血凝抑制效价(ppt文档).ppt

项目九项目九 实习周综合实训实习周综合实训综合实训项目二综合实训项目二 提供鸡群检测鸡新城疫抗体提供鸡群检测鸡新城疫抗体 项目九 实习周综合实训-提供鸡群检测鸡新城疫抗体工作任务工作任务：测定某鸡场鸡新城疫抗体测定某鸡场鸡新城疫抗体检测检测NDND抗体的目的、意义？抗体的目的、意义？确定免疫日龄、检测免疫效果等确定免疫日龄、检测免疫效果等用什么方法检测用什么方法检测NDND抗体？抗体？HAHA及及HIHI项目九 实习周综合实训-提供鸡群检测鸡新城疫抗体应用方法：应用方法：HAHA和和HI HI 12HAHA和和HIHI的原理？的原理？3需要准备哪些器材？需要准备哪些器材？4需要准备哪些试剂？需要准备哪些试剂？5采血制备被检血清采血制备被检血清 10结果报告及应用结果报告及应用 9HIHI测抗体效价测抗体效价 8配配4 4单位病毒单位病毒 7HAHA测病毒的血凝价测病毒的血凝价 采血制备采血制备1%RBC1%RBC悬液悬液 6完成抗体测定任务的工作思路完成抗体测定任务的工作思路(实训目标实训目标)项目九 实习周综合实训-提供鸡群检测鸡新城疫抗体HA和和HI的原理的原理HA的原理的原理：病毒的血凝现象：病毒的血凝现象有些病毒的表面有血凝素，能与某些动物的红细胞表有些病毒的表面有血凝素，能与某些动物的红细胞表面受体结合，从而出现红细胞凝集现象，称为病毒的面受体结合，从而出现红细胞凝集现象称为病毒的血凝现象，简称病毒的血凝。血凝现象，简称病毒的血凝。HI的原理的原理：病毒的血凝抑制现象：病毒的血凝抑制现象当病毒与相应的抗病毒抗体结合后，能使红细胞的凝当病毒与相应的抗病毒抗体结合后，能使红细胞的凝集现象受到抑制，称为病毒血凝抑制现象，简称病毒集现象受到抑制，称为病毒血凝抑制现象，简称病毒的血凝抑制。的血凝抑制。项目九 实习周综合实训-提供鸡群检测鸡新城疫抗体需要准备的器材需要准备的器材序序号号器材或设备名称器材或设备名称数量数量规格规格序序号号器材或设备名称器材或设备名称数量数量规格规格1 1普通托盘天平普通托盘天平1 1台台7 7微量移液器吸头盒微量移液器吸头盒1 1个个0.0050.05mL2 2普通离心机普通离心机1 1台台1 1个个0.11mL3 3微型振荡器微型振荡器1 1台台8 8板式微量移液器架板式微量移液器架1 1个个4 4DRAGONDRAGON微量移液器微量移液器1 1支支0.0050.05mL9 99696孔孔V V型血凝反应板型血凝反应板2 2块块1 1支支0.11mL1010烧杯烧杯5 5个个50mL1 1支支210mL2 2个个100mL5 5微量移液器吸头微量移液器吸头3030个个0.0050.05mL1111禽用采血器禽用采血器2 2支支5mL1010个个0.11mL1212具盖塑料离心管具盖塑料离心管4 4支支10mL1010个个210mL1313试管架试管架1 1支支6 6实验工作服实验工作服2 2件件1414细记号笔细记号笔1 1支支项目九 实习周综合实训-提供鸡群检测鸡新城疫抗体需要准备的试剂需要准备的试剂生理盐水生理盐水250mL250mL3.8%3.8%柠檬酸钠溶液柠檬酸钠溶液20mL20mL新城疫标准抗原新城疫标准抗原被检血清被检血清新城疫标准阳性血清新城疫标准阳性血清新城疫标准阴性血清新城疫标准阴性血清75%75%酒精棉球若干酒精棉球若干标签纸若干标签纸若干实验报告单一张实验报告单一张项目九 实习周综合实训-提供鸡群检测鸡新城疫抗体采血制备被检血清采血制备被检血清在在翅静脉翅静脉处消毒，手持采血针处消毒，手持采血针从无血管处向翅静脉丛刺入采从无血管处向翅静脉丛刺入采血。待血液凝固析出的淡黄色血。待血液凝固析出的淡黄色液体即为血清。将血清移至另液体即为血清。将血清移至另外一小塑料离心管内，盖盖，外一小塑料离心管内，盖盖，4冷藏。需长期保存时，将冷藏。需长期保存时，将血清至血清至-20 冷冻。冷冻。项目九 实习周综合实训-提供鸡群检测鸡新城疫抗体采血制备采血制备1%RBC悬液悬液制备方法采集至少采集至少3只只SPF公鸡或无禽流感和新城疫抗体的非免公鸡或无禽流感和新城疫抗体的非免疫鸡的抗凝血，放入离心管中，加入疫鸡的抗凝血，放入离心管中，加入34倍体积的倍体积的PBS混匀，以混匀，以2000r/min离心离心510min，去掉上清液和白细，去掉上清液和白细胞层，重复以上过程，反复洗涤胞层，重复以上过程，反复洗涤3次（洗净血浆和白细次（洗净血浆和白细胞），最后吸取压积胞），最后吸取压积RBC用用PBS配成体积分数为配成体积分数为1%的的悬液，于悬液，于4保存备用。保存备用。采血部位：鸡心脏采血项目九 实习周综合实训-提供鸡群检测鸡新城疫抗体今天上午同学要完成的任务如下今天上午同学要完成的任务如下练习采血（心脏采血、翅静脉采血）采血制备被检血清采血制备1%RBC悬液学会离心机的使用项目九 实习周综合实训-提供鸡群检测鸡新城疫抗体HA 测测NDVNDV抗原血凝价抗原血凝价（单位：（单位：LL）孔号孔号1 12 23 34 45 56 67 78 89 9101011111212PBS252525252525252525252525252525252525252525252525NDV25252525252525252525252525252525252525252525PBS252525252525252525252525252525252525252525252525病毒稀释倍数病毒稀释倍数2 21 1 2 22 2 2 23 3 2 24 4 2 25 5 2 26 62 27 7 2 28 8 2 29 9 2 210102 21111PBSPBS对照对照1%RBC悬悬液液252525252525252525252525252525252525252525252525振荡混匀后，室温（2025）下静置40min后观察结果，若环境温度太高，放4静置60min。当PBS对照孔红细胞呈明显纽扣状沉到孔底时判定结果。弃25项目九 实习周综合实训-提供鸡群检测鸡新城疫抗体病毒的血凝价病毒的血凝价血凝价（血凝滴度）：能使一定量红细胞完全凝集血凝价（血凝滴度）：能使一定量红细胞完全凝集的病毒最大稀释倍数为该病毒的血凝滴度或称血凝的病毒最大稀释倍数为该病毒的血凝滴度或称血凝价。（一个血凝单位价。（一个血凝单位HAU）（以完全凝集的病毒最大稀释倍数为该抗原的血凝滴（以完全凝集的病毒最大稀释倍数为该抗原的血凝滴度）度）项目九 实习周综合实训-提供鸡群检测鸡新城疫抗体HA结果判定结果判定在对照孔出现正确结果在对照孔出现正确结果的情况下，将反应板倾的情况下，将反应板倾斜，观察红细胞是否完斜，观察红细胞是否完全凝集。以完全凝集的全凝集。以完全凝集的病毒最大稀释倍数为该病毒最大稀释倍数为该抗原的抗原的血凝价血凝价（一个血（一个血凝单位，凝单位，HAUHAU）。用。用nlog2nlog2表示表示。HA各孔凝集情况及判定标准各孔凝集情况及判定标准 HA结果示例：血凝价结果示例：血凝价8log2 PBS 对照对照 水平观看倾斜观看项目九 实习周综合实训-提供鸡群检测鸡新城疫抗体2025 作用40分钟后项目九 实习周综合实训-提供鸡群检测鸡新城疫抗体根据血凝价配制根据血凝价配制4单位病毒单位病毒4 4单位病毒的稀释倍数单位病毒的稀释倍数 =4 4单位病毒的配制方法：单位病毒的配制方法：如果抗原的血凝价为如果抗原的血凝价为8 8log2log2，其，其4 4个血凝单位为个血凝单位为6log26log2，则将病毒稀释，则将病毒稀释6464倍即可。稀释时将倍即可。稀释时将1mL1mL病毒抗病毒抗原加入原加入63mLPBS63mLPBS中即为中即为4 4单位病毒。单位病毒。项目九 实习周综合实训-提供鸡群检测鸡新城疫抗体HI测抗体效价测抗体效价（单位：（单位：LL）孔号孔号1 12 23 34 45 56 67 78 89 9101011111212PBS252525252525252525252525252525252525252525255050待检血清待检血清2525252525252525252525252525252525252525待检血清稀释倍数待检血清稀释倍数2 21 1 2 22 2 2 23 3 2 24 4 2 25 5 2 26 62 27 7 2 28 8 2 29 9 2 21010阳性阳性对照对照PBSPBS对照对照4血凝血凝单单位的病毒位的病毒25252525252525252525252525252525252525252525 轻扣反应板室温（2025）下静置不少于30min，4不少于60min1%RBC悬悬液液252525252525252525252525252525252525252525252525轻晃混匀后，室温（2025）下静置约40min，若环境温度太高，放4静置60min。当PBS对照孔红细胞呈明显纽扣状沉到孔底时判定结果。弃25项目九 实习周综合实训-提供鸡群检测鸡新城疫抗体血凝抑制效价（抗体效价）血凝抑制效价（抗体效价）血凝抑制效价（血凝抑制滴度）：以完全抑制血凝抑制效价（血凝抑制滴度）：以完全抑制4个个HAU抗原的血清最大稀释倍数作为该血清的血凝抑抗原的血清最大稀释倍数作为该血清的血凝抑制滴度或血清的血凝抑制效价。制滴度或血清的血凝抑制效价。以以nLog2nLog2方式表示方式表示血清的血凝抑制滴度。血清的血凝抑制滴度。滴度是指产生完全不凝集（红细胞完全流下）的最滴度是指产生完全不凝集（红细胞完全流下）的最高稀释度。高稀释度。项目九 实习周综合实训-提供鸡群检测鸡新城疫抗体HI结果判定结果判定HI结果示例：抗体效价结果示例：抗体效价7log2 HI结果判定结果判定 在对照孔出现正确结果的情况下，将反应板倾斜，从背在对照孔出现正确结果的情况下，将反应板倾斜，从背侧看，看红细胞是否呈泪珠状流下。血凝抑制价（即抗体效侧看，看红细胞是否呈泪珠状流下。血凝抑制价（即抗体效价）是指产生完全不凝集（红细胞完全流下）的最高稀释倍价）是指产生完全不凝集（红细胞完全流下）的最高稀释倍数，表示为数，表示为nlog2。项目九 实习周综合实训-提供鸡群检测鸡新城疫抗体2025 作用40分钟后项目九 实习周综合实训-提供鸡群检测鸡新城疫抗体结果报告及应用结果报告及应用 结果报告方式为：nlog2 确定首免日龄 确定再次免疫的时间 确定鸡群地免疫效果 疑似新城疫时的初步诊断项目九 实习周综合实训-提供鸡群检测鸡新城疫抗体作作 业业现有50个血清检样，需要检测鸡新城疫抗体，请您设计工作（检测）方案。提示：方法、原理、器材（几块血凝板？）、试剂、血清（已提供）1%RBC悬液（制备多少？）、HA测病毒的血凝价、配制4单位病毒（？）HI测抗体效价（结果报告）