HC2法在宫颈疾病类型辅助诊断中的应用研究_魏国华.pdf

基金项目：锦州医科大学大学生创新创业训练项目，项目编号：；辽宁省博士科研启动基金计划项目，项目编号：。作者简介：魏国华（），女，山西朔州人，讲师，硕士学位，主要研究方向为临床病理学研究。通讯作者：柳兴源（），男，黑龙江大庆人，高级实验师，硕士学位，主要研究方向为病理学研究。法在宫颈疾病类型辅助诊断中的应用研究魏国华，李菁媛，石红雨，柳兴源（锦州医科大学基础医学院病理学教研室；锦州医科大学附属第一医院临床药学科；锦州医科大学附属第三医院，辽宁 锦州）摘要：目的 通过大样本研究报告 流行率，并对完成筛查患者开展长时程、大规模的随访研究，确定筛查结果同主要的宫颈疾病类型的发病情况的关系。方法 使用实验室信息系统进行数据搜索，得到从 年 月到 年 月时间跨度为 年的年龄在 岁之间的 名女性患者样本数据。所有样本均采用第二代杂交捕获法（，）进行高危 定量检测。分析不同年龄阶段同相对光单位 截断值的比值（，）值的分级和分布人数和频率并计算阳性率。而后对已检测为 阳性的患者，经过平均随访时间 个月的追踪，根据患者随后的组织学、细胞学诊断结果，研究 值与宫颈病变风险关系。结果 在所有接受检查的患者当中，阳性患者检出率为 。值的分布显示除去 阴性患者外，全部年龄区间患者的检测值在 的患者分布基数较大（）。随着 值的增加组织学和细胞学报道子宫颈上皮不典型增生（，）级及以上病变的比例和相对风险度增加。结论 检测方法稳定性得到了验证，纳入研究的患者当中 负荷级别较大的诊断为高度宫颈病变的风险更高。关键词：人乳头瘤病毒（）；值；宫颈病变；第二代杂交捕获法中图分类号：文献标志码：文章编号：（），（，；，；，）：，（，）（），（），：（）；根据世界卫生组织统计，人乳头瘤病毒（，）约占所有感染性因素锦州医科大学学报 （）DOI:10.13847/ki.lnmu.2023.01.004相关癌症的。感染每年导致 万例癌症和 万例死亡，是全球需要共同面对的公共卫生问题。是包膜双链 病毒大家族，人类和动物的乳头状瘤病毒在特定类型的宿主复层上皮中持续复制，导致慢性无症状感染，并产生持久的病毒粒子，将免疫清除的机会降到最低，感染后病毒基因组在分裂上皮细胞中的复制水平很低，在组织中形成了维持数十年的感染源。国际癌症研究机构（）根据临床意义提出了详细的 亚型分类：低危 基因型（低致癌风险，主要引起尖锐湿疣）和高危 基因型（高致癌风险，与新生细胞和癌症的发展密切相关）。美国食品及药物管理局（）共批准了五项 检测：（）、（）、（）和（）。第二代杂交捕获法（，）是 批准的无分型的高危病毒的共同集合的检测，现在普遍用于检测高危 类型。本研究根据 名患者的 检测结果推断流行趋势，并在 筛查后进行患者人群的追踪随访，确定主要的宫颈相关疾病的发病情况。从大样本量计算得到 在各年龄区间的流行趋势以及不同量级 病毒载量（用 值表示）和高度宫颈疾病的相对风险度，从而为设计适当的感染相关癌症控制政策提供依据，对于 疫苗接种、诊断、治疗等手段的进步并且消除相关疾病具有非常重要的意义。资料与方法 研究对象对锦州医科大学附属第一医院临床病理中心实验室信息系统进行了数据搜索，限定区间为 年 月至 年 月之间完成 筛查的门诊和住院患者，标本来自女性就诊个体（除外术后复查，定期体检等原因多次检查的患者）的宫颈黏膜脱落液（口腔等刷片除外），而后对后期的宫颈活检和宫颈细胞学检查（，）的结果进行追踪。所有接受筛查的患者有 人是因为症状包括接触性出血、闭经、腹痛等，人因为无症状常规体检。对于已检测为 阳性的患者，经过平均随访时间 个月的追踪，根据患者随后的病变部位福尔马林固定石蜡包埋（）材料、计算机断层扫描（）、磁共振成像（）、正电子发射断层扫描（）或细胞学等诊断结果筛选后，纳入这项研究。宫颈活检的标本依据 女性生殖器官肿瘤学分类（第 版）由两名有经验的病理医生进行报告。细胞学标本染色制片后由两位细胞学病理医师根据 等级体系进行阅片和定评，诊断出现差异时另请资深医师进行研判。实验材料全部患者样本使用 （凯杰，德国）试剂盒进行检测，严格按照产品使用说明书进行操作。检测方法用于 筛查的宫颈刷子和收集装置按照说明书进行收集和运输标本，内收集的所有 筛查标本都在实验室中进行处理。使用 技术的高危 检测是一种利用微板化学发光使信号放大功能的核酸杂交检测。将含有靶 的样品与特定的 探针杂交。所得到的 杂交物被捕获到微板的表面。然后将固定化的杂交体与 杂交体特异性的碱性磷酸酶偶联抗体反应，并用化学发光底物进行检测。碱性磷酸酶分子与抗体结合形成共轭抗体结合到捕获的杂交体上导致实质上的信号放大。当底物被结合的碱性磷酸酶裂解时，发射的光在基因杂交信号扩大仪 上被测量为相对光单位 截断值的比值（，值）。发射的光的强度表示样品存在目标 的量。值 表示样品中存在高危 ，临床报告为阳性；值 表示没有检测到特定的高危 序列或低于检测限的 水平，临床报告为阴性，比值越大代表高危型的病毒载量越高。统计学方法按参与者的年龄分层统计。按照有正常病理或低度疾病 、高度宫颈病变 级及以上发生分为两组，因为 是临床治疗的阈值。以 值等级为因变量通过 回归模型，计算 阴性作为对照组不同的 负荷级别的组织学和细胞学层面发生宫颈癌前病变和恶性肿瘤发生的相对危险度（，；暴露组发病率 非暴露组发病率），置信区间和 得分。所有分析均采用 软件进行统计学检验，以 为差异有统计学意义。结 果 法进行 筛查人群年龄同病毒载量魏国华，等：法在宫颈疾病类型辅助诊断中的应用研究 值的分布趋势表 显示了在不同年龄区间的 阳性、病毒载量 值的区段分布数量及其比例。在所有 接 受 检 查 的 患 者 当 中，阳 性 率 为。阳性率最高的年龄区间为 岁（），阳性率最低的年龄区间为 岁（）。其中 岁、岁、岁和 岁高于总体水平；岁、岁、岁低于总体水平。根据 法所检测出的 的 值，将患者进行分组。为 检测阴性，在所有的 名女性患者中，名患者被检测为阴性，占比为 。值在 区间内的患者为 名，占比为 ；在 区间内的患者为 名，占比为 ；在 区间内的患者为 名，占比为 ；在 区间内的患者为 名，占比为 ；区间内的患者为 名，占比为 。值的分布显示除去检测为阴性患者外，全部年龄区间患者的检测值在 的患者分布基数较大（）。表 的 值与年龄分布的关系（）年龄（岁）值（阴性）阳性合计（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）合计（）（）（）（）（）（）（）注：相对光单位 截断值的比值；表示 检测为阴性 法检测 的 值区间与宫颈疾病的关系的评估近年来 阳性引起的宫颈疾病的发病率一直在上升，因此将 年 月至 年 月患者反向纳入。表 显示，检测结果为阴性的患者，诊断为 级及以上宫颈病变的比例为，远低于总体水平（）；发生低度鳞状上皮内病变（，）、高度鳞状上皮内病变（，）以及宫颈鳞状细胞癌和宫颈内腺癌（，）的风险分别为 、，低于各自的总体水平（、和 ）。的阴性患者发现 级及以上病变的比例是，随着 值的区间升级，患者发现 级及以上病变的比例逐渐增大，分别为、；相比于 阴性人群，发生宫颈高度病变相对风险度也逐渐增大，分别为 ：，：，：，：，：。根据表 可见，对合计 名 和 联合筛查的患者进行了 的 值与细胞学检测宫颈病变的相关性统计，对于细胞学的严重程度，检测结果为阴性的患者，诊断为癌前病变和恶性宫颈病变的比例为 ，远低于总体水平（）。随着 值的区间升级，患者发现癌前病变和恶性宫颈病变的比例逐渐增大，分 别 为、；相比于 阴性人群，诊断为宫颈高度病变相对风险度，分别为 ，：，：，：。结果表明在随访期间，负荷随分级的变化与患者宫颈高度病变（将组织学报告为 级及以上，重度及以上作为阈值）的相对风险度之间存在显著的相关性。锦州医科大学学报 年 月，（）表 根据 值区间分级组织学报告宫颈病变的频率和相对风险度（）值报告组织学病变 轻症 级及以上病变（）分数总数（）（）（）（）（）（）（）（）（）（），（）（）（）（）（），（）（）（）（）（），（）（）（）（）（），（）（）（）（）（），合计（）（）（）（）（）注：相对光单位 截断值的比值；：相应年龄组的患者数量；表示 检测阴性；：低度鳞状上皮内病变；：高度鳞状上皮内病变；：宫颈上皮内瘤变；：宫颈鳞状细胞癌和宫颈腺癌；：相对危险度；：置信区间；：；：无对应值表 根据 值区间分级细胞学报告宫颈病变的频率和相对风险度（）值正常（中度）（重度）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）合计（）（）（）（）（）（）值轻症（）分数总数（）（）（）（）（，）（）（）（，）（）（）（，）（）（）（，）（）（）（，）合计（）（）注：意义未明的非典型鳞状细胞；：低级别鳞状上皮内病变；（中度）：中度鳞状上皮内病变；（重度）：，高度鳞状上皮内病变；：原位癌，原位腺癌；：癌前病变；：恶性肿瘤；：相对危险度；：置信区间；：；：无对应值 讨 论本研究是迄今为止研究规模较大的常规临床实践研究。在所有接受检查的患者当中，阳性患者检出率为 ，研究表明在多个地区年龄特异性曲线不同。值的分布显示，除去检测为阴性患者外，岁患者的分布基数最大，这些受试者中有 的人陈述了伴侣或自己的婚外性行为。随着 值的区间升级，患者发生宫颈恶变的风险逐渐增大，这与北京大学深圳医院的研究具有一致性。近期研究观察到持续感染的概率随着病毒载量的级别的升高而逐渐增加，并且具有上升病毒载量的女性发生 级及以上病变的风险比 负荷降低的女性高 倍，和我们的研究结果相符。定量水平与宫颈病变严重程度的关系一直是近年来研究的热点，因此本研究将患者的临床数据和 的检测结果进行统计，对疾病诊断、治疗和相关政策制定是有积极意义的。临床导向的 检测的关键性能属性是分辨宫颈病变的敏感性，面向流行病学监测分析的关键性能属性是描述多种感染的能力和对不同生物样本的适宜性，本研究是对检测方法稳定性的验证。在我们的研究中女性 级及以上病变的相对风险度随着魏国华，等：法在宫颈疾病类型辅助诊断中的应用研究 负荷而增加，特别是对于高负荷的患者。具有中高度 病毒载量特别是负荷持续增加的个体未来发生高度病变的风险更高，并且可能被用作 阳性女性的分类指标。研究表明，随着 和 联合检测在 岁及以上女性中推荐使用的增加更明确的分类使得与 阴性的 级及以上的低风险患者可能允许保守治疗。精确预测未来高度病变发展的风险，如不同程度的 负荷对宫颈病变的长期风险的影响，对于帮助临床医生在筛查阳性的女性中做出更切当的治疗决定至关重要，我们建议使用 负荷分级作为分类指标协助 阳性患者的临床管理。本研究的限制是得出的诊断结果可能比实际的比率要低。主要原因包括：首先不是每位患者进行 筛查后都会进行组织病理检查，主要是根据妇产科医生根据经验对阴道镜的结果进行判断。其次，追踪存在困难，部分外地患者就诊后离开并未在本院进行治疗。最后，由于首次采样易碎的细胞被移除，二次采样不一定代表首次采样情况导致的随访困难，亦涉及宫颈细胞学检测，因此专家根据细胞学实践建议在 检测不令人满意的情况下，随后的宫颈重新取样应推迟 以便宫颈上皮细胞再生，避免存在因采样时间差异而产生的偏倚。虽然中国持续推进“两癌”筛查计划，但开展筛查最初阶段多数患者感染之后并不知晓。随着疫苗接种率的提高和筛查计划的推进，感染能够及早被验查出来并通过合适的治疗方式降低载量，这种情况可能被扭转。负荷可以与 结果同时获得，不需要额外的筛查试验，因此降低了筛查费用。组织学的 值与宫颈病变相关性在细胞学中表现一致。由此对宫颈疾病的筛查 与 联合检测在降低漏诊率、无创伤地提高宫颈病变检出率等方面具有重要价值。近期有证据表明，联合 检测的在宫颈癌筛查中的临床价值高于单一检查，但特异性较低。预防性 疫苗涵盖大多数致癌 类型，被证明是安全的，并且疫苗诱导的免疫反应提供了针对癌前和癌症的持续的免疫效力。由于性行为和 传播的同质性，强大的群组效应不可避免。专家观点为，疫苗接种的最终目标是降低高危 覆盖率，对早期青少年进行无区分性别的疫苗接种，也将迅速从一般人群中根除 感染。现期对 感染者采取的治疗手段主要涵盖锥切术、冷冻疗法、激光治疗、干扰素、治疗性疫苗接种、光动力疗法和混合治疗等，环状切除和锥形切除术在清除 感染的能力方面似乎优于冷冻疗法。理解 的流行趋势和传播基础对于设计适当的癌症控制政策至关重要。联合诊断、联合治疗等措施将为根除致癌的 类型并且消除相关疾病提供切实、有效的方法，降低人群对 相关疾病昂贵的筛查和治疗的需要。参考文献：元玫雯，王宏昊，段如菲，等 年中国归因于人乳头瘤病毒感染的肿瘤发病与死亡分析 中华流行病学杂志，（）：何骏驹，李智，付淑君，等 病毒致瘤蛋白对肿瘤微环境的改造 生物化学与生物物理进展，（）：吴俊珍，刘笑芬 世界卫生组织和疫苗组织支持广泛接种人乳头瘤病毒疫苗 中国感染与化疗杂志，（）：王兰芳，胡双婕，葛晓伟，等 不同基因型感染在宫颈病变过程中的研究 中华疾病控制杂志，（）：，：，：，（）：邵招凤，戚秀秀，杨玲飞，等 宫颈上皮内瘤变患者感染高危型人乳头瘤病毒载量水平及临床意义 中华医院感染学杂志，（）：，：刘文敏，付振明 宫颈癌预防与筛查研究进展 中国预防医学杂志，（）：茅小颖 联合高危型 检测在社区宫颈癌筛查中的意义 中华肿瘤防治杂志，（）：符平，吴文萃 超声、宫颈、联合检查对老年宫颈癌的诊断价值 中国老年学杂志，（）：蔡珊，缪珂，谭小玉，等 宫颈癌及癌前病变治疗性疫苗临床研究进展与 启示 中华肿 瘤杂志，（）：张颖，吴月玲 宫颈癌的免疫治疗：精准医学的到来 实用医学杂志，（）：收稿日期：锦州医科大学学报 年 月，（）