，申请人在申报“药物注册申请表”后，经药物审评中心审评符合规定，告知申请人向药物认证管理中心申请生产现场检查，现场检查目是确认核定生产工艺可行性，同步抽取1批样品，并规定样品生产应当符合GMP规定。由此可见，申报产品注册时，应对用于正式上市产品生产工艺有了足够结识。这种结识是建立在产品和工艺开发，扩产、设备和系统验证以及验证批生产整个过程上。验证批目是要证明在规定工艺参数范畴内，工艺过程能始终身产出合格产品来。因而，在进行验证批生产前，应已充分理解并能控制工艺中各种核心可变因素。 10、在进行灭菌工艺验证时，普通会放置一种校验探头在灭菌柜控制探头旁边，这两者之间温度差别有什么规定？与否应按校样原则，只容许0.5偏差？ 答： 普通来说: a：灭菌器自带独立记录探头与监控探头就应完毕足够验证数据，然后对存在偏差作修正； b：验证所用测温探头精度应优于灭菌器自带记录探头和监控探头； c：验证自身作用之一是对灭菌器自带监控探头和记录探头进行修正，以便正常使用时达到较为精确温度值。 当前没有找到“只容许0.5偏差”说法。注射剂无菌保证工艺研究与验证常用技术问题（二）注：如下均为第一期讲习班（注射剂无菌保证工艺研究与验证技术规定）参会代表所提问题，本期讲习班讲习组依照当前关于技术规定，通过认真梳理、分析、总结后，现予以发布，并就有关问题进行讨论与交流。 11、在同一条大容量注射剂生产线上，如果有一台灭菌柜，需要进行各种规格产品（如250ml,100ml）以及不同灭菌参数产品（例如灭菌温度和时间不同）灭菌，那么在进行验证和再验证过程中，如何进行热分布以及热穿透验证设计？与否各种规格、各种灭菌条件均需分别进行验证？ 答：普通来说，各种规格、各种灭菌条件均需分别进行验证。 不同规格混合装载灭菌，除非可以确认诸多有关内容，否则不推荐应用。 12、在对湿热灭菌器进行验证或再验证过程中，进行热分布、热穿透验证时，如果柜内设立12个或16个热电偶进行温度测试时，找到冷点在3次验证中也许不同，如果浮现这种状况该如何解决？ 答：普通来说，空载热分布冷点应当是在拟定位置周边，否则就也许是设备、压力、空气置换不完全、蒸汽质量等因素引起。 对于装载热穿透，大容量注射剂（LVP，100ml）冷点位于产品几何中心和沿纵轴位于产品底部，但需要验证确认。冷点定位在小容量注射剂中并不典型，由于溶液加热速率几乎与灭菌器相似。 尚有，容器方向也会影响冷点位置，当容器旋转或翻转时，也许不存在可辨别冷点。 如果装载不变，容量相似，蒸汽穿透不存在阻隔等，冷点依然无法重现，则应检查设备、工艺、压力、蒸汽质量等方面也许存在不拟定性。 13、满载热分布和空载热分布对于灭菌效果上体现出意义有何不同？ 答：两项实验都是测量灭菌腔室温度分布状况，还不反映产品内温度和热效益状况，还不能直接反映产品灭菌效果。但腔室状况显然会影响产品内状况。验证中依次进行空载热分布、满载热分布、产品热穿透实验。采用这种实验重要目是用尽量少实验次数，尽量地揭示客观状况。前道实验成果为后道实验提供信息。 14、满载热分布实验是用空瓶进行还是用装注射用水输液瓶进行？ 答：满载热分布实验是用模仿样品进行。 15、如验证时装载方式为半载或满载，在后来生产中处在满载和半载之间与否需要验证？ 答：对于处在满载和半载之间装载方式，建议使用模仿产品填充使其达到满载，从而保证生产时装载方式与验证时一致。 16、热穿透实验怎么做？ 答：热穿透实验目是拟定灭菌室装载中“最冷点”，并确认该点在预定灭菌程序中获得充分无菌保证值，即菌种残存量10-6及各检测点温度与灭菌室内平均温度差值2.5。对于也许影响灭菌效果操作状况变更应做相应验证，确认操作办法。例如：当在每个灭菌盘上增长不锈钢盖后，实际产品（溶液）内部升温时间要比不加盖时慢2分钟，因而要在灭菌程序设定期增长2分钟时间。热电偶放置与满载热分布实验规程一致，将原则热电偶放在灭菌溶液中心部位。 17、热穿透实验中模仿样品是什么概念，是指实验室小批量样品吗？ 答：热穿透实验中模仿样品是指热穿透性能与真实样品一致样品，不是实验室小批量样品。 18、微生物挑战实验生物批示剂种类需要依照品种选取吗？如何选取？ 答：微生物挑战实验生物批示剂种类及选取可以参照中华人民共和国药典二部附录169灭菌法。 19、灭菌前微生物污染水平测定办法？ 答：滤膜过滤法是最惯用办法。使用前应通过验证。 20.产品微生物限度检测成果为0CFU，没有发现耐热微生物，那么验证过程中能否采用D值稍低枯草芽孢杆菌作为生物批示剂进行验证？ 答：1）、微生物限度检测成果和选取D值稍低枯草芽孢杆菌作为生物批示剂之间不存在因果关系。 2）、依照提问者问题，可以以为其采用是残存概率法灭菌工艺。对于残存概率法灭菌工艺可以选取生物批示剂进行残存概率测试，仅仅是由于产品或包装自身不能承受过度杀灭，从而选取比较严格过程控制，加上产品初始菌数量控制，或者再加上除菌过滤工艺等等，然后选取生物批示剂进行敏捷度测试，测出平均含菌量N0，再进行不少于4个梯度菌量、足够批次、数量产品灭菌先后微生物限度测试（若必须，对不同灭菌时间也要进行测试），寻找并得到不不大于下降6个对数级别状态参数，在满足F0值在812之间条件下，从而推算出D值。注射剂无菌保证工艺研究与验证常用技术问题（三）注：如下均为第一期讲习班（注射剂无菌保证工艺研究与验证技术规定）参会代表所提问题，本期讲习班讲习组依照当前关于技术规定，通过认真梳理、分析、总结后，现予以发布，并就有关问题进行讨论与交流。 21、请问灭菌前微生物污染水平和耐热性（D值）测试办法？ 答：微生物污染水平普通采用滤膜过滤法截留微生物，再将滤膜转移到固体培养基表面，培养并作微生物计数。应注意过滤体积、截留微生物数量，保证足够检出率（足量过滤量）和可计数性（截留微生物太多就没法计数了）。 每批产品都进行耐热性测试并非D值测试，而是所谓沸腾实验一种定性实验。将截留了微生物滤膜放入装有同种产品药液试管中，进行水浴煮沸15分钟或更长时间，对该药液进行无菌检查，如阴性则通过，呈阳性，阐明污染菌是耐热菌，则需要进一步测D值。99%以上检品是非耐热菌。 D值测定相称复杂，请参照药物生产验证指南（蓝皮书，国家药监局编）第三篇第三章第一节，有详细简介。 22、如何依照D值计算接种量？ 答：芽孢接种量计算： Ni10Do(lgNo+6)/Di 其中Ni为生物批示剂耐热孢子接种数量 No为预定产品中灭菌前污染微生物限度 Do为污染微生物容许最大D值 Di为生物批示剂耐热孢子在产品中D值 23、对于选取残存概率法最后灭菌产品，如果灭菌前每批检测微生物限度，而微生物限度检测时间为72小时，而实际持续生产生产周期远远短于72小时，其检测成果仅是对灭菌后产品无菌保证水平参照吗？ 答：显然灭菌前微生物含量检查成果远远滞后于生产过程，其目不是用于对当批产品中间控制。 该检查意义重要有两项：第一，用于评价该批产品无菌保证水平；第二，长期积累了多批灭菌前微生物含量数据后，可以对生产系统在灭菌前各工艺环节微生物污染状况作整体评估，从而批示该生产体系与否有效地将微生物污染控制在较好水平，与否需要进行改进等。 24、请问微生物种类、数量研究办法？所需设备？如果采用残存概率法，与否在生产过程中必要对微生物水平进行测定，如果引入将增长多少成本？作为大输液生产公司，采用残存概率法，与否要建立专门微生物实验室检测灭菌前药液微生物污染水平？ 答：微生物污染限度即数量检查可以按照药典收载微生物限度检查办法进行；微生物种类即鉴别可以从如下几方面依次展开：1）通过肉眼观测菌落形态；2）镜检形态和运动性；3）普通生化实验：革兰氏染色或3KOH实验；4）生化鉴定（即API实验）鉴别到种。 采用残存概率法时，应当检测产品灭菌前微生物污染水平，涉及污染菌煮沸实验（如100，15分钟）和微生物计数。 注射剂生产公司，微生物实验室是必不可少，其基本功能应涉及原辅料微生物限度检查，产品灭菌前微生物污染量检查，产品无菌检查，细菌内毒素检查，生产环境动态检查（空气微粒、浮游菌和沉降菌计数）。有条件实验室还可开展如下工作：微生物鉴别实验（建议公司集团中心实验室开展API鉴定），生物批示剂标定（即D值测定，建议公司集团中心实验室开展该项工作）。 25. 对于过度杀灭法与否需要进行灭菌工艺验证？残存概率法产品研发工艺研究与实际生产中验证有何区别？ 答：固然需要验证，欧盟CGMP附录第83条：所有灭菌工艺都应验证。 残存概率法是灭菌工艺设计，自身就需要验证确认。 26、过度杀灭法与否拟定不需进行微生物挑战实验？ 答：过度杀灭法内涵是产品中微生物下降12个对数，微生物挑战实验是证明微生物残存概率不不不大于10-6，故过度杀灭法可以不进行微生物挑战实验。 27、最后灭菌产品与否每个申请注册品种都要单独进行设备验证？与否可以只进行一次设备验证，其他品种可以通用？设备验证资料与否可不附在品种验证资料中，只作为存档备查？ 答：最后灭菌产品不一定每个申请注册品种都要单独进行设备验证，如果注册品种采用相似或更低灭菌条件，可以只进行较高温度灭菌条件下设备验证；针对品种灭菌条件设备验证资料也应附在品种验证资料中。 28、非溶液剂型、半固体或粉针剂灭菌工艺可以计算出类似于F0值数值吗？可以计算出SAL吗？详细规定是多少？ 答：非溶液剂型、半固体或粉针剂灭菌工艺不可以计算出F0值，但可以计算出SAL，详细可参照欧盟灭菌工艺选取决策树。 29、关于培养基灌装实验，是针对生产线验证，还是针对申报产品进行（每个产品都要灌装三批验证），请问：（1）生产线验证能否代替申报产品灌装实验（同类品种）？（2）采用何种培养基，硫乙醇酸盐和改良马丁两种培养基都要吗？（3）GMP检查中不同包装规格与否都需要进行三批次灌装实验？ 答：（1）培养基模仿灌装实验应依照产品、包装规格、包装形式不同而分别进行。例如，如果产品是粉针剂，则培养基模仿灌装实验普通会先灌装液体培养基，然后再灌装模仿产品无菌粉末（如PEG无菌粉）；如果无菌注射液或冻干粉针剂，则只需灌装液体培养基即可；如果包装规格有2ml、5ml、10ml几种，则即便是同一种产品也需要分别进行各自规格培养基模仿灌装实验；如果包装形式有西林瓶或者其她形式（如预充式注射器、安瓿），因采用不同生产线需要分别进行培养基模仿灌装实验。 在详细工作中，考虑到培养基模仿灌装实验事实上是对整个生产线系统验证，涉及生产设备、环境和人员操作等，因此，如果进行培养基模仿灌装实验采用最差条件，即瓶子最大，灌装速度最慢，人员最多，时间长于正常生产时间等，则也可以不必进行每个产品、每个规格培养基模仿灌装实验；如果不是最差条件，则应依照产品、包装规格、包装形式不同分别进行。 （2）普通采用广谱培养基，能增进革兰氏阳性、阴性、酵母菌和霉菌生长，如大豆胰蛋白胨培养基，厌氧培养基只在特殊状况下使用。 （3）只有在初次验证时，每种规格需要持续成功进行3次培养基模仿灌装实验，后来每年进行2次，每次进行1批次培养基模仿灌装实验即可。注射剂无菌保证工艺研究与验证常用技术问题（四）注：如下均为第一期讲习班（注射剂无菌保证工艺研究与验证技术规定）参会代表所提问题，本期讲习班讲习组依照当前关于技术规定，通过认真梳理、分析、总结后，现予以发布，并就有关问题进行讨论与交流。 30、培养基灌装实验中，培养基灭菌后、灌装前，再经滤膜除菌过滤，以观测滤器在消毒安装过程中无菌效果，与否可行？ 答：培养基灌装实验是对涉及无菌过滤在内所有环节无菌性保证限度考察，推荐配制培养基后直接用于无菌过滤及随后灌装过程，实际操作中要注意防止不溶性颗粒堵塞滤器。 31、培养基灌装实验年度再验证每年两次，每次几批？ 答：对于某个产品年度再验证，普通做法是每年进行两次培养基灌装实验，每次一批。 32、中华人民共和国药典无菌培养时间已变为14天，培养基模仿灌装后在两个温度培养实验与否也需延长？ 答：总培养时间不得少于14天，可以提成两个温度（22.5度和32.5度）各培养至少7天，也可以一种温度（22.5度）直接培养。 33、培养基灌装实验合格原则置信限为95%，染菌概率0.1%，请详细解释一下使用哪个记录办法，如何计算查表得出。 答：关于计算公式详细阐明，可参照国家食品药物监督管理局药物安全监管司和药物认证管理中心组织编写药物生产验证指南（）（化学工业出版社）一书第258页。 有两种计算办法。一种是采用泊松分布近似值计算公式，即 P（X0）=1e-Np0.95 其中，P为置信限，N为模仿分装瓶数或批量，p0.1（污染概率） 另一种计算办法是更为精准二项式计算公式，即 P(X0)=1（1X）N 其中，P为置信限，N为模仿分装瓶数或批量，X= 0.1（污染概率） 在书中第259页，列有“可信限为95%时一次模仿分装中模仿分装量、污染数量与污染概率关系表”，可从该表查出模仿分装数量与污染数量相应数值。 34、在讲义72页第59张片子中提到粉针剂、冻干粉针、小容量注射剂工艺验证异同点中培养基灌装程序差别重要是指什么，详细如何做，起始点是哪里，从哪里开始到哪里结束？ 答：对于无菌粉针剂，培养基灌装形式有某些特殊性，如要准备模仿无菌粉末，分装后用注射器将液体培养基加入瓶中；或将无菌培养基粉末分装，结束后用注射器加入无菌注射用水。但目仍是考察整个无菌分装过程无菌保证限度。 35、如何进行容器密封性验证？ 答：容器密封性验证常采用物理和微生物学检测手段。物理检测有许多长处，如敏捷度较高、使用以便、检测迅速及低成本等。在产品有效期内，均可使用物理检测办法来拟定包装完整性与否符合规定规定。进行包装完整性检测一种重要因素是保证无菌产品始终保持无菌状态。因而，在产品包装研发阶段，应考虑采用微生物侵入实验，或采用经验证过并且比微生物检测更为有效物理实验办法，来检测产品包装完整性。但是，对效期内产品稳定性实验来说，因进行微生物侵入实验较为困难，故建议采用物理检测办法。微生物侵入实验是对最后灭菌容器密封系统完好性挑战性实验。在验证明验中，取输液瓶或西林瓶(小瓶)，灌装入培养基，在正常生产线上压塞、压盖灭菌。然后，将容器密封面浸入高浓度运动性菌液中，取出、培养并检查与否有微生物侵入，确认容器密封系统完好性。同步，需作阳性对照实验，确认培养基促菌生长能力。 36、在采用微生物浸泡法进行容器密封性验证时，为什么要事先去除铝盖，请问除去铝盖后，是不是只剩胶塞，那么在实验过程中会不会发生药液泄露而影响验证成果？ 答：去除铝盖是为了导致一种更为严格条件，授课中以冻干粉针剂为例，普通容器内有较高真空，不会导致漏液，实验者可依照自己产品特点判断去除铝盖与否合用。 37、密封性验证中，如铝桶验证，用培养基验证无法观测成果，与否有其她办法？ 答：对于无菌原料容器，建议尝试物理办法，如盐水渗入法。 38、密封性验证普通每次取样量是多少，再验证周期是多少？ 答：可以从压盖线上从开始、中间、结束各取至少10瓶进行实验，起始验证应考察有效期内不同步间密闭性，再验证普通一年可进行一次。 39、验证指南中对大输液产品密封性验证有有关规定，但对分装及冻干产品无规定，与否不需进行密封性验证？ 答：对大容量注射剂、小容量注射剂、粉针剂均应进行容器密封性验证。 40、容器密封性测试与否在安瓿、西林瓶等所有注射剂型中都必要完毕？ 答：容器密封性测试在安瓿、西林瓶等所有注射剂型中都必要进行。但采用办法不尽相似，安瓿普通采用物理测试办法，西林瓶则采用物理和微生物学检测办法。注射剂无菌保证工艺研究与验证常用技术问题（五）注：如下均为第一期讲习班（注射剂无菌保证工艺研究与验证技术规定）参会代表所提问题，本期讲习班讲习组依照当前关于技术规定，通过认真梳理、分析、总结后，现予以发布，并就有关问题进行讨论与交流。 40、容器密封性测试与否在安瓿、西林瓶等所有注射剂型中都必要完毕？ 答：容器密封性测试在安瓿、西林瓶等所有注射剂型中都必要进行。但采用办法不尽相似，安瓿普通采用物理测试办法，西林瓶则采用物理和微生物学检测办法。 41.无菌过滤验证当前国内厂家可以做到什么水平？哪种水平是国家承认？ 答：依照国家局药物注册司于1月10日发布执行化学药物注射剂基本技术规定（试行）（二）制备工艺第4点关于冻干粉针剂规定，除菌过滤系统适应性验证明验涉及过滤系统相容性测试、过滤先后过滤膜完整性测试、必要潮流需要进行滤膜微生物截留量测试。 关于灭菌工艺验证工作当前正处在推动过程中，以上是基于当前结识所提出阶段性规定，还将随着对此问题认知而不断完善。 42、对于滤膜微生物挑战实验与否需对每一种特定产品进行？这某些实验既然交由生产商进行，对生产商资质与否有规定？即，如何鉴定供应商提供应我检测报告是有效？ 答：如果不同产品对于过滤器通透性影响是不同，从而导致截留效率不同，应当对分别进行微生物挑战实验，反之则不需要。 当前，没有对过滤器生产商资质有法定规定，建议选取已通过行业认证，其产品在国际国内广泛应用，质量有保证，信用度较高生产商。所选取过滤器供应商与否可信是基于药物生产公司对于自己所要生产产品理解以及对于过滤工艺理解。过滤器生产商与否法定资质并不是最重要，最重要是药物生产公司与否清晰自己选取过滤器合用于所生产产品，过滤器材质与否符合安全性规定，符合制药规定，药物生产公司与否清晰自己研发过滤工艺与否有效。也就是说，只有自己真正理解了过滤专业知识，理解产品和工艺，才干鉴定供应商检测报告有效性。 此外，还可以到过滤器供应商那里亲眼看看检测过程，对供应商进行质量审计，这也有助于增强判断精确性。 43、除菌过滤使用二个滤芯串联，与否孔径一致？如对主药成分有影响，如何解决？ 答：串联两个除菌过滤器，其滤膜孔径应一致，如果串联两个除菌过滤滤芯是不同生产批号，就更好。 如果滤膜对重要成分有影响，应依照过滤系统相容性测试成果选用其她材质滤膜，使其对主药成分没有影响。 44、请详细简介一下过滤器完整性实验测试办法，如“扩散流实验”。 答：过滤器完整性实验测试办法应参照供应商阐明书提供办法。如果采用扩散流办法，请依照供应商阐明书使用指定介质润湿过滤器，再与扩散流法专用仪器、压力气体（压缩空气或氮气）相连接，向过滤器提供供应商阐明书拟定压力，专用仪器会自动打印出测试成果，表白实验通过还是不通过。 45、过滤器验证哪些是生产公司必要进行？哪些是供应商提供？ 有教师在授课中提到“微生物挑战性实验由供应商做，以避免污染产品”，有教师在授课中提到无菌过滤器微生物挑战实验，应当在实际生产参数下进行验证，且微生物截留实验必要在药液中进行，这似乎只能由药物生产公司完毕。如何理解？如何进行此项实验更能保证验证科学价值？ 答：两者并不矛盾。过滤器生产厂家都应有自己实验室，如Pall和Millipore，可以运用药物生产公司提供药液，选取适当过滤器并拟定实际生产中过滤参数，并在这些参数范畴内进行微生物挑战实验。 46、过滤器使用先后起泡点测试中，使用后来是用注射用水冲洗后测试好，还是直接测试好？ 答：起泡点实验需要保持过滤器充分润湿，在过滤器选取和验证时就应拟定润湿介质） 47、起泡点实验与前向流实验，在过滤器完整性实验中，是只需选取一种，还是必要两种都作？ 答：选取一种即可，但应依照过滤器验证中拟定完整性实验测试条件和原则进行） 48、如何补救吐温使滤膜孔径变大，以保证药物安全性？ 答：公司应将产品成分和特性等资料提供应过滤器生产厂家，过滤器厂家依照产品特性选取适当过滤材质并进行无菌过滤验证） 49、无菌药物应如何监控中间产品微生物和细菌内毒素污染状况？非最后灭菌？最后灭菌？普通微生物检测需要45天，而中间产品须当天完毕才干决定与否可以进入下道工序。 答：在无菌药物生产过程中，不论是非最后灭菌还是最后灭菌工艺，尽管中间产品微生物检测需要几天时间，但是普通不用等微生物检测成果，可直接进行下一步工序生产。等中间产品微生物检查成果出来后，可以依照检测成果采用相应办法，如中间产品检查成果合格，则产品可以继续生产直至最后方行，如中间产品检查成果不合格，则产品不能放行。 50、生产环境控制：（1）在生产过程中，无菌灌装线上沉降碟放置与否应在所用操作开始前完毕？ （2）沉降碟需要暴露多长时间？ （3）在讲义60页提到无菌灌装区生产环境监控频率中测试项目“表面微生物”是指哪种检测项目，其内容和原则是什么，监测频率与否是每批一次呢？ （4）动态沉降菌检测中，等成果出来已经是2-3天后了，如何依照成果进行判断？ （5）压缩空气微生物检测如何较好进行？ 答：（1）是，这样可以监测整个操作过程。（2）欧盟、FDA规定是不超过4小时，当前国内规定为30分钟，在新GMP修订时也许会考虑采用国际通行规定。（3）表面微生物测试是考察如墙面、地面、操作台面、设备等表面微生物状态，普通采用接触碟或棉拭子办法，有关原则请参照欧盟GMP附录1和FDA关于无菌生产工艺指南。（4）由于微生物培养特点，批生产时进行环境微生物监测成果至少需要等待2-3天时间，一旦发生超标，需要进行全面分析和调查，以找出导致偏差因素，并评估对产品污染风险。（5）由于压缩气体有压力，普通空气浮游菌采样仪较难直接测定，需要先进行减压，现已有商品化压缩气体浮游菌采样仪。注射剂无菌保证工艺研究与验证常用技术问题（六）注：如下均为第一期讲习班（注射剂无菌保证工艺研究与验证技术规定）参会代表所提问题，本期讲习班讲习组依照当前关于技术规定，通过认真梳理、分析、总结后，现予以发布，并就有关问题进行讨论与交流。 51、请问如何建立警戒限或纠偏限？有无有关计算公式或技术规定？ 答：应依照历史数据，结合不同干净区域原则制定。如采用数理记录办法，普通可以将平均值加上2倍原则差作为警戒限度，加上3倍原则差作为行动限度，限度设定后来，应定期回顾评价，如每年一次。 52、无菌检查不合格时，如有真菌不合格状况，也许有哪些因素？最有也许因素是什么？ 答：无菌检查浮现不合格时，应一方面进行无菌实验过程调查，考虑因素可涉及培养基、实验器材、实验环境、人员操作等，并结合当批产品生产环境监测成果作出综合分析判断。 53、如何进行药液储存周期验证，储存周期起点、终点如何拟定，使配制完毕后灭菌前，还是过滤后灭菌前，取样点如何设立，检查办法及合格鉴定原则如何拟定？ 答：进行药液储存时间验证目是为了保证药液微生物水平控制在下道工艺规定范畴内并保证对产品无菌性和内毒素等质量指标无不良影响。普通来讲，配液完毕后到无菌过滤前，或过滤完毕后到灭菌前（终端灭菌产品）是考察重点，办法和原则需要依照自己产品工艺特点拟定。 54、轧盖条件是万级制药下局部保护，这局部保护如何理解？冻干转运是万级下局百，是指在冻干过程中吗？ 答：局部保护就是在轧盖机正上方有高效空气过滤器，提供单向流保护，这里所说万级实际是欧盟无菌药物附录中C级。 参照98版GMP无菌药物附录规定，冻干转运应当是在万级背景下百级环境中进行，这普通发生在冻干开始前将已灌装半加塞产品送入冻干机冷冻干燥腔室内，或者是冻干结束后将已冻干产品从冻干机冷冻干燥腔室内取出送去轧盖，特别是前者应对产品予以特别保护，这样才不至于污染未密封产品。 55、冻干机湿热灭菌怎么进行？臭氧或甲醛熏蒸不行吗？ 答：如果冻干机带有在线灭菌系统，就可以在每次冻干结束后对冷冻干燥腔室进行湿热灭菌。如果采用臭氧或甲醛熏蒸，应证明这两种办法能达到灭菌规定，并且其残留量不会对产品质量有不利影响，也不会影响到产品安全性。此外，采用臭氧有也许加速设备老化，而采用甲醛熏蒸时，应考虑甲醛残留以及对人体健康影响。 56.冻干产品批号以冻干机来拟定（98版），如一次配料共两台冻干机冷冻，批号如何拟定？ 答：依照98版GMP“无菌药物”附录第5条第（3）款规定，“冻干粉针剂以同一批药液使用同一台冻干设备在同毕生产周期内生产均质产品为一批”，一次配料共两台冻干机冷冻时，应对每台冻干机冻干产品分别设定各自生产批号。 57、能否详细简介一下充氮效果，如何进行评价？含氧量测定是在线还是事后QC测定？所用办法与检测设备？ 答：充氮能明显地抑制以氧气为底物氧化反映，效果取决于反映系统内氧气含量。含氧量测定有专门仪器分别用于测定空气中和溶液中氧，均有在线和离线（实验室）测定设备。比较知名仪器有：瑞士Orbisphere Laboratories公司溶解氧仪；丹麦PBIDansensor公司气体氧仪。均有各种精度在线和离线型号。 58、请问，可靠除热原办法有哪些？普通状况下，采用哪种除热原办法较好？ 答：活性炭吸附、超滤等办法都对除热源有效果。效果取决于实际条件和产品特性，应通过实验比较、拟定。 59、对空间灭菌采用新洁尔灭溶液喷洒、紫外灯照射过夜方式，该灭菌办法有隐患吗（与环氧乙烷消毒比较）？ 答：新洁尔灭对空间消毒是无效，并且残留固体微粒，并不可取。生产空间也不能用环氧乙烷消毒。可靠消毒办法是甲醛（福尔马林）熏蒸或臭氧消毒。两种办法效果取决于空气中活性成分浓度和存留时间。 60、一品种已上市近年，未采用终端灭菌工艺，再注册时与否需提供灭菌工艺验证资料，若考察后可以终端灭菌，与否需更改工艺？ 答：对未采用终端灭菌工艺已上市品种，其可以采用终端灭菌工艺，则应进行变更工艺补充申请，提供相应研究和验证资料。详细可参照二七年八月十日国食药监办504号“关于开展注射剂类药物生产工艺和处方核查工作告知”规定。注射剂无菌保证工艺研究与验证常用技术问题（七）注：如下均为第一期讲习班（注射剂无菌保证工艺研究与验证技术规定）参会代表所提问题，本期讲习班讲习组依照当前关于技术规定，通过认真梳理、分析、总结后，现予以发布，并就有关问题进行讨论与交流。 61、大输液产品现采用残存概率法，后来与否要提高到过度杀灭法？残存概率法与否每批样品都要对灭菌前药液进行微生物检查，并制定相应原则进行相应验证？ 答：大输液产品采用残存概率法，与否要提高到过度杀灭法，重要还是依照主药性质和公司付出生产成本，如果大输液产品质量稳定，可以耐受过度杀灭灭菌条件，最佳还是提高到过度杀灭法，这样既不影响产品质量，同步又减少了生产成本；由于残存概率法要对每批样品灭菌前药液进行微生物监测及控制。 62、既有大某些小容量注射剂灭菌工艺F0值均不能达到8，对此中心有何办法或规定？ 答：国食药监7号文附件1：化学药物注射剂基本技术规定（试行），对F0值不能达到8小容量注射剂提出了相应技术规定，可参照执行。 63、原申报工艺为大盘冻干或溶媒结晶后再无菌分装，现改成冻干（瓶冻）工艺，应当讲无菌保证水平有提高，当前CDE对此类工艺变更审评规定？ 答：一方面应当按照药物注册管理办法附件4规定，进行工艺变更补充申请，同步参照上市后化学药物变更研究技术指引原则进行工艺变更研究和验证，提交相应研究资料。CDE对此类工艺变更审评与其她变更申请技术规定一致，任何变更应对产品安全性、有效性、质量不产生负面影响，对无菌产品还应关注无菌保证水平不能减少。 64、在遵循注射剂研发技术指引原则前提下，创新药申报临床和申报生产阶段对灭菌工艺验证规定与否不同？ 答：创新药申报临床和申报生产阶段对灭菌工艺验证规定是不同。在申报临床阶段不需进行灭菌工艺验证，但需进行灭菌工艺研究，并在GMP车间试制临床研究用样品，其灭菌工艺应能评价样品可以达到无菌规定；在申报生产时规定进行灭菌工艺验证，提交相应验证资料。 65、如整个生产系统无菌验证已通过GMP认证，这某些详细内容与否需体当前注册申报资料中？例如，生产设备、灭菌柜、滤器等验证与否需体当前申报资料中？ 答：生产系统GMP认证资料，普通不需体当前注册申报资料中。但当生产系统认证与注册品种同步进行时，则应将这某些资料作为注册申报资料进行申报。也就是说，灭菌工艺验证资料重要是与品种验证关于内容。 66、工艺验证资料应当在申报临床还是在申报生产时提供？如果在申报生产时提供验证资料，与否将8号资料重新附上，还是可以单独报验证资料？ 答：工艺验证资料应当在申报生产时提供。8号资料工艺研究内容可以不必重新申报，但应提供工艺研究成果，并阐明在临床期间工艺与否发生了变更，以及工艺验证资料，涉及生产工艺验证及灭菌工艺验证资料。 67、对注射剂品种，每年均系统地进行无菌保证工艺再验证，涉及：设备热分布实验、热穿透实验和微生物挑战实验，培养基模仿灌装实验等，请问，申报注射剂品种时，与否可以使用以上再验证数据，作为8号申报资料数据？ 答：注射剂品种每年均系统地进行无菌保证工艺再验证，在申报新注射剂品种时，有些验证数据可以使用，有些则需要针对品种进行验证，例如，新报注射剂品种采用灭菌条件与原生产品种相似，或更低，其设备性能（空载热分布）验证数据是可以使用原生产品种再验证数据，装载热分布、热穿透、微生物挑战实验还应针对产品进行验证，而不能使用原生产品种再验证数据，因不同产品，其热分布、热穿透、微生物在其中耐热性是有差别。 68、申报资料中未提供无菌工艺验证资料，与否一定要在补充资料中体现？粉针剂需要进行哪些验证工作，申报资料必要体现哪几点？ 答：申报资料中未提供无菌工艺验证资料，如果进行了无菌保证工艺验证，可以在提交补充资料时一并提供；粉针剂验证内容涉及：培养基模仿灌装实验、除菌过滤系统适应性实验（过滤系统相容性测试、过滤先后滤膜完整性测试、滤膜微生物截留量测试），以及容器系统密封性验证等。 69、采用无菌生产工艺品种，申报临床前样品，其无菌工艺研发及验证资料与否必要在实际生产设备及环境下进行？ 答：无菌工艺研究应在符合GMP规定车间中进行，但无菌工艺验证则必要在实际生产设备及环境下进行。 70、如果生产产品被抽检“无菌不合格”，而无菌检查又不能随便复试，但对自己产品质量绝对有信心（例如已通过无菌工艺验证，生产过程中也无偏差），该怎么办。由于无菌检查中所涉及有关因素也诸多，也会影响抽验单位检测成果可信度、精确度，但无菌检查 又不能规定复检。 答：药物管理法第六十七条规定，当事人对药物检查机构检查成果有异议，可以自收到药物检查成果之日起七日内向原药物检查机构或者上一级药物监督管理部门设立或者拟定药物检查机构申请复验，也可以直接向国务院药物监督管理部门设立或者拟定药物检查机构申请复验。但对于无菌检查而言，复验意义不大。