薜荔中的总黄酮含量测定研究.doc

薜荔籽果胶的提取和含量测定研究1 薜荔的概述 薛荔(Ficuspumila L)属桑科榕属，亦称木莲、凉粉树等，是常绿攀缘性灌木藤本植物。枝条有两种，结果枝叶型大，叶小枝用于趴在树干或墙壁上的枝条囝。土产于中国和日本，在我国，主要分布在江西、湖南、四川、海南等省区。从本草记载看，薜荔在我国的药用历史久远。植物名贵图考(公元1670)称“俗以其实中子浸汁为凉粉，以解暑”，可见薜荔在中国甚早即己知可利用其种子洗出胶体食用。薜荔的药用价值和其营养价值很早就为人所知，然而因其以野生为主，国内外对其研究报道较少，对此资源的研究与利用处于比较的低水平。1.1 薜荔的营养成分和药用价值 近年来，关于薜荔营养成分的研究，国内报道较多，而国外报道相对较少。薜荔的花粉、瘦果、果皮和种子、茎叶以及藤都含有丰富的营养成分。吴文珊等对薛荔进行成分预试验中发现，以薜荔叶为原料提取黄酮类物质，总黄酮最大提取率为45。Katajarna，J(1998)等研究了薜荔的茎和叶中的化学成分，分离得到两种香豆素、10种类黄酮化合物、两种糖甙类化合物。范明松等人对薜荔地上除果部分外干样的化学成分进行了研究，分离得到16种化合物。此外，薛荔藤内含内肌醇、芸香甙、O谷甾醇等化合物。吴文珊等测定了薛荔花粉干样的营养成分，结果表明蛋白质高达3988、总糖1883、此外还含有一定量的脂肪酸、黄铜类物质和维生素(Vbl，Vb2、Vc、ve和胡萝卜素)。同年，研究者研究了薜荔瘦果的营养成分，结果表明薛荔花被中含果胶3270，蛋白质380总糖量2033，总黄酮1514；种子中亦含有丰富的营养成分，其中果胶含量为573108，远高于其他含果胶量高的植物果实，是一种是良好的果胶资源。薜荔不仅具有丰富的营养价值，而且还具有很高的药用价值。薜荔的根、茎、藤、叶、果均可入药。药理研究显示，薜荔有抗菌、增强免疫、抗肿瘤、抗诱导、抗炎镇痛、驱蛔虫等活性。空军汉口医院肿瘤防治小组通过动物试验，研究了薜荔果多糖抗肿瘤作用，结果表明薜荔籽的水洗粘液对多种小自鼠移植性肿瘤的生长，有较明显的抑制作用。鄂少廷等研究表明薜荔果多糖对化疗药所致的免疫抑制现象似有纠正作用，且对放疗、化疗后的骨髓有一定的保护作用。吴文珊等以薜荔的水提液和乙醇提取液进行抑菌药敏试验，结果显示薜荔的水提液对大肠杆菌抑菌效果明显；乙醇提取液对枯草芽孢杆菌的抑菌效果较为显著，对啤酒酵母、桔青霉、黑曲霉等真菌均无抑菌作用。此外，薜荔亦可用于治疗其它恶性肿瘤。2.1 实验材料 薜荔果采集于湖南省永州市祁阳县肖家村镇八庙村2.2 实验试剂95乙醇(分析纯，天津大茂化学试剂厂)；咔唑(分析纯，北京化学试剂公司)；浓硫酸(分析纯，广东汕头西拢试剂厂)。2.3 实验仪器 TDL5A台式离心机(上海安亭科学仪器厂)；SHA-D()循环式真空泵（巩义市予华仪器有限责任公司）；RE-52C型旋转蒸发仪（巩义市予华仪器有限责任公司）；HH-600数显三用恒温水浴箱（无锡沃信仪器有限公司）；SHA-D()循环式真空泵（巩义市予华仪器有限责任公司）；ARll40电子分析天平(奥豪斯国际贸易(上海)有限公司)；DZG6020型真空干燥箱(上海森信试验仪器有限公司)；752型紫外可见分光光度计（上海光谱仪器有限公司）；FW177型中草药粉碎机（上海隆拓仪器设备有限公司）；DHG9145A电热恒温鼓风干燥箱(上海恒科技仪器有限公司)。3 实验步骤 采用低温水萃取法提取薜荔耔果胶的基本工艺流程如下：薜荔瘦果(除杂过筛)薜荔籽(加水)加热浸提(滤布)过滤乙醇沉淀离心乙醇洗涤(沉淀) 干燥称重(果胶含量测定)提取率计算称取薜荔籽粉20g，按液固比为28:1ml/g，加入560ml蒸馏水，于65水浴锅中加热，提取60min，将提取完的果胶水溶液过120目滤布，再用玻璃棒挤压滤布至干为止。浓缩：将过滤后的果胶溶液置于60旋转蒸发仪内浓缩。沉淀：按体积比为1:2加入95%乙醇沉淀，冷却置于4冰箱中静置过夜。离心：六支离心管内沉淀均为25g，转速为4000r/min，离心20min，将上清液倒弃，加入浓度为78%乙醇并进行第二次离心。干燥：将果胶放入已恒重的培养皿中，置于电热恒温鼓风干燥箱中，55下干燥5h。3.1 计算公式式中： Ml一干燥后果胶的重量(g)Mo一容器重量(g) M2一薜荔籽重量(g)3.2果胶的纯度测定 采用咔唑硫酸法，依据果胶水解之后的生成物(半乳糖醛酸)在强酸溶液中与咔唑试剂作用发生缩合反应，呈现紫红色。540nm处呈色强度与试样中半乳糖醛酸的含量成正比，测定薜荔籽果胶中果胶质含量。3.3吸收光谱曲线和最大吸收波长的确定 将显色样品溶液用紫外可见分光光度计从400-850nm扫描样品的吸光度，绘制吸收曲线。结果见图（图3.4）。从图中可以得到样品溶液在526nm处有最大吸收峰。吸收光谱曲线4果胶的咔哇硫酸分光光度测定法 标准曲线的制作 ：准确称取分析纯G.A 0.0500g,用蒸馏水溶解后定容于50mL容量瓶中(浓度1mg/ml),于6个5mL容量瓶中分别吸取此液O、1、2、3、4、5mL,配成0、20、40、60、80、100mg/ml 。取6支比色管分别加入上述溶液1ml，然后各加入6ml浓硫酸,用自来水边加边冷却至室温后,各加入0.30mL0.15 %咔唑无水乙醇溶液,摇匀。 在室温下暗处放置1.5h,在540nm处测吸光度( A )，以试剂空白作参比,绘制标准曲线。 标准曲线的吸光值含量（mg）020.0040.0050.0060.0080.00100.00吸光度（A）0.0000.0460.0720.2020.2250.3270.263 咔唑硫酸分光光度法标准曲线4.1 样品测定： 准确称取0.035一0.040g果胶粉于50mL烧杯中,加入10mL0.5mol浓硫酸，15mL水,搅匀,在75水中水解15min，冷却至室温后定容于50mL容量瓶中。然后,准确移取5.00m L该液于另一50mL容量瓶,稀释至刻度。标准稀释液的测定。4.2计算公式： 式中： c为从标准曲线查得的所测果胶液中G.A的浓度 (mg /l)，W为果胶粉质量 ( g )。根据不同果实果胶G.A的含量不同 ,可换算出相应果实中果胶的含量。5 结论本文采用低温水萃取法从薜荔籽中提取果胶，用分光光度法测定果胶含量，对薜荔籽果胶的浸提和分离进行了实验。低温水萃取法、分光光度法设备简单，成本低，降低了试验成本，同时操作方便，取得了较好的实验结果。