红山茶花、叶提取液在化妆品中的抗老功效研究.pdf

第 43 卷第 2 期2024 年 2 月中 国 野 生 植 物 资 源Chinese Wild Plant ResourcesVol.43 No.2Feb.2024红山茶花、叶提取液在化妆品中的抗老功效研究胡昕*，李广涛，高宏旗（上海林清轩生物科技有限公司，上海 201400）摘要 目的：通过体外测试探究红山茶花、叶提取液在化妆品中抗老（抗皱、抗氧化、抗糖化）的能力。方法：通过实时荧光定量PCR和ELISA 试剂盒测试红山茶花、叶提取液在斑马鱼和成纤维细胞中的抗皱能力，使用流式细胞术和MTT比色法测试其在角质形成细胞的抗氧化能力，使用免疫组织化学测试其在离体皮肤中的糖基化终末产物含量评价抗糖化能力。结果：（1）红山茶花、叶提取液具有促进型胶原蛋白及抑制基质金属蛋白酶MMP-1和MMP-3的能力，可达到抗皱的效果；（2）可抑制活性氧和提升超氧化物歧化酶的含量，具有抗氧化的能力；（3）可抑制表皮层和真皮层中糖基化终末产物的表达，具有抗糖化的效果。结论：红山茶花、叶提取液可从抗皱、抗氧化和抗糖化方面达到抗老的效果。关键词 红山茶花、叶提取液；抗皱；抗氧化；抗糖化中图分类号：R284.2 文献标识码：A 文章编号：1006-9690（2024）02-0026-07Study on the Ability of Anti-aging of Camellia japonica Flower and Leaf Extract in CosmeticsHu Xin*，Li Guangtao，Gao Hongqi（Shanghai Forest Cabin Biological-Tech Co.Ltd.，Shanghai 201400，China）Abstract Objective：To explore the anti-aging（anti-wrinkle，anti-oxidation，anti-glycation）ability of Camewa japonica L.flower and leaf extract in cosmetics by in vitro testing.Methods：The anti-wrinkle ability of C.japonica flower and leaf extract in Brachydanio rerio and fibroblasts was tested by real-time PCR and ELISA kit，respectively.In addition，the antioxidant ability of C.japonica flower and leaf extract in keratinocytes was tested by flow cytometry and MTT colorimetry.What s more，the anti-glycation of C.japonica flower and leaf extract in ex vivo skin was evaluated by immunohistochemistry.Results：（1）C.japonica flower and leaf extract had the ability to promote type I collagen and inhibit matrix metalloproteinases MMP-1 and MMP-3，achieving the ability of anti-wrinkle.（2）It inhibited reactive oxygen species and increase the content of superoxide dismutase，achieving the ability of anti-oxidation.（3）It inhibited the expression of advanced glycation end products in the epidermis and dermis，achieving the ability of anti-glycation.Conclusion：C.japonica flower and leaf extract had the ability of anti-aging from anti-wrinkle，anti-oxidation and anti-glycation.Key words Extraction of Camellia japonica flower and leaf；Anti-winkle；Anti-oxidation；Anti-glycation山茶属（Camellia L.）是山茶科（Theaceae）中最大的属，包含 20组，共 280种，我国有 238种1。其中有一组为红山茶组（Sect.Camellia），全世界有57种，而我国拥有55种，其余2种在日本2。红山茶组植物不仅具有重要的经济、药用、观赏价值，在化妆品行业也具有一定的应用价值。目前，在化妆品行业，对油茶组3-4和茶组5-6的研究较多，但对红山茶组的研究并未很多。例如，爱茉莉公司研究了红山茶（Camellia japonica L.）花的抗氧化能力7，并考察了从山茶籽饼中提取的山奈酚三糖和四糖的抑制doi：10.3969/j.issn.1006-9690.2024.02.005收稿日期：2023-07-17，录用日期：2024-02-20作者简介：胡昕（1996-），女，博士，研发工程师，研究方向为功能性原料的研发。Email： 26第 2 期胡昕，等：红山茶花、叶提取液在化妆品中的抗老功效研究MMP-1的作用8，且进一步得到山奈酚四糖可以通过抑制 PDK1（3-phosphoinositide-dependent kinase 1）减少细胞衰老，同时可促进胶原纤维的增加9。还有学者研究了红山茶叶中抗氧化物质的抗光老化作用10。红山茶花提取物还可以对城市空气污染物激活的皮肤老化机制具有保护作用11。与化妆品最相关的人体器官为皮肤。从重量和范围的角度，皮肤是人体最大的器官，像传感器一样促使人体对外界变化做出反应12。随着年龄的增长，皮肤主要受到外源性因素（紫外线13、空气污染14、温度15等）和内源性因素（遗传或激素等）的影响，逐渐衰老，主要表现为皱纹的产生、色素的沉着或变得松垮等16。而与皱纹最相关的为皮肤真皮层的细胞外基质（Extracellular matrix，ECM），它可以赋予皮肤强度和弹性，假如ECM 的机械结构破坏，意味着皮肤不再具有充足的弹性和支撑，从外形上体现为皱纹产生、皮肤松弛、缺少紧致与弹性等17。在分子或细胞层面，过多的活性氧（Reactive oxygen species，ROS）会引发一系列细胞信号转导，进而产生更多的炎症因子以及基质金属蛋白酶（Matrix metalloproteinase，MMPs），从而导致ECM的降解18-19。因此，抗氧化成为大家较为关注的功效评价。除此之外，抗糖化也逐渐受到大家的青睐。糖基化是还原糖（如葡萄糖）与蛋白质、脂质或核酸之间的非酶促反应，其最终产物即晚期糖终末产物（Advanced glycation end products，AGEs）。一方面，AGEs会导致色素沉着，主要体现为与蛋白质形成色素加合物20或影响黑色素的分泌量21。另一方面，AGEs会导致皮肤皱纹的出现，主要原因为：（1）AGEs与ECM中的蛋白质形成交联，降低结缔组织通透性，使皮肤组织硬度增加，皮肤弹性下降，导致皱纹产生22；（2）AGEs会与晚期糖基化终产物受体结合，导致ROS大量产生，最终导致皮肤衰老23。因此抗氧化、抗糖化都可以进一步抗皱，进而达到抗老的效果。近年来，红山茶越来越多应用在化妆品领域中，但是对红山茶的研究结果还不是很多。因此本文对红山茶花、叶提取液的抗老功效进行了多种体外功效测试分析，主要从抗皱、抗氧化和抗糖化的角度阐述了其抗老的功效，为其在化妆品的应用提供了一定的参考意义。1材料与方法1.1试剂与仪器试剂：野生型 AB 品系斑马鱼（杭州环特生物科技股份有限公司）、人永生化角质形成细胞（北京颐唯实检测技术有限公司）、成纤维细胞（陕西博溪通用检测科技有限公司）、离体皮肤组织培养液（FSK4，陕西博溪通用检测科技有限公司）、MMP-1 ELISA 试 剂 盒（Abcam）、MMP-3 ELISA 试 剂 盒（Abcam）、稀释荧光探针 DCFH-DA、SOD 试剂盒（S0103，上海碧云天生物技术有限公司）、PBS（武汉博士德生物工程有限公司）、多聚甲醛（中国医药集团有限公司）、甲基乙二醛（MGO，Sigma）、荧光染料（Takara）、氨基胍硫酸盐（AM，Sigma）、TGF-1（Peprotech）仪器：Accuri C6流式细胞仪（Becton Dickinson）、CFX96荧光定量 PCR 仪（BioRad）、UVA 照射仪（陕西博溪通用检测科技有限公司）、150iCO2 培养箱（Thermo Fisher）、SW-CJ-1F超净工作台（苏州安泰空气技术有限公司）、BX53正置显微镜（Olympus）.1.2实验方法1.2.1红山茶花、叶提取液的制备在室温下用 30%的乙醇水溶液超声萃取干燥之后的红山茶花、叶（上海柒潭生物科技有限公司提供）（m红山茶花 m红山茶叶=2 1）30 min，料液比（重量）为1 20，随后加热到60，震荡萃取2 h，然后将萃取液用AB-8大孔树脂吸附，用70%乙醇溶液洗脱；之后真空浓缩，获得浓缩液；在浓缩液中加入水和1，3-丙二醇，使得总质量为山茶花、叶总质量的15倍，最终得到红山茶花、叶提取液。1.2.2抗皱能力检测1.2.2.1基于斑马鱼的抗皱功效测试实验步骤为：（1）随机选取斑马鱼于6孔板中，每孔 30尾。（2）水溶给予样品，同时设置正常对照组，每孔容量为3 mL，3次生物学重复。（3）28条件下避光孵育24 h。（4）提取各实验组斑马鱼总RNA，合成 cDNA，利用 q-PCR 检测-actin和 col1a1b的基因表达。（5）用-actin作为基因表达的内参，计算目的基因的 RNA 相对表达量。计算方法如以下公式：RNA相对表达量=2C()t（1）C(t)=C(t)正常对照组-C(t)样品组（2）C(t)=C(t)目的基因-C(t)-actin（3）1.2.2.2基于成纤维细胞的抗皱功效测试基于成纤维细胞的 MTT 法检测实验步骤为：（1）细胞接种：接种细胞至96孔板，培养箱（37、5%CO2）中孵育过夜。（2）分组及配液：设置空白组、阴性 27中 国 野 生 植 物 资 源第 43 卷对照组、阳性对照组和样品组。其中，阴性对照组为30 J/cm2 UVA辐照，阳性对照组为100 ng/mL TGFB1溶液，样品组为红山茶花、叶提取液。按表1配制不同浓度的红山茶花、叶提取液。每个浓度梯度下设置3个重复孔。（3）给药：待 96 孔板中细胞铺板率达到 40%60%时进行给药。给药完成后放置在培养箱（37、5%CO2）中培养 24 h。（4）检测：细胞孵育培养24 h后，弃掉上清，加入MTT工作液（0.5 mg/mL），37避光孵育4 h，孵育结束后，弃掉上清，每孔加 150 L DMSO，在 490 nm处读取OD值。（5）细胞相对活力计算：根据公式4计算。细胞相对活力=样品孔OD-空白孔OD溶剂对照孔OD-空白孔OD 100%（4）基于成纤维细胞的MMP-1和MMP-3测试 实验步骤为：（1）细胞接种：接种成纤维细胞至 24 孔板，培养箱（37、5%CO2）中孵育过夜。（2）配液：按分组分别配制受试物工作液。（3）给药：待细胞铺板率达到 40%60%时，进行分组给药。给药完成后放置在培养箱（37、5%CO2）中培养 24 h。（4）UVA 辐照：根据试验分组，对需要 UVA 照射的组别进行 30 J/cm2 的 UVA 辐照，置于培养箱（37、5%CO2）中继续培养 24 h。（5）收样：培养 24 h后，收集细胞培养上清液于离心管中，置于-80冰箱冷冻保存。（6）ELISA 检测：MMP-1、MMP-3 ELISA 试剂盒的操作说明书进行检测。1.2.3抗氧化能力检测1.2.3.1基于角质形成细胞的MTT法检测实验步骤为：（1）细胞接种：接种密度接种细胞至 96 孔板，培养箱（37、5%CO2）中孵育过夜。（2）分组及配液：实验设置空白组、溶剂对照组和样品组。按表 2 配制不同浓度的红山茶花、叶提取液，每个浓度梯度下设置 3个重复孔。（3）给药：细胞培养24 h后进行给药。给药完成后放置在培养箱（37、5%CO2）中培养。（4）检测：细胞孵育培养20 h后，加入 MTT 工作液（5 mg/mL），37避光孵育4 h，孵育结束后，每孔加100 L三联液，在培养箱（37、5%CO2）中孵育过夜。在570 nm，参考波长630 nm条件下测吸光度。细胞相对活力计算请参考公式4。1.2.3.2基于角质形成细胞的ROS测定实验步骤为：（1）种板：将细胞消化，计数，置于孔板内。（2）置于37培养箱培养24 h后，使细胞贴壁，弃上清液，空白组每孔加入2 mL培养基，对照组和样品组每孔加入 2 mL 0.003%的 H2O2。（3）加完H2O2 6 h后，吸出六孔板中的培养液，空白组、对照组每孔加入2 mL培养基，样品组每孔加入2 mL终浓度为1.875%的样品，继续培养18 h。（4）用培养基（无血清）稀释荧光探针DCFH-DA（2，7-Dichlorodihydrofluorescein diacetate，2，7-二氯二氢荧光素二乙酸酯），使终浓度为10 mol/L；吸出上清液，每孔加入 2 mL 终浓度为 10 mol/L 的 DCFH-DA。（5）将六孔板置于37培养箱内孵育20 min。用无血清培养液洗涤3次。（6）用荧光显微镜观察，然后用胰酶消化收集细胞24 1000 r/min，离心5 min，调节细胞浓度，用流式细胞仪定量检测。ROS抑制率=对照组-样品组对照组 100%（5）1.2.3.3基于角质形成细胞的SOD测定前 3个步骤见 1.2.2.2前 3个步骤，之后弃上清液，胰酶消化，24 1000 r/min，离心 5 min，调节细胞 浓 度，按 照 超 氧 化 物 歧 化 酶（Superoxide dismutase，SOD）试剂盒说明书操作，用流式细胞仪定量检测。SOD提升率=样品组-对照组对照组 100%（6）表1样品测试浓度表Tab.1Test concentrations of sample样品名称红山茶花、叶提取液浓度设置（%，V/V）10.078 120.156 330.312 540.625 051.250 062.500 075.000 0810.000 0表2样品测试浓度表Tab.2Test concentrations of sample样品名称红山茶花、叶提取液浓度设置（%，V/V）10.234 3820.468 7530.937 5041.875 0053.750 0067.500 00715.000 00830.000 00 28第 2 期胡昕，等：红山茶花、叶提取液在化妆品中的抗老功效研究1.2.4基于离体皮肤的抗糖化能力测试本实验采用免疫组织化学（Immunohistochemistry，IHC）检测离体皮肤组织中表皮层和真皮层中AGEs含量的变化，评价红山茶花、叶提取液的抗糖化作用。实验步骤为：（1）Ex vivo处理：获取去除皮下脂肪组织，将组织在液氮和 37水浴锅中反复冻融 5 次，然后将皮肤组织置入 6 孔板中。用磷酸缓冲盐溶液（Phosphate buffered saline，PBS）冲洗 3 遍，放入 75%乙醇中浸泡 5 min，然后再用含有双抗的 PBS 冲洗 3 遍。（2）培养过夜：灭菌后，将皮肤组织切成直径为 0.6 cm 的小圆片，放入培养模具中，然后放入 6 孔板中，每孔加入 4 mL PBS 缓冲液，将孔板转移至 45恒温培养箱培养 24 h。（3）给药：孵育 24 h 后，给药处理，空白对照和阴性对照都不进行给药处理，阴性对照组将培养液更换为糖化反应液（0.5 mM MGO 的 PBS 缓冲液），阳性对照组给药 3 mM 的氨基胍硫酸盐，将培养液更换为糖化反应液，样品组表面涂抹样品，添加量为 1.5 L，同时将培养液更换为糖化反应液。（4）UVA 辐照：给药结束后进行10 J/cm2 UVA 的照射。（5）糖化反应：辐照结束后，将孔板转移至 45恒温培养箱进行糖化反应 72 h。（6）72 h 之后，重复步骤（3）至步骤（5）。（7）UVA 辐照进行 3 次，第 4 次之后，只进行给药和更换糖化反应液，不再进行 UVA 的照射处理，共计持续 21 天。（8）糖化反应结束后，将离体皮组织转移至 1.5 mL 离心管中，用 4%多聚甲醛固定，进行包埋、切片、AGEs 免疫组化染色，显微镜下采集图片。1.2.5结果统计分析应用Excel 2016作图，结果表示为Mean SD。各组间比较采用t-test统计分析。统计分析均为双尾。P 0.05认为具有显著差异，P 0.01认为具有极显著差异。2结果与分析2.1红山茶花、叶提取液的抗皱能力斑马鱼中col1a1b基因表达量，如图1所示。从图1中可以得出，使用0.25%红山茶花、叶提取液的斑马鱼的col1a1b基因相对表达量为1.22，与正常对照组相比显著增加，表明红山茶花、叶提取液能促进I型胶原蛋白的表达。在成纤维细胞上开展细胞毒性检测试验，细胞存活率随着红山茶花、叶提取液浓度的大小变化如图 2 所示，可以得到，在 0.625%范围内的红山茶花、叶提取液并未体现出明显的细胞毒性。基于此，选取0.5%红山茶花、叶提取液，测试其对成纤维细胞中 MMP-1 和 MMP-3 含量的影响，结果如图 3 和图 4。从图 3中可以看出，与阴性对照图3红山茶花、叶提取液对MMP-1 含量的影响Fig.3Effects of C.japonica flower and leaf extract on MMP-1 content注：与 BC 组比较，#P 0.05，#P 0.01；与 NC 组比较，*P 0.05，*P 0.01。BC：Blank Control，空白对照；NC：Negative Control，阴性对照；PC：Positive Control，阳性对照，下同。图1红山茶花、叶提取液对斑马鱼 col1a1b 基因相对表达量的影响Fig.1Effect of C.japonica flower and leaf extract on the relative expression of col1a1b gene in Brachydanio rerio注：与空白对照组比较，*P 0.01。图2红山茶花、叶提取液对成纤维细胞存活率的影响Fig.2Effects of C.japonica flower and leaf extract on the survival rate of fibroblast 29中 国 野 生 植 物 资 源第 43 卷组相比，0.5%的红山茶花、叶提取液可以明显抑制MMP-1的表达，并经过计算得到抑制率为14.34%。从图4中可以看出，与阴性对照组相比，0.5%的红山茶花、叶提取液也可显著性抑制MMP-3的表达，抑制率为14.78%。因此，综合红山茶花、叶提取液对col1a1b基因表达量的促进以及对MMP-1和MMP-3表达的抑制，可以得到，红山茶花、叶提取液可以促进胶原蛋白的表达，且可以抑制胶原蛋白或弹性蛋白等ECM的降解，从而达到抗皱的效果。2.2红山茶花、叶提取液的抗氧化能力在角质形成细胞上开展细胞毒性检测试验，细胞存活率随着红山茶花、叶提取液浓度的大小变化如图5所示，可以得到当红山茶花、叶提取液的浓度在 0.234%1.875%范围内，细胞存活率均大于100%，并未体现出明显的细胞毒性。因此选取1.875%的红山茶花、叶提取液从对ROS和SOD表达的影响评估其抗氧化能力，结果如图6和图7所示。与空白组相比，对照组中活性氧ROS和SOD的表达有显著变化，表明造模成功。从图6中可以看出，与对照组相比，红山茶花、叶提取液可显著性抑制ROS的表达，且计算得到抑制率为28.85%；从图7中可以看出，与对照组相比，红山茶花、叶提取液可显著提升 SOD 的表达，且计算得到促进率为25.65%。因此，从细胞层面，红山茶花、叶提取液具有一定的抗氧化能力。这也与之前对红山茶的抗氧化研究结论一致。2.3红山茶花、叶提取液的抗糖化能力通过对离体皮肤中AGEs免疫组化染色，且使用显微镜对其进行观察，如图8所示（正文只展示1个复孔的显微照片）。可以明显看出，对比于阴性对照组，涂抹了红山茶花、叶提取液的离体皮肤中AGEs的免疫组化强度明显减弱，且可以分别得到表皮层和真皮层中 AGEs的含量，分别如图 9和图10所示。从图中可以得知，与阴性对照组相比，红山茶花、叶提取液对表皮层和真皮层中AGEs的表达均为抑制，且抑制率分别为 12.65%和 13.87%。因此，红山茶花、叶提取液对离体皮肤的表皮层和真皮层均有抗糖化的作用。图4红山茶花、叶提取液对MMP-3含量的影响Fig.4Effects of C.japonica flower and leaf extract on MMP-3 content图5红山茶花、叶提取液对角质形成细胞存活率的影响Fig.5Effects of C.japonica flower and leaf extract on the survival rate of keratinocytes图6红山茶花、叶提取液对ROS水平的影响Fig.6Effects of C.japonica flower and leaf extract on ROS level图7红山茶花、叶提取液对SOD活性的影响Fig.7Effects of C.japonica flower and leaf extract on SOD activity 30第 2 期胡昕，等：红山茶花、叶提取液在化妆品中的抗老功效研究3讨论本研究从抗皱、抗氧化及抗糖化的体外功效测试阐述了红山茶花、叶提取液的抗老功效。从之前的大量研究中可以得知，红山茶花、叶中主要含有山茶苷（Camellianoside）24、黄酮类、酚类和三萜类25等活性成分，因此具有优异的生物活性，如抗氧化等，主要体现为对ROS的抑制以及对DPPH的清除，还可提升抗氧化酶如SOD等的活性。因此，本研究的结论与这些研究结果一致。而对于红山茶组花、叶的抗糖化研究并无太多报道，目前研究集中在茶组或油茶组的抗糖化功效上，如油茶（Camellia oleifera Abel.）壳26，绿茶（Chinese green tea）叶、红茶（Black tea）叶及乌龙茶（Oolong tea）叶都具有抗糖化的功效27。但红山茶组、茶组及油茶组都属于山茶属，因此本研究也验证了红山茶组也具有抗糖化的功效。近年来在化妆品领域，对红山茶的研究也在逐渐增多，选择不同种红山茶的花、叶、籽或籽饼为研究对象，使用不同组学分析工具分析其DNA序列或活性成分28。现在越来越多的化妆品公司选择将红山茶提取物作为原料添加进化妆品中，并进行人体功效测试证明其确实具有优异的功效，如抗皱、紧致、抗氧化等。未来也需更深入且准确地分析出红山茶不同部位（花、叶等）中的活性单体成分，对其进行作用靶点和通路的研究，使其作用机理更为明确，另外，开发出更高效的提取工艺对其进行富集，最终使其可以更好地应用在化妆品行业中。参考文献:1 张宏达中国植物志（第 49 卷第 3 册）M 北京：科学出版社，19982 莫迟.山茶属红山茶组主要物种开花物候及抗寒性研究 D.杭州：浙江农林大学，2010：1.3 Luan F，Zeng J S，Yang Y，et al.Recent advances in Camellia oleifera Abel：A review of nutritional constituents，biofunctional properties，and potential industrial applications J.Journal of Functional Foods，2020，75：104242.4 Tsai C E，Lin L H.DPPH scavenging capacity of extracts from Camellia seed dregs using polyol compounds as solvents J.Heliyon，2019，5（8）：e02315.5 Koch W，Zagorska J，Marzec，Z，et al.Applications of tea（Camellia sinensis）and its active constituents in cosmetics J.Molecules，2020，24（23）：4277.6 Gianeti M D，Mercurio D G，Campos P M.The use of green tea extract in cosmetic formulations：not only an antioxidant active ingredient J.Dermatologic Therapy，2013，26（3）：267-271.7 Piao M J，Yoo E S，Koh Y S，et al.Antioxidant effects of the ethanol extract from flower of Camellia japonica via scavenging of reactive oxygen species and induction of antioxidant enzymes J.International Journal of Molecular Sciences，2011，12（4）：2618-图9红山茶花、叶提取液对表皮层中AGEs表达的影响Fig.9Effects of C.japonica flower and leaf extract on the expression of AGEs in the epidermis图10红山茶花、叶提取液对真皮层中AGEs表达的影响Fig.10Effects of C.japonica flower and leaf extract on the expression of AGEs in the dermis图8离体皮肤的表皮层和真皮层中AGEs的免疫组化显微照片Fig.8Immunohisto chemistry micrographs of AGEs in the epidermis and dermis of ex vivo skin注：（a）：空白对照组；（b）：阴性对照组；（c）：阳性对照组；（d）：红山茶花、叶提取液。31中 国 野 生 植 物 资 源第 43 卷2630.8 Ko J，Rho T，Yoon K D.Kaempferol tri-and tetrasaccharides from Camellia japonica seed cake and their inhibitory activities against matrix metalloproteinase-1 secretion using human dermal fibroblasts J.Carbohydrate Research，2020，495：108101.9 Kim J，Kim H S，Choi D H，et al.Kaempferol tetrasaccharides restore skin atrophy via PDK1 inhibition in human skin cells and tissues：Bench and clinical studiesJ.Biomedicine&Pharmacotherapy，2020，156：113864.10Mizutani T，Masaki H.Anti-photoaging capability of antioxidant extract from Camellia japonica leaf J.Experimental Dermatology，2014，23：23-26.11Kim M，Son D，Shin S，et al.Protective effects of Camellia japonica flower extract against urban air pollutants J.BMC Complementary Medicine and Therapies，2019，19：30.12Tobin D J.Biochemistry of human skin-our brain on the outside J.Chemical Society Reviews，2006，35（1）：52-67.13Halliday G M，Byrne S N，Damian D L.Ultraviolet A radiation：Its role in immunosuppression and carcinogenesis J.Seminars in Cutaneous Medicine and Surgery，2012，30（4）：214-221.14Martic I，Jansen-Durr P，Cavinato M.Effects of air pollution on cellular senescence and skin aging J.Cells，2022，14（11）：2220.15Seo J Y，Chung J H.Thermal aging：A new concept of skin aging J.Journal of Dermatological Science，2006，S13-S22.16Tobin D J.Introduction to skin aging J.Journal of Tissue Viability，2017，26：37-46.17Wlaschek M，Maity P，Makrantonaki E，et al.Connective tissue and fibroblast senescence in skin aging J.Journal of Investigative Dermatology，2021，141（4S）：985-992.18Pittayapruek P，Meephansan J，Prapapan O，et al.Role of matrix metalloproteinases in photoaging and photocarcinogenesis J.International Journal of Molecular Sciences，2016，17（6）：868.19Kammeyer A，Luiten R M.Oxidation events and skin aging J.Ageing Research Reviews，2015，21：16-29.20Crisan M，Taulescu M，Crisan D，et al.Expression of advanced glycation end-products on sun-exposed and non-exposed cutaneous sites during the ageing process in humans J.PLoS One，10（8）：e75003.21Lee E J，Kim J Y，Oh S H.Advanced glycation end products（AGEs）promote melanogenesis through receptor for AGEs J.Scientific Reports，2016，6：27848.22Moldogazieva N T，Mokhosoev I M，Melnikova T I，et al.Oxidative stress and advanced lipoxidation and glycation end products（ALEs and AGEs）in aging and age-related diseases J.Oxidative Medicine and Cellular Longevity，2019，2019：3085756.23Peng L W，Lai J X，He C F，et al.Research progress of nonenzymatic glycosylation and skin aging J.Chinese Journal of Gerontology，2010，30（20）：3027-3029.24Onodera K，Hanashiro K，Yasumoto T.Camellianoside，a novel antioxidant glycoside from the leaves of Camellia japonica J.Applied Biochemistry and Biotechnology，2006，70（8）：1995-1998.25Nakajima H，Itokawa H，Ikuta A.Studies on the constituents of the flower of Camellia japonica（2）J.Yakugaku Zasshi，1984，104（2）：157-161.26Peng J M，Wen W J，Liang G Q，et al.Camellia oleifera shells polyphenols inhibit advanced glycation end-products（AGEs）formation and AGEs-induced inflammatory response in RAW264.7 macrophages J.Industrial Crops and Products，2023，197：116589.27Ho S C，Wu S P，Lin S M，et al.Comparison of anti-glycation capacities of several herbal infusions with that of green tea J.Food Chemistry，2010，122（3）：768-774.28倪穗.山茶属红山茶组植物系统学研究 D.南京：南京林业大学，2007.32