血液学一般检验(绪论、第一章)(ppt文档).ppt

19031903年美国宾西法尼亚州立医院成立了第一个年美国宾西法尼亚州立医院成立了第一个专门的临床检验实验专门的临床检验实验室室1931年，恩斯特年，恩斯特 鲁斯卡通过研制电子显微镜，鲁斯卡通过研制电子显微镜，使生物学发生了一场革命使生物学发生了一场革命。19501950年美国学者年美国学者LeveyLevey和和JenningsJennings发表第一篇发表第一篇关于使用质控图的实验室室内质控，临床检验关于使用质控图的实验室室内质控，临床检验实验室的室内质控工作正式拉开序幕，该方法实验室的室内质控工作正式拉开序幕，该方法至今仍被各临床实验室所使用。至今仍被各临床实验室所使用。国国外医学检验学发外医学检验学发展简史展简史1919世纪世纪7070年代，德国学者年代，德国学者KochKoch创造固体培养创造固体培养基，将细菌从环境或病人排泄物等标本中分基，将细菌从环境或病人排泄物等标本中分离成单一菌落离成单一菌落19591959放射免疫分析技术及放射免疫分析技术及19751975年单克隆抗体年单克隆抗体技术的创立均获得诺贝尔生物医学奖。技术的创立均获得诺贝尔生物医学奖。19851985年美国年美国PECetusPECetus公司人类遗传研究室的公司人类遗传研究室的Mullis Mullis 等发明了具有划时代意义的聚合酶等发明了具有划时代意义的聚合酶链反应技术链反应技术国国外医学检验学发外医学检验学发展简史展简史新中国成立时，检验专业技术人员新中国成立时，检验专业技术人员40004000余人余人 19791979年年9 9月成立了中华医学会检验分会，并在月成立了中华医学会检验分会，并在WHOWHO的支持指导下，同年成立了卫生部临床检的支持指导下，同年成立了卫生部临床检验中心验中心国国内医学检验学发内医学检验学发展简史展简史 7070年代我国参加了世界卫生组织的临床化学年代我国参加了世界卫生组织的临床化学质量评价活动质量评价活动 19911991年我国卫生部部长令：首批淘汰三十五年我国卫生部部长令：首批淘汰三十五项检验项目项检验项目 19901990年后，一些高科技、分子生物学技术在年后，一些高科技、分子生物学技术在检验医学方面应用迅速增多检验医学方面应用迅速增多20002000年年中华医学检验杂志中华医学检验杂志正式更名为正式更名为中华检验医学杂志中华检验医学杂志，检验医学作为一个，检验医学作为一个学科名称正式确立。学科名称正式确立。国国内医学检验学发内医学检验学发展简史展简史clinical laboratory technology or scienceclinical laboratory technology or science临临 床床 检检 验验通过实验室的各种检查方法，包括感官检查、通过实验室的各种检查方法，包括感官检查、通过实验室的各种检查方法，包括感官检查、通过实验室的各种检查方法，包括感官检查、理学检查、化学检查、显微镜检查以及自动化仪理学检查、化学检查、显微镜检查以及自动化仪理学检查、化学检查、显微镜检查以及自动化仪理学检查、化学检查、显微镜检查以及自动化仪器检查等，对病人的血液、体液、分泌物和排泄器检查等，对病人的血液、体液、分泌物和排泄器检查等，对病人的血液、体液、分泌物和排泄器检查等，对病人的血液、体液、分泌物和排泄物等标本进行检查、分析，以获得病原、病理变物等标本进行检查、分析，以获得病原、病理变物等标本进行检查、分析，以获得病原、病理变物等标本进行检查、分析，以获得病原、病理变化及脏器功能状态等资料。化及脏器功能状态等资料。化及脏器功能状态等资料。化及脏器功能状态等资料。医院检验科医院检验科临临检检室室生生化化室室免免疫疫室室血血液液室室基基因因室室微微微微生生生生物物物物室室室室病病理理室室从手工检测进行仪器自动化检测从手工检测进行仪器自动化检测检验试剂批量化、专业化、多样化检验试剂批量化、专业化、多样化检验方法标准化检验方法标准化实施了全面的质量管理和保证实施了全面的质量管理和保证床旁检测（床旁检测（point of care test,POCTpoint of care test,POCT）医学检验学的现状医学检验学的现状临床检验基础的临床应用临床检验基础的临床应用 1 1 1 1、为准确诊断、及时治疗提供依据、为准确诊断、及时治疗提供依据、为准确诊断、及时治疗提供依据、为准确诊断、及时治疗提供依据临床检验的结果是支持诊断、鉴别诊断、甚至确临床检验的结果是支持诊断、鉴别诊断、甚至确定诊断的主要依据定诊断的主要依据例：例：例：例：anemiaanemia依据：血中红细胞和血红蛋白量减少依据：血中红细胞和血红蛋白量减少leukemialeukemia依据：血象和骨髓象变化依据：血象和骨髓象变化肾脏有实质性损伤肾脏有实质性损伤肾脏有实质性损伤肾脏有实质性损伤依据依据尿液中出现蛋白、细胞、管型尿液中出现蛋白、细胞、管型 tumor tumor？2 2 2 2、为分析病情、观察疗效、判断预后提供依据、为分析病情、观察疗效、判断预后提供依据、为分析病情、观察疗效、判断预后提供依据、为分析病情、观察疗效、判断预后提供依据 在疾病过程中，血液、体液、分泌物和排在疾病过程中，血液、体液、分泌物和排泄物也会随之发生相应的变化泄物也会随之发生相应的变化3 3 3 3、为预防疾病提供资料、为预防疾病提供资料、为预防疾病提供资料、为预防疾病提供资料 如血象和肿瘤细胞学的普查等如血象和肿瘤细胞学的普查等临床检验的临床应用临床检验的临床应用4 4、为科学研究提供医学检验数据为科学研究提供医学检验数据为科学研究提供医学检验数据为科学研究提供医学检验数据 目视检查目视检查目视检查目视检查:直接观察标本：颜色、透明度、直接观察标本：颜色、透明度、性状，有无凝块或寄生虫性状，有无凝块或寄生虫 理学检查理学检查理学检查理学检查:液体的相对密度、血液比粘度、液体的相对密度、血液比粘度、红细胞沉降率、红细胞比积等病理变化红细胞沉降率、红细胞比积等病理变化临床检验的一般方法临床检验的一般方法（1 1）化学检查化学检查化学检查化学检查:定性和定量检测标本化学成分的病定性和定量检测标本化学成分的病理变化理变化 显微镜检查显微镜检查显微镜检查显微镜检查:观察有型成分的数量和形态观察有型成分的数量和形态 自动化仪器检查自动化仪器检查自动化仪器检查自动化仪器检查:电子技术、程序控制的发展电子技术、程序控制的发展临床检验的一般方法（临床检验的一般方法（2 2）理论联系实践理论联系实践理论联系实践理论联系实践 实验技能和方法学评价实验技能和方法学评价实验技能和方法学评价实验技能和方法学评价 检验结果参考值及临床意义检验结果参考值及临床意义检验结果参考值及临床意义检验结果参考值及临床意义 检验工作者的医德检验工作者的医德检验工作者的医德检验工作者的医德学习临床检验的基本要求学习临床检验的基本要求thanksthanks一、血液生理一、血液生理血液的组成血液的组成血液的理化特性血液的理化特性血液的功能血液的功能血血液液血血 浆浆血血细细胞胞红细胞红细胞红细胞红细胞白细胞白细胞白细胞白细胞血小板血小板血小板血小板 水水水水：90909292 血浆蛋白血浆蛋白血浆蛋白血浆蛋白 溶质溶质溶质溶质：8 81010小分子物质小分子物质小分子物质小分子物质营养物质营养物质营养物质营养物质激素激素激素激素代谢产物代谢产物代谢产物代谢产物有机物有机物有机物有机物无机盐（电解质）无机盐（电解质）无机盐（电解质）无机盐（电解质）白蛋白白蛋白白蛋白白蛋白球蛋白球蛋白球蛋白球蛋白纤维蛋白原纤维蛋白原纤维蛋白原纤维蛋白原血液的组成及血浆成分血液的组成及血浆成分血液的功能血液的功能1 1 营养营养2 2 运输运输3 3 缓冲缓冲 4 4 参与机体免疫参与机体免疫5 5 参与凝血和抗凝参与凝血和抗凝二、血液标本的采集全全 血血静脉全血：静脉全血：静脉全血：静脉全血：G-6-PDG-6-PDG-6-PDG-6-PD、糖化血红蛋白、基因检测、糖化血红蛋白、基因检测、糖化血红蛋白、基因检测、糖化血红蛋白、基因检测动脉全血：血气分析动脉全血：血气分析动脉全血：血气分析动脉全血：血气分析末稍全血：用于细胞计数、分类、形态观察末稍全血：用于细胞计数、分类、形态观察末稍全血：用于细胞计数、分类、形态观察末稍全血：用于细胞计数、分类、形态观察分分 类类血浆：全血去除血细胞血浆：全血去除血细胞,用于血栓止血用于血栓止血检测检测血清：全血自然凝固后析出的液体血清：全血自然凝固后析出的液体,用用于生物化学、免疫学检测等于生物化学、免疫学检测等分分 类类采血用品采血用品1 1 1 1、皮肤采血法：、皮肤采血法：、皮肤采血法：、皮肤采血法：微量检测微量检测(the collection of capillary blood)(the collection of capillary blood)采血部位：采血部位：采血部位：采血部位：耳垂或手指末梢耳垂或手指末梢血液标本采集的方血液标本采集的方法法2 2、静脉采血法、静脉采血法(the collection of venous blood)(the collection of venous blood)用于血沉、免疫、生化等检测项目用于血沉、免疫、生化等检测项目部位：部位：部位：部位：以肘部静脉为主以肘部静脉为主采集方法采集方法注血标本法注血标本法采血的注意事项采血的注意事项头盖颜色头盖颜色临床用途临床用途标本类型标本类型采血量（采血量（ml）红红 色色 血清生化血清生化 血库试验血库试验血血 清清3.0 4.05.0 7.0绿绿 色色快速血浆生化快速血浆生化 血流变试验血流变试验血血 浆浆3.0 4.05.0黄黄 色色快速血清生化快速血清生化药代动力学试验药代动力学试验血血 清清3.5 5.0紫紫 色色血液常规、全血试验血液常规、全血试验 血流变试验血流变试验全全 血血2.0 5.0浅蓝色浅蓝色凝血试验凝血试验凝血因子试验凝血因子试验血血 浆浆1.8 2.7黑黑 色色手工血沉试验手工血沉试验全自动血沉试验全自动血沉试验全全 血血1.8 2.4真空采血管颜色及应用真空采血管颜色及应用多管血分配顺序多管血分配顺序黄黄 色色红红 色色紫紫 色色黑黑 色色绿绿 色色浅蓝色浅蓝色动脉采血法动脉采血法通常选用桡动脉（方便）、股动脉、肱动脉通常选用桡动脉（方便）、股动脉、肱动脉标本采集时应规范操作，以减少误差标本采集时应规范操作，以减少误差毛细血管采血时应避开伤损部位，避免挤压毛细血管采血时应避开伤损部位，避免挤压皮肤，血液应自然流出皮肤，血液应自然流出静脉采血时压脉带压迫时间不宜太长静脉采血时压脉带压迫时间不宜太长动脉采血后应立即与空气隔绝，阻止血气交动脉采血后应立即与空气隔绝，阻止血气交换换 标本采集标本采集的注意事项的注意事项注意：严禁在静脉输液管中采集血液注意：严禁在静脉输液管中采集血液两种采血方法的应用两种采血方法的应用皮肤采血法皮肤采血法静脉采血法静脉采血法静脉采血法静脉采血法缺点缺点缺点缺点限制了重复实验和追限制了重复实验和追加实验，标本量少，加实验，标本量少，局部炎症可得假结果局部炎症可得假结果，组织液可混入，组织液可混入不同抗凝剂的使用，不同抗凝剂的使用，改变血液性质，影响改变血液性质，影响有形成分的形态有形成分的形态优点优点优点优点价廉、快速、操作简价廉、快速、操作简便，标本可直接测定便，标本可直接测定标本代表性大，无组标本代表性大，无组织液影响，适于临床织液影响，适于临床研究，可重复实验和研究，可重复实验和追加其他实验追加其他实验 标本送检、保存与处理标本送检、保存与处理唯一标识、生物安全原则、尽快运送唯一标识、生物安全原则、尽快运送接收与拒收标本原则接收与拒收标本原则;未检测标本的保存、检测后标本析保存未检测标本的保存、检测后标本析保存检验后血液标本的处理检验后血液标本的处理 抗抗凝剂的选择和运用凝剂的选择和运用抗凝抗凝 用物理或化学方法除去或抑制血用物理或化学方法除去或抑制血 液中的某些凝血因子的活性，以阻止血液中的某些凝血因子的活性，以阻止血液凝固，称为抗凝。液凝固，称为抗凝。抗凝剂抗凝剂 钙拮抗剂、肝素钙拮抗剂、肝素。概念概念 抗凝原理：抗凝原理：抗凝原理：抗凝原理：形成草酸钙沉淀形成草酸钙沉淀形成草酸钙沉淀形成草酸钙沉淀 使用方法：使用方法：使用方法：使用方法：草酸钠草酸钠0.1mol/L0.1mol/L和血液和血液1:91:9 优点：优点：优点：优点：溶解性好，价廉溶解性好，价廉 缺点：缺点：缺点：缺点：对凝血因子保护功能差，影响凝血因对凝血因子保护功能差，影响凝血因子；形成草酸钙沉淀物，影响自动凝血仪器子；形成草酸钙沉淀物，影响自动凝血仪器的使用的使用 使用范围：使用范围：使用范围：使用范围：双草酸盐维持红细胞体积，使血双草酸盐维持红细胞体积，使血小板聚集、白细胞形态改变小板聚集、白细胞形态改变草酸盐草酸盐 抗凝原理：抗凝原理：抗凝原理：抗凝原理：与与钙离子钙离子生成可溶性的鳌合物生成可溶性的鳌合物 使用方法：使用方法：使用方法：使用方法：配成配成109 mmol/L109 mmol/L的浓度和血液的浓度和血液1:9,106 mmol/L1:9,106 mmol/L的浓度和血液的浓度和血液1:41:4 优点：优点：优点：优点：对凝血因子有很好的保护作用对凝血因子有很好的保护作用 缺点：缺点：缺点：缺点：血液中溶解度低，抗凝作用较弱血液中溶解度低，抗凝作用较弱 使用范围：使用范围：使用范围：使用范围：止血学检验、血沉、输血保养止血学检验、血沉、输血保养液（毒性小）液（毒性小）枸橼酸钠枸橼酸钠 抗凝原理：抗凝原理：抗凝原理：抗凝原理：生成可溶性的鳌合物。生成可溶性的鳌合物。使用方法：使用方法：使用方法：使用方法：15g/L EDTA15g/L EDTA和血液和血液1:101:10。优点：优点：优点：优点：对红细胞和白细胞形态影响小。对红细胞和白细胞形态影响小。缺点：缺点：缺点：缺点：影响血小板的聚集。影响血小板的聚集。使用范围：使用范围：使用范围：使用范围：全血细胞分析和血细胞比容测定，不全血细胞分析和血细胞比容测定，不适用于出凝血实验和血小板功能适用于出凝血实验和血小板功能乙二胺四乙酸（乙二胺四乙酸（EDTA）盐）盐 抗凝原理：抗凝原理：抗凝原理：抗凝原理：加强抗凝血酶作用加强抗凝血酶作用 使用方法：使用方法：使用方法：使用方法：肝素钠肝素钠1g/L1g/L与血液与血液1:101:10 优点：优点：优点：优点：抗凝能力强、不影响血细胞体积、不易溶血、抗凝能力强、不影响血细胞体积、不易溶血、能耐高温能耐高温 缺点：缺点：缺点：缺点：引起白细胞聚集，使白细胞计数降低，不利引起白细胞聚集，使白细胞计数降低，不利于制备血涂片，价格昂贵于制备血涂片，价格昂贵 使用范围：使用范围：使用范围：使用范围：红细胞脆性实验，科学研究等红细胞脆性实验，科学研究等肝素肝素谢 谢血涂片的用途：血涂片的用途：血涂片的用途：血涂片的用途：血细胞形态学检验血细胞形态学检验网织红网织红异常寄生虫检验异常寄生虫检验四、血涂片四、血涂片血涂片的制备技术血涂片的制备技术 涂片技术是制备血液样品最常用的技术。涂片技术是制备血液样品最常用的技术。涂片技术是制备血液样品最常用的技术。涂片技术是制备血液样品最常用的技术。将血液样品制成单层细胞的涂片标本，染将血液样品制成单层细胞的涂片标本，染将血液样品制成单层细胞的涂片标本，染将血液样品制成单层细胞的涂片标本，染色后可对血液中各种细胞形态进行形态观色后可对血液中各种细胞形态进行形态观色后可对血液中各种细胞形态进行形态观色后可对血液中各种细胞形态进行形态观察、细胞计数、细胞大小测量等工作察、细胞计数、细胞大小测量等工作察、细胞计数、细胞大小测量等工作察、细胞计数、细胞大小测量等工作。实验原理实验原理 1 1 1 1采血采血采血采血 2 2 2 2制作涂片制作涂片制作涂片制作涂片 3 3 3 3干燥涂片干燥涂片干燥涂片干燥涂片 4 4 4 4标记涂片标记涂片标记涂片标记涂片 5 5 5 5染色染色染色染色 6 6 6 6观察结果观察结果观察结果观察结果 血涂片制备步骤血涂片制备步骤(手工推片法手工推片法)医用一次性采血针医用一次性采血针医用一次性采血针医用一次性采血针 酒精棉球酒精棉球酒精棉球酒精棉球 镊子镊子镊子镊子 经脱脂洗净的载玻片经脱脂洗净的载玻片经脱脂洗净的载玻片经脱脂洗净的载玻片 双凹片（推片）双凹片（推片）双凹片（推片）双凹片（推片）实验器材准备实验器材准备采血前用70酒精棉球消毒人的指腹采采 血血由于第一滴血中含单核白细胞较多，由于第一滴血中含单核白细胞较多，因此弃去第一滴血因此弃去第一滴血推片：挤出第二滴血置于载玻片的右侧推片：挤出第二滴血置于载玻片的右侧 再取另一张边缘光滑的双凹片，斜置于血滴的前再取另一张边缘光滑的双凹片，斜置于血滴的前再取另一张边缘光滑的双凹片，斜置于血滴的前再取另一张边缘光滑的双凹片，斜置于血滴的前缘，先向后稍移动轻轻触及血滴，使血液沿玻片端缘，先向后稍移动轻轻触及血滴，使血液沿玻片端缘，先向后稍移动轻轻触及血滴，使血液沿玻片端缘，先向后稍移动轻轻触及血滴，使血液沿玻片端展开成线状。展开成线状。展开成线状。展开成线状。3045 两玻片的角度以两玻片的角度以两玻片的角度以两玻片的角度以3030303045454545为宜，轻轻将双为宜，轻轻将双为宜，轻轻将双为宜，轻轻将双凹片向前匀速推进，即涂成血液薄膜。凹片向前匀速推进，即涂成血液薄膜。凹片向前匀速推进，即涂成血液薄膜。凹片向前匀速推进，即涂成血液薄膜。将推玻片向后将推玻片向后稍抽回，当血液充稍抽回，当血液充满推玻片的宽度后，满推玻片的宽度后，以一定均匀的速度以一定均匀的速度向前方滑动。向前方滑动。血涂片的制作血涂片的制作 均匀均匀均匀均匀 厚薄厚薄厚薄厚薄 头体尾头体尾头体尾头体尾 边缘边缘边缘边缘 两侧两侧两侧两侧血涂片质量评价血涂片质量评价注意：注意：注意：注意：血滴大，速度快、角度大血滴大，速度快、角度大血滴大，速度快、角度大血滴大，速度快、角度大-血膜厚血膜厚血膜厚血膜厚 染料染料染料染料(天然染料和人工染料）天然染料和人工染料）天然染料和人工染料）天然染料和人工染料）发色基团和助色基团使生物学发色基团和助色基团使生物学染色剂产生颜色和被染组织亲合。染色剂产生颜色和被染组织亲合。五、血细胞常用的染色方法五、血细胞常用的染色方法 碱性染料：碱性染料：碱性染料：碱性染料：阳离子染料，能接受质子，染阳离子染料，能接受质子，染细胞核的染料（如亚甲蓝、天青）细胞核的染料（如亚甲蓝、天青）酸性染料：酸性染料：酸性染料：酸性染料：阴离子染料，能释放质子。能阴离子染料，能释放质子。能结合细胞的碱性成分并染色，如血红蛋白，结合细胞的碱性成分并染色，如血红蛋白，嗜酸性颗粒成分等。嗜酸性颗粒成分等。复合染料：复合染料：复合染料：复合染料：同时具有阴、阳离子型的染料同时具有阴、阳离子型的染料如瑞氏染料如瑞氏染料染料的分类染料的分类 物理作用：物理作用：物理作用：物理作用：渗透、吸收、吸附作用等渗透、吸收、吸附作用等 化学作用：化学作用：化学作用：化学作用：a a、染料的化学成分：、染料的化学成分：助色基团助色基团的存在。碱性染料在溶媒中为阳离子型，易的存在。碱性染料在溶媒中为阳离子型，易与组织和细胞内带负电荷的酸性物质结合；与组织和细胞内带负电荷的酸性物质结合；而酸性染料在溶媒中为阴离子型，与带正电而酸性染料在溶媒中为阴离子型，与带正电荷的碱性物质结合。荷的碱性物质结合。细胞着色原理细胞着色原理 b b b b.蛋白质的化学性质：蛋白质的化学性质：蛋白质的化学性质：蛋白质的化学性质：蛋白质中的氨基酸蛋白质中的氨基酸含有不同数量的氨基（含有不同数量的氨基（-NH2-NH2）和羧基（）和羧基（-COOHCOOH），同时还有其他活性基团。在游离），同时还有其他活性基团。在游离状态时，状态时，-NH2-NH2获得一个获得一个H+H+变成带正电的变成带正电的-NH3+NH3+，而，而-COOH-COOH失去一个失去一个H+H+变成带负电的变成带负电的-COO-COO-。分别与不同染料结合。分别与不同染料结合。化学作用化学作用C.周围环境的酸碱度：周围环境的酸碱度：如环境如环境pHpHpIpI（pI pI 为为等电点），则蛋白质带正电，结合酸性染料；等电点），则蛋白质带正电，结合酸性染料；反之，反之，pHpHpIpI，则结合碱性染料。，则结合碱性染料。化学作用化学作用染色原理染色原理 分两相进行，第一相是酸性伊红与细胞中分两相进行，第一相是酸性伊红与细胞中的碱性物质如血红蛋白、嗜酸性颗粒结合；碱性染料的碱性物质如血红蛋白、嗜酸性颗粒结合；碱性染料天青天青B B与细胞中的酸性物质如核染色质、特异中性颗与细胞中的酸性物质如核染色质、特异中性颗粒、血小板结合。第二相是天青粒、血小板结合。第二相是天青B B和伊红结合在适宜和伊红结合在适宜条件下形成紫色的天青条件下形成紫色的天青B-B-伊红复合物，结果使白细胞伊红复合物，结果使白细胞核染色质成紫色（疟原虫的染色质成红色），中性粒核染色质成紫色（疟原虫的染色质成红色），中性粒细胞的颗粒及血小板颗粒区成紫色。细胞的颗粒及血小板颗粒区成紫色。瑞氏染色法瑞氏染色法 试剂试剂 1.Wright1.Wright染液染液 瑞氏染粉瑞氏染粉0.1g,0.1g,甲醇甲醇60.0ml60.0ml甲醇：有甲醇：有强大的脱水力，可将细胞固定为一定形态，强大的脱水力，可将细胞固定为一定形态，并使蛋白质沉淀为颗粒状、网状等结构，并使蛋白质沉淀为颗粒状、网状等结构，增加细胞与染料接触表面积，提高对染料增加细胞与染料接触表面积，提高对染料的吸附作用，增强染色效果。的吸附作用，增强染色效果。瑞氏染色法瑞氏染色法 试剂试剂 2.2.磷酸盐缓冲液（磷酸盐缓冲液（PBSPBS）磷酸二氢钾（无水）磷酸二氢钾（无水）0.3g0.3g，磷酸氢，磷酸氢二钠（无水）二钠（无水）0.2g,0.2g,蒸馏水加到蒸馏水加到1000ml1000ml。配好后用磷酸盐溶液校正配好后用磷酸盐溶液校正pHpH，塞紧瓶口，塞紧瓶口备用。备用。瑞氏染色法瑞氏染色法a.a.用蜡笔在血膜两头划线，平放于染色架上用蜡笔在血膜两头划线，平放于染色架上b.b.加瑞氏染液覆盖血膜，固定加瑞氏染液覆盖血膜，固定1min1minc.c.滴加等量或稍多的缓冲液，混匀，染色滴加等量或稍多的缓冲液，混匀，染色10-10-15 15分钟分钟d.d.用清水冲洗，待干后油镜镜检用清水冲洗，待干后油镜镜检瑞氏染色方法瑞氏染色方法染染 色色 待涂片在空气中完全待涂片在空气中完全干燥后，滴加数滴干燥后，滴加数滴WrightWrights s染液盖满血膜为染液盖满血膜为止，染色止，染色1 min。然后滴加然后滴加等量或稍多缓冲液，使其等量或稍多缓冲液，使其与染液均匀混合，静置与染液均匀混合，静置101015 min15 min。用流水缓缓冲。用流水缓缓冲去染去染 液，待干镜检。液，待干镜检。染色原理染色原理染色原理染色原理 基本成分仍然是伊红和亚甲蓝，改进了基本成分仍然是伊红和亚甲蓝，改进了染料的质量，使细胞核着色好，结构显示更染料的质量，使细胞核着色好，结构显示更清晰，而胞浆和中性颗粒染色较差。清晰，而胞浆和中性颗粒染色较差。试剂试剂试剂试剂 Giemsa染液染液 甲醇甲醇 纯甘油纯甘油姬姆萨染色法姬姆萨染色法1.1.甲醇固定干燥血膜甲醇固定干燥血膜3-5min3-5min2.2.将血膜在染液中浸染将血膜在染液中浸染10-30min10-30min3.3.流水冲洗流水冲洗,待干后镜检待干后镜检姬姆萨染色方法姬姆萨染色方法瑞氏和姬氏染粉按一定比例混合，用甲瑞氏和姬氏染粉按一定比例混合，用甲醇溶解配制成瑞醇溶解配制成瑞-姬染液。姬染液。染色过程和染色原理与瑞氏染色类似。染色过程和染色原理与瑞氏染色类似。瑞瑞-姬染色姬染色新鲜配制的染液偏碱，染色效果较差，应贮存新鲜配制的染液偏碱，染色效果较差，应贮存一段时间后再用。一段时间后再用。不能使用肝素抗凝标本不能使用肝素抗凝标本玻片必须清洁、干燥、无尘。使用玻片时，只玻片必须清洁、干燥、无尘。使用玻片时，只能手持玻片边缘，切勿触及玻片表面能手持玻片边缘，切勿触及玻片表面染色注意事项染色注意事项制作涂片时根据血细胞比容、血粘度的高低决制作涂片时根据血细胞比容、血粘度的高低决定应采用血滴的大小及推片的角度和速度。定应采用血滴的大小及推片的角度和速度。血涂片干透后方可固定染色。血涂片干透后方可固定染色。根据染液浓度、室温及细胞多少决定染色时间根据染液浓度、室温及细胞多少决定染色时间低倍镜下观察血涂片染色质量。低倍镜下观察血涂片染色质量。染色注意事项染色注意事项瑞氏染色对胞浆着色好，胞浆中的嗜天青、瑞氏染色对胞浆着色好，胞浆中的嗜天青、嗜酸性、嗜碱性等颗粒染色清晰、嗜酸性、嗜碱性等颗粒染色清晰、色泽色泽纯正，细胞核着色不理想纯正，细胞核着色不理想姬氏染色对细胞核着色程度适中，染色后姬氏染色对细胞核着色程度适中，染色后细胞核结构清晰，胞质染色较差细胞核结构清晰，胞质染色较差瑞瑞-姬染色使瑞氏及姬氏染色取长补短，姬染色使瑞氏及姬氏染色取长补短，优势互补优势互补 方法学评价方法学评价染色效果观察染色效果观察染色效果观察染色效果观察 原理原理原理原理 待测标本经过适当稀释（或浓缩）后，充入待测标本经过适当稀释（或浓缩）后，充入计数池，在显微镜下计数一定体积内的细胞，再换计数池，在显微镜下计数一定体积内的细胞，再换算成每升标本内的细胞数。算成每升标本内的细胞数。方法评价方法评价方法评价方法评价 常用于各种细胞成份的计数，亦可用于常用于各种细胞成份的计数，亦可用于其他体液的细胞计数。其他体液的细胞计数。计数误差大，不适用于大批量标本检测。计数误差大，不适用于大批量标本检测。六、血细胞显微镜计数法六、血细胞显微镜计数法 普通光学显微镜普通光学显微镜普通光学显微镜普通光学显微镜 一次性微量吸管一次性微量吸管一次性微量吸管一次性微量吸管 改良年鲍氏计数板改良年鲍氏计数板改良年鲍氏计数板改良年鲍氏计数板（NeubauerNeubauerNeubauerNeubauer）盖玻片盖玻片盖玻片盖玻片（24*20*0.624*20*0.624*20*0.624*20*0.6）使用器材使用器材改良年鲍计数板（改良年鲍计数板（NeubauerNeubauer）每块计数板分每块计数板分为上下两个计为上下两个计数池，计数池数池，计数池两侧各有一条两侧各有一条支柱，用支撑支柱，用支撑盖玻片，立柱盖玻片，立柱高度与计数池高度与计数池相差相差0.1mm0.1mm计数板构造计数板构造计数室边长为计数室边长为3.0mm,3.0mm,划划分为分为9 9个大方格个大方格,每一大每一大方格边长为方格边长为1.0mm,1.0mm,面积面积为为1.0mm2,1.0mm2,和盖玻片之和盖玻片之间形成的体积为间形成的体积为0.1mm3,0.1mm3,四角四个大方四角四个大方格单线划为格单线划为1616个中方格个中方格;中央大方格双线划为中央大方格双线划为2525个中方格。个中方格。NeubauerNeubauer计数室构造计数室构造1.1.检查、清洗计数板检查、清洗计数板检查、清洗计数板检查、清洗计数板 计数板上有污物或水分会影响计数结果的计数板上有污物或水分会影响计数结果的准确性准确性2.2.2.2.加盖片加盖片加盖片加盖片 将合适大小的盖玻片搭放在两侧将合适大小的盖玻片搭放在两侧的平台上的平台上3.3.3.3.充池充池充池充池 充池之前先将标本充分混合均匀充池之前先将标本充分混合均匀操作方法操作方法4.4.4.4.静置静置静置静置 静置静置5 5分钟左右，使细胞沉降到计数分钟左右，使细胞沉降到计数板上板上5.5.5.5.计数计数计数计数 显微镜下选择相应的计数的方格进行显微镜下选择相应的计数的方格进行计数计数6.6.换算换算 根据计算公式，将结果换算成标准数根据计算公式，将结果换算成标准数据据操作方法操作方法 计上不计下，计左不计右计上不计下，计左不计右压线细胞计数原则压线细胞计数原则 技术误差（技术误差（技术误差（技术误差（technical errostechnical errostechnical errostechnical erros）由操作不规由操作不规范，试剂变质或仪器状态改变等原因造成的范，试剂变质或仪器状态改变等原因造成的误差，可避免或减小。误差，可避免或减小。固有误差（固有误差（固有误差（固有误差（inherent errorsinherent errorsinherent errorsinherent errors）由使用器材由使用器材本身携带的误差，和计数池内血细胞自然分本身携带的误差，和计数池内血细胞自然分布不均等造成的原因，无法避免。布不均等造成的原因，无法避免。计数误差计数误差谢 谢