小檗碱提取工艺的研究模板.doc

摘要】  小檗碱作为临床上常见药材成份应用广泛，为提升小檗碱提取得率，多年来对小檗碱提取工艺研究很多。该文关键综述了近些年来对小檗碱提取工艺研究进展。
【关键词】  小檗碱 提取工艺 黄连 黄柏 三颗针 正交试验
　　　Abstract:Being the common medicine ,berberine has extensive applications in clinical pharmacy.There have been many studies to improve the yielding rate of berberine in recent years.The article sums up studies on the extracting technology of berberine.
　　Key words：Berberine;  Extraction technology；    Rhizoma Coptidis；  Phellodendron amurense Rupr；  Berberis；  Orthogonal test
    小檗碱又称黄连素，广泛分布在植物界，大约有4个科10个属植物全部已发觉有小檗碱存在。小檗碱是黄色针状晶体，表现为季铵型、醇型3种互变异构体，其中以季铵碱型最稳定。小檗碱能缓慢溶解于冷水（1∶20）或冷乙醇1∶100），在热水或热乙醇中溶解度比较大，难溶于丙醇、氯仿或苯，盐类溶解度全部比较小，硫酸盐在水中溶解度约为1∶30，盐酸盐微溶于冷水。小檗碱可从三颗针、黄连、黄柏等植物中提取。因为黄连生长缓慢，价格较高，黄柏起源也较少，现中国关键应用三颗针作为提取原料。
    小檗碱是临床上一个常见广谱抗菌药，关键用于菌痢、胃肠炎、痈肿等细菌性感染。现代研究证实小檗碱有抗肿瘤、抗心率失常、降压、降血糖等作用，在临床上有越来越广泛应用，需求量日益增加。为提升小檗碱提取效率，近些年来对小檗碱提取工艺研究很多，本文对这首先作一综述。
　　1  酸水法提取小檗碱
    酸水法是现在工业生产提取小檗碱常见方法。从三颗针中提取小檗碱,常见多倍量0.3%硫酸水溶液浸泡24 h，滤液用石灰乳调pH值至12，过滤，滤液用盐酸调pH值到2～3,再加入6%左右精制食盐,使食盐完全溶解,放置过夜,抽滤得盐酸小檗碱粗品［1］。或用0.5%硫酸水溶液冷浸提取,酸水液用石灰乳调pH值到7左右,滤液浓缩用盐酸调pH值到2～3，再加入6%左右精制食盐,使食盐完全溶解,过滤，沉淀溶于热水，加石灰乳调pH值到8.5～9趁热过滤, 滤液再用盐酸调pH值到2～3，放冷过滤得盐酸小檗碱粗品［2］。廖志新等［3］以产于青海等地三颗针为原料，采取正交试验法，对酸水法提取盐酸小檗碱生产工艺进行研究，找出了最好提取工艺。依据试验结果盐酸用量达成pH=1，浸提剂量也应在浸透材料量之上超出两倍，食盐用量应使提取液浓度达成5%～7%；浸提总时间应达成12～24 h，浸提剂温度控制在80℃至沸点之间；浸提剂浓度（即硫酸浓度）为0.5%～0.7%最好。黄祖良等［4］报道从十大功劳根粗粉中提取小檗碱,用0.5%左右硫酸溶液浸泡24 h,次日,把浸泡液倾出,浸泡液(搜集8～10倍量浸泡液,后50%留作下一批套用),用浓盐酸调 pH值到1.5左右,按10%(W/V)量加入精制食盐放置过夜,滤取析出盐酸小檗碱粗品晒干, 盐酸小檗碱提取率为1.23%。据庞小雄等［5］报道，采取正交试验优选三颗针中小檗碱提取工艺，依据盐酸小檗碱提取条件，选定浸泡时溶剂用量，稀硫酸浓度，石灰乳沉淀pH值两个原因，确定最好工艺溶剂量是药材16倍，稀硫酸浓度为0.2%,加石灰乳沉淀杂质时pH值为9,精制时调酸温度是60℃。肖美凤等［6］报道,用正交试验法对黄连中小檗碱提取工艺进行优选,采取分光光度法测定盐酸小檗碱含量,其最好提取工艺是0.4%硫酸水溶液,16倍量溶剂,石灰乳调pH值到10,精制时加入酸温度不低于50℃,该工艺经济实用,小檗碱提取率较高。孙波等［7］就水提法部分进行正交优选，确定水提法用水煎煮3次，3.5 h,加水量14倍为最好工艺。预试验中,结果表明用0.5%酸水作溶媒提取最好。吕霞［8］报道用0.5%硫酸水溶液提取黄连中小檗碱，分别采取索氏提取、超声提取和浸渍提取，HPLC法分析小檗碱浓度分别为16.401，14.246，13.415 μg/ml。方阵等［9］优选黄连最好酸水提取工艺为2%盐酸,12倍量水，回流3次，1.5 h/次。
　　2  石灰乳法提取小檗碱
    石灰乳法也是目前工业生产上常见方法。如用渗漉法从黄柏中提取小檗碱，称取黄柏粗粉200 g置大蒸发皿中，加入石灰乳搅拌均匀，常法装渗漉桶，加入饱和石灰水浸泡6 h后渗漉（pH值在10以上），控制流速5～6 ml/min，搜集渗漉液2 000 ml，加入渗漉体积7%（质量浓度）固体食盐，搅拌后放置过夜，过滤，沉淀，用热水溶解，趁热过滤。滤液加盐酸调pH值为2，放置过夜，过滤，沉淀用蒸馏水洗至中性，抽干后于80℃下干燥，即得盐酸小檗碱粗品［10］。黄祖良等［4］从十大功劳中提取小檗碱，用石灰乳适量搅拌均匀，用水浸渍24 h后用水渗漉，搜集渗漉液适量，用浓盐酸调pH值为1.5左右，按10%（W/V）加入食盐放置过夜，滤取析出盐酸小檗碱粗品晒干，盐酸小檗碱提取率为1.17%。石灰乳法用大量石灰乳可能引发成份损失，也浪费盐酸，增加了生产成本。尹蓉莉等［11］从黄柏中提取盐酸小檗碱,比较多个传统提取方法,有酸水法、石灰乳法和醇提法等,并加以改善,结果证实,石灰乳法提取效率优于其它方法。
　　3  乙醇法提取小檗碱
    通常黄连根粉用乙醇温浸，回收大部分乙醇，剩下乙醇浓缩液放置，过滤，滤液加盐酸、沉淀、放置，过滤得黄色沉淀为盐酸小檗碱粗品［12］。或用加热回流提取，称取一定量黄连切碎，放入250 ml圆底烧瓶中用100 ml乙醇作提取溶媒，热水浴加热回流30 min，放置浸泡1 h，抽滤，滤渣反复上述处理两次，合并3次滤液，减压蒸出乙醇直到为棕红色糖浆状。在棕红色糖浆状物中加入1%醋酸（约30～40 ml）加热使溶解，抽滤以除去不溶物，然后于溶液中滴加浓盐酸至溶液浑浊为止，放置冷却，最好用冰水冷却，即有盐酸小檗碱析
出，抽滤，结晶用水洗涤两次，再用丙酮洗涤一次，干燥，烘干称重。席国萍等［13］报道，设计用乙醇法提取小檗碱正交试验方案经过方差分析，得到黄连中小檗碱最好提取工艺为：温度为60℃ ，9倍体积50%乙醇，提取两次，1 h/次，小檗碱提取率为91%以上，平均回收率为97.38%，相对标准偏差为1.48%。黄祖良等［4］研究用75%乙醇回流提取十大功劳根茎粗粉至无色，提取液减压回收乙醇后，用热水溶解，趁热过滤，滤液中加浓盐酸调pH值为1.5左右，按10%（W/V）加入食盐放置过夜，滤取析出盐酸小檗碱粗品晒干，盐酸小檗碱粗品提取率为3.47%，粗品中盐酸小檗碱含量为38.96%，盐酸小檗碱提取率为1.35%。吕霞［7］报道用95%乙醇为溶媒，采取索氏提取法，HPLC法分析小檗碱浓度为17.504 μg/ml，用95%乙醇、75%乙醇浸渍提取，所得小檗碱浓度分别为12.120 ，14.465 μg/ml，可见索氏提取显著优于浸渍。刘圣等［14］用正交试验法考察黄连中小檗碱最好提取工艺为：溶剂为6倍量80%乙醇，乙醇中硫酸加入量为0.25%，提取时间为1.5 h/次，提取次数为3次，以该工艺制备盐酸小檗碱精制品含量在90%以上,适合工业化生产。张乐佳等［15］报道黄连总碱浸出量和溶剂量，溶剂种类，浸提时间等原因相关,黄连最好提取工艺是：50%乙醇回流提取3次,每次10倍量溶剂，提取2 h。罗音久等［16］用正交设计筛选醇提工艺最好条件是黄连须粗粉中加入5%中药提取因子，37℃恒温浸泡6 h，乙醇连续回流3次，1 h/次，总加醇量22倍，所得盐酸小檗碱总量最高，为3.81%。黄传俊等［17］采取正交试验法，以黄连提取收膏率和盐酸小檗碱提取量为考察指标，利用HPLC法测定盐酸小檗碱含量，结果表明最好提取工艺是黄连粗粉加8倍量60%乙醇回流提取3次，1 h/次。邢俊波等［18］报道用正交法优选黄柏中小檗碱提取工艺是7倍量70%乙醇热回流提取两次，2 h/次提取率最好。张学顺等［19］报道比较黄连不一样提取方法所得提取液整体成份及小檗碱含量，确定最好提取条件，采取反向色谱柱，以乙腈磷酸二氢钾溶液（47∶53）1 000 ml加入SD1.7 g为流动相，结果显示，75%乙醇索氏提取法所得小檗碱含量最高。

　　4  超声波提取小檗碱
    常规提取小檗碱通常费时费力，效率低，而借助于超声技术却可得到显著效果。超声波提取技术是利用超声波产生强烈振动，高加速度，加速药品有效成份进入溶剂，从而提升了提出率，缩短了提取时间，而且免去了高温对提取成份影响。
    郭孝武［20］报道应用超声技术从黄连根茎中提取黄连素工艺参数和常规浸泡法相比，超声提取含有省时、提出率高等优点。在研究从黄连根茎中提取小檗碱时，分别对超声波处理、超声波频率及硫酸浓度等进行了观察，结果表明用20 kHz超声波提取30 min浸泡24 h，提取率相同（8.12%）。核磁共振波仪对提取产物研究说明超声波对小檗碱结构无影响。超声波用于从黄连中提取小檗碱常规碱性浸泡工艺中，超声波提取30 min所得到小檗碱提取率比碱液浸泡24 h高50%以上 ［21］。吕霞［7］报道用超声波提取法从黄连中提取小檗碱，称取黄连粗粉2.0 g四份，分别用纯水，95%乙醇，75%乙醇，0.5%H2SO4溶液超声提取30 min，过滤，滤渣按上述方法再反复提取两次。试验结果用HPLC法分析了各提取液小檗碱浓度表明用75%乙醇超声提取所得小檗碱浓度最高（15.642 μg/ml），0.5%H2SO4溶液处理次之，95%乙醇超声提取小檗碱浓度最低（11.342 6 μg/ml）。为了考察超声提取小檗碱结构是否有改变，以常规浸泡法提取小檗碱成份作对照，用红外谱仪扫描，核磁共振波谱仪测得两种提取法所得小檗碱样品光谱和氢图谱图一致，说明超声波提取未破坏小檗碱成份结构［22］。吴宝华［23］报道，黄柏用甲醇煮后用超声波处理提取小檗碱，时间短，产率高。鲁云博等［24］用HClCH3OH(1∶10)溶液超声20 min提取方法，能够取得较高盐酸小檗碱提取率。岑志芳等［25］采取超声波法考察川黄柏中小檗碱提出率，优选最好超声频率。以饱和石灰水为溶媒，分别以不一样频率超声波从川黄柏中提取盐酸小檗碱并和浸渍法比较，结果用50 kHz超声波提取3次，20 min/次，提取率最高，比浸渍高近1倍。
　　5  微波法提取小檗碱
    微波指频率在300～300000 MHZ之间电磁波，其提取机制是，首先经过微波照射，使植物细胞破裂，细胞内有效成份自由流出转移至温度较低提取介质中；其次，微波产生电磁场加速被提取组分由物料内部向提取溶剂界面扩散速率。邓远辉等［26］用微波法提取黄连中小檗碱，以干固物和小檗碱含量测定值为指标，比较微波和回流两种方法。干固物测定结构显示，在单位时间内微波处理较回流好，含有显著优势；以小檗碱含量为指标，结果显示回流提取小檗碱含量高于微波提取。郭锦棠等［27］用微波索氏联合工艺提取小檗碱。选择不一样粒度黄连药材，正确称量10 g，加入一定量蒸馏水，混合均匀，在变频微波炉中，以不一样水平微波功率，辅助时间进行微波照射，每份样品待其冷却后，反复照射1次。微波预处理后，在索氏提取器中以不一样水平提取溶剂用量和提取时间进行提取，将提取液静置过夜，取上清液加盐酸调pH值为2，然后加入18%食盐水，将生成沉淀静置一段时间后过滤，水洗后放入电热鼓风干燥箱，在60～80℃加热干燥，得到盐酸小檗碱粗品，计算收率。经过正交试验优选条件为，微波功率520 W，（80%功率档），辐照时间1.5 min×2次，基质含水量20   ml，粒度为中粒，提取溶剂用量100 ml，提取时间4 h，反复试验3次，盐酸小檗碱粗品平均收率5.634%。试验表明，微波-索氏联合工艺比单用索氏提取得到小檗碱收率显著要高，和传统提取方法比，提取效率高，无需过滤，工艺简单。
    张海容等［28］用正交法优化微波萃取条件，和传统酸碱法浸提小檗碱比较研究，确定工艺条件：80℃萃取温度，固液比为1∶15, 时间1.5 min,传统溶剂法萃取温度70℃，固液比为1∶20, 时间24 h,和稀硫酸浸泡提取比，微波萃取工艺提取时间大大缩短，产量可提升30%，操作简便，省时节能易于控制。
　　6  酶法提取小檗碱
    酶工程技术是近几年来用于关键工业一项生物工程技术。经过酶反应温和地将植物组织分解，加速有效成份释放提取，选择对应酶可将影响液体制剂澄清度杂质如淀粉、蛋白质、果胶等分解去除，而且针对根中含有脂溶
性成份多，经过葡萄糖苷酶或转糖苷酶，使脂溶性成份转化成水溶性糖苷类，酶反应提取温度低，可较大幅度地提升得率。比如，马田田［29］用黄柏提取小檗碱之前用纤维素酶进行预处理，可提升小檗碱收率，和未加酶提取进行比较，有显著性差异。张福维等［30］报道用纤维素酶预处理黄柏提取盐酸小檗碱，收率比不加酶时高28%，其最好试验步骤为：10 g黄柏加入80 ml pH 4.5柠檬酸缓冲溶液，50℃恒温6 h酶解，过滤，滤液中加入0.3 ml H2SO4放置10 h过滤，滤液中加入石灰乳调pH8～9，过滤，滤液用盐酸调pH值到1.5，向溶液中加入食盐至8%，放置5 h，过滤得盐酸小檗碱粗品。梁柏林，周民杰［31］用正交试验法研究酶法提取小檗碱最好工艺条件，确定酶解黄连最好工艺条件：温度40℃，时间90 min，pH 4.0,酶用量30 mg/g；酶提取工艺比传统乙醇法提小檗碱产率提升49%。马桔云等［32］选择黄连提取小檗碱研究了加酶组和未加酶组对有效成份小檗碱提取影响，新工艺比原工艺只是多了一个向其中加入纤维素酶酶解过程，但这两种工艺提取小檗碱含量有显著差异，而提取成份一致，所以，考虑是否将新工艺用于黄连提取工业化中。
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　　7  微量法提取小檗碱
    微型化学试验是多年来中国外快速发展一个试验新方法，有用量少，经费少，环境污染小，安全性好，时间短等优点。据报道［33］用微量法提取黄柏中小檗碱和常规化学试验相比，只是产率略低。具体数据见表1。表1 常规化学试验和微型化学试验比较（略）
　　8  半仿生提取小檗碱
    半仿生提取法，是指从生物药剂学角度，模拟口服药品及其在胃肠道转换过程，采取一定pH酸水和碱水依次连续提取，目标是提取含指标成份高活性混合物，它和纯化学见解“酸碱法”是等同，又因为此种提取方法工艺条件要适应工业化生产实际，不能完全和人体条件完全相同，仅半仿生而已，故称“半仿生提取技术”。这种提取方法特点是能够提取和保留更多有效成份，能缩短生产周期，降低成本。
    林慧彬等［34］以小檗碱含量为指标，采取半仿生提取法，对黄连解毒汤最好药材组合方法进行筛选，优化了组合配伍。张学兰等［35］以小檗碱，总生物碱，干浸膏量为指标对黄柏做半仿生提取法和水提取法相比较，结果表明，半仿生提取液显著优于水提取液。
　　9  超临界萃取提取小檗碱
    超临界萃取是今年来逐步发展起来一个现代提取分离技术，关键是利用二氧化碳在超临界温度下含有流体性质来提取低极性成份，经过加入少许极性稍大溶剂作为夹带剂，提升溶剂极性扩大提取成份极性范围。日本学者系川秀治等［36］早在20世纪80年代就以TLC为指标，用超临界萃取方法对黄连有效成份进行了提取。齐艳宁［37］也报道，经过试验研究，超临界萃取方法和传统溶剂提取方法相比，有效成份高度浓缩，收率高，药理效果好，且毒性降低
【参考文件】
  　　［1］陈友梅. 中药化学［M］.济南：山东科学技术出版社，1997：3.

　　［2］吴剑峰. 天然药品化学［M］.北京：人民卫生出版社， ，2（1）：69.

　　［3］廖志新，李玉林，纪兰菊，等.青海产三颗针中盐酸小檗碱最好提取工艺研究［J］.天然产物研究和开发，1998,10 (2) ：62.

　　［4］黄祖良，何有成，韦国峰，等. 从植物十大功劳中制取四氢小檗碱工艺研究［J］.广西化工，，31（2）：6.

　　［5］庞小雄，徐立良.黄连中盐酸小檗碱提取试验方法改善 ［J］.广东药学院学报，1996,12(4) :261.

　　［6］肖美凤，姚沅平，何 飞，等. 正交试验优选黄连中小檗碱提取工艺［J］.怀化医专学报，,3 (2)：26.

　　［7］孙 波，张永光 . 正交优选黄连中盐酸小檗碱提取工艺［J］.海峡药学，1999，11（3）：100.

　　［8］吕 霞，张鸿雁，蒋文强，等.HPLC法分析优选黄连提取方法 ［J］.山东医药工业，，22 (4)：2.

　　［9］方 阵,吴 健,王康才，等.正交试验优选黄连水提工艺 ［J］.时珍国医国药，,12 (11)：982.

　　［10］杨 红，郭向东，程咏梅，等.中药化学实用技术，第1版［M］.北京：化学工业出版社，：9.

　　［11］尹蓉莉,杨军宣，李 化，等. 黄柏中盐酸小檗碱提取试验方法改善［J］.基层中药杂志，,14 (6) ：27.

　　［12］冀春茹，王浴铭,刘延泽. 中药化学试验技术和试验［M］.郑州：河南科学技术出版社，1986：232.

　　［13］席国萍,何照范. 黄连中小檗碱提取工艺［J］.山东农业生物学报，,6.

　　［14］刘 圣,唐丽琴，陈礼明，等. 正交试验优选黄连中小檗碱提取工艺研究［J］.中国药房，，15（1）：18.

　　［15］张乐佳,夏新华. 黄连提取工艺研究［J］.中成药，, 23 (6) ：398.

　　［16］罗音久，曾中良，古淑英，等.黄连须中盐酸小檗碱提取工艺研究［J］.四川畜牧兽医学院学报，，16（3）：17.

　　［17］黄传俊，李其兰，高申蓉，等.正交试验优选黄连提取工艺［J］.中国药师，，8（8）：699.

　　［18］邢俊波，刘 云.正交设计优选黄柏中小檗碱提取工艺［J］.时珍国医国药，,14(3) ：129.

　　［19］张学顺，赵晓义，郭仲平. RP-HPLC法分析优选黄连提取方法［J］.齐鲁药事，：5.

　　［20］郭孝武. 超声提取对黄连素提出率影响［J］.中国中药杂志，1995，20（11）：673.

　　［21］D.

　　［22］国家药品监督管理局信息中心文件资料.超声提取黄柏中小檗碱成份研究，中药制药技术和工艺汇编［M］.北京：化学工业出版社，：1.

　　［23］吴宝华. 超声技术对关黄柏中盐酸小檗碱提出率影响［J］.中医药学报，，32（4）：29.

　　［24］鲁云博，杨广德.黄柏中盐酸小檗碱
和盐酸巴马汀提取方法研究［J］.中成药，,26 (3)：186.

　　［25］岑志芳，李海燕.不一样频率超声提取对川黄柏中盐酸小檗碱提出率影响［J］.时珍国医国药， , 16 (5)：374.

　　［26］邓远辉，周 蓓，杨 柳，等. 微波用于黄连提取［J］.数理医药学杂志，，15（1）：88.

　　［27］郭锦棠，李雄勇，杨俊红，等 微波-索氏联合工艺提取盐酸小檗碱［J］.化工进展，，22（12）：1338.

　　［28］张海容，赵芳慧，陈金娥.微波萃取－分光光度法研究关黄柏中小檗碱提取［J］.光谱试验室，, 23 (3)：526.

　　［29］马田田. 纤维素酶用于中药提取初步研究［J］.中草药，1994，25（3）：123.

　　［30］张福维，关崇新，高 坤，等.盐酸小檗碱提取试验改善［J］.大学化学，，8.

　　［31］梁柏林，周民杰. 酶法提取小檗碱工艺研究［J］.应用化工，,35 (5)：373.

　　［32］马桔云，赵晶岩，姜 颖，等. 纤维素酶在黄连提取工艺中应用 ［J］.中草药，，31（2）：103.

　　［33］谷歌 医药网微型化学试验，，6.

　　［34］林慧彬，张兆旺，孙秀梅，等. 黄连解毒汤用半仿生法提取药材组合方法优选［J］.中国试验方剂学杂志，，10（1）：1.

　　［35］张学兰，张北旺，徐 霞，等. 黄柏SBE法和WE法成份比较 ［J］.中国中药杂志，1999, 24（10）：600.

　　［36］系川秀治. 木春拓 TLC为标准生药成份超临界萃取法［J］.药学杂志（日）1987，107（71）：506.

　　［37］齐艳宁. 超临界萃取在现代中药提取中应用［J］.科技风，，17：22.