金标技术-.ppt

金免疫技术12我们公司目前拥有 六大技术平台：酶联免疫（EIA）、免疫荧光（IFA）、金标免疫（GIA）、生物芯片（BIOCHIP）、快速检测卡（生化反应）类及化学发光免疫类；我主要是学习金标知识。金标是公司较为新的产品的，它的全名叫做金标斑点免疫法斑点免疫渗滤试验的基本原理是：以双抗体夹心法为例。在硝酸纤维素膜的膜片中央滴加纯化的抗体，为膜所吸附。当滴加在膜上的标本液体渗滤过膜时，标本中含抗原被膜上抗体捕获，其余无关蛋白等没滤出膜片。其后加入的胶体金标记也在渗滤中与已结合在膜上的抗原相结合。因胶体金本身呈红色，阳性反应即在膜中央显示红色斑点。3一、概念：以胶体金作为标记物的免疫检测技术。（灵敏度略低于其他标记技术）二、有关胶体金的基本知识1.胶体金概念及来源：胶体金也称金溶胶，是由金盐还原成金后形成的金颗粒悬液。2.胶体金颗粒结构：由一个基础金核(原子金)及包围在外的离子层构成，离子层为负离子(AuCl2-)，外层为H+则分散在溶液中。呈球形(小颗粒)或椭圆形(大颗粒)。43.胶体金的特性：A 胶体性质，特别是对电解质敏感，对试验有影响。B 呈色性：胶体金的光散射性与溶胶颗粒的大小密切相关，一旦颗粒大小发生变化，光散射也随之发生变异，产生肉眼可见的显著的颜色变化。小：25nm橙黄色，中：1020nm酒红色，大：3080nm紫红色。C 光吸收性：胶体金有单一吸收峰，光波在510550nm之间，随颗粒变大而偏向长波长。利用这特性，可进行吸光度检测。54.胶体金的制备：滴加还原剂方法：HAuCl4 胶体金颗粒 搅拌 0.01%HAuCl4 100ml 加热至沸，搅拌不断 定量还原剂 (常用0.7ml1%柠檬酸三钠水溶液)23min内变色金黄紫红 继续煮沸15min 冷却至室温 加蒸馏水恢复至原体积。（所得胶体金max为535nm，A535nm=1.12。)6三、免疫金(金标金蛋白)的制备：1.标记原理：表面带负电荷的胶体金与蛋白质的正电荷基团因静电吸附而结合。胶体金+Ag/Ab 金标Ag/Ab(Ag*/Ab*)2.标记步骤：调节金溶胶至所需pH (用0.2mol/LK2CO3或0.1mol/LHCl)加入蛋白质溶液(100ml:23ml)，搅拌 加入5ml 1%PEG20000溶液 离心分离3060min(胶体颗粒不同则离心条件不同)沉淀悬浮于含0.20.5mg/ml PEG20000的缓冲液中。7金标的渗滤装置渗滤装置：由塑料小盒、吸水垫料和点加了抗原或抗体的硝酸纤维素膜片三部分组成。塑料小盒可以是多种形状的，盒盖的中央有一直径约0.40.8cm的小圆孔，盒内垫放吸水垫料，硝酸纤维素膜片安放在正对盒盖的中央有一直径约0.40.8cm的小圆孔，盒的垫放吸水塑料，硝酸纤维素膜片安放在正对盒的圆孔下，紧密关闭盒盖，使硝酸纤维素膜片贴紧吸水垫料。如此即制备成一渗滤装置塑料小盒的形状最多见的是扁平的长方形小板，加之滴金法的整 反应过程都是在渗滤装置上进行的，因此又常称渗滤装置为滴金法反应板 8接下来我说说我平时的实验方法吧。1）将反应板从冷藏环境中取出。必须置37C温箱中平衡30分钟。后方可使用。2）加2滴洗涤液于反应板孔中。待液体完全渗入。3）加入100微升（约两滴）品（也就是血清）待完全渗入。4）加入4滴洗涤液，待完全渗入。5）假入3滴胶体金结合物（加入前反转摇匀）。待完全渗入。6）于小孔内滴加洗涤液4滴，待完全渗入。判读结果：在膜中央有清晰的淡红色斑点显示者判为阳性反应；反之，则为阴性反应。斑点呈色的深浅相应地提示阳性强度。9接下来我又学习了BV（细菌性阴道炎），HP尿素酶。下图为BV板。HP尿素酶。它是从慢性活动性胃炎患者的胃黏膜分离的一种革兰氏阴性杆菌。HP快速尿酶的原理是HP具有丰富的尿素酶，分解尿素产生氨，是反应产生氨，使反应变成碱性，再由HP指示剂显色，这个方法很简便。很容易就可以检测出很多疾病。以下就是我做很多的HP尿酶板了。10最后我又稍微学了一点芯片的知识。装玻片。生物芯片分为膜芯片和玻璃芯片。膜芯片的操作方法和金标的差不多。较为难的是玻璃芯片。它所点的点多。它制作很麻烦。玻璃要经过硫酸，氨水，盐酸，清水超声洗。最后用酒精洗涤。最后进行装片。在去烤干。后来还在芯片孔上面加上膜。最后经过重重的关卡才可以进行点量。以下是玻璃芯片图。11很感谢公司里的人教会了我很多.除了在工作学习方面学会了很多东西.在做人处事方面也学会了很多.一回首一驻足，我们都会惊叹，因为我们以为只过了一天，哪知时光已经过了一年。时间过的很快.虽然很多东西已经在慢慢淡忘.我们从龙岗到西校再到实习.时间已经过去了三年了,还有将近一年半,或许应该说是一年了.所以要好好珍惜了.大家如果毕业了.应该会难再见了吧其实我真的很喜欢这个班,很喜欢班上的人,所以,我们都要幸福开心12