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军团菌实验活动风险评估报告

一、生物学特性
〈一〉种类和细菌分型
军团菌属( Legionella) 细菌是一 类革兰氏阴性杆菌，广泛分布于自然界中，特别适当温暖潮湿地带天然水源及人工冷、热水管道系统中。军团菌科仅有一种属，即军团菌属 9 本属涉及嗜肺军团菌、博杰曼军团菌、米克戴德军团菌、杜莫夫军团菌、长滩军团菌、高尔曼军团菌、詹姆斯敦军团菌、约旦军团菌、菲利军团菌、阿尼沙军团菌、红光军团菌、橡树岭军团菌等 30 种以上军团菌，至少 19 种是人类肺炎病原菌，其中以嗜肺性军国菌最易致病。如下以简介嗜肺军团菌关于内容为主。
嗜肺军团菌具备O和H抗原，O抗原具特异性，依照O抗原特异性可将嗜肺军团菌 分为 15 个血清型 (LP1-LP15) ，其中1 型就是 1976 年军团病病原菌。在国内分离较多嗜肺军团菌为 l(LPl)和 6 (LP6) 两个血清型。 15 个血清型中前 10 个血清型都具备 39kDa 外膜蛋白成分，是机体应答反映重要免疫原。 H 抗原无特异性。
（二)来源
1976 年，美国费城退役军人协会会员中曾爆发急性发热性呼吸道疾病，导致 221 人
感染疾病，其中死亡34 人。经研究发现一种细菌，被命名为嗜肺军国菌。随后，许多关于
细菌暂被列入这一属，且追溯研究发现 9 早在 1943 年即有军团菌病病例。此后，军团菌
病在全球共发生过 50 多次。近几年在欧洲、美国 、澳大利亚等国家和地区均有流行 9 其中
最常用病原体为嗜肺军团菌(占病例 85%~ 90%) ，另一方面是米克戴德军团菌(占5%~
10%) ，最后是博杰曼军团菌和杜莫夫军团菌。此类细菌形态相似，具备共同生化特性 9
会引起类似疾病。
（三）传染性
军团病重要污染源是供水系统、冷却塔及空调系统。军团菌为水源中常用微生物 9 空调系统、冷却塔和暖水管道是该菌极易繁殖场合 9 因而，暴发流行多见于医院、旅馆、建筑工地等公共场合。
(四〉传播途径
病原菌随气雾和气溶胶经呼吸道传播。直接与军团菌接触自身并不存在危险，但将
具有此种菌水滴悬浮物吸入肺中，就会引起危及生命疾病。
(五)易感性
人群普遍易感 9 男性发病多于女性 9 孕妇、老年人、免疫功能低下者为多发人群。医院
内感染占 5% ，并且集中在免疫缺陷、器官移植、血液透析、糖尿病、吸烟、慢性支气管炎或 肺气肿、肿瘤等患者。
（六)潜伏期
肺炎型潜伏期-般为 2~ 10d；非肺炎型(庞蒂亚克热)为该病菌感染轻型 9 潜伏期
5~66h ，半数为36h 左右。
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（七）剂量—效应关系
军团菌感染剂量与不同型别军团菌致病性强弱密切有关 9 因而产生了有流感样型 (轻症型)、肺炎型(重症型)和肺外感染三种类型不同临床特性军团菌病。当前，尚未见军团菌对人精确感染剂量报道。
(八)致病性
(1)致病物质 嗜肺军团菌产生各种酶类、毒素和溶血素，直接损伤宿主。细胞毒素阻碍中性拉细胞氧化代谢;菌细胞中所含磷酸醋酶阻碍剌激中性拉细胞超氧化物 离子产物，使中性粒细胞内第二信使陷于混乱。这些物质可抑制吞噬细胞与溶酶体融 合 9 使吞噬体内细菌在吞噬细胞内生长繁殖而导致宿主细胞死亡。
(2) 所致疾病 嗜肺军团可引起军团病，也可引起医院感染。多流行于夏秋季。主
要通过呼吸道吸入带菌飞沫、气溶胶而感染，引起以肺为主全身性感染。军团病临床上 有流
感样型(轻症型)，肺炎型 (重症型)和肺外感染三种类型。流 惑样型亦称庞蒂亚克热， 浮现发热、不适、头痛和肌肉疼痛等症状， X 线无肺炎征象 9 预后良好;肺炎型亦称军团病，起病骤然 9 浮现以肺部感染为主多器官损害，患者浮现寒战、高热、头痛、肌痛激烈、干咳，后浮现浓痰或咯血 9 全身症状明显，常伴有中枢神经系统和消化道症状，不及时治疗可导致死亡，死亡率可达 15%~ 20% 。肺外感染型为继发性感染9 浮现脑、肠、肾、肝、脾 等多脏器感染症状。嗜肺军团菌为胞内寄生菌，细腿免疫在抗感染中起重要作用。
(九)变异性
军团菌变异性当前尚未有确凿证据资料可以证明。
(十)环境中稳定性
军团菌产生在自然环境中，在温水里及潮热地方蔓延。人工供水系统 9 涉及淋浴器、矿泉池、喷泉以及空调设备冷却水塔均能为军团杆菌大量繁殖提供生存环境。军团菌是长期隐藏在空调制冷装置中致病菌，该茵在适当环境中可长期存活，随冷风吹出浮游在空气中，人们普通是由于呼吸了被军团杆菌污染水源散发水雾而感染上军团病。
〈十一〉药物敏感性
军团菌对红霉素敏感 9 重症患者用红霉素静滴外，可联合应用利福平、多西环素。氨基糖甙类抗生素、青霉素和头孢菌素对军团菌病无效。
（十二）消毒剂敏感性
对惯用化学消毒剂敏感，如 0.03% 戊二醛、2% 甲酸及 70% 乙醇均可杀死该菌，但对
氯或酸抵抗力比肠道菌大 9 置于 21℃时含 O. 1ng/LJ 游离氯水中 9 杀死 90% 嗜肺军团菌需 40min，而杀死大肠埃希菌则不到 1min ，在pH=2.0盐酸中可存活 30min:运用这些特点解决标本可去除杂菌。
（十三)物理灭活
对干燥、紫外线较敏感，加热70℃ 以上，也可灭活。通过照射紫外线短波，波长 254nm 可以使病菌无法活跃，再附加使用超声波可以更有力地除菌。薄膜技术——使用 薄膜来去除微生物， 普通可以运用薄膜微孔让直径不大于0..2nm 颗粒涉及细菌，甚至某些病毒 9 过滤掉。
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该菌在适当环境中可长期存活。如在 36 ~37℃ 热水中可以存活，而在蒸馏水中可存活l00d 以上。
(十五)与其她生物和环境交互作用
军团菌能与某些常用原虫形成共生关系，可寄生于阿米巴变形虫内井保持致病活性。
（十六）防止和浩疗方案
当前，尚无嗜肺军团菌特异性疫苗。医院空调冷却水、辅助呼吸机等产气愤溶胶中
能检出此菌。因而，加强水源管理及人工输水管道和设施消毒解决 9 防止军团菌导致空
气和水源污染，是防止军团菌病扩散重要办法。
军团菌肺炎为细胞内感染，因而，治疗以红霉素为首选。轻症病例以口服红霉素和其
她辅助药为主。较重者用红霉素分次静脉滴注，连用 2~3周。并联合其她辅助药物治疗。重症患者用红霉素静滴外， 可联合应用利福平、多西环素，支持对症等综合治疗。大环内
酯类或氟喹诺酮类、四环素类、利福平等也有一定治疗效果。
一、 实验室有关活动风险评估与控制
(一)实验室感染性因子种类、来源和危害
1．感染性因子种类 军团菌可产生各种酶和毒素 9 涉及蛋白酶、磷酸酯酶、脱氧核
糖核酸酶、ß内酰胺酶，以及细胞毒素，也许与毒性关于。依照军团菌生物特性和中心 验室检测能力范畴，本实验室也许感染因子为军团菌病原体。
2. 感染因子来源
(1)用于军团菌检测公共场合集中空调通风系统中冷却水、冷凝水样品等。
(2) 样本采集和检测过程涉及所有实验场合。
(3) 实验室操作过程中也许产生含病原菌气溶胶。
3. 感染性因子也许导致危害
(1)被污染实验器材、器皿等对实验室环境导致污染。 (2) 实验室废弃物对环境导致污染。
(3) 实验人员暴露后感染。
(4) 实验室含病原体气溶胶对实验室环境导致污染。
由于军团菌是通过气溶胶感染致病，因此，实验室人员在检测过程各个环节有可
能因意外吸入实验产气愤溶胶，从而导致感染。
(二)实验室常规活动过程中风险评估与控制
1.实验办法
(1)风险点辨认 未采用国标、行业原则进行检则;使用新或变更国家或行业原则前，未经技术确认，也许存在安全风险。
(2)风险控制办法 尽量采用国标、行业原则进行检测，或使用通过充分验证 实验办法;在使用新或变更国标、行业原则前，必要通过严格技术确认。
2. 样品采集
(1)公共场合集中空调通风系统冷凝水、冷却水样本采集
①重要实验设备和器材 螺旋盖玻璃瓶等容器。
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②重要风险点辨认 公共场合集中系统冷凝水、冷却水等样品中也许存在感染性病原体 9 采样人员采样不规范、盛装容器密合不严、玻璃容器意外破损等因素均可导致样品溅洒、溢出、渗漏而污染环境;同步， 现璃容器意外破损存在乎外剌伤或划伤采样人员风险。
③风险控制办法 采集容器必要防水、防漏，容器外面要包裹足量吸取性材料，以便容器打破或泄漏时，能吸取溢出所有液体。
(2)集中空调通风系统送风空气样本采集
①重要实验设备和器材 微生物气溶胶浓缩器、液体冲击式微生物气溶胶采样器、螺旋盖吸取管。
②重要风险点辨认 集中空调通风系统送风空气标本中也许存在军团菌等感染性病 原体。使用液体冲击式微生物气溶胶采样器采集标本过程中，工作人员采样不规范、个 人防护不到位 9 均存在采样人员被气溶胶感染隐患。
③风险控制办法 采集集中空调通风系统送风中空气标本时 9 采样人员需要穿戴 防护服、口罩、帽子、手套等防护品，严格按照原则规定规范采样。
(3) 下呼吸道分泌物、肺活检组织或胸腔积掖等标本采集
①重要实验设备和器材 塑料蝶旋盖采样管、消毒棉签等。
②重要风险点辨认 下呼吸道分泌物、肺活检组织或胸腔积液等病理标本中也许存 在感染性病原体，采集过程中 9 患者咳嗽，释放小颗粒气溶胶;采样人员采样不规范、个人 防护不到位，存在采样人员随气雾 和气溶胶吸入感染隐患。
(4) 血样采集
①重要实验设备和器材 一次性采血针、真空采血管、消毒榻签及一次性利器盒。
②重要风险点辨认 血液样品也许存在不明感染性病原体，采血管密封盖意外脱落 或采血针内残留血滴落，存在血样溅洒从而污染人员或环境风险;采血针头存在乎外刺 伤或如伤采样人员风险。
③风险控制办法 使用一次性采血针和真空采血管时 9 采样人员应通过正规采血培训，并纯熟掌握采血技巧。采血前做好个人防护(防护服、乳胶手套、口罩) ;认真、仔细谨慎操作，抽血后针头直接放入利器盒内 9 禁止用于直接接触使用后针头或将使用后 针头重新套上针头套;采好血后直立于试管架中，防止倒翻;消毒棉签等污染物放入医疗 废弃物专用袋中，统一进行消毒解决。
3，样本包装和运送
(1)重要实验设备和器材 真空密封采血管、外螺旋盖玻璃瓶、聚乙烯材料密填充器、聚乙烯材料密封采样管、95 千帕样品运送罐、B 类标本运送箱 (UN3373 冷藏箱)、运送 车辆。
(2) 重要风险点辨认 盛样容器不结实，存在玻璃容器或包装容器意外破损，刺伤或划伤采送样人员隐患;盛样容器密合不严，也许导致样品溅洒、溢出、渗漏;样本运送包 装不符合生物安全规定，也许导致样品侧翻、渗漏，导致污染扩散。
(3) 风险控制办法
盛装样品容器必要结实、不易破碎，尽量选用塑料制品，采样后必要检查容器密合性。样品运送需使用三层合格包装材料。

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4. 样品接受和前解决
(1)重要实验设备和器材 旋涡振荡器、离心机、生物安全柜、干净工作台、微生物膜 过掠装置。
（2）重要风险点辨认 样品管理员未按实验室样品管理程序规定接受样品;检测人 员进行样品前解决时未做好个人防护;打开水样、空气吸取液标本、下呼吸道分泌物样本 时，意外发生样品侧翻；水样前解决执行过滤和洗脱操作时样液溅洒，离心机操作时离 心管破裂等意外状况。
(3) 风险控制办法
①样品接受必要在专用区域进行， 合同评审人员和实验室收样人员严格按照《样品管理程
序》(XJK/CX32)规定交接样品，不得擅自打开样品包装， 收样后及时洗手。
②开始检测前 9 必要做好个人防护:对盛装下呼吸道分泌物等感染性材料样品容器，必要
在生物安全柜中缓慢打开;水样和空气吸取液标本必要在干净工作室内打开;启动容器管口应当动作轻缓，不能对着操作者。
③进行水样前解决时，抽滤和洗脱整个操作过程时动作必要轻缓， 防止产生大量气溶胶和样液溅洒污染环境；遇到水样中具有较多沉积物和软泥时，必要先粗滤 9 以减少多次抽滤导致气雾和样液溅洒污染环境风险。
④实验室应配备应急药箱，发生手剪伤等意外事件时应及时进行消毒、包扎解决。
⑤在进行感染性样品和滤膜洗脱等离心振荡操作时必要戴口罩，并将离心盖封严实， 再关上离心机盖，以防气溶胶产生。当发生离心管意外破裂、溅出时，应及时对所有涉及污染部位进行消毒解决。同步，按《二级生物安全实验室建设与管理》 "实验室意外事 故处置"章节处置。
5. 样本检测过程
(1)重要实验设备和器材 旋涡振荡器、离心机、微生物膜滤系统、生物安全柜、培养箱、定量荧光 PCR 仪、核酸提取仪、金属浴、移液器及吸液头、接种环、培养皿、无水乙醇、溴化乙啶等。
(2) 重要风险点辨认
①对水样、空气、下呼吸道分泌物等样品进行军团菌菌株分离、生化鉴定、血清分型、药敏实验、分子生物学等实验活动时，均涉及活菌操作。检测过程中样品移取、划线分离、涂片染色、离心、过滤等操作均可产气愤溶胶，存在气溶胶直接吸入感染隐患。
②实验过程中玻璃器材意外破碎或渗漏、离心操作时离心管意外破裂等事故，可导致液体溅出从而污染设备表面或工作台面等环境，间接污染操作者皮肤、黏膜。
③提取核酸时 9 使用无水乙醇属易燃易爆物质，溴化乙啶具备强烈致癌性。
(3) 风险控制办法
①检测人员在实验前应按照二级生物安全防护规定做好自身防护办法(穿防护服，戴手套、口罩，穿不露脚趾和覆盖脚背、防滑、防渗漏工作鞋)。进行水样等样品抽滤、浓缩等操作时，必要在干净实验室内进行且动作要轻缓，抽滤前一定要检查滤器密合性。下呼吸道分泌物等病理标本、涉及感染性活菌实验操作时必要在生物安全柜内进行。实验结束后对桌面、台面及时进行消毒解决。
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②必要使用移液器或吸球移取样液，旋盖和移液操作动作要轻缓，所有吸管应用棉塞，移液头尽量使用带滤芯，以减少对移液器或吸球污染。
③使用直径2~3mm且完全封闭、手柄长度不大于 6cm 接种环分离细菌，尽量使用封闭式微型电加热器对接种环进行消毒，避免在酒精灯明火上加热从而引起感染性物质爆溅。
④尽量以塑料器皿代替玻璃器皿，若必要使用玻璃器皿，只能用实验室级玻璃(硼硅酸盐) 且任何破碎或有裂纹器皿都应丢弃。禁止用手直接接触使用后针头、刀片、玻璃碎片等锐器。禁止用带有注射针头注射器吸液，更不可把它当吸管用，用过锐器 应直接放入利器盒，消毒后废弃。
⑤分子生物学检测实验中使用无水乙醇属易燃易爆物质，应放置在通风柜远离热源;溴化乙啶属有毒物质，需要专人专管。
⑥在任何也许导致潜在传染性物质溅出操作过程中，应保护好面部、眼睛和嘴；发生液体溅出、溢出等事故，明显暴露于传染源时，应及时向科室负责人报告，及时解决并对事故发生与解决作记录，必要时进行恰当医学评估、观测和治疗并保存书面记录。
6. 菌株使用、保存和运送
(1)重要实验设备和器材 接种针(环)、菌株保存管、生物安全柜、95 千帕样品运送 罐、B 类标本运送箱 (UN3373冷藏箱)、运送车辆。
(2)重要风险点辨认
①保菌操作不规范、个人防护不到位、保菌磁珠管等保菌容器意外破损、磁珠掉落等会导致病原菌污染实验室环境和实验人员。
②军团菌使用和保存未按照《菌(毒)种管理程序>>(XJK/CX37)规定实行管理，存在菌株
被恶意使用及污染环境等生物安全隐患。
③运送包装不符合生物安全规定，或运送工具无安全保障，则易导致污染扩散，甚至样本丢失。
(3) 风险控制办法
①军团菌分离纯化及保菌操作必要在生物安全柜内进行，若发生保菌磁珠管破损、磁珠掉落状况时，应及时对所有涉及污染部位进行消毒解决，并按《二级生物安全实验室建设与管理》中"实验室意外事故处置"章节进行规范处置。
②军团菌原则菌株使用、保存严格按照《菌(毒)种管理程序>>（ XJK/CX37)规定进行操作，实行双人双锁保管，严防菌株被恶意使用而导致生物危害。
③军团菌阳性菌株上送应严格执行规范，采用 3 层包装，并由专车运送，同步携带"可感染人类高致病性病原微生物菌(毒)种或样本运送允许证"，由专业人员全程护送。
7. 实验室清洁和消毒
(1)重要实验设备和器材 70%~75%酒精、施康清洗消毒液Ⅰ0
(2) 重要风险点辨认 工作完毕后，若不及时对工作台面、生物安全柜进行消毒，有可 能会对下次操作人员导致污染或感染。
(3) 风险控制措胞 工作完毕后，及时对检测所涉及工作台面、地面和生物安全柜进行消毒，使用稀释 100 倍施康清洗消毒液Ⅰ擦拭，用消毒液清洁后要干燥 20min以
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上，再进行实验操作。生物安全柜用 70%~75% 酒精擦拭消毒。待实验和消毒完毕， 先脱去手套，再脱去防护服，并对的用肥皂和流水洗手。
8. 废弃物处置
(1)重要实验设备和器材 医疗废弃物专用袋、硬质耐高压防渗漏垃圾桶、高压灭菌器。
(2) 重要风险点辨认
①样品采集和实验检测过程产生感染性废弃物重要有水样、空气样品、下呼吸道分泌物等病理标本、血液血清标本、病原菌培养基标本和阳性菌种及所有实验过程涉及用品，释放前未按照规范规定解决，导致感染或致病因子外泄而污染环境。
②样品采集和实验检测过程中产生被污染损伤性废弃物，如一次性使用采血和下呼吸道分泌采样用品、载玻片、玻璃试管、玻璃安瓿、培养皿等，未按照规定进行规范解决，存在乎外刺伤或划伤工作人员隐患。
(3) 风险控制办法 实验室废弃物解决应遵循《医疗废弃物管理条例>>《医疗卫生机构医疗废弃物管理办法>>《医疗废物专用包装袋、容器和警示标志原则》等有关法规规定，分类收集，规范处置。所有损伤性废弃物必要放置于有警示标记硬质、防漏、防锐器刺破专用利器盒中;所有感染性废弃物必要放置于有警示标记医疗废物专用包装袋中;使用高效消毒液浸泡或高温高压灭菌后集中解决，集中存储至中心指定医疗废弃室，由有资质医疗废弃物解决单位上门收集，集中处置。同步，做好废弃物处置交接记录，所有有关记录应定期整顿归挡。
(三)实验室常现活动中其她风险评估与防止控制办法
1.电力
(1)重要风险点辨认 断电或电压不稳，存在引起电气设备故障隐患。断电可使运营中生物安全柜、检测设备突然停止工作，致使实验活动被迫中断，存在感染性物质外溢，污染操作人员和环境风险。
(2) 防止控制办法 实验室由双路市电供电，并为核心仪器设备配备应急电源 (UPS)，避免
实验室因断电也许引起生物安全风险，保证检测工作顺利进行。
2. 电气操作
(1)重要风险点辨认 实验室活动涉及电气操作，涉及实验室工作区内电气设备启动、关闭、安装和维修;设备层内UPS 、空调机组等电气设备启动、关闭和维修等。这些电气操作过程也许产生触电、电击、导致电气故障等风险。
(2)防止控制办法
①电气设备设计及制造应符合有关安全原则规定。实验室工作区内若有380V电源插座
，则需明确标记，并由有资质专业人员进行操作。
②新、改装过或修理过电气设备在未经专业人员(如有资质电工)完毕电气安全测试、使设备符合安全使用规定之前，不容许使用。
③电气设备使用人员应接受对的操作培训，操作方式不减少电气安全性。电气设备使用人员要定期检查设备破损状况，以避免引起电气故障。只有专业人员才可从事电气设备和电路工作。禁止未经授权工作。
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④采用办法对设备进行去污染解决，以减少维护人员被病原菌感染风险。
3. 实验室给排水设施设备
(1)重要风险点辨认 实验室具有给排水设施设备，涉及位于工作区和洗消区高压灭菌器和洗涤池。管道意外破裂、排水管道阻塞也许导致感染性材料溢出，有污染实验人员和环境风险。
(2) 防止控制办法 实验室产生所有染菌物及器具，必要先经高压灭菌或含氧消毒剂浸泡消毒后洗涤，洗消产生污水集中排入中心污水池进行消毒解决，禁止直接排放。按照"GB 18466中6.1污水取样与监测"规定执行。
4. 实验室设施设备管道
(1)重要风险点辨认 实验室设施设备管道穿越维护构造部位也许存在密封不严状况，当感染性材料溢出时，有污染环境风险。
(2) 防止控制办法 所有管道穿越维护构造部位应严格密封，定期进行检查检测，避免感染性材料外溢从而污染环境风险。
5. 重要检测仪器设备
(1)细菌鉴定和药敏测试仪 (ATB 仪)、PCR 仪、核酸提取仪、凝胶成像仪等设备。
①重要风险点辨认 对疑似嗜肺军团菌鉴定期要用到 ATB 仪进行生化鉴定及药敏实验，或用核酸提取仪、定量荧光 PCR 仪进行毒力基因检测。使用这些设备时，如果不按操作规程进行规范操作，则会导致病原体溅出，渗漏从而污染实验环境。
②防止控制办法 严格按 ATB 仪、核酸提取仪、PCR 仪、凝胶成像仪等设备操作规程操作和维护，每次使用完毕后对设备箱体及也许污染实验环境进行消毒。
(2) 离心机
①重要风险点辨认 未对的配备密闭盖离心机、密封头真空采血管、耐压螺旋盖离心管，高速离心时可产气愤溶胶扩散;离心血样时没有做好平衡，也许会发生离心管破裂、离心管盖脱落状况，存在血样污染离心转子和离心腔风险。
②防止控制办法 实验室配备密闭盖离心机、密封头真空采血管、耐压螺旋盖离心管;离心前做好平衡，选取对的离心速度和离心力;规范对的操作;每次使用后做好清洁消毒和使用维护记录，定期进行功能检查，保证离心机性能正常。
(3) 微生物膜过滤装置
①重要风险点辨认 未按照仪器使用规定规范操作，也许会发生滤杯松动，导致待检样品滤液外流，从而污染实验台面和设备。
②防止控制办法 实验室严格按照仪器使用阐明规范操作，仪器启动前，必要检查滤杯与滤器接口密封性，保证密闭状态，并做好个人生物安全防护;每次使用后做好清洁消毒和使用维护记录，定期进行功能检查，保证仪器性能正常。
6. 生物安全设施设备 (1)生物安全柜
①重要风险点辨认 没有按照设备操作规程或使用阐明书进行操作、维护，使生物安全柜气溶胶防护效果明显减少，甚至失效。设备长时间使用后未及时更换 HEPA 过滤膜，可浮现工作窗口气流速度减少或流向紊乱等功能失常状况。生物安全柜使用后未进

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第四章 呼吸道病原微生物实验活动风险评估报告实例

行彻底消毒解决，对清洁、维护人员将会产生污染。设备长期关停，将会使某些电器元件 老化从而失去正常功能。对于设备移位、碰撞受损时，没有及时进行性能检测等。
②防止控制办法 对的选配生物安全柜，使用人员接受有关操作、维护培训 9 做到规 范使用和维护。每月进行空气沉降菌检测，每年请有资质服务机构对生物安全柜风速、气流、尘埃粒子数、紫外线强度等重要性能指标进行检测 9 保证其功能正常。一旦生物安全柜使用导致污染，应及时进行消毒。
(2)高压灭菌器
①重要风险点辨认 没有对的配备高压灭菌器，存在气溶胶污染环境隐患没有按照设备操作规程或使用阐明书进行操作、维护，也许使高压灭菌器效果明显减少，甚至失效，失去去污染与无害化作用;压力锅长时间使用又不定期监测灭菌效果，对压力容器灭菌效果无从考证，存在灭菌不彻底从而引起污染隐患。压力锅长期关停期间，如果不及时排干锅体水分，将会使内部器件老化从而失去正常功能。
②防止控制办法 选取下排式高压灭菌器，防止气溶胶污染 9 对的规范操作，定期维护，保证高压灭菌器性能正常，做好使用记录。每次监测化学批示物，监控并记录温度、压 力、时间等灭菌参数 9 每周进行生物监测，以保证灭菌质量。
(3) 个人防护用品
①重要风险点辨认 实验室不提供足够数量、符合质量规定防护服、防护眼罩、一次性乳胶手套、口罩和覆盖足背防滑鞋等 9 使用大小不适当个人防护用品，个人防护用品穿戴、脱卸程序、办法不符合规定 9 均也许存在人员感染或污染环境风险。
②防止控制办法 选取正规、符合质量规定防护用品 9 使用迈进行必要培训，按照规定程序对的使用、脱卸。
(4)应急救治设施和用品
①重要风险点辨认 实验室若没有配备洗眼器、应急药箱等必要应急设施和物品，
或配备急救用品种类不全、不适当或过期，则会导致急用时无法发挥作用。
②防止控制办法 在实验室内对的配备洗眼器，保证其功能正常。配备 75% 乙醇、碘伏或其她消毒剂、创可贴等急救物品与实验活动相适应并在有效期内使用专人负责管理 9 定期维护、清理和更新。
( 5)消毒灭菌剂
① 要风险点辨认 消毒剂产品无生产允许证、过期、配制办法或浓度不对的、种类选取
不合理，将会导致消毒效果减少、生物灭活能力减少或对物品腐蚀性增长、对皮肤导致剌激等问题。
② 防控制办法 选取符合国标正规厂家生产产品 9 选取适当消毒剂，按照规定
消毒办法、消毒时间和消毒浓度(剂量)进行消毒，避免使用过期产品;消毒过程中，消毒人员应做好必要个体防护，防止发生意外。依照军团菌特点，可选用70%~75% 酒精和稀释10~25 倍、50~ 100 倍、200 倍施康消毒剂 Ⅰ作为实验室惯用消毒剂。
7. 管理体系风险

(1)重要风险点辨认 管理体系(涉及应急预案)与否健全和完善，与否符合实际管理规定，程序文献、作业指引书和操作规程与否科学和具备可操作性，与否能保证生物安全

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病原棋生物实验活动风险评估报告实例

重要因素。如果组织构造不健全、设立不合理、体系文献与实际工作不匹配，以及部门职责不清或衔接不当等，就都也许带来安全风险。
(2)防止控制办法 定期开展对管理体系评审，包捂应急预案、检测原则操作规范
(SOP)等，发现问题应及时修订、完善，以保证生物安全管理体系持续有效运营。
〔四)工作人员风险评估与防止控制办法
(1)人员数量和素质
①重要风险点辨认 人员过少会因缺少互相提示监督或因工作量增大而导致操作过 中工作失误增长，风险增长。
②防止控制办法 采样和检测人员数量应与工作量相匹配，尽量有 2 名工作人员同步进行采样和检测工作，质量监督员加强对实验活动核心环节监督。
(2) 人员构造
①重要风险点辨认 实验室检测人员职称分布不合理，新进人员没有高资历人员带 教操作，不能较好地应对意外事件，风险增长。
②防止控制办法 实验室检测人员年龄和资历构造应配备合理 9 新进人员应由高 资历人员带教或监督操作。
(3) 职业操守
①重要风险点辨认 军团菌检测存在较大生物安全风险 9 若政治思想素质不高、责 任心不强人员参加该项工作，则产生生物危害而危及人员安全、环境安全与社会安定 也许性较大。
②防止控制办法 加强工作人员职业道德教诲，培养工作责任心。
2. 健康管理
(1)重要风险点辨认 健康状况重要涉及生理、心理素质与免疫状态。若实验室检测有关人员浮现呼吸道感染症状、机体免疫力低下，或其她不适合工作状况，则职业暴露 风险增长。
(2) 防止控制办法 建立健康申报制度，遇有人员浮现呼吸道感染症状、机体免疫力
低下及其她不适合工作状况时，应及时向科室负责人报告并暂停工作。
3. 人员资质
(1)重要风险点辨认 检测人员不具备卫生检测有关学历教诲背景，不熟悉军团菌检测办法及操作规范，未执行有关专业知识培训和考核，未获得上岗证 9 无法保证工作质量
和安全。
(2) 顶防控制办法 检测人员必要是检查或有关专业毕业 9 通过上岗培训和考核合格。上岗培训内容至少应涉及军团菌检测有关基本理论、有关检测技术及管理规定、实验 操作环节、检测质量保证与质量控制。规定掌握有关专业知识和技能，能独立纯熟地操作，理解有关技术、质量控制及生物安全规定新进展，实验室在使用新检测办法前，须对 技术人员进行再培训。

4．生物安全培训规定

（1）重要风险点辨认 检测人员、辅助人员、后勤保障人员、进修实习人员上岗前没有

" 62 •

四章 呼吸道病原做生物实验活动风险评估报告实例

接受严格生物安全以及有关生物安全设备操作技术培训，易导致生物安全事故 发生。
(2)防止控制办法 检测人员、辅助人员、后勤保障人员每年参加本中心组织生物
安全知识或生物安全操作技术培训、考核。上岗前纯熟掌握生物安全仪器设备、设施操作技术 9 具备有关安全防护能力。进修实习人员参加实验活动前必续进行生物安全知识培训，在带教教师监督下工作。

5．应急事件解决能力
（1）重要风险点辨认 实验人员上岗前没有接受实验室意外事故解决、职业暴露后防止等突发事件处置培训 ，一旦发生意外事件 9 就不能有效地进行初期解决和控制生物安全事件。
(2)防止控制办法 实验室工作人员必要严格按照《实验室意外事故和职业性疾病报告制度》和《病原微生物生物安全应急处置技术方案》中规定规定进行应急事件处置，强化职业暴露应急解决能力。
(五〕实验室非常规活动中风险评估与防止控制办法
(1)重要实验室非常规活动
①实验室外专业人员对实验室设施设备维护、维修、检定/校准、检测验证(如重要设施设备检测验证)和更换(如高效过滤器等更换)等。
②实验室后勤保障人员对实验室及公共环境保洁、实验器材清洗消毒。
③实验室外人员参观实验室和上级部门对实验室检查。
③任何其她人员需要进入实验室从事实验活动外行为。
(2)重要风险点辨认
①上述人员进入实验室从事有关活动 9 特别是发生不慎打翻、打破标本管或损坏仪器
零部件等状况时 9 也许会引起实验室感染风险。
②实验室运营过程中 9 某些人员需要进入实验室参观 9 存在影响实验活动正常运营或 者导致有关或不有关设施设备损坏风险。 c
(3)防止控制办法
①实行人员准入、登记制度。进修实习人员进入实验室从事检测活动前， 必要先进行生物安全和实验规章制度培训。参观和检查活动范畴应尽量不涉及实验区域。若中心实验室外专业人员和实验室后勤保障人员确需进入实验室进行有关活动， 或上级部门需要进入实验室进行检查， 则应由中心实验室人员陪伴。
②实验室外专业人员和实验室后勤保障人员必要要有相应专业知识，应对其进行 生物安全培训，提供安全指南，实验室人员应协助指引和规范进入人员在实验室内活动并对其安全行为进行监督 9 进入人员必要遵守实验室各项管理规定 9 以保证人员和环境安全。
③进入人员未经允许绝对不能擅自动用实验室内有标志危险品(除非通过授权) ， 绝不能将未经消毒解决物品拿出实验区。
4 在生物安全BSL-2实验室进行设施、设备维护维修过程中，若发生意外事件，则应及时报告实验室负责人。实验室负责人依照导致事故进行风险评估，采用应对办法。

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病原微生物实验活动风险评估报告实例

按专业技术规定进行设施、设备维护维修时 9 不能擅自动用其她设施设备。若导致有关或不有关设施、设备损坏时，则应及时报告。
⑤当需要更换HEPA 过滤膜或高效过惊器时 9 应先对高效过滤器、HEPA 过滤膜等作原位消毒后，专业人员才干进行更换。
⑤为保证自己和她人安全，禁止未穿防护服人员随意进出实验室防护区域。 同步也禁止穿防护服人员走出实验室防护区域。
⑦对实验室设施、设备进行维护工作时动作轻柔，避免产气愤溶胶。
③离开实验室前 9 所有人员必要洗手
〔六〉被误用和恶意使用风险与防止控制办法
1．重要风险点辨认 阳性标本未明确标记，未严格实行双人双锁管理 9 实验活动结束后不及时对操作场合进行消毒，工作人员在不知情状况下也许误用标本、实验材料和 设施设备等 9 导致人员感染和实验室环境污染、人员受伤或设施设备损坏等事故。
2．防止控制办法
①实行严格人员准入和持证上岗制度。
②所有获得批准进入实验室工作人员，必要严格按规程操作实验材料和设施、设 备， 以及其她一切实验活动 9 不得擅自动用实验室内任何不熟悉物品。
③发生事故时必要及时报告并作必要解决和记录。
④实验所用材料和试剂等必要有明确标记。
⑤阳性际本实行严格双人双锁管理， 上送阳性样本必要经中心盖章批准，采用专 用包装，并由专业人员全程护送。
(七)有关实验室已发生事故分析和从中得到启示
当前，已有军团菌检测导致实验室人员感染有关报道，重要因素是采样人员现场采
样和实验室人员在进行样本前解决、检查、废弃物处置等工作过程中，个人防护不到位而吸入气溶胶导致感染。因而，应严格遵守实验室有关规定，按照风险评估报告制定规定规范执行，可减少和规避职业暴露风险。
三、实验室理化因素风险评估及安全防护办法
〔一)紫外线
1.重要风险点辨认 干净实验室内传递窗、生物安全柜、BSL-2 实验室均使用紫外线灯进行物体表面消毒。紫外线波长为 250~ 280nm ，重要影响眼睛和皮肤9 引起急性角膜炎和结膜炎、慢性白内障等眼疾病 9 还可诱发皮肤癌。紫外线灯启动时 9 人员在不知情状况下进入可受到伤害。
2. 安全防护办法 在实验室工作应避免紫外线直接照射人体，特别是眼部。生物安
全柜表面应张贴紫外线危害标记 9 提示实验人员小心紫外线危害。在进行紫外线消毒
时 9 实验人员应尽量远离消毒区域。如此 9 基本可以规避紫外线对人体危害。
（二）辐射
1．重要风险点辨认 辐射源或辐射事故可以间接导致病原微生物屏障系统破坏，增长实验人员被病原微生物感染风险。

2．防止控制办法 实验室应远离辐射源，如果无法避开，则应采用物理办法，防

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第四章 呼吸道病原微生物实验活动风险评估报告实例

止辐射源对检测工作和人员健康产生影响。本中心实验室内部和周边建筑群均没有辐射源，因此 9 辐射风险基本不用考虑。
{王)施康清洗消毒剂
1.重要风险点辨认 施康清洗消毒剂I属于含争氯消毒剂，有效氯含量为 4. 55%~
5.55% ，次氯酸钠为重要杀菌因子。含氯消毒液会残留在空气中不挥发9 长期使用会使
人感到头疼、恶心并剌激黏膜 9 对于有体质过敏人，还容易引起过敏、哮喘疾病等。高浓度含氯消毒剂对人呼吸道黏膜和皮肤有明显剌擞作用，可使人流泪、咳嗽，并剌激 皮肤和黏膜，严重者可浮现氯气中毒。急性中毒者浮现躁动、恶心、呕吐、呼吸困难等症状，甚至因窒息而死。
2. 安全防护办法 按照使用阐明，依照消毒对象不同而配制不同稀释倍数，避免
使用不必要高浓度消毒液 9 稀释和使用时戴好手套 9 消毒后可及时开窗通风，基本可规避消毒液对人体危害。
(四〕真她
1． 重要风险点辨认 实验室内照明和声音(生物安全柜等)有也许因强光和噪声对人员健康导致损害。
2. 安全防护办法 对实验室照明和声音等参数进行检测，保证合格，避免强光和噪声对人员健康损害。
四、实验室火灾险评估与顿防控制办法
1． 重要风险点辨认
(1)超负荷用电，电线过长。
(2) 电器和电源老化、电器保养不良，例如电缆绝缘层老旧或损坏。
(3) 用火不当等引起火灾。
(4) 仪器设备在不使用时未关闭电源。
(5) 使用仪器设备不是专为实验室环境设计。
(6) 易燃、易爆品解决、保存不当。
(7) 不相容化学品没有对的隔离。
(8) 在易燃物品和蒸汽附近有能产生火花设备。 (9) 通风系统不当或不充分。
2. 防止控制办法 实验室采用如下防止控制办法避免火灾发生 9 保证发生火灾后可以安全撤离实验室。
(1)定期检查电器插座、电线绝缘层与否完好，保证用电负荷，对易燃、易爆等危险品进行有效区域隔离。
(2) 实验室配备灭火器。放置在易取