淋病等实验室诊断技术(玉林).ppt

性性传播疾病的播疾病的实验室室诊断断广西区性病中心广西区性病中心实验室室广西皮肤病防治研究所中心广西皮肤病防治研究所中心实验室室广西皮肤病医院广西皮肤病医院检验科科朱邦勇朱邦勇2015-11-202015-11-201 1.性病性病实验室室诊断在性病防治中的作用断在性病防治中的作用效果效果评价价 临床服床服务疫情疫情监测科学研究科学研究 实验室室诊断断实验室室诊断在性病防治中的作用断在性病防治中的作用经经典性病典性病典性病典性病监测监测性病性病性病性病梅毒梅毒梅毒梅毒淋病淋病淋病淋病软软下疳下疳下疳下疳性病性淋巴肉芽性病性淋巴肉芽性病性淋巴肉芽性病性淋巴肉芽肿肿梅毒梅毒梅毒梅毒淋病淋病淋病淋病软软下疳下疳下疳下疳性病性淋巴肉芽性病性淋巴肉芽性病性淋巴肉芽性病性淋巴肉芽肿肿非淋菌性尿道炎非淋菌性尿道炎非淋菌性尿道炎非淋菌性尿道炎生殖器疱疹生殖器疱疹生殖器疱疹生殖器疱疹尖尖尖尖锐锐湿疣湿疣湿疣湿疣HIV/AIDSHIV/AIDSHIV/AIDSHIV/AIDS新的方法新的方法新的方法新的方法监测监测的性病的性病的性病的性病梅毒梅毒梅毒梅毒淋病淋病淋病淋病生殖道沙眼衣原体感染生殖道沙眼衣原体感染生殖道沙眼衣原体感染生殖道沙眼衣原体感染生殖器疱疹生殖器疱疹生殖器疱疹生殖器疱疹尖尖尖尖锐锐湿疣湿疣湿疣湿疣HIV/AIDSHIV/AIDSHIV/AIDSHIV/AIDS3 3.性病性病实验室室诊断在性病防治中的作用断在性病防治中的作用冰山一角冰山一角冰山一角冰山一角感染者感染者有症状者有症状者就就诊者者正确正确诊断者断者接受治接受治疗者者治愈者治愈者在性病在性病临床服床服务中的中的应用用确诊有症状的病例 实验室检测对有症状的性病患者可以提高临床诊断的特异性，达到明确诊断的目的。发现无症状的感染 有些性病感染者，特别是女性，在感染后往往不表现出典型的症状，或症状轻微。对于这类人群只有通过实验室检测方法才能发现其感染。从而减少由于感染后未能得到及时的治疗而引起严重的并发症及后遗症以及造成新的传播。5 5.在性病在性病临床服床服务中的中的应用用 指导临床实践 了解病原体对药物的敏感性及其流行趋势，从而为临床治疗提供可靠的依据，保障治疗的有效性。此外，实验室检测对新药的推广应用和新治疗方案的效果评估也提供了必要的支持。观察疗效及判断治愈 性病治疗效果的正确评价，有助于尽早切断传染源、预防并发症及后遗症的发生。临床疗效的判断往往需要借助于实验室的检测。6 6.性病性病实验室室诊断的断的现状状梅毒梅毒:TPPA/TPHATPPA/TPHA淋病淋病:培养培养 沙眼衣原体沙眼衣原体:核酸核酸检测/EIA/EIA生殖器疱疹生殖器疱疹:抗原抗原/抗体抗体 EIAEIA尖尖锐湿疣湿疣:核酸核酸检测基本普基本普及方法及方法梅毒梅毒:RPR/TRUSTRPR/TRUST淋球菌淋球菌:涂片涂片镜检沙眼衣原体沙眼衣原体:快速抗原快速抗原检测加加强普普及方法及方法支原体培养支原体培养,广泛使广泛使用方法用方法7 7.淋病淋病实验室室诊断断概况概况-病原学病原学(1)(1)淋病是指由淋病奈瑟菌淋病是指由淋病奈瑟菌(Neisseria(Neisseria gonorrhoeae,gonorrhoeae,简称淋球菌称淋球菌)引起的各种化引起的各种化脓性感染，是一种性感染，是一种经典的常典的常见的性的性传播疾播疾病病.淋球菌淋球菌为革革兰阴性双球菌，大小阴性双球菌，大小约0.60.60.8m0.8m。通常成。通常成对生生长，两菌接触面平坦。，两菌接触面平坦。8 8.概况概况-病原学病原学(2)(2)淋球菌与奈瑟属的另一种致病菌淋球菌与奈瑟属的另一种致病菌脑膜膜炎球菌及其他共栖奈瑟菌在生物学上炎球菌及其他共栖奈瑟菌在生物学上有有许多相似性，可通多相似性，可通过生化特性加以生化特性加以鉴别。发性感染部位主要性感染部位主要为男性尿道男性尿道或女性或女性宫颈管内膜。管内膜。9 9.概况概况-流行病学流行病学淋病的淋病的传播途径有以下二种：播途径有以下二种：1 1、直接性接触感染：成人淋病几乎全部、直接性接触感染：成人淋病几乎全部 通通过性接触感染。性接触感染。2 2、间接接触感染：儿童可通接接触感染：儿童可通过污染了淋染了淋 球菌的物品球菌的物品间接感染。新生儿可通接感染。新生儿可通过 母母亲产道分泌物道分泌物间接感染。接感染。1010.淋病的淋病的实验室室诊断方法断方法直接直接显微微镜检查淋球菌；淋球菌；分离培养淋球菌；分离培养淋球菌；非非培培养养技技术检测淋淋球球菌菌细胞胞成成份份如如抗抗原原或或DNADNA（EIA,PCREIA,PCR）1111.标本的采集本的采集 取材部位依据取材部位依据 年年龄 性性别 性接触方式性接触方式 临床表床表现取材拭子种取材拭子种类 藻酸藻酸钙拭子拭子 普通棉拭子普通棉拭子 涤纶拭子拭子 1212.标本的采集本的采集-取材部位取材部位(1)(1)男性男性异性恋者异性恋者:采集尿道采集尿道标本，有口淫史者加取咽部本，有口淫史者加取咽部标本；本；同性恋者同性恋者:采集尿道、直采集尿道、直肠及咽部及咽部标本本.女性女性 采采集集宫颈标本本，必必要要时从从尿尿道道、直直肠、咽咽部部、前前庭庭大大腺腺和尿道旁腺取材和尿道旁腺取材.1313.标本的采集本的采集-取材部位取材部位(2)(2)幼女幼女 幼幼女女和和/或或处女女膜膜未未破破的的感感染染者者标本本：采采集集阴阴道分泌物道分泌物新生儿眼炎患者新生儿眼炎患者 采集眼采集眼结膜分泌物膜分泌物1414.标本的采集本的采集-取材方法取材方法(1)(1)尿道尿道男性患者男性患者 用用手手指指从从阴阴茎茎根根部部向向尿尿道道口口方方向向挤压，有有症症状状患患者者可可挤出出脓液液，用用取取样拭拭子子蘸蘸取取脓液液作作涂涂片片或或培培养养。对挤压后后无无明明显分分泌泌物物时，采采用用男男用用取取材材拭拭子子插插入入尿尿道道 2 23cm3cm，稍稍用用力力转动，保保留留数数秒秒钟再再取取出，出，以采集到粘膜上皮以采集到粘膜上皮细胞。胞。1515.标本的采集本的采集-取材方法取材方法(2)(2)尿道尿道女性患者女性患者 可可抵抵着着耻耻骨骨联合合轻轻按按摩摩尿尿道道口口，挤压出出分分泌泌物物。如如果果无无明明显分分泌泌物物，可可用用同同男性相似的上述方法取材。男性相似的上述方法取材。1616.标本的采集本的采集-取材方法取材方法(3)(3)宫颈 避避免免使使用用防防腐腐剂和和润滑滑剂，因因为这些些物物质对淋淋球球菌菌有有抑抑制制作作用用。仔仔细检查阴阴道道壁壁和和宫颈，如如果果宫颈口口外外面面的的分分泌泌物物较多多，先先用用无无菌菌棉棉拭拭清清除除过多多的的宫颈粘粘液液。将将一一取取样拭拭子子插插入入宫颈管管内内1 12cm2cm，稍稍用用力力转动，保保留留10103030秒后取出。秒后取出。眼部眼部 用用男男性性采采样拭拭子子在在眼眼结膜膜处蘸蘸取取分分泌泌物物或或轻绕眼眼结膜。膜。1717.标本的采集本的采集-取材方法取材方法(4)(4)直直肠 将将取取样拭拭子子插插入入肛肛门2 23cm3cm，从从紧靠靠肛肛环边的的隐窝中取材。避免接触中取材。避免接触粪便。便。阴道阴道 青青春春期期前前女女孩孩可可采采集集阴阴道道标本本。将将取取样拭拭子子置置于于阴道后穹窿阴道后穹窿10101515秒，采集阴道分泌物。秒，采集阴道分泌物。咽部咽部 从咽后壁或扁桃体从咽后壁或扁桃体隐窝取材取材 1818.标本的运送本的运送淋淋球球菌菌的的抵抵抗抗力力弱弱，对热敏敏感感，不不耐耐干干燥燥。取取材材后后标本本若若不不能能立立即即接接种种于于选择性性培培养养基基上上时，需需采采用用运运送送系系统。置置于于非非营养养型型运运送送培培养养基基中中的的标本本应在在1212小小时内内送送到到实验室室，接接种种于于选择性性培培养养基基，分分离离阳阳性性率率可可达达90%90%以以上上。超超过2424小小时则分离阳性率下降。分离阳性率下降。1919.直接直接显微微镜检查染色方法染色方法:革革兰染液染液 美美兰染液染液 姬姆姆萨染液染液 荧光抗体光抗体 革革兰染染色色为一一传统方方法法，因因简便便、快快捷捷及及价价廉廉、仍仍然然为最最广广泛泛采采用用的的方方法法。革革兰染染色色将将菌菌分分为二二大大类，即即染成紫色的革染成紫色的革兰阳性菌及染成阳性菌及染成红色的革色的革兰阴性菌。阴性菌。2020.革革兰染色：染色：细胞内革胞内革兰阴性双球菌阴性双球菌2121.直接直接显微微镜检查的的临床意床意义男性淋菌性尿道炎的尿道男性淋菌性尿道炎的尿道标本本 敏感性及特异性可高达敏感性及特异性可高达9595%99%99%，具，具诊断价断价值。宫颈标本、无症状男性尿拭子及取自直本、无症状男性尿拭子及取自直肠的涂片的涂片时 敏感性敏感性仅404070%70%。不不推推荐荐直直接接显微微镜检查诊断断直直肠和和咽咽部部淋淋球球菌菌感感染染。亦亦不不能能用用于于疗后后判判愈愈。如如果果在在多多形形核核细胞胞外外见到到形形态典型的革典型的革兰阴性双球菌，需做培养阴性双球菌，需做培养进行确行确证。2222.淋球菌镜检报告格式1、革兰氏阴性双球菌2、细胞内外3、该细胞指的是什么细胞规范格式：细胞内外胞内外见到革到革兰氏阴性双球菌氏阴性双球菌 或或细胞内外未胞内外未见到革到革兰氏阴性双球菌氏阴性双球菌2323.24美国中国美国和中国淋病病例性美国和中国淋病病例性别分布比分布比较2424.淋球菌培养淋球菌培养培养法培养法为诊断淋病的金断淋病的金标准准.对女性淋病的确女性淋病的确诊应做淋球菌培养做淋球菌培养 从从选择性培养基上分离出淋球菌即可性培养基上分离出淋球菌即可诊断淋病。断淋病。培养的敏感性培养的敏感性81100%81100%。培养的培养的优点有：点有：特异性极高（特异性极高（100%100%）；）；可可发现无症状淋球菌感染患者；无症状淋球菌感染患者；可确可确诊儿童性虐待；儿童性虐待；可用于可用于进一步作一步作药敏敏试验；可用于治可用于治疗后的判愈后的判愈试验。2525.淋球菌培养淋球菌培养选择性培养基性培养基 评价培养基价培养基质量的一个重要指量的一个重要指标:男男性性淋淋菌菌性性尿尿道道炎炎标本本的的革革兰染染色色与与培培养养的的符符合合率率应达达95%95%100%100%。如如果果革革兰染染色色阳阳性性/培培养养阴阴性性的的比比率率较高高则表表明明选择性性培培养养基基的的质量欠佳量欠佳2626.淋球菌培养淋球菌培养接种接种标本本 取取材材后后标本本应尽尽可可能能及及早早接接种种。培培养养基基应先先置置于于室室温温或或孵孵箱箱中中预温温。将将取取材材的的拭拭子子转动涂涂布布于于平平皿皿的的上上1/41/4范范围，然然后后用用接接种种环分区划分区划线，以保，以保证获得得较纯的的单个菌落。个菌落。2727.接种接种标本本-四区划分接种四区划分接种2828.接种接种标本本-四区划分接种四区划分接种2929.淋球菌培养淋球菌培养培培养养条条件件 ：35 35 3636，含含5%5%10%10%COCO2 2，湿湿润（70%70%湿度）的湿度）的环境。境。COCO2 2环境境可可由由COCO2 2培培养养箱箱、COCO2 2产气气袋袋及及烛缸缸提提供供。使使用用烛缸缸时，应使使用用白白色色、无无芳芳香香味味的的无无毒毒性性蜡蜡烛。在在烛缸底部放些浸水棉球以保持一定的湿度。缸底部放些浸水棉球以保持一定的湿度。培养培养时间：24244848小小时3030.淋球菌培养淋球菌培养-观察察结果果3131.淋球菌培养淋球菌培养-淋球菌的初步淋球菌的初步鉴定定初步初步鉴定淋球菌的主要依据定淋球菌的主要依据 菌落特征菌落特征氧化氧化酶试验 革革兰染色染色3232.淋球菌培养淋球菌培养-淋球菌的确淋球菌的确证试验来来自自泌泌尿尿生生殖殖道道符符合合初初步步鉴定定标准准的的分分离离株株，一一般可般可诊断断为淋球菌，准确性达淋球菌，准确性达98%98%。对于于菌菌落落形形态不不典典型型的的分分离离株株，来来自自咽咽部部、眼眼睛睛、或或其其他他泌泌尿尿生生殖殖道道外外部部位位的的分分离离株株，来来自自低低危危人人群群（如如儿儿童童）的的分分离离株株，以以及及涉涉及及医医疗法法律律案案例例的分离株，的分离株，应作确作确证试验。3333.淋球菌培养淋球菌培养-淋球菌的确淋球菌的确证试验糖糖发酵酵试验免疫学免疫学试验 -荧光抗体染色光抗体染色 -协同凝集同凝集试验 酶底物底物试验DNADNA探探针试验 3434.糖糖发酵酵试验糖糖发酵酵试验检测奈奈瑟瑟球球菌菌分分解解特特定定糖糖类(葡葡萄萄糖糖、麦麦芽芽糖糖、乳乳糖糖及及蔗蔗糖糖)产酸酸的的能能力力。根根据据淋淋球球菌菌仅分分解解葡葡萄萄糖糖，脑膜膜炎炎球球菌菌分分解解葡葡萄萄糖糖和和麦麦芽芽糖糖，乳乳屑屑奈奈瑟瑟球球菌菌分分解解葡葡萄萄糖糖、麦麦芽芽糖糖、蔗蔗糖糖或或不不分分解解这些些糖糖类，可可将将淋淋球球菌菌与与可可能能在在淋淋球球菌菌选择性性培培养养基基上上分分离离出出的的其其他他奈奈瑟瑟球球菌菌加以加以鉴别。3535.糖糖发酵酵试验-奈瑟球菌属的糖奈瑟球菌属的糖发酵特征酵特征细菌菌葡萄糖葡萄糖麦芽糖麦芽糖乳糖乳糖蔗糖蔗糖淋球菌淋球菌+-脑膜炎球菌膜炎球菌+-乳乳酰胺奈瑟菌胺奈瑟菌+-灰色奈瑟球菌灰色奈瑟球菌-布布兰汉卡他球菌卡他球菌-3636.淋球菌的淋球菌的鉴定特征定特征菌落形菌落形态淋球菌淋球菌样革革兰染色染色革革兰阴性双球菌阴性双球菌氧化氧化酶试验阳性阳性过氧化物氧化物酶试验阳性阳性快速糖快速糖发酵酵试验G+L-M-S-3737.非培养非培养诊断技断技术-核酸核酸检测核酸核酸检测的特点的特点l 不依不依赖于活的病原体的存在，无需特殊运送条件；于活的病原体的存在，无需特殊运送条件；l 仅适合尿道或适合尿道或宫颈标本，以及尿液；本，以及尿液；l 不能不能进行抗生素敏感性行抗生素敏感性试验l 用于判愈用于判愈试验需在治需在治疗后至少后至少3 3 周以上周以上进行行.3838.淋球菌耐淋球菌耐药检测3939.淋球菌耐淋球菌耐药检测方法方法琼脂脂纸片片扩散法散法 E test E test 琼脂稀脂稀释法法分子生物学方法分子生物学方法(耐耐药基因基因检测)4040.琼脂脂纸片片扩散法散法4141.琼脂稀脂稀释法法 将待将待检菌接种到含有不同菌接种到含有不同浓度抗菌度抗菌药物的物的琼脂脂平皿上，抗菌平皿上，抗菌药物物浓度小度小时细菌生菌生长，浓度大度大时细菌生菌生长被抑制，据此可被抑制，据此可测出出该菌株最低抑菌制菌株最低抑菌制浓度度（MIC),MIC),判断判断对抗菌抗菌药物的敏感性。此法主要用于物的敏感性。此法主要用于耐耐药监测.MICMIC是指抗菌是指抗菌药物能物能够抑制抑制细菌生菌生长的最小抑菌的最小抑菌药物物浓度，表示度，表示单位位为 g/ml g/ml 4242.E testE test4343.淋球菌耐淋球菌耐药监测-内容与方法内容与方法监测药物物 青霉素青霉素 头孢克克肟 四四环素素 阿奇霉素阿奇霉素 大大观霉素霉素 头孢曲松曲松 环丙沙星丙沙星4444.NG cases in 2006 3,000GRSP sites in 1987-2003GRSP sites in 2004-2006GRSP sites in 2007-1987：个省个省1992-2006 5个省个省2007-2009 个省个省2010-2012 10个省（个省（12点）点）中国淋球菌耐中国淋球菌耐药监测网网络4545.2006-20122006-2012年年年年间间广西南宁地区淋球菌广西南宁地区淋球菌广西南宁地区淋球菌广西南宁地区淋球菌对头孢对头孢曲松、大曲松、大曲松、大曲松、大观观霉素、霉素、霉素、霉素、环环丙沙星、丙沙星、丙沙星、丙沙星、TRNGTRNG和和和和PPNGPPNG的的的的变变化化化化趋势趋势 4646.20142014年年南宁地区淋球菌南宁地区淋球菌对抗生素敏感性抗生素敏感性4747.淋球菌耐淋球菌耐药监测项目目1、开展时间1987年至2015年，连续监测28年2、课题：卫生厅课题（2014年）一项 科技厅课题（2007年）一项3、文章：总共发表文章近15篇（皮研所）其中大部分为国家级核心期刊论文，一篇SCI文章，中华医学会系列杂志4篇。4848.性病性病门诊检查发现存在的存在的问题淋病淋病1、淋病缺少治疗药（大观、菌必治等）2、未开展淋球菌培养项目3、女性淋病仅涂片显微镜检查就诊断和报病4、淋球菌培养未按要求使用淋球菌培养基4949.1.1.沙眼衣原体的病原学沙眼衣原体的病原学2.2.沙眼衣原体的分沙眼衣原体的分类与致病性与致病性3.3.沙眼衣原体泌尿生殖道和沙眼衣原体泌尿生殖道和婴幼儿感染的幼儿感染的实验室室诊断断沙眼衣原体感染的实验室诊断 5050.一、一、沙眼衣原体病原学沙眼衣原体病原学严格格细胞内寄生胞内寄生 生活特性：原体和始体生活特性：原体和始体 正常生活周期 持续性感染5151.分分类：沙眼、性病淋巴肉芽：沙眼、性病淋巴肉芽肿和鼠生物和鼠生物变种种Serovar:A,B,Ba,C,D,E,F,G,H,I,K,L1,L2,L3Serovar:A,B,Ba,C,D,E,F,G,H,I,K,L1,L2,L3B B群群:B:B、BaBa、D D、E E、L1L1和和L2 L2 C C群群:A:A、C C、H H、I I、J J、K K和和L3 L3 中中间群：群：G G 和和 F F二、二、沙眼衣原体分沙眼衣原体分类与致病性与致病性5252.三、沙眼衣原体泌尿生殖道感染的实验室诊断 检测方法：n直接涂片法n免疫学方法：ELISA，IFA，胶体金法n细胞培养法n分子生物学方法5353.标本的采集：本的采集：泌尿生殖道感染：泌尿生殖道感染：男性：尿道拭子、尿沉渣和男性：尿道拭子、尿沉渣和EPSEPS等。等。女性：女性：宫颈拭子拭子/阴道拭子等。阴道拭子等。5454.直接涂片法（直接涂片法（姬姆姆萨染色）：染色）：方法：涂片方法：涂片姬姆姆萨染色染色镜检包涵体包涵体。5555.沙眼衣原体包涵体姬姆萨染色临床应用：眼部感染：敏感性95，男性尿道：敏感性15，宫颈感染：敏感性41。应用范围：眼部标本。5656.沙眼衣原体免疫沙眼衣原体免疫荧光法光法检测临床床应用用 敏感性：敏感性：74749090 高高 特异性特异性:98:989999 高高 缺缺 点：主点：主观性，性，荧光光显微微镜 临床床应用：快速用：快速检测 非培养法阳性非培养法阳性标本的确本的确证5757.ELISAELISA法法 原理：原理：AbAbAgAgAb-Ab-酶 底物底物显色色 方法：加入方法：加入标本（孵育后洗板）本（孵育后洗板）酶标抗体（孵育后洗板）抗体（孵育后洗板）底底 物（孵育）物（孵育）终止液机止液机读或肉眼或肉眼读。5858.免疫胶体金快速法：免疫胶体金快速法：原理：原理：方法：拭子方法：拭子I I液液80C1080C10分冷分冷5 5分分 滴加滴加5 5滴滴1515分分读结果果 结果：阳性：果：阳性：质控窗，控窗，结果窗果窗 阴性：阴性：质控窗，控窗，结果窗果窗 失失败：质控窗，控窗，结果窗果窗5959.免疫胶体金快速法免疫胶体金快速法检测临床床应用用 敏感性：敏感性：33.333.349.749.7 低低 特异性特异性:88.1:88.199.299.2 高高 缺缺 点：需要确点：需要确证，不宜，不宜质控操作控操作 临床床应用用：临床症状典型病例的床症状典型病例的检测 不适合非典型感染的不适合非典型感染的筛查6060.细胞培养法：胞培养法：原理：衣原体在瘤原理：衣原体在瘤细胞胞 生生长，染色，染色检测 方法：制方法：制备McCoyMcCoy细胞胞 接种接种标本（本（25002500转，1h1h）去上清加新培养液（培养去上清加新培养液（培养48487272）检测（碘或（碘或姬姆姆萨染色，染色，荧光法）光法）6161.6262.细胞培养法胞培养法检测临床床应用用 敏感性：敏感性：52529292 低低 特异性特异性:99:99100100 高高 缺缺 点：点：实验室条件和室条件和实验技技术要求高，要求高，费时，敏感性低，敏感性低 临床床应用：用：“金金标准准”方法方法 方法学方法学评价价 沙眼衣原体感染的确沙眼衣原体感染的确证 沙眼衣原体感染的科研沙眼衣原体感染的科研 6363.分子生物学分子生物学检测临床床应用用 敏感性：敏感性：75759797 高高 特异性特异性:98:98100100 高高 缺缺 点：点：实验室条件和技室条件和技术要求高，要求高，成本高，成本高，费时，假阳性，抑制物，假阳性，抑制物临床床应用：用：临床和健康体床和健康体检 沙眼衣原体感染的沙眼衣原体感染的筛查6464.生殖器疱疹的生殖器疱疹的实验室室诊断断 6565.概述 生殖器疱疹是由单纯疱疹病毒(HSV)感染泌尿生殖器 及肛门部位皮肤粘膜而引起是一种复发性疾病,是一 种常见的性传播疾病。HSV是双链DNA病毒，属人类疱疹病毒亚科。人类是HSV的唯一自然宿主。HSV有两种类型;单纯疱疹病毒1型(SHV-1)和单纯疱疹病毒2型(HSV-2)。多数生殖器疱疹是由HSV-2引起。HSV可呈慢性复法过程，尚无彻底治愈的方法。6666.概述生殖器疱疹的复发可给患者带来很大的身体痛苦，影响其生活质量，并可能引起播散性HSV感染、病毒性脑膜炎、脊髓脊神经根病、盆腔炎综合征等一系列并发症。孕妇HSV感染影响生育，可引起子宫内新生儿的感染那，导致流产、早产、死产、新生儿死亡或发生严重疑症。6767.概述传染源：生殖器HSV 感染者、亚临床感染或无症状派读者、未识别症状或不典型生殖器疱疹患者是生殖器疱疹的主要传播源 传播途径有水平传播和垂直传播。水平传播主要是性接触传播，垂直传播是指母-婴及母-胎儿间传播，包括子宫内感染和经产道感染。6868.标本采集 复发性生殖器疱疹病程12周,病毒排放持续平均时间4天;原发性病程23周,病毒排放持续时间12天。1、疱液取材；2、溃疡取材；3、宫颈取材；4、其他标本如尿道拭子，丘疹等。6969.标本采集标本运送：如不能立即检测，应将标本洗入病毒运送液，置冰箱保持。如当天检测可置4保存，如不能当天检测，应置-70 保存7070.实验方法1分离培养法2.细胞学检查3直接免疫荧光法4单纯疱疹抗原酶联免疫试验5HSV-DNA或基因检测法 6血清学检测7171.病毒分离培养原理：培养法分离培养HSV，每天观察病毒对敏感细胞的细胞病变（CPE），初步确定病毒的存在。方法：单层细胞的准备；标本接种；细胞病变的观察；病毒传代；鉴定与分型。7272.病毒培养结果：培养超过4天后可以观察CPE，可初步确定HSV培养为阳性，如要确认需经过免疫学方法进一步鉴定证实。注意事项：1、细胞的敏感性（选敏感性好及活力强幼龄细胞）；2、标本取材时不应使用消毒剂和润滑剂及藻酸钙拭子；3、标本中病毒含量；4、保存；5、注意无菌操作，避免细菌和真菌污染7373.病毒培养临床意义：培养法是HSV检测的“金标准”，对病毒分离敏感、特异，生殖器疱疹患者的斑丘疹、水疱、脓疱、溃疡、结痂性皮损标本坐HSV培养的敏感性分别是25%、94%、87%、70%和27%。7474.细胞学检查 HSV感染细胞后,可使细胞产生特征性的病变。取疱液或溃疡渗液涂片，在显微镜下观察细胞的变化，如细胞出现气球样变或出现胞浆空泡，感染细胞相互融合成多核巨细胞，同时观察病毒包涵体，有助于诊断。由于特异性差，目前不主张将细胞学检查应用于生殖器疱疹的诊断。7575.直接免疫荧光法 国内外有检测疱疹病毒的荧光单克隆抗体试剂市售。直接免疫荧光法检测简单，阳性结果为上皮细胞的浆和细胞核内可见亮绿色的荧光。本法易受取材和涂片技术的影响。目前，国外有疱疹病毒分型的单克隆抗体试剂供应，可用于病毒细胞培养鉴定和临床标本检测。7676.单纯疱疹抗原酶联免疫试验 近年，丹麦一厂家生产96孔单纯疱疹抗原酶联免疫诊断试剂盒，可检测水泡、溃疡和痂皮中的疱疹病毒。本法与细胞培养比较，敏感性为85.6，特异性为97.8。本法的缺点是疱疹病毒不能分型。7777.PCR检测 全国性病控制中心已开展了HSV的研究，他们采用细胞培养、荧光单克隆法和PCR法对生殖器疱疹进行了全面的研究，PCR微孔板杂交法分型与病毒培养单克隆抗体分型的阳性结果一致。PCR敏感、特异和快速，适用于生殖器标本中的检测。7878.血清学检测 血清学检测主要采用HSV的特异性的糖蛋白，可检测并区分血清中的抗SHV1和SHV2型抗体的免疫酶联试验。检测抗SHV抗体的血清试验可用于证实既往SHV的感染，主要用于回顾原发性感染的诊断，对恢复期或复发性生殖器疱疹的意义不大。7979.单纯疱疹病毒的透射电镜图像8080.单纯疱疹病毒感染细胞的免疫荧光染色8181.单纯疱疹病毒感染后形成的多核巨细胞8282.8383.8484.谢谢！8585.