1例输入性类鼻疽的病原学诊断及溯源分析.pdf

中 国 人 兽 共 患 病 学 报C h i n e s eJ o u r n a l o fZ o o n o s e s ,()D O I:/j i s s n 调查研究例输入性类鼻疽的病原学诊断及溯源分析杨红霞,王春雨,王洋,郝瑞娥,赵启玉,郑宵通讯作者:郑霄,E m a i l:z h e n g x i a o i c d c c n;O R C I D:作者单位:山西省疾病预防控制中心,重点传染性疾病预防与诊治山西省重点实验室,太原 ;山西省人民医院,太原 ;太原市疾病预防控制中心,太原 ;中国疾病预防控制中心传染病预防控制所,传染病预防控制国家重点实验室,北京 摘要:目的对例输入性类鼻疽患者进行病原学诊断及溯源分析,为山西省类鼻疽防控提供科学依据.方法患者血培养阳性,分离菌株鉴定为泰国伯克霍尔德菌.采用生化试验及微生物质谱仪进行菌株鉴定,核酸提取后进行全基因组测序,分析ML S T型和耐药基因携带情况,同时构建系统进化树.结果此次分离株经生化试验及微生物质谱仪检测均鉴定为类鼻疽伯克霍尔德菌,ML S T型为S T ,全基因测序分析与海南省个分离株进化亲缘关系较近,同源性较高.结论此例类鼻疽病例经分子溯源分析及流行病学调查确定为海南省输入,提示医疗机构及疾控部门应加强对类鼻疽的认识,提高诊疗能力.关键词:类鼻疽;类鼻疽伯克霍尔德菌;ML S T分型;全基因测序;分子溯源中图分类号:R 文献标识码:B文章编号:()E t i o l o g i c a l d i a g n o s i sa n dm o l e c u l a r t r a c i n ga n a l y s i si nac a s eo f i m p o r t e dm e l i o i d o s i sYANG H o n g x i a,WANGC h u n y u,WANGY a n g,HAOR u i e,Z HAOQ i y u,Z HE NGX i a o(S h a n x iP r o v i n c i a lK e yl a b o r a t o r yf o rM a j o rI n f e c t i o u sD i s e a s eR e s p o n s e,S h a n x iP r o v i n c i a lC e n t e r f o rD i s e a s eC o n t r o la n dP r e v e n t i o n,T a i y u a n ,C h i n a;S h a n x iP r o v i n c i a lP e o p l esH o s p i t a l,T a i y u a n ,C h i n a;T a i y u a nM u n i c i p a lC e n t e r f o rD i s e a s eC o n t r o la n dP r e v e n t i o n,T a i y u a n ,C h i n a;S t a t eK e yl a b o r a t o r yf o rI n f e c t i o u sD i s e a s eP r e v e n t i o na n dC o n t r o l,C h i n e s eC e n t e r f o rD i s e a s eC o n t r o la n dP r e v e n t i o n,B e i j i n g ,C h i n a)A b s t r a c t:W ea i m e dt o i d e n t i f yt h ei n f e c t i o u ss o u r c eo fac a s eo fm e l i o i d o s i s,t op r o v i d ee v i d e n c ef o rt h ep r e v e n t i o na n dc o n t r o l o fm e l i o i d o s i s i nS h a n x iP r o v i n c e,C h i n a T h ep a t i e n t d e v e l o p e dr e p e a t e df e v e r,f a t i g u e,d i a r r h e a,a n do t h e r s y m p t o m sa f t e rb e i n gc a u g h t i nt h e r a i nw h i l e t r a v e l i n g i nH a i n a nP r o v i n c e T h eb l o o dc u l t u r ew a sp o s i t i v e,a n d t h eb a c t e r i a l s t r a i nw a s i d e n t i f i e da sB u r k h o l d e r i at h a y e n s i sa n ds e n t t o t h ep r o v i n c i a lC e n t e r f o rD i s e a s eC o n t r o l a n dP r e v e n t i o n f o r f u r t h e r e v a l u a t i o n MA L D I T O FM Sa n db i o c h e m i c a l i d e n t i f i c a t i o nw e r eu s e d t o i d e n t i f y t h e s t r a i n,w h o l eg e n o m e s e q u e n c i n gw a sp e r f o r m e da f t e rn u c l e i ca c i de x t r a c t i o n,ML S Tt y p ea n dd r u g r e s i s t a n c eg e n e sw e r e a n a l y z e d,a n dap h y l o g e n e t i c t r e ew a s c o n s t r u c t e d T h e i s o l a t e ds t r a i nw a s i d e n t i f i e da sB u r k h o l d e r i ap s e u d o m a l l e ib yMA L D I T O FM Sa n db i o c h e m i s t r y,a n d t h eML S Tt y p ew a s T h ew h o l eg e n es e q u e n c i n ga n a l y s i s i n d i c a t e dac l o s ee v o l u t i o n a r yr e l a t i o n s h i pw i t ht h e t h r e e i s o l a t e s i nH a i n a nP r o v i n c e,w i t hh i g hh o m o l o g y T h i sc a s eo fm e l i o i d o s i sw a si n d e e di m p o r t e df r o m H a i n a nP r o v i n c e,a c c o r d i n gt om o l e c u l a rt r a c i n ga n a l y s i sa n de p i d e m i o l o g i c a l i n v e s t i g a t i o n,t h u ss u g g e s t i n gt h a tm e d i c a l i n s t i t u t i o n sa n dd i s e a s ec o n t r o ld e p a r t m e n t ss h o u l ds t r e n g t h e nu n d e r s t a n d i n go fm e l i o i d o s i s,a n d i m p r o v e t h ed i a g n o s i sa n dt r e a t m e n t a b i l i t y K e y w o r d s:m e l i o i d o s i s;B u r k h o l d e r i ap s e u d o m a l l e i;ML S T;w h o l eg e n es e q u e n c i n g;m o l e c u l a r t r a c i n gC o r r e s p o n d i n ga u t h o r:Z h e n gX i a o,E m a i l:z h e n g x i a o i c d c c n类鼻疽(M e l i o i d o s i s)是一种由类鼻疽伯克霍尔德菌(B u r k h o l d e r i ap s e u d o m a l l e i)感染引起的人兽共患传染病.主要流行于东南亚,尤其是马来西亚、泰国、新加坡以及澳洲北部等南北纬 之间的地区 ,年全球类鼻疽发病数估算约 例,死亡约 例.在我国主要流行于海南、广东及广西等地区,在北方地区则较少见报道.该病临床表现复杂多变,以肺炎、败血症、局部脓肿为主.类鼻疽伯克霍尔德菌是一种环境腐生菌,广泛存在于水体、土壤等生活环境,对人和动物均具有高度致病性.类鼻疽伯克霍尔德菌侵入人体肺部后,容易形成难治性肺炎、肺部空洞,并可能短期内快速发展为败血症而死亡.此外,类鼻疽伯克霍尔德菌还可能引起脑膜炎、前列腺炎、尿路感染及内脏脓肿 .尽管类鼻疽的发现已有 多年,但因其临床症状多样化,使得漏诊、误诊率及病死率均较高.因此,该病的病原学诊断尤为重要.该病例是山西省报道的从例感染发热的患者血液标本中分离鉴定出类鼻疽伯克霍尔德菌,为明确其诊断和溯源,通过流行病学调查和全基因测序等方法,对该病例进行溯源分析,不仅为全面了解类鼻疽伯克霍尔德菌的分子流行病学特征奠定了基础,还为山西省预防该病的流行及传播提供了建议.材料与方法病史患者为男性,岁,学生,山西人.患者自述在 年月日至日在海南旅游.于月日上午出现头晕、咽痛,随后出现恶心、干呕、乏力、四肢肌肉酸痛、无法行走,当晚前往三亚市级医院就诊,测体温,当地医院给予头孢抗炎、补液、退热等治疗(具体不详).返回太原后,于月日就诊于山西省人民医院急诊,入院诊断为:紫癜性肾炎、发热原因待查、右侧胸背部疼痛待查.患者于 年月曾确诊“紫癜性肾炎I I b型”.入院后进行血培养阳性,分离菌株经微生物质谱仪(德国布鲁克)鉴定显示为泰国伯克霍尔德菌(B u r k h o l d e r i at h a i l a n d e n s i s),进 行 药 敏 实 验(V I T E K C OM P A C T法国梅里埃,全自动微生物生化鉴定仪,革兰氏阴性菌药敏卡A S T GN ).临床会诊后考虑患者自述在海南旅游期间曾有淋雨史,结合患者症状、体征,不能除外类鼻疽伯克霍尔德菌感染可能,遂将菌株送至山西省疾控中心进一步鉴定.月 日山西省疾控中心鉴定为类鼻疽伯克霍尔德菌.临床继续给予美罗培南(g/d,静脉滴注)抗感染治疗,病情迅速得以控制,d后患者好转出院.细菌鉴定我中心收到菌株后立即接种哥伦比亚血平板和营养琼脂平板,培养 h后进行鉴定.观察菌落形态,涂片革兰染色.采用甲酸提取法,将细菌灭活后使用微生物质谱仪(德国布鲁克MA L D I TO F M S)进行鉴定,同时采用A P I N E(法国梅里埃)做系统生化鉴定.核酸提取及全基因测序挑取菌落制成菌悬液,按照细菌D NA基因组核酸提取试剂盒说明书(德国Q I A a m pD NA试剂盒)提取核酸.送北京诺禾致远科技股份有限公司进行全基因测序.测序平台为I l l u m i n aN o v a s e q ,测序文库大小为 b p,对基因组进行P E 双末端高通量测序.基因组序列组装、测序数据的质控、组装和基因注释分别采用F a s t Q C、S P A d e sv 和P r o k k av 软件.耐药基因分析使用R e s F i n d e r软件(h t t p s:/b i t b u c k e t o r g/g e n o m i c e p i d e m i o l o g y/r e s f i n d e r/s r c/m a s t e r/)筛选菌株耐药基因.参数设置为比对最小覆盖度为,核酸比对相似性最小为.多位点序列分型(m u l t i l o c u ss e q u e n c et y p i n g,ML S T)将组装好的菌株序列上传至ML S T数据库(h t t p s:/p u b m l s t o r g/b i g s d b?d bp u b m l s t_b p s e u d om a l l e i_s e q d e f),针对类鼻疽伯克霍尔德菌的a c e、g l t B、g m h D、l e p A、l i p A、n a r K、n d h个管家基因进行比对匹配,获得其所属S T型.从数据库选取我国自 至今上传的类鼻疽伯克霍尔德菌共 株 个S T型,采用B i o n u m e r i c sB N 软件进行ML S T聚类分析.系统发育进化关系分析通过美国国家生物技术 信 息 中 心(n a t i o n a lc e n t e rf o rb i o t e c h n o l o g yi n f o r m a t i o n,N C B I)网站搜索类鼻疽伯克霍尔德菌所有已测序组装的基因组序列,筛选来自全球多个国家及地区,以及海南省相近S T型代表株与本研究分离株共 条全基因组序列做系统发育进化分析.采用全基因组测序单核苷酸多态性(WG Ss i n g l en u c l e o t i d ep o l y m o r p h i s m,w g S N P)数据构建进化树,利用f a s t t r e e软件对w g S N P序列构建进化树,使用p y a n i(h t t p s:/g i t h u b c o m/w i d d o w q u i n n/p y a n i)的AN I b算法计算菌株间基因组序列的相似性(AN I).结果菌株鉴定将菌株接种于哥伦比亚血平板上,培养 h发现有菌落生长,为圆形、湿润、突起、透明或半透明小菌落,边界完整;培养d后,形成干燥的白色菌落,表面有皱褶,多呈放射状.革兰氏染色阴性,卵圆形短小杆菌,菌体两端浓染,见图.微生物质谱仪鉴定结果为类鼻疽伯克霍尔德菌.期杨红霞,等:例输入性类鼻疽的病原学诊断及溯源分析A P I N E生化反应显示,硝酸盐还原实验、精氨酸、明胶、葡萄糖、甘露醇及氧化酶等反应阳性,编码为 ,鉴定为类鼻疽伯克霍尔德菌,菌株编号S X _ B P D.图类鼻疽伯克霍尔德菌革兰染色()F i g G r a ms t a i nc h a r a c t e r i s t i c so fBp s e u d o m a l l e ii s o l a t e s()抗生素药物敏感试验情况采用微量肉汤稀释法检测菌株对常用抗生素的最小抑菌浓度(m i n i m u mi n h i b i t o r yc o n c e n t r a t i o n,M I C),包括下列抗生素:哌拉西林、哌拉西林/他唑巴坦、头孢唑啉、头孢他啶、头孢曲松、头孢吡肟、氨曲南、亚胺培南、美罗培南、阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素、环丙沙星、左氧氟沙星、复方新诺明/磺胺甲恶唑.质控菌株为大肠埃希菌AT C C .药敏试验判读结果参照美国临床实验室标准化协会(C l i n i c a lL a b o r a t o r yS t a n d a r d s I n s t i t u t e,C L S I)版及 版中关于类鼻疽伯克霍尔德菌的敏感或耐药标准进行判定 .据C L S I的判读标准,此分离株对头孢他啶、亚胺培南、美罗培南、左氧氟沙星、哌拉西林/他唑巴坦和复方新诺明均表现敏感,未产生耐药.基因测序结果基本情况S X _ B P D的基因组由连续序列组成,总长度为 b p,G C含量为 ,共检测到 个蛋白质编码序列,编码区域占比为 .ML S T分型分析类鼻疽伯克霍尔德菌有a c e、g l t B、g m h D、l e p A、l i p A、n a r K、n d h个管家基因的等位基因数为 个.向ML S T数据库提交全基因组序列,获得该菌株的S T型为 .该菌株 与 我 国 海 南 省 分 离 的株 菌(B P 和B P )为相同S T型.从数据库选取自 年至今,我国上传的 株类鼻疽伯克霍尔德菌(人源 株、环境 株及动物 株),共 个S T型,采用B N软件进行ML S T聚类分析,结果见图.注:每个圆形代表一个S T型,圆形大小代表数量的多少.红色代表此次鉴定的S T 型菌株,紫色代表ML S T型数量在 条以上,绿色代表 条以下.图 株类鼻疽伯克霍尔德菌的ML S T最小生成树F i g ML S Tm i n i m u ms p a n n i n g t r e ed i a g r a mo f s t r a i n so fB u r k h o l d e r i ap s e u d o m a l l e i中 国 人 兽 共 患 病 学 报 ,()从图可以看出在我国S T型较常见有S T (,)、S T (,)、S T (,)、S T (,)、S T (,)、S T (,)、S T (,)及S T (,),与F a n gY等 研究结论一致.该菌株的ML S T分型S T 与S T 亲缘关系最近,只有l i p A基因不同,其余几个基因都一致,两型均为从S T 分支进化而来,见表.表株类鼻疽伯克霍尔德菌的ML S T分型T a b M u l t i l o c u s s e q u e n c e t y p i n go f t h r e eBp s e u d o m a l l e is t r a i n s菌株编号管家基因的等位基因数ML S T型a c eg l t B g m h D l e p A l i p A n a r Kn d hS X _ B P D NR A HP PH 耐药基因携带情况利用R e s f i n d e软件进行耐药基因分析发现,此菌株携带内酰胺类抗生素耐药基因b l aO XA ,不携带b l aO XA ,与黄静敏等对广东省分离株的耐药基因分析结果一致.系统发育进化关系分析构建本研究分离株与遗传关系相近S T型代表株共 株类鼻疽菌的全基因组单核苷酸多态性系统发育关系(图).这些菌株分离自 年,来自中国、澳大利亚、新加坡及泰国等国家和地区,宿主包括类鼻疽病人、环境以及动物等,共 个S T型.本研究中的 株菌S N P总数为 个.从图上可见这些菌株分成大簇,S T 共株,我国分离株株,美国分离株株,红色框中可看到此次分离株S X _ B P D与海南的株S T 进化关系较近,与海南B P 的AN I相似度值为 ,与B P 的相似度为 ,与G C A_ 的相似度为 ,这株菌的亲缘关系较近,S N P总数为 个;而 与 美 国株 从 食 蟹 猴 中 分 离 的 同 为S T 的菌株进化关系较远,位于不同的分支上.注:系统进化树从左到右的信息分别表示为菌株所在分支位置、菌株名称、登录号、ML S T型、分离年份、分离地及菌株来源,左下角红色框内为聚集成簇的株S T 型菌株进化关系放大图.图基于全基因组单核苷酸多态性的类鼻疽伯克霍尔德菌系统发育关系F i g P h y l o g e n e t i cr e l a t i o n s h i po fBp s e u d o m a l l e is t r a i n sb a s e do nw h o l eg e n o m e s i n g l en u c l e o t i d ep o l y m o r p h i s m s(w g S N P s)期杨红霞,等:例输入性类鼻疽的病原学诊断及溯源分析讨论类鼻疽伯克霍尔德菌是一种人兽共患的高致病性细菌,它主要存在于热带地区的土壤和水中 ,被该菌污染的泥土和水是类鼻疽的主要传染源,农民、渔民等都是其主要易感人群,另外免疫功能低下者也容易感染类鼻疽伯克霍尔德菌.该病例患者在海南旅游期间有疫区环境暴露史,且曾患有紫癜性肾炎,也是引起此次感染发生的重要易感因素.类鼻疽发病的初期,患者可出现畏寒、发热、头痛、咳嗽、咳痰、胸痛、腹痛、尿频、尿急、尿痛、骨关节疼痛等一系列非特异性表现,极易被误诊为其他疾病 .而本例患者刚开始时出现不明原因发热,并且高烧持续不退而入院,患者入院后,医生刚开始经验性使用哌拉西林/他唑巴坦治疗,病情有所好转,但停药后病情反复、加重,待血培养、细菌鉴定结果均提示可能为类鼻疽伯克霍尔德菌时,临床专家给予静脉滴注美罗培南等进行治疗,病情便迅速得以控制,最后患者康复出院.本研究中采用微生物质谱仪、A P I N E生化鉴定卡两种方法同时对菌株进行种属的鉴定.微生物质谱仪的使用极大提高了临床对细菌的鉴定范围和能力,但是它也存在鉴定的缺陷,其中泰国伯克霍尔德菌与类鼻疽伯克氏菌的指纹图谱极其相似,易发生鉴定错误.在此次病例的病原学诊断中,布鲁克质谱仪就出现了该菌株首次鉴定错误.任何鉴定方法均有局限性,因此在怀疑鉴定结果时,可采用多种鉴定方法同时鉴定.类鼻疽伯克霍尔德菌可在环境中持久存在,不同地理区域的特定环境分布、疾病临床表现及发病率等方面均存在明显差异,从而导致类鼻疽病的流行病学研究变得复杂.多位点序列分型(ML S T)是分子流行病学研究中重要分子分型方法,可为研究细菌的遗传多样性及流行病学关联提供证据支持.自 年以 来,ML S T已广泛 应 用 于Bp s e u d o m a l l e i的分子流行病学研究.F a n gY等 对中国 株Bp s e u d o m a l l e i的ML S T进行分析发现,我 国 主 要 的S T型 为S T ()、S T ()、S T ()、S T ()、S T ()及S T (),与本研究ML S T数据相类似,当时的 个型别,目前已达到 个S T型,表明我国类鼻疽伯克霍尔德菌具有很高的遗传多样性.此次分离株的与海南株菌的S T型相同均为S T ,S T 与S T 、S T 遗传相似度较高,而S T 为我国海南省常见的基因型 .S T型的一致性为此例海南省输入山西省病例提供了分子流行病学证据.年,H o l d e n等 首次对类鼻疽伯克霍尔德菌进行了全基因组测序,揭示了类鼻疽伯克霍尔德菌的基因组特征,随后全基因组测序技术被全面运用 于 类 鼻 疽 伯 克 霍 尔 德 菌 的 研 究.年,C h e w a p r e e c h aC等 通过对 多个国家的 株类鼻疽伯克霍尔德菌全基因组进行研究,构建了全球类鼻疽伯克霍尔德菌系统发育关系,提示澳大利亚为该病原的源头,然后传播到东南亚的泰国、越南、马来西亚和新加坡等国家.本研究也采用了全基因测序方法进行分析,结果提示病例分离株与海南省S T 型 菌 株(B P 、B P 及G C A_ )的同源性较高,而与美国相同S T型菌株的相似度较低,也说明与基于个管家基因序列的ML S T分子分型方法相比,全基因组测序技术能精确有效的追溯全球各流行地区来源的类鼻疽伯克霍尔德菌株之间的潜在流行病学联系.近年来,随着旅游业的不断发展,世界范围内输入性类鼻疽病例的报道已屡见不鲜 ,已不再是单纯的热带地区流行病,它可通过疫区暴露感染而发病.这不仅给全球医疗卫生应急工作提出了新的挑战,同时也给类鼻疽诊断和研究提出了新的要求.本研究采用基因测序分析方法对分离的类鼻疽伯克霍尔德菌进行了分子溯源分析,结合流行病学调查,确定该病例为例海南省输入性类鼻疽病例.通过对该病例的研究报道,提示医疗机构及疾控部门应加强对类鼻疽的认识,了解该菌在山西省及全国的流行情况,提高诊治和防控能力.利益冲突:无引用本文格式:杨红霞,王春雨,王洋,等例输入性类鼻疽的病原学诊断及溯源分析J中国人兽共患病学报,():D O I:/j i s s n 参考文献:C h a k r a v o r t yA,H e a t hC H M e l i o i d o s i s:a nu p d a t e d r e v i e wJA u s t J G e n P r a c t,():D O I:/A J G P C h e n gA C,C u r r i eB J M e l i o i d o s i s:e p i d e m i o l o g y,p a t h o p h y s i o l o g y,a n dm a n a g e m e n tJ C l i n M i c r o b i o lR e v,():D O I:/CMR C o r e aE M e l i o i d o s i s:an e g l e c t e dt r o p i c a ld i s e a s eJ C e y l o nM e dJ,():D O I:/c m j v i L i mm a t h u r o t s a k u lD,G o l d i n gN,D a n c eD A,e ta l P r e d i c t e dg l o b a ld i s t r i b u t i o no fB u r k h o l d e r i ap s e u d o m a l l e ia n db u r d e no fm e l i o i d o s i sJN a t M i c r o b i o l,:D O I:/n m i c r o b i o l 中 国 人 兽 共 患 病 学 报 ,()Z h e n gX,X i aQ,X i aL,e t a l E n d e m i cm e l i o i d o s i s i nS o u t h e r nC h i n a:p a s t a n dp r e s e n tJ T r o pM e dI n f e c tD i s,():D O I:/t r o p i c a l m e d K a r u n a n a y a k ePM e l i o i d o s i s:c l i n i c a la s p e c t sJ C l i n M e d,():D O I:/c l i n m e d G a s s i e p I,A r m s t r o n gM,N o r t o nR,e t a l H u m a nm e l i o i d o s i sJC l i nM i c r o b i o lR e v,():e D O I:/CMR 胡继红,马筱玲,王辉,等 MA L D I T O F M S在临床微生物鉴定中的标准化操作专家共识J中华检验医学杂志,():D O I:/c m a j i s s n C l i n i c a lL a b o r a t o r yS t a n d a r d s I n s t i t u t e M m e t h o d s f o r a n t i m i c r o b i a l d i l u t i o na n dd i s ks u s c e p t i b i l i t y t e s t i n go f i n f r e q u e n t l yi s o l a t e do r f a s t i d i o u sb a c t e r i aM r de d C L S I,:C l i n i c a lL a b o r a t o r y S t a n d a r d sI n s t i t u t e M p e r f o r m a n c es t a n d a r d s f o ra n t i m i c r o b i a l s u s c e p t i b i l i t yt e s t i n gM r de d C L S I,:G o d o yD,R a n d l eG,S i m p s o nA J,e ta l M u l t i l o c u ss e q u e n c et y p i n ga n de v o l u t i o n a r yr e l a t i o n s h i p sa m o n gt h ec a u s a t i v ea g e n t so fm e l i o i d o s i sa n dg l a n d e r s,B u r k h o l d e r i ap s e u d o m a l l e ia n dB u r k h o l d e r i a m a l l e iJ JC l i n M i c r o b i o l,():D O I:/J CM F a n gY,Z h uP,L iQ,e ta l M u l t i l o c u ss e q u e n c et y p i n go f B u r k h o l d e r i ap s e u d o m a l l e is t r a i n si s o l a t e df r o m C h i n aJE p i d e m i o lI n f e c t,():D O I:/S 黄静敏,柯碧霞,何冬梅,等广东地区类鼻疽伯克霍尔德菌耐药特征及分子流行病学分析J中国公共卫生,():D O I:/z g g g w s H a l lCM,J a r a m i l l oS,J i m e n e zR,e t a l B u r k h o l d e r i ap s e u d o m a l l e i,t h e c a u s a t i v e a g e n t o fm e l i o i d o s i s,i s r a r eb u t e c o l o g i c a l l ye s t a b l i s h e da n d w i d e l yd i s p e r s e di nt h ee n v i r o n m e n ti nP u e r t oR i c oJ P L o SN e g lT r o pD i s,():e D O I:/j o u r n a l p n t d S t o n eN E,H a l lCM,B r o w n eA S,e ta l B u r k h o l d e r i ap s e u d o m a l l e ii ns o i l,U SV i r g i n I s l a n d s,J E m e r g I n f e c tD i s,():D O I:/e i d C u r r i eB J M e l i o i d o s i s:e v o l v i n gc o n c e p t si ne p i d e m i o l o g y,p a t h o g e n e s i s,a n dt r e a t m e n tJ S e m i nR e s p i rC r i tC a r eM e d,():D O I:/s 董素芳,林学姝,符生苗,等海南省 例类鼻疽的流行病学特征与临床分析J中国病原生物学杂志,():D O I:/j c j p b 中国微生物学会医学微生物学与免疫学专业委员会,重庆市微生物学会临床微生物专业委员会类鼻疽诊断与治疗专家共识J中华 传 染 病 杂 志,():D O I:/c m a j c n W a t t h a n a w o r a w i tW,R o b e r t sT,H o p k i n sJ,e ta l A m u l t i c o u n t r ys t u d yu s i n gMA L D I T O Fm a s ss p e c t r o m e t r yf o r r a p i di d e n t i f i c a t i o no fB u r k h o l d e r i ap s e u d o m a l l e iJ BMCM i c r o b i o l,():D O I:/s 刘玲丽,王旭明,郑霄,等海南类鼻疽伯克霍尔德菌致病株多位点序列分型研究 J中华地方病学杂志,():D O I:/c m a j i s s n 刘琳,孙庆惠,裴华,等海南地区类鼻疽伯克霍尔德菌的多位点序列分型J中国人兽共患病学报,():,D O I:/j i s s n G H o l d e nMT,T i t b a l lRW,P e a c o c kS J,e t a l G e n o m i c p l a s t i c i t yo f t h e c a u s a t i v e a g e n t o fm e l i o i d o s i s,B u r k h o l d e r i ap s e u d o m a l l e iJ P r o cN a t lA c a dS c iU S A,():D O I:/p n a s C h e w a p r e e c h aC,H o l d e nMT,V e h k a l aM,e ta l G l o b a la n dr e g i o n a ld i s s e m i n a t i o na n de v o l u t i o no fB u r k h o l d e r i ap s e u d o m a l l e iJ N a t M i c r o b i o l,():D O I:/n m i c r o b i o l D a nM M e l i o i d o s i s i nt r a v e l e r s:r e v i e wo f t h e l i t e r a t u r eJ JT r a v e lM e d,():D O I:/j t m 郑百慧,黎敏,鲁卫平,等例高致病性类鼻疽伯克霍尔德菌的鉴定及溯源性分析J国际检验医学杂志,():D O I:/j i s s n 方瑶,陈建国,朱叶飞,等 例输入性类鼻疽病例的溯源分析J第 三 军 医 大 学 学 报,():D O I:/j P e l e r i t oA,N u n e sA,C o e l h oS,e ta l B u r k h o l d e r i ap s e u d o m a l l e i:f i r s tc a s eo fm e l i o i d o s i si nP o r t u g a lJ I D C a s e s,:D O I:/j i d c r 收稿日期:编辑:梁小洁期杨红霞,等:例输入性类鼻疽的病原学诊