脑脊液寡克隆区带对多发性硬化的诊断意义.ppt

-傅慧傅慧20162016年年5 5月月2 2日日引言引言世界多发性硬化日由国际多发性硬化联盟于2009年5月27日建立，以唤起全世界对多发性硬化症的关注，推动相关研究和医疗进展，并约定每年五月的最后一个星期三为世界多发性硬化日。今年的世界多发性硬化日是5月25日，为第八个世界多发性硬化日。然而多发性硬化早在19世纪中期即已经有记载，是中世纪的神秘疾病 是诅咒？是天谴？引言引言1 1、什么是多发性硬化症？、什么是多发性硬化症？多发性硬化（multiple sclerosis，MS）是以中枢神经系统脱髓鞘病变为特点的自身免疫性疾病，病灶的空间多发性、病程的时间多发性是其主要临床特点。临床表现复杂多样，中枢神经系统均可受累（脑、脊髓、视神经），我国以视神经、脊髓损害多见。病因和发病机制尚未完全明确，可能与自身免疫、遗传、环境因素、病毒感染、个体易感等相关。2 2、多发性硬化症的全球分布情况：、多发性硬化症的全球分布情况：流行病资料表明，接近地球两极地带，特别是北半球北部高纬度地带的国家，本病发病率较高。多发性硬化症（MS）高危地区包括美国北部、加拿大、冰岛、英国、北欧、澳洲的塔斯马尼亚岛和新西兰南部，患病率为40/10万或更高。赤道国家发病率小于1/10万，亚洲和非洲国家发病率较低，约为5/10万。我国属于低发病区，与日本相似。3 3、多发性硬化症的国内情况：、多发性硬化症的国内情况：多发性硬化易发生于15到40岁的青壮年人群，而且女性患者居多，全球目前约有230万名多发性硬化患者，国内约有5万确诊患者。北京医院神经科主任医师许贤豪指出，多发性硬化症由于不常见且症状多样和隐蔽，八成就医患者曾被误诊，一些患者发展到全身瘫痪仍未被确诊。我国在20世纪50年代，认为多发性硬化症是罕见病，仅有个别报道。但20世纪70年代以后，国内发病率有增高趋势。近年来全国各地报道日益增加，并有大宗病例报道，已成为神经系统较常见的疾病，采用传统的诊断方法往往不能做出早期诊断而延误治疗。脑脊液寡克隆区带不仅对MS诊断特异性较高，而且敏感性强，是MS的重要实验室诊断指标，使MS得早期诊断，早期治疗成为现实。4 4、什么是寡克隆区带？、什么是寡克隆区带？正常生理状态下，人体内含有很多克隆株的浆细胞所合成的免疫球蛋白，进行电泳时r-球蛋白区域会形成均匀的连续的区带均匀的连续的区带，即多克隆免疫球蛋白区带。而在病理免疫状态下人体的几个克隆株浆细胞会发生异常增生，其所合成的免疫球蛋白在电泳时会在r-球蛋白区域可见2 2条或条或2 2条以上分开的、不均一、比较狭窄、不连续条以上分开的、不均一、比较狭窄、不连续的清晰蛋白区带的清晰蛋白区带，称之为寡克隆区带（OCB）。19601960年年19711971年年19791979年年Karcher，van Sande和 Lowenthal 用琼脂糖凝胶电泳法从亚急性硬化性全脑炎患者的CSF-球蛋白中分离出几个光密度不同的条带。Kutt也发现MS患者CSF电泳后在靠近阴极端形成狭窄而不连续区带。由Link证实为OCB IgG区带。Thompson 报道CSF有非典型淋巴细胞和典型的浆细胞的多发性硬化（MS）患者在CSF电泳时均检出了OCB。19591959年年5 5、寡克隆区带的发现、寡克隆区带的发现6 6、寡克隆区带的产生机制、寡克隆区带的产生机制 OCB是数个B细胞系株(克隆)在 CNS 局部产生的特殊抗体，因此关于OCB产生的机制 KAUSSIS 等提出是由于内源性B细胞遗传的异常，选择性地使某些B细胞克隆增强转录，引起增殖并导致免疫球蛋白失衡。OCB的产生有赖于存在限制异质性 Ig 的合成，反映出 CNS 内部对某些微生物和自身抗原的隔离免疫应答。可见，OCB是针对 CNS 内部持续抗原刺激的一种特异反应，CSF中 OCB 阳性高度提示在CNS 内有Ig的异常合成，存在鞘内局部免疫应答。OCB多数是IgG，很少是IgA或IgM。7 7、寡克隆区带的检测方法、寡克隆区带的检测方法 临床主要采用主要采用琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳和等电聚焦电泳三类方法分离蛋白。琼脂糖凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳等电聚焦电泳等电聚焦电泳 琼脂糖凝胶电泳操作简单，孔径较大，有利于蛋白质的分离和转膜，所以更适宜实验室推广使用 由于聚丙烯酰胺凝胶电泳制胶复杂，且对人体有毒而使应用受限等电聚焦是利用蛋白质等两性分子等电点的不同，在稳定、连续、线性的pH梯度中将蛋白质区分出不同条带，是当前分辨率最高的电泳技术。采用电泳法分离蛋白后，再采用采用电泳法分离蛋白后，再采用考马斯亮蓝、硝酸银、过氧化物考马斯亮蓝、硝酸银、过氧化物酶或亲和素酶或亲和素-生物素复合物等染色生物素复合物等染色方法使蛋白条带显色，得出方法使蛋白条带显色，得出OCBOCB的的染色型，然后进行分析。染色型，然后进行分析。8 8、寡克隆区带的结果判断、寡克隆区带的结果判断正常情况下，CSF中Ig含量极少。病理情况下，CSF中 r-球蛋白（主要是IgG）病理性增高主要有以下三种情况：以往国内相关研究仅检测CSF中的OCB，由于血脑屏障的破坏，可导致出现假阳性。因此，配对分析CSF和血清中的 OCB，得到CSF-OCB的结果，可排除血脑屏障的影响。（1）血脑屏障损害，血源性IgG进入 CSF（3）既有血脑屏障损害，又有鞘内IgG自身合成（2）CNS 内源性合成增加，不依赖血清IgG 水平变化 8.1 8.1寡克隆区带结果判断寡克隆区带结果判断配对分析配对分析 8.2 8.2寡克隆区带结果判断寡克隆区带结果判断结果描述结果描述 欧洲专家组推荐以下5种类型描述OCB结果：1.血清与CSF均未检出OCB2.局限于CSF中的OCB，血清中未见3.除CSF与血清中共有的OCB外，CSF中还存在特有区带4.CSF与血清中区带相同5.CSF 和血清中的单克隆区带正常提示存在IgG鞘内合成显示同时存在血脑屏障损伤及IgG鞘内合成提示存在血脑屏障损伤提示副蛋白血症 虽然(b)、(c)、(d)和(e)图均提示产生了体液免疫反应，但仅(b)和(c)图提示存在 IgG 鞘内合成，是反映CNS 病变的重要标志，可以判断为阳性结果。9 9、脑脊液寡克隆区带、脑脊液寡克隆区带对多发性硬化的诊断意义对多发性硬化的诊断意义欧美学者报道确诊MS 患者OCB 阳性率为90%-95%，但国内报道MS患者OCB阳性率多为30%-60%，日本学者报道MS患者阳性率为36%，韩国学者报道韩国MS患者阳性率为31.6。这些研究结果提示亚洲MS人群OCB阳性率均明显低于西方国家(95)。目前，OCB 仍是 MS 实验室检测中应用最为广泛的生物学指标。传统的脑脊液常规、生化检查对 MS 的辅助诊断缺乏特异性。脑脊液 OCB 阳性有助于 MS 的诊断，虽然非 MS 特异性改变，其他炎症性或非炎症性疾病，例如副肿瘤综合征(NPS)、SLE、神经白塞病、干燥综合征(SS)、神经梅毒、HIV感染和神经莱姆病等亦可呈阳性,但其敏感性和特异性较传统的 CSF 检查高，对 MS 早期诊断及疗效观察有重要的临床价值。此外，寡克隆区带还有助于判断预后，脑脊液寡克隆区带阳性的临床孤立综合征(CIS)患者较阴性者更易进展为多发性硬化。OCB 反映了 MS 患者中枢神经系统内IgG 发生质的改变，是 MS 最常见的免疫学异常表现，也是 MS 最有价值的单项检测，1983 年以来已被国际 MS 委员会作为 MS 诊断标准中的重要组成部分。