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医学检验本班《分子生物学检验技术》试卷

一. 选择题(在备选答案中选择一个最佳答案,每题2分，共20分）:
1。 在核酸提取时，常需要使用氯化钠，醋酸钠等盐溶液，真正的目的是（ )
A. 中和核酸的负离子,使其易于沉淀 B. 调节PH值
C。 保持核算的完整性 D。 提高核酸的浓度
E. 无特定目的
2。 在一个DNA分子中,如G所占摩尔比为17.2%,则A所占摩尔比为（ )
A。 82。8％ B. 32.8% C. 17。2% D 65.6％ E。 无法计算
3。下列那项不是扩增反应所必需的？( )
A. 引物和模板 B. dNTP C. Mg++ D 。DNase E。 缓冲液
4。 下列那项是分子生物学技术形成的理论基础？(　 ）
A. 基因结构与功能的关系 B. 基因结构变异与疾病的关系
C. 病原微生物的基因结构特征 D。 基因的表达.调控与疾病的关系
E. 以上皆是
5. 分子生物学检验技术主要包括那些技术？（　 　)
A. 核酸分子杂交技术 B。 DNA测序技术

C。 PCR技术 D。 DNA重组技术
E。 以上全是
6. 下列哪项检测需应用分子生物学检验技术？（　　 ）
A。 肝功能检测 B.乙肝两对半检测
C. 乙肝病毒DNA（HBV-DNA)检测 D. 肿瘤细胞培养
E. 病原微生物培养
7。 在核酸的分离纯化过程中，为保证其一级结构的完整性,应采取(　 ）
A。 尽量简化分离步骤,缩短提取时间 B。 适当延长提取时间
C. 在37摄氏度条件下进行 D. 加入Mg++,Ca等二价金属离子
E。 以上全是
8。 有一核酸样品,测得A260/A280=2.0，请问该样品属于哪类核酸样品？（　 　）
A. DNA B. RNA
C. 是DNA,但有蛋白质污染 D. 是RNA,但有蛋白质污染
E。 DNA和RNA
9. 在RNA提取和纯化过程中，为避免Rnase污染而导致RNA的降解,应采取（　　）
A. 在洁净的实验室里操作 B. 带手套和口罩
C. 所用器材高压消毒或DEPC处理 D. 冰浴下操作
E. 以上皆是
10。 随机引物标记法全程标记DNA时,需选用下列哪种酶？（　 　）
A. DNA多聚酶I的Kelnow片段 B. TaqDNA聚合酶
C。 限制性内切酶 D. DNA连接酶
E。 末端转移酶
二. 判断题：（你认为下列叙述正确的请在题后括号内打√，错误的打×，每题2分,共6分)
1。 双脱氧核酸链终止法是最常用的DNA测序技术（　 　）
2。 TapDNA聚合酶的作用是催化DNA合成，但由于缺乏3’→5'外切酶活性，无校正功能，所以在复制合成新链过程中可能会发生碱基错配，导致PCR产物的错误（　 　）
3. 采用加热煮沸法可使RNase完全失活(　　 )
三：填空题(每空格2分,共24分):
1. 在选择核酸的分离纯化方法，应遵循的总原则是：一是保证核酸（一级结构的完整性）；二是尽可能（排除其他分子的污染，保证核酸样品的纯度　)。
2。 在PCR反应中，Mg++是个至关重要的因素，浓度（ 过低 ）会降低酶的活性，浓度( 过高 )又会导致非特异性扩增。
3。 用于核酸杂交的普通硝酸纤维素膜最大的优点是（本底低 ),因而最容易检测杂交信号,缺点是(　脆性大　)易破裂，且队＜５００bp的核酸结合力低。
4． 整个核酸杂交反应主要由（预杂交）、（杂交）和（洗脱)三个步骤组成。
5. 转移到硝酸纤维素膜或尼龙膜上的核酸，其与滤膜的结合是松散的，需做进一步的固定，常用的固定方法是（烘烤)、（紫外线固定）和(碱固定）。
三. 名词解释:(每题4分,共20分):
1。 融点曲线分析技术：是根据野生型序列和突变序列因不同Tm而产生不同的融点曲线而设计的。
2。 探针:指所有能与特定的靶分子发生特异性的相互作用,并可以被检测的分子。
3. Tm值： DNA熔解温度，指把DNA的双螺旋结构降解一半时的温度.
4. 转染:将外源DNA直接导入真核生物细胞的过程称为转染。
5。 转化:将重组的DNA分子导入细菌，使其在细菌体内扩增及表达的过程称为转化。
四. 问答题:（每题10分，共30分）
1. 简述限制性内切酶的定义、命名原则和分类.
答：定义:限制性内切酶是能识别和水解双链DNA分子内特异序列的核酸水解酶类。
命名:通常由3个斜体字母表示,第1个大写字母为来源微生物的属名第1个字母，第2、第3个小写子母取微生物种名的头两个字母。
分类：根据酶分子组成及裂解方式的不同，将限制性内切酶分3类，Ⅰ类和Ⅲ类限制性内切酶在同一酶分子中兼有修饰(甲基化）作用和依赖于ATP的限制水解活性，Ⅱ类限制性内切酶能识别并水解特异性的核苷酸序列是DNA重组技术中最重要的工具.

2. PCR引物的设计应遵循哪些原则.

答:1。用于PCR反应的引物需要两条，分别设在被扩增目的的片段的两端，并分别与模版正负链序列互补。
2.引物的长度一般以18-25个核苷酸为宜，引物过长容易产生寡核苷酸的链内互补，形成发夹状结构，影响引物和模板之间的互补.
3.两条引物之间尤其在3’端的序列不能有互补，以免形成引物二聚体。
4.引物的碱基组成应平衡,避免出现嘌呤、嘧啶碱基堆积。
5.PCR扩增中的退火温度是根据引物的Tm值而决定的,两条引物的Tm值不能差太大。
6.根据需要，可在合成引物时于其5'端加修饰成分。

3。 试述实时荧光PCR水解探针法的实验原理?
答：原理：PCR反应体系中除有两条引物外还需要一条荧光素标记的探针。探针的5’端和3’端分别标记荧光报告基团R和荧光淬灭基团Q，当探针完整时R基团与Q基团分别位于探针的两端，Q基团抑制R基团使其不能发射荧光。PCR过程中，TaqDNA聚合酶沿着模板移动各成新链,当移动到模板互补的探针处时,TaqDNA聚合酶同时还发挥其5’-3’外切核酸酶活性，将探针的脱氧核苷三磷酸逐个水解，R基团与Q基团随子分离。此时R基团不再受Q基团的抑制而发射荧光，仪器的检测系统便可测得荧光信号。