超临界流体色谱法在中药有效成分提取中的应用研究应用.doc

超临界流体色谱法在中药有效成分提取中应用研究
郑州大学网络教诲本科学院 孙丽芳
摘要：综述了近年来超临界流体色谱法在中药有效成分提取中应用， 以及该法和其他分析技术联用测定中药材有效成分含量概况。
目:探讨超临界流体色谱法以及该法和其他分析技术联用,在中药有效成分提取中应用，并对其含量进行测定。
办法：在SFC中，采用流动相是CO₂，由于CO₂极性关系，使SFC 分析范畴受到了限制，为了变化其溶剂化能力，普通是变化压力或流动相中添加改性剂，最为惯用改性剂是甲醇和异丙醇,提取分析盐酸麻黄碱、黄酮类等有效成分。在SFC与其他色谱技术联用中，采用SF E - H PL C 法测定银杏叶提物中总黄酮苷含量以及在延胡索中含量测定。
成果：超临界流体色谱在中药有效成分分析中起着重要作用,是气相色谱和液相色谱技术重要补充。国内学者对该领域也作了大量研究，并获得了一定成果。
结论:随着超临界流体理论和技术发展，相信超临界流体色谱在中药提取和有效成分分析中会起着越来越大作用。
核心词：超临界流体色谱 　中药 　有效成分 提取分析
　 超临界流体(Sup e rcr it ica l F lu id，简称 SC F ) 是指温度和压力均在其临界点之上流体，现研究最多流体是CO₂，临界条件较温和(T c= 31℃，P c= 7. 48M P a) ，且无毒、不易燃。超临界流体具备非凝缩性特性，超临界流体相对接近液体密度使它具备较高溶解度，而相对接近气体粘度使得具备较好流动性能，扩散系数介于液体与气体之间，因而超临界流体对所有萃取物质组织具备较好渗入性。在临界点附近压力很小变化都会使流体密度产生急剧变化，从而引起溶解度变化。
中药化学成分，特别是有效成分是中药发挥药效物质基本，因而有效成分含量测定就成为评价中药物质重要标志。中药质量研究，是保证中药安全、有效、可控、稳定重要环节。为了提高中药材质量，关于部门在“七五”“八五”期间将，“惯用中药材品种整顿和质量研究”列为国家重点攻关课题，在此基本上,“九五”期间又继续立项对中药材进行质量原则规范化研究，其目是逐渐建立起国内中药原则化、规范化质量原则，争取使其成为国际上参照执行原则，从而为中药持续进入国际 市场创造条件。
1、超临界流体色谱 ( Sup e rcr it ica l f lu id ch rom a to g rap hy，简称 SFC )
超临界流体色谱是采用超临界流体作为流动相一种新型分析办法 ，由于超临界流体具备溶解能力强、流动性好、传质速 率快等特点，因而它比气相色谱(GC ) 和高效液相色谱(H PL C ) 具备更多长处。气相色谱重要合用于热稳定性好、沸点不高、分子 量不大于400化合物分析，液相色谱则可在室温下分析高沸点、热不稳定、分子量大化合物，但由于其检测器缺陷，也使其应用范畴受到了一定限制。而超临界流体色谱正好既具备了气相色谱高速、高效分析性能和液相色谱高选取性，且克服了上述缺陷，它可与各种检测器兼容，如氢火焰离子检测器(F ID )、紫 外光度检测器(U V )、蒸发光散射检测器(EL SD )、氧化还原电流 检测器、化学发光氮气检测器 (CLN D )等，还可以与质谱(M S)、红外光谱( IR ) 等技术连用。因而 SFC 是 GC 和H PL C 有效补充，成为分析大分子量、难挥发、遇热易分解物质有效方 法，如脂肪酸、磷脂、甘油脂、甾类、类胡萝卜素等。
SFC 中，惯用流动相是CO₂，由于CO₂极性关系，使SFC 分析范畴受到了限制，为了变化其溶剂化能力，普通是变化压力或流动相中添加改性剂，最为惯用改性剂是甲醇和异丙醇。如郭亚东等人研究了茶叶中咖啡因超临界流体色谱分析，用超临界流体色谱法(SFC ) 测定茶叶中咖啡因，在二氧化碳流动相中加入体积分数为 5% 甲醇后，得到了良好分离效果，该办法具备样品前解决简朴，共存组分不干扰测定，分析速度 快等长处，可以用于茶叶中咖啡因迅速分析。近年来，对固定相研究也呈上升趋势，如 Su to 等采用氟代烷硅胶填充柱分离盐酸麻黄碱研究。
刘志敏等运用 SFC 成功分离了黄酮类化合物，研究了流动相构成、柱条件、压力及温度影响。发现流动相构成是影响分离一种很重要因素；另一方面色谱柱条件也是影响分离一种很重要因素，并在适当色谱条件下进行了银杏叶提取物中黄酮类化合物分离。赵锁奇等建立了空白硅胶填料用于SFC 分离强极性物质和生物碱办法，采用三元流动相(CO₂- 携带剂- 酸碱改性剂) 成功分离了多羟基黄酮化合物混合物和生物碱混合物，摸索了操作温度、压力、携带剂浓度和流速对目产物分离纯化纯度和收率影响。
由于 SFC 对环境污染小、分析范畴广，是一种抱负药物分析手段，可用于手性对映体分离，随着毛细管 SFC 迅速发展，SFC 应用于手性药物分离研究报道也增多。
在此后SFC 研究焦点是如何将典型某些填充柱应用到 SFC 中，添加改性剂CO₂流动相以及各种检测器应用以及注重某些中档极性化合物分离。
此外，Depta 等研制了采用超临界CO₂作为流动相逆流色谱，该制备装置包括了 8 个内径 30 mm 高压色谱柱，可在最高 350 ba r、80℃下工作。该逆流色谱装置在 240 ba r、40℃下分 离叶绿醇异构体，均达到了 99% 以上纯度。
2、超临界流体色谱法与其他色谱技术联用
由于超临界流体色谱法(Sup e rcr it ica l f lu id ex t ract io n，简
称 SF E ) 具备良好选取性，使它在中药有效成分提取分离过程中发挥了较大优势，并有助于中药有效成分分析。分析型超临界流体技术与其她分析技术如 GC ，H PL C ，GC öM S，SFC ，TL C ，F T IR 等联用可用于中药有效成分分析。SF E 与其他分析技术联用有离线和在线两种方式。离线方式较为简朴，应用范畴广，如 SF E - GC öM S 联用，由于 SF E 技术高选 择性和 GC öM S 技术以便快捷，已广泛应用于中药有效成提成分分析；在线方式自动化限度高、定量精确迅速、敏捷度高以及对强挥发性组分回收率高，实现了样品前解决及分离分析优化组合，国外对在线联用技术方面研究较为活跃，在医药化工、环境等已有较多研究，但国内在这方面研究甚少。梁延 寿等研究了 SF E - SFC 联用在生药分析中应用。SF E 与其他技术离线联用在中药有效成分分析中研究较多。
2.1 SF E - H PL C M a rx 等建立了迅速SF E - H PL C 测定Gua rana 中可可碱、茶碱、儿茶素和表儿茶素办法。Ibanez 等研究了从薄荷中提取抗氧化性物质，并用反相高效液相色 谱法测定提取物中含量。何首乌为蓼科植物 P oly g onum m u lti2 f lorum T hunb 块根，具备滋补强健、解毒消痛、润肠通便等功能。何首乌具有蒽醌类，二苯乙烯苷类及磷脂等有效成分，其中蒽醌类是重要活性成分。袁海龙等建立了SF E - H PL C 法分离测定何首乌中蒽醌类成分以及磷脂类成分，为什么首乌及其制 剂质量控制提供了办法性根据。又如延胡索 C ory d a lis y an2 h u su o W. T. w ang 有效成分为生物碱，其中以延胡索乙素(d l-te t rahyd rop a lm a t ine) 止痛、镇定、抗惊作用最强。原永芳等建立了 SF E - H PL C ，应用硅胶柱- 反相洗脱系统高效液相色谱法测定延胡索及其成方制剂中延胡索乙素含量，办法简便、迅速、精密度高。此色谱系统同样适于其她中药及其制剂中生物碱定量分析。余佳红等采用 SF E - H PL C 法测定银杏叶提物中总黄酮苷含量，办法简便、迅速，重现性好。李迎春等人用超临界CO₂流体及共溶剂乙醇萃取丹参中3种丹参酮，并用高效液相色谱法(H PL C ) 检测了萃取产物中3种丹参酮含量。
2.2 SF E - GC öM S GC öM S 法分析水蒸气提馏法(SD ) 与超临界流体色谱法(SF E ) 从百里香中提取物化学成分，SD 法萃取物中有55 个化合物被测定，含单萜11个，倍半萜12个；SF E 萃取物中有 75 个化合物被测定，含单萜13个，倍半萜7个。百里 香为百里香属植物，它花煎剂流浸膏可以用于支气管炎或上呼吸道疾病防治，也可用于神经炎或脊神经根炎止痛之用。此外，临床报道可以治疗急慢性胃病。因此，分析其化学成分对研究其药理作用品有重要意义。陈斌等用超临界流体萃取法联用毛细管气相色谱法(C GC ) 测定了丹参药材中丹参酮 IIA 含量，成果表白 SF E - C GC 法测定丹参药材中丹参酮 IIA 简便迅速，成果精确可靠。
2.3 SF E - L C M S Seno ran s 等采用超临界流体萃取技术从薄荷叶中选取性提取具备抗氧化性活性物质，并用液质测定提取物中活性物质。
2. 4 SF E - SFC M . A sh raf- Kho ra ssan i 等采用 SF E - SFC联用
办法从醉椒根中提取并用超临界流体色谱分析了 7 种醉椒根内酯 ( 7，8 - D ihyd ro kava in，Kava in，5，6 - D ehyd ro kava in，Yango n in，M e thy st icin，5，6，7，8 - T e t rahy sro yango n in，D ihy d rom e thy st icin )。醉椒根在南太平洋地区人们生活中经常使用，它可以治疗各种疾病。
3、结束语
综上所述，超临界流体色谱以及超临界流体技术与其他分析技术联用在中药有效成分分析中起着重要作用,是气相色谱和液相色谱技术重要补充。国内学者对该领域也作了大量研究，并获得了一定成果。但关于超临界流体基本理论还尚未进一步，且超临界流体色谱是高压装置，一次性投资较大，限制了超临界流体技术应用。但随着超临界流体理论和技术发展，相信它在中药提取和有效成分分析中会起着越来越大作用。
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