《蛋白质II》.ppt

蛋白质（蛋白质（蛋白质（蛋白质（IIII）蛋白质的结构蛋白质的结构蛋白质的结构蛋白质的结构蛋白质的共价结构蛋白质的共价结构蛋白质的共价结构蛋白质的共价结构n nn蛋白质的一级结构（蛋白质的一级结构（蛋白质的一级结构（蛋白质的一级结构（Primary structurePrimary structure）n nn定义：蛋白质的共价结构，即蛋白质分子内部定义：蛋白质的共价结构，即蛋白质分子内部定义：蛋白质的共价结构，即蛋白质分子内部定义：蛋白质的共价结构，即蛋白质分子内部定义：蛋白质的共价结构，即蛋白质分子内部定义：蛋白质的共价结构，即蛋白质分子内部通过共价键连接而形成的结构形式通过共价键连接而形成的结构形式通过共价键连接而形成的结构形式通过共价键连接而形成的结构形式通过共价键连接而形成的结构形式通过共价键连接而形成的结构形式n nn氨基酸在蛋白质内的排列顺序氨基酸在蛋白质内的排列顺序氨基酸在蛋白质内的排列顺序氨基酸在蛋白质内的排列顺序氨基酸在蛋白质内的排列顺序氨基酸在蛋白质内的排列顺序n nn二硫键的位置和连接顺序二硫键的位置和连接顺序二硫键的位置和连接顺序二硫键的位置和连接顺序二硫键的位置和连接顺序二硫键的位置和连接顺序n nn侧链基团的修饰和连接情况侧链基团的修饰和连接情况侧链基团的修饰和连接情况侧链基团的修饰和连接情况侧链基团的修饰和连接情况侧链基团的修饰和连接情况n nn是否磷酸化，磷酸化位置是否磷酸化，磷酸化位置是否磷酸化，磷酸化位置是否磷酸化，磷酸化位置是否磷酸化，磷酸化位置是否磷酸化，磷酸化位置n nn是否糖基化，糖基化位置，糖链组成是否糖基化，糖基化位置，糖链组成是否糖基化，糖基化位置，糖链组成是否糖基化，糖基化位置，糖链组成是否糖基化，糖基化位置，糖链组成是否糖基化，糖基化位置，糖链组成n nn是否酯化，酯化位置，酯的组成是否酯化，酯化位置，酯的组成是否酯化，酯化位置，酯的组成是否酯化，酯化位置，酯的组成是否酯化，酯化位置，酯的组成是否酯化，酯化位置，酯的组成n nn是否有辅基或其他分子是否有辅基或其他分子是否有辅基或其他分子是否有辅基或其他分子是否有辅基或其他分子是否有辅基或其他分子,连接方式连接方式连接方式连接方式连接方式连接方式n nn肽肽肽肽肽肽 键键键键键键n nn蛋白质是氨基酸通过脱水缩合形成肽键而形成的蛋白质是氨基酸通过脱水缩合形成肽键而形成的蛋白质是氨基酸通过脱水缩合形成肽键而形成的蛋白质是氨基酸通过脱水缩合形成肽键而形成的蛋白质是氨基酸通过脱水缩合形成肽键而形成的蛋白质是氨基酸通过脱水缩合形成肽键而形成的n nn实验证据实验证据实验证据实验证据实验证据实验证据 （1 11）蛋白质分子中游离的）蛋白质分子中游离的）蛋白质分子中游离的）蛋白质分子中游离的）蛋白质分子中游离的）蛋白质分子中游离的-氨基，氨基，氨基，氨基，氨基，氨基羧基很少。若水解，游离羧基很少。若水解，游离羧基很少。若水解，游离羧基很少。若水解，游离羧基很少。若水解，游离羧基很少。若水解，游离-氨基，氨基，氨基，氨基，氨基，氨基，-羧基以等羧基以等羧基以等羧基以等羧基以等羧基以等molmolmol数增加数增加数增加数增加数增加数增加 说明说明说明说明说明说明 氨基，氨基，氨基，氨基，氨基，氨基，-羧基参与某种结羧基参与某种结羧基参与某种结羧基参与某种结羧基参与某种结羧基参与某种结合，水解时，这种结合断开。合，水解时，这种结合断开。合，水解时，这种结合断开。合，水解时，这种结合断开。合，水解时，这种结合断开。合，水解时，这种结合断开。（2 22）人工合成肽可以被蛋白酶水解人工合成肽可以被蛋白酶水解人工合成肽可以被蛋白酶水解人工合成肽可以被蛋白酶水解人工合成肽可以被蛋白酶水解人工合成肽可以被蛋白酶水解 O OO （3 33）包含包含包含包含包含包含-C-N-H-C-N-H-C-N-H基团的化合物如双缩脲基团的化合物如双缩脲基团的化合物如双缩脲基团的化合物如双缩脲基团的化合物如双缩脲基团的化合物如双缩脲H HH2 22N-CO-NH-NHN-CO-NH-NHN-CO-NH-NH2 22能与能与能与能与能与能与硫酸铜硫酸铜硫酸铜硫酸铜硫酸铜硫酸铜-氢氧化钠溶液产生双缩脲颜色反应。天然蛋白质也存同氢氧化钠溶液产生双缩脲颜色反应。天然蛋白质也存同氢氧化钠溶液产生双缩脲颜色反应。天然蛋白质也存同氢氧化钠溶液产生双缩脲颜色反应。天然蛋白质也存同氢氧化钠溶液产生双缩脲颜色反应。天然蛋白质也存同氢氧化钠溶液产生双缩脲颜色反应。天然蛋白质也存同样反应。样反应。样反应。样反应。样反应。样反应。（4 44）人工合成的多聚）人工合成的多聚）人工合成的多聚）人工合成的多聚）人工合成的多聚）人工合成的多聚AAAAAA的的的的的的X XX射线衍射图案和红外吸收光谱与天射线衍射图案和红外吸收光谱与天射线衍射图案和红外吸收光谱与天射线衍射图案和红外吸收光谱与天射线衍射图案和红外吸收光谱与天射线衍射图案和红外吸收光谱与天然的纤维状蛋白质十分相似。然的纤维状蛋白质十分相似。然的纤维状蛋白质十分相似。然的纤维状蛋白质十分相似。然的纤维状蛋白质十分相似。然的纤维状蛋白质十分相似。（5 55）我国在世界上首次人工合成蛋白质）我国在世界上首次人工合成蛋白质）我国在世界上首次人工合成蛋白质）我国在世界上首次人工合成蛋白质）我国在世界上首次人工合成蛋白质）我国在世界上首次人工合成蛋白质-结晶牛胰岛素的成功，结晶牛胰岛素的成功，结晶牛胰岛素的成功，结晶牛胰岛素的成功，结晶牛胰岛素的成功，结晶牛胰岛素的成功，完全证明了蛋白质的肽链结构学说的正确性。完全证明了蛋白质的肽链结构学说的正确性。完全证明了蛋白质的肽链结构学说的正确性。完全证明了蛋白质的肽链结构学说的正确性。完全证明了蛋白质的肽链结构学说的正确性。完全证明了蛋白质的肽链结构学说的正确性。n nn肽键的特点肽键的特点肽键的特点肽键的特点肽键的特点肽键的特点n nn酰胺键：酰胺键：酰胺键：酰胺键：酰胺键：酰胺键：由于酰胺氮上的孤对电子与相邻羰基的共由于酰胺氮上的孤对电子与相邻羰基的共由于酰胺氮上的孤对电子与相邻羰基的共由于酰胺氮上的孤对电子与相邻羰基的共由于酰胺氮上的孤对电子与相邻羰基的共由于酰胺氮上的孤对电子与相邻羰基的共振作用，表现出高稳定性振作用，表现出高稳定性振作用，表现出高稳定性振作用，表现出高稳定性振作用，表现出高稳定性振作用，表现出高稳定性 n nnC CCN NN具具具具具具404040404040双键性质双键性质双键性质双键性质双键性质双键性质 n nnC CCO OO具具具具具具404040404040单键性质单键性质单键性质单键性质单键性质单键性质 n nn共振杂化体共振杂化体共振杂化体共振杂化体共振杂化体共振杂化体n nn亚氨基（亚氨基（亚氨基（亚氨基（亚氨基（亚氨基（NHNHNH）pH 0pH 0pH 0141414没有明显的解离和质没有明显的解离和质没有明显的解离和质没有明显的解离和质没有明显的解离和质没有明显的解离和质子化倾向子化倾向子化倾向子化倾向子化倾向子化倾向n nn肽键是一个平面，称肽平面。可以有反式顺式结构，肽键是一个平面，称肽平面。可以有反式顺式结构，肽键是一个平面，称肽平面。可以有反式顺式结构，肽键是一个平面，称肽平面。可以有反式顺式结构，肽键是一个平面，称肽平面。可以有反式顺式结构，肽键是一个平面，称肽平面。可以有反式顺式结构，但旋转能障较高，反式稳定（但旋转能障较高，反式稳定（但旋转能障较高，反式稳定（但旋转能障较高，反式稳定（但旋转能障较高，反式稳定（但旋转能障较高，反式稳定（ProProPro例外）例外）例外）例外）例外）例外）n nn蛋白质中的每一个氨基酸单位称氨基酸残基蛋白质中的每一个氨基酸单位称氨基酸残基蛋白质中的每一个氨基酸单位称氨基酸残基蛋白质中的每一个氨基酸单位称氨基酸残基蛋白质中的每一个氨基酸单位称氨基酸残基蛋白质中的每一个氨基酸单位称氨基酸残基（residueresidueresidue）n nn肽链结构的命名与书写肽链结构的命名与书写肽链结构的命名与书写肽链结构的命名与书写肽链结构的命名与书写肽链结构的命名与书写n nn根据含根据含根据含根据含根据含根据含AaAaAa的数目命名：的数目命名：的数目命名：的数目命名：的数目命名：的数目命名：*肽肽肽肽肽肽n nn从从从从从从NHNHNH2 22末端末端末端末端末端末端AaAaAa残基开始，称为：某氨基酰某氨基酰残基开始，称为：某氨基酰某氨基酰残基开始，称为：某氨基酰某氨基酰残基开始，称为：某氨基酰某氨基酰残基开始，称为：某氨基酰某氨基酰残基开始，称为：某氨基酰某氨基酰某氨基酰某氨基酰某氨基酰某氨基酰某氨基酰某氨基酰.氨基酸氨基酸氨基酸氨基酸氨基酸氨基酸n nn书写时氨基端在左边，羧基端在右边；以氨基酸的书写时氨基端在左边，羧基端在右边；以氨基酸的书写时氨基端在左边，羧基端在右边；以氨基酸的书写时氨基端在左边，羧基端在右边；以氨基酸的书写时氨基端在左边，羧基端在右边；以氨基酸的书写时氨基端在左边，羧基端在右边；以氨基酸的三字缩写或单字缩写代表对应的氨基酸；用短横线三字缩写或单字缩写代表对应的氨基酸；用短横线三字缩写或单字缩写代表对应的氨基酸；用短横线三字缩写或单字缩写代表对应的氨基酸；用短横线三字缩写或单字缩写代表对应的氨基酸；用短横线三字缩写或单字缩写代表对应的氨基酸；用短横线代表氨基酸残基之间的肽键代表氨基酸残基之间的肽键代表氨基酸残基之间的肽键代表氨基酸残基之间的肽键代表氨基酸残基之间的肽键代表氨基酸残基之间的肽键肽的物理化学性质肽的物理化学性质n nn一般物理性质一般物理性质一般物理性质一般物理性质n nn短肽晶体、熔点很高（离子晶体、偶极离子）短肽晶体、熔点很高（离子晶体、偶极离子）短肽晶体、熔点很高（离子晶体、偶极离子）短肽晶体、熔点很高（离子晶体、偶极离子）短肽晶体、熔点很高（离子晶体、偶极离子）短肽晶体、熔点很高（离子晶体、偶极离子）n nn肽的两性解离肽的两性解离肽的两性解离肽的两性解离肽的两性解离肽的两性解离n nn决定于游离氨基末端、游离羧基末端以及侧链基团决定于游离氨基末端、游离羧基末端以及侧链基团决定于游离氨基末端、游离羧基末端以及侧链基团决定于游离氨基末端、游离羧基末端以及侧链基团决定于游离氨基末端、游离羧基末端以及侧链基团决定于游离氨基末端、游离羧基末端以及侧链基团n nn肽链羧基的肽链羧基的肽链羧基的肽链羧基的肽链羧基的肽链羧基的pKpKpK 比氨基酸的大一些，而氨基的比氨基酸的大一些，而氨基的比氨基酸的大一些，而氨基的比氨基酸的大一些，而氨基的比氨基酸的大一些，而氨基的比氨基酸的大一些，而氨基的pKpKpK 则则则则则则要小一些要小一些要小一些要小一些要小一些要小一些n nn多肽等电点的计算多肽等电点的计算多肽等电点的计算多肽等电点的计算多肽等电点的计算多肽等电点的计算n nn中性肽的等电点中性肽的等电点中性肽的等电点中性肽的等电点中性肽的等电点中性肽的等电点n nn酸性肽的等电点酸性肽的等电点酸性肽的等电点酸性肽的等电点酸性肽的等电点酸性肽的等电点n nn碱性肽的等电点碱性肽的等电点碱性肽的等电点碱性肽的等电点碱性肽的等电点碱性肽的等电点n nn常见化学反应常见化学反应常见化学反应常见化学反应n nnNNN端氨基酸残基与茚三酮、端氨基酸残基与茚三酮、端氨基酸残基与茚三酮、端氨基酸残基与茚三酮、端氨基酸残基与茚三酮、端氨基酸残基与茚三酮、DNFBDNFBDNFB、PITCPITCPITC等反应等反应等反应等反应等反应等反应n nnC C C氨基酸残基成酯、成酰胺、成盐氨基酸残基成酯、成酰胺、成盐氨基酸残基成酯、成酰胺、成盐氨基酸残基成酯、成酰胺、成盐氨基酸残基成酯、成酰胺、成盐氨基酸残基成酯、成酰胺、成盐n nn侧链氨基酸的反应侧链氨基酸的反应侧链氨基酸的反应侧链氨基酸的反应侧链氨基酸的反应侧链氨基酸的反应n nn磷酸化：磷酸化：磷酸化：磷酸化：磷酸化：磷酸化：TyrTyrTyr、SerSerSer、ThrThrThrn nn酯化：酯化：酯化：酯化：酯化：酯化：SerSerSer、ThrThrThr、TyrTyrTyrn nn糖基化：糖基化：糖基化：糖基化：糖基化糖基化：SerSerSer、ThrThrThr、CysCysCysn nn双缩脲反应（双缩脲反应（双缩脲反应（双缩脲反应（双缩脲反应（双缩脲反应（BiuretBiuretBiuret reaction reaction reaction）：）：）：）：）：）：n nn多肽与多肽与多肽与多肽与多肽与多肽与CuSOCuSOCuSO4 44碱性溶液反应，生成紫红色或蓝紫色的碱性溶液反应，生成紫红色或蓝紫色的碱性溶液反应，生成紫红色或蓝紫色的碱性溶液反应，生成紫红色或蓝紫色的碱性溶液反应，生成紫红色或蓝紫色的碱性溶液反应，生成紫红色或蓝紫色的复合物，复合物，复合物，复合物，复合物，复合物，540nm540nm540nm处有最大光吸收。处有最大光吸收。处有最大光吸收。处有最大光吸收。处有最大光吸收。处有最大光吸收。n nn为肽和蛋白质特有（两个或两个以上肽键），氨基酸为肽和蛋白质特有（两个或两个以上肽键），氨基酸为肽和蛋白质特有（两个或两个以上肽键），氨基酸为肽和蛋白质特有（两个或两个以上肽键），氨基酸为肽和蛋白质特有（两个或两个以上肽键），氨基酸为肽和蛋白质特有（两个或两个以上肽键），氨基酸没有该反应。没有该反应。没有该反应。没有该反应。没有该反应。没有该反应。天然活性多肽天然活性多肽n nn定义：定义：定义：定义：n nn在生物体中，多肽最重要的存在形式是作为蛋在生物体中，多肽最重要的存在形式是作为蛋在生物体中，多肽最重要的存在形式是作为蛋在生物体中，多肽最重要的存在形式是作为蛋在生物体中，多肽最重要的存在形式是作为蛋在生物体中，多肽最重要的存在形式是作为蛋白质的亚单位，但是，也有许多分子量比较小白质的亚单位，但是，也有许多分子量比较小白质的亚单位，但是，也有许多分子量比较小白质的亚单位，但是，也有许多分子量比较小白质的亚单位，但是，也有许多分子量比较小白质的亚单位，但是，也有许多分子量比较小的多肽以游离状态存在。这类多肽通常都具有的多肽以游离状态存在。这类多肽通常都具有的多肽以游离状态存在。这类多肽通常都具有的多肽以游离状态存在。这类多肽通常都具有的多肽以游离状态存在。这类多肽通常都具有的多肽以游离状态存在。这类多肽通常都具有特殊的生理功能，常称为活性肽特殊的生理功能，常称为活性肽特殊的生理功能，常称为活性肽特殊的生理功能，常称为活性肽特殊的生理功能，常称为活性肽特殊的生理功能，常称为活性肽n nn常见活性多肽常见活性多肽常见活性多肽常见活性多肽n nn谷胱甘肽（谷胱甘肽（谷胱甘肽（谷胱甘肽（谷胱甘肽（谷胱甘肽（GSHGSHGSH）n nn -Glu-Cys-GlyGlu-Cys-GlyGlu-Cys-Glyn nn巯基缓冲剂巯基缓冲剂巯基缓冲剂巯基缓冲剂巯基缓冲剂巯基缓冲剂n nn脑啡肽（脑啡肽（脑啡肽（脑啡肽（脑啡肽（脑啡肽（enkephalinsenkephalinsenkephalins）n nn神经系统中产生的一类短肽，具有多种特殊生物学神经系统中产生的一类短肽，具有多种特殊生物学神经系统中产生的一类短肽，具有多种特殊生物学神经系统中产生的一类短肽，具有多种特殊生物学神经系统中产生的一类短肽，具有多种特殊生物学神经系统中产生的一类短肽，具有多种特殊生物学功能。功能。功能。功能。功能。功能。n nn蕈毒素、蛇毒素蕈毒素、蛇毒素蕈毒素、蛇毒素蕈毒素、蛇毒素蕈毒素、蛇毒素蕈毒素、蛇毒素n nn 鹅膏蕈碱鹅膏蕈碱鹅膏蕈碱鹅膏蕈碱鹅膏蕈碱鹅膏蕈碱 ：能与真核生物的能与真核生物的能与真核生物的能与真核生物的能与真核生物的能与真核生物的RNARNARNARNARNARNA聚合酶（聚合酶（聚合酶（聚合酶（聚合酶（聚合酶（RNA RNA RNA RNA RNA RNA polymerasepolymerasepolymerasepolymerasepolymerasepolymerase）和和和和和和牢固结合而抑制酶的活性，因牢固结合而抑制酶的活性，因牢固结合而抑制酶的活性，因牢固结合而抑制酶的活性，因牢固结合而抑制酶的活性，因牢固结合而抑制酶的活性，因而使而使而使而使而使而使RNARNARNARNARNARNA的合成不能进行，但不影响原核生物的的合成不能进行，但不影响原核生物的的合成不能进行，但不影响原核生物的的合成不能进行，但不影响原核生物的的合成不能进行，但不影响原核生物的的合成不能进行，但不影响原核生物的RNARNARNARNARNARNA合成。合成。合成。合成。合成。合成。n nn短肽类抗生素短肽类抗生素短肽类抗生素短肽类抗生素短肽类抗生素短肽类抗生素蛋白质一级结构测定蛋白质一级结构测定n nn氨基酸顺序测定的一般步骤氨基酸顺序测定的一般步骤氨基酸顺序测定的一般步骤氨基酸顺序测定的一般步骤n nn要求：要求：要求：要求：要求：要求：n nn样品均一样品均一样品均一样品均一样品均一样品均一n nn纯度纯度纯度纯度纯度纯度97%97%97%以上以上以上以上以上以上n nn已知分子量已知分子量已知分子量已知分子量已知分子量已知分子量 （误差小于（误差小于（误差小于（误差小于（误差小于（误差小于10%10%10%）n nn一般步骤：一般步骤：一般步骤：一般步骤：一般步骤：一般步骤：n nn测定蛋白质分子中多肽链的数目测定蛋白质分子中多肽链的数目测定蛋白质分子中多肽链的数目测定蛋白质分子中多肽链的数目测定蛋白质分子中多肽链的数目测定蛋白质分子中多肽链的数目 n nn蛋白质末端残基（蛋白质末端残基（蛋白质末端残基（蛋白质末端残基（蛋白质末端残基（蛋白质末端残基（NHNHNH2 22末端、末端、末端、末端、末端、末端、COOHCOOHCOOH末端）末端）末端）末端）末端）末端）molmolmol数数数数数数n nn蛋白质的分子量蛋白质的分子量蛋白质的分子量蛋白质的分子量蛋白质的分子量蛋白质的分子量 n nn拆分蛋白质分子的多肽链拆分蛋白质分子的多肽链拆分蛋白质分子的多肽链拆分蛋白质分子的多肽链拆分蛋白质分子的多肽链拆分蛋白质分子的多肽链n nn测定多肽链的测定多肽链的测定多肽链的测定多肽链的测定多肽链的测定多肽链的AaAaAa组成组成组成组成组成组成n nn分析多肽链的分析多肽链的分析多肽链的分析多肽链的分析多肽链的分析多肽链的NNN末端和末端和末端和末端和末端和末端和C C C末端残基末端残基末端残基末端残基末端残基末端残基 n nn断裂多肽链内的二硫键断裂多肽链内的二硫键断裂多肽链内的二硫键断裂多肽链内的二硫键断裂多肽链内的二硫键断裂多肽链内的二硫键n nn过甲酸氧化过甲酸氧化过甲酸氧化过甲酸氧化过甲酸氧化过甲酸氧化n nn巯基化合物还原巯基化合物还原巯基化合物还原巯基化合物还原巯基化合物还原巯基化合物还原n nn多肽链断裂成肽段多肽链断裂成肽段多肽链断裂成肽段多肽链断裂成肽段多肽链断裂成肽段多肽链断裂成肽段n nn酶解法酶解法酶解法酶解法酶解法酶解法 n nn化学法化学法化学法化学法化学法化学法n nn测定各个肽段的测定各个肽段的测定各个肽段的测定各个肽段的测定各个肽段的测定各个肽段的AaAaAa顺序顺序顺序顺序顺序顺序n nn EdmanEdmanEdman降解法降解法降解法降解法降解法降解法n nn确定肽段在多肽链中的次序确定肽段在多肽链中的次序确定肽段在多肽链中的次序确定肽段在多肽链中的次序确定肽段在多肽链中的次序确定肽段在多肽链中的次序 n nn确定原多肽链中二硫键的位置确定原多肽链中二硫键的位置确定原多肽链中二硫键的位置确定原多肽链中二硫键的位置确定原多肽链中二硫键的位置确定原多肽链中二硫键的位置n nn多肽多肽多肽多肽多肽多肽N N N末端分析方法末端分析方法末端分析方法末端分析方法末端分析方法末端分析方法n nn二硝基氟苯（二硝基氟苯（二硝基氟苯（二硝基氟苯（二硝基氟苯（二硝基氟苯（DNFBDNFBDNFB or or or FDNBFDNBFDNB法），法），法），法法），法），SangeSangeSange试剂试剂试剂试剂试剂试剂 n nn丹磺酰氯（丹磺酰氯（丹磺酰氯（丹磺酰氯（丹磺酰氯（丹磺酰氯（DNSDNSDNS）法）法）法）法）法）法 n nn原理：与原理：与原理：与原理：与原理：与原理：与DNFBDNFBDNFB相同相同相同相同相同相同n nn优点：优点：优点：优点：优点：优点：DNSDNSDNS具强烈的荧光，具强烈的荧光，具强烈的荧光，具强烈的荧光，具强烈的荧光，具强烈的荧光，检测灵敏度可以达到检测灵敏度可以达到检测灵敏度可以达到检测灵敏度可以达到检测灵敏度可以达到检测灵敏度可以达到1 11 101010-9-9-9molmolmol比比比比比比DNFBDNFBDNFB法高法高法高法高法高法高100100100倍倍倍倍倍倍n nn苯异硫氰酸酯（苯异硫氰酸酯（苯异硫氰酸酯（苯异硫氰酸酯（苯异硫氰酸酯（苯异硫氰酸酯（PITCPITCPITC）法）法）法）法）法）法n nn氨肽酶法氨肽酶法氨肽酶法氨肽酶法氨肽酶法氨肽酶法 ：n nn氨肽酶：氨肽酶：氨肽酶：氨肽酶：氨肽酶：氨肽酶：可以从多肽链的可以从多肽链的可以从多肽链的可以从多肽链的可以从多肽链的可以从多肽链的N NN端端端端端端逐个逐个逐个逐个逐个逐个 降解氨基酸的降解氨基酸的降解氨基酸的降解氨基酸的降解氨基酸的降解氨基酸的肽链外切肽链外切肽链外切肽链外切肽链外切肽链外切酶酶酶酶酶酶n nn亮氨酸氨肽酶（亮氨酸氨肽酶（亮氨酸氨肽酶（亮氨酸氨肽酶（亮氨酸氨肽酶（亮氨酸氨肽酶（LAPLAPLAP）：水解以：水解以：水解以：水解以：水解以：水解以LeuLeuLeu为为为为为为N NN末端的肽键速度为最末端的肽键速度为最末端的肽键速度为最末端的肽键速度为最末端的肽键速度为最末端的肽键速度为最大大大大大大 n nn多肽多肽多肽多肽多肽多肽C C C末端分析方法末端分析方法末端分析方法末端分析方法末端分析方法末端分析方法n nn肼解法肼解法肼解法肼解法肼解法肼解法n nn蛋白质蛋白质蛋白质蛋白质蛋白质蛋白质or or or 多肽无水肼多肽无水肼多肽无水肼多肽无水肼多肽无水肼多肽无水肼,C,C,C末端末端末端末端末端末端AaAaAa以游离形式存在，其他以游离形式存在，其他以游离形式存在，其他以游离形式存在，其他以游离形式存在，其他以游离形式存在，其他AaAaAa转变为相应的转变为相应的转变为相应的转变为相应的转变为相应的转变为相应的AaAaAa酰肼化物加入苯甲醛可以使酰肼化物加入苯甲醛可以使酰肼化物加入苯甲醛可以使酰肼化物加入苯甲醛可以使酰肼化物加入苯甲醛可以使酰肼化物加入苯甲醛可以使AaAaAa酰肼化酰肼化酰肼化酰肼化酰肼化酰肼化物转变成二苯基衍生物沉淀，物转变成二苯基衍生物沉淀，物转变成二苯基衍生物沉淀，物转变成二苯基衍生物沉淀，物转变成二苯基衍生物沉淀，物转变成二苯基衍生物沉淀，C CC末端末端末端末端末端末端AaAaAa则在溶液中。则在溶液中。则在溶液中。则在溶液中。则在溶液中。则在溶液中。n nn缺点：缺点：缺点：缺点：缺点：缺点：GlnGlnGln、AspAspAsp、CysCysCys破坏不易测出，破坏不易测出，破坏不易测出，破坏不易测出，破坏不易测出，破坏不易测出，ArgArgArg OrnOrnOrnn nn还原法：还原法：还原法：还原法：还原法：还原法：n nn肽链肽链肽链肽链肽链肽链C CC末端末端末端末端末端末端AaAaAa +硼氢化锂硼氢化锂硼氢化锂硼氢化锂硼氢化锂硼氢化锂 氨基醇氨基醇氨基醇氨基醇氨基醇氨基醇 n nn羧肽酶法羧肽酶法羧肽酶法羧肽酶法羧肽酶法羧肽酶法n nn最有效，最常用的测最有效，最常用的测最有效，最常用的测最有效，最常用的测最有效，最常用的测最有效，最常用的测C CC端殘基方法端殘基方法端殘基方法端殘基方法端殘基方法端殘基方法n nn羧肽酶：专一地从肽链的羧肽酶：专一地从肽链的羧肽酶：专一地从肽链的羧肽酶：专一地从肽链的羧肽酶：专一地从肽链的羧肽酶：专一地从肽链的C CC端逐个降解，释放出游离端逐个降解，释放出游离端逐个降解，释放出游离端逐个降解，释放出游离端逐个降解，释放出游离端逐个降解，释放出游离AaAaAa肽肽肽肽肽肽链外切酶链外切酶链外切酶链外切酶链外切酶链外切酶 n nn多肽链的部分断裂和肽段的拼接多肽链的部分断裂和肽段的拼接多肽链的部分断裂和肽段的拼接多肽链的部分断裂和肽段的拼接多肽链的部分断裂和肽段的拼接多肽链的部分断裂和肽段的拼接 n nn常用蛋白酶（内切酶）常用蛋白酶（内切酶）常用蛋白酶（内切酶）常用蛋白酶（内切酶）常用蛋白酶（内切酶）常用蛋白酶（内切酶）n nn胰蛋白酶胰蛋白酶胰蛋白酶胰蛋白酶胰蛋白酶胰蛋白酶（T TTrypsinrypsinrypsin）：n nn专一性强、只断裂专一性强、只断裂专一性强、只断裂专一性强、只断裂专一性强、只断裂专一性强、只断裂LysLysLys、ArgArgArgArgArgArg的羧基参与形成的肽键的羧基参与形成的肽键的羧基参与形成的肽键的羧基参与形成的肽键的羧基参与形成的肽键的羧基参与形成的肽键n nn可以通过修饰增加或减少酶切位点可以通过修饰增加或减少酶切位点可以通过修饰增加或减少酶切位点可以通过修饰增加或减少酶切位点可以通过修饰增加或减少酶切位点可以通过修饰增加或减少酶切位点n nn糜蛋白酶（糜蛋白酶（糜蛋白酶（糜蛋白酶（糜蛋白酶（糜蛋白酶（C CChymotrypsinhymotrypsinhymotrypsin ）n nn专一性专一性专一性专一性专一性专一性 胰蛋白酶胰蛋白酶胰蛋白酶胰蛋白酶胰蛋白酶胰蛋白酶 ，断裂断裂断裂断裂断裂断裂PhePhePhe,TrpTrpTrp,TyrTyrTyr等疏水芳香等疏水芳香等疏水芳香等疏水芳香等疏水芳香等疏水芳香AaAaAa的的的的的的羧基所形成的肽键羧基所形成的肽键羧基所形成的肽键羧基所形成的肽键羧基所形成的肽键羧基所形成的肽键n nn断裂键邻近的基团若为碱性：裂解能力断裂键邻近的基团若为碱性：裂解能力断裂键邻近的基团若为碱性：裂解能力断裂键邻近的基团若为碱性：裂解能力断裂键邻近的基团若为碱性：裂解能力断裂键邻近的基团若为碱性：裂解能力，酸性：裂解，酸性：裂解，酸性：裂解，酸性：裂解，酸性：裂解，酸性：裂解能力能力能力能力能力能力 n nn嗜热菌蛋白酶（嗜热菌蛋白酶（嗜热菌蛋白酶（嗜热菌蛋白酶（嗜热菌蛋白酶（嗜热菌蛋白酶（thermolysinthermolysinthermolysin ）n nn含含含含含含Zn.CaZn.CaZn.Ca，ZnZnZn是是是是是是活力必需的，活力必需的，活力必需的，活力必需的，活力必需的，活力必需的，CaCaCa与与与与与与热稳定有关热稳定有关热稳定有关热稳定有关热稳定有关热稳定有关n nn专一性差，断裂较短的多肽链专一性差，断裂较短的多肽链专一性差，断裂较短的多肽链专一性差，断裂较短的多肽链专一性差，断裂较短的多肽链专一性差，断裂较短的多肽链ororor大肽段最适大肽段最适大肽段最适大肽段最适大肽段最适大肽段最适PH8PH8PH89 99 n nn胃蛋白酶（胃蛋白酶（胃蛋白酶（胃蛋白酶（胃蛋白酶（胃蛋白酶（P PPepsinepsinepsin）n nn专一性专一性专一性专一性专一性专一性 糜蛋白酶糜蛋白酶糜蛋白酶糜蛋白酶糜蛋白酶糜蛋白酶 ，要求被断裂键两侧的殘基都是，要求被断裂键两侧的殘基都是，要求被断裂键两侧的殘基都是，要求被断裂键两侧的殘基都是，要求被断裂键两侧的殘基都是，要求被断裂键两侧的殘基都是疏水性疏水性疏水性疏水性疏水性疏水性AaAaAan nn最适最适最适最适最适最适PH2PH2PH2，可用来确定二硫键的位置，可用来确定二硫键的位置，可用来确定二硫键的位置，可用来确定二硫键的位置，可用来确定二硫键的位置，可用来确定二硫键的位置n nn金黄色葡萄球菌蛋白酶（金黄色葡萄球菌蛋白酶（金黄色葡萄球菌蛋白酶（金黄色葡萄球菌蛋白酶（金黄色葡萄球菌蛋白酶（金黄色葡萄球菌蛋白酶（GluGluGlu蛋白酶）蛋白酶）蛋白酶）蛋白酶）蛋白酶）蛋白酶）n nn磷酸缓冲液磷酸缓冲液磷酸缓冲液磷酸缓冲液磷酸缓冲液磷酸缓冲液PH7.8PH7.8PH7.8，能在，能在，能在，能在，能在，能在GluGluGlu殘基和殘基和殘基和殘基和殘基和殘基和AspAspAsp殘基的羧基侧殘基的羧基侧殘基的羧基侧殘基的羧基侧殘基的羧基侧殘基的羧基侧断裂肽键断裂肽键断裂肽键断裂肽键断裂肽键断裂肽键n nnNHNHNH4 44HCOHCOHCO3 33缓冲液缓冲液缓冲液缓冲液缓冲液缓冲液PH7.8PH7.8PH7.8，或或或或或或醋酸铵缓冲液醋酸铵缓冲液醋酸铵缓冲液醋酸铵缓冲液醋酸铵缓冲液醋酸铵缓冲液PH4.0PH4.0PH4.0中，中，中，中，中，中，只只只只只只能断裂能断裂能断裂能断裂能断裂能断裂GluGluGlu殘基的羧基侧肽键殘基的羧基侧肽键殘基的羧基侧肽键殘基的羧基侧肽键殘基的羧基侧肽键殘基的羧基侧肽键n nn梭状芽孢杆菌蛋白酶（梭状芽孢杆菌蛋白酶（梭状芽孢杆菌蛋白酶（梭状芽孢杆菌蛋白酶（梭状芽孢杆菌蛋白酶（梭状芽孢杆菌蛋白酶（ArgArgArg蛋白酶）蛋白酶）蛋白酶）蛋白酶）蛋白酶）蛋白酶）n nn专门裂解专门裂解专门裂解专门裂解专门裂解专门裂解ArgArgArg殘基殘基殘基殘基殘基殘基的的的的的的COOHCOOHCOOH所形成的肽键，对不溶性所形成的肽键，对不溶性所形成的肽键，对不溶性所形成的肽键，对不溶性所形成的肽键，对不溶性所形成的肽键，对不溶性蛋白质的蛋白质的蛋白质的蛋白质的蛋白质的蛋白质的长时间裂解长时间裂解长时间裂解长时间裂解长时间裂解长时间裂解很有效很有效很有效很有效很有效很有效 n nn肽段的拼接次序确定肽段的拼接次序确定肽段的拼接次序确定肽段的拼接次序确定肽段的拼接次序确定肽段的拼接次序确定n nn利用不同的方法获得多种肽段组合利用不同的方法获得多种肽段组合利用不同的方法获得多种肽段组合利用不同的方法获得多种肽段组合利用不同的方法获得多种肽段组合利用不同的方法获得多种肽段组合n nn断裂点位置差异越大越好断裂点位置差异越大越好断裂点位置差异越大越好断裂点位置差异越大越好断裂点位置差异越大越好断裂点位置差异越大越好n nn断裂点不宜过多或过少断裂点不宜过多或过少断裂点不宜过多或过少断裂点不宜过多或过少断裂点不宜过多或过少断裂点不宜过多或过少n nn确定确定确定确定确定确定N NN、C CC末端的末端的末端的末端的末端的末端的AaAaAa残基残基残基残基残基残基n nn确定各个肽段的确定各个肽段的确定各个肽段的确定各个肽段的确定各个肽段的确定各个肽段的AaAaAa顺序顺序顺序顺序顺序顺序n nn根据不同的肽段组合内根据不同的肽段组合内根据不同的肽段组合内根据不同的肽段组合内根据不同的肽段组合内根据不同的肽段组合内AaAaAa顺序的部分重叠，确定肽段的拼顺序的部分重叠，确定肽段的拼顺序的部分重叠，确定肽段的拼顺序的部分重叠，确定肽段的拼顺序的部分重叠，确定肽段的拼顺序的部分重叠，确定肽段的拼接次序接次序接次序接次序接次序接次序n nn二硫键的位置确定二硫键的位置确定二硫键的位置确定二硫键的位置确定二硫键的位置确定二硫键的位置确定n nn胃蛋白酶水解胃蛋白酶水解胃蛋白酶水解胃蛋白酶水解胃蛋白酶水解胃蛋白酶水解n nn过甲酸打开二硫键过甲酸打开二硫键过甲酸打开二硫键过甲酸打开二硫键过甲酸打开二硫键过甲酸打开二硫键n nn双向电泳法分析。双向电泳法分析。双向电泳法分析。双向电泳法分析。双向电泳法分析。双向电泳法分析。n nn蛋白质的一级结构和生物功能的关系蛋白质的一级结构和生物功能的关系蛋白质的一级结构和生物功能的关系蛋白质的一级结构和生物功能的关系n nn同源蛋白质的种属差异与生物进化同源蛋白质的种属差异与生物进化同源蛋白质的种属差异与生物进化同源蛋白质的种属差异与生物进化同源蛋白质的种属差异与生物进化同源蛋白质的种属差异与生物进化n nn基本概念：基本概念：基本概念：基本概念：基本概念：基本概念：n nn同源蛋白质：在不同的有机体中实现同一功能的蛋白质同源蛋白质：在不同的有机体中实现同一功能的蛋白质同源蛋白质：在不同的有机体中实现同一功能的蛋白质同源蛋白质：在不同的有机体中实现同一功能的蛋白质同源蛋白质：在不同的有机体中实现同一功能的蛋白质同源蛋白质：在不同的有机体中实现同一功能的蛋白质n nn顺序同源：同源蛋白质的顺序同源：同源蛋白质的顺序同源：同源蛋白质的顺序同源：同源蛋白质的顺序同源：同源蛋白质的顺序同源：同源蛋白质的AaAaAa顺序的相似性。顺序的相似性。顺序的相似性。顺序的相似性。顺序的相似性。顺序的相似性。n nn不变残基：同源蛋白质不变残基：同源蛋白质不变残基：同源蛋白质不变残基：同源蛋白质不变残基：同源蛋白质不变残基：同源蛋白质AaAaAa顺序中对所有的种属来说都相同顺序中对所有的种属来说都相同顺序中对所有的种属来说都相同顺序中对所有的种属来说都相同顺序中对所有的种属来说都相同顺序中对所有的种属来说都相同的的的的的的AaAaAa残基残基残基残基残基残基n nn可变残基：不同种属有相当大的变化的可变残基：不同种属有相当大的变化的可变残基：不同种属有相当大的变化的可变残基：不同种属有相当大的变化的可变残基：不同种属有相当大的变化的可变残基：不同种属有相当大的变化的AaAaAa残基残基残基残基残基残基n nn生物学意义生物学意义生物学意义生物学意义生物学意义生物学意义n nn生物进化的标记，生物进化的标记，生物进化的标记，生物进化的标记，生物进化的标记，生物进化的标记，e.g.e.g.e.g.细胞色素细胞色素细胞色素细胞色素细胞色素细胞色素C CCn nn遗传变异的分子基础，遗传变异的分子基础，遗传变异的分子基础，遗传变异的分子基础，遗传变异的分子基础，遗传变异的分子基础，e.g.e.g.e.g.镰刀型贫血病镰刀型贫血病镰刀型贫血病镰刀型贫血病镰刀型贫血病镰刀型贫血病n nn一级结构的改变与蛋白质的活性变化一级结构的改变与蛋白质的活性变化一级结构的改变与蛋白质的活性变化一级结构的改变与蛋白质的活性变化一级结构的改变与蛋白质的活性变化一级结构的改变与蛋白质的活性变化n nn局部断裂与蛋白质的激活局部断裂与蛋白质的激活局部断裂与蛋白质的激活局部断裂与蛋白质的激活局部断裂与蛋白质的激活局部断裂与蛋白质的激活n nn胰岛素原的激活胰岛素原的激活胰岛素原的激活胰岛素原的激活胰岛素原的激活胰岛素原的激活n nn前胰岛素原前胰岛素原前胰岛素原前胰岛素原前胰岛素原前胰岛素原(N(N(N末端多一段肽链末端多一段肽链末端多一段肽链末端多一段肽链末端多一段肽链末端多一段肽链,信号肽引导新生的多肽信号肽引导新生的多肽信号肽引导新生的多肽信号肽引导新生的多肽信号肽引导新生的多肽信号肽引导新生的多肽链进入内质网链进入内质网链进入内质网链进入内质网链进入内质网链进入内质网)胰岛素原胰岛素原胰岛素原胰岛素原胰岛素原胰岛素原(信号肽被切信号肽被切信号肽被切信号肽被切信号肽被切信号肽被切)()()(GolgiGolgiGolgi体体体体体体)胰岛素胰岛素胰岛素胰岛素胰岛素胰岛素(肽酶催化胰岛素的二个特定肽键断裂肽酶催化胰岛素的二个特定肽键断裂肽酶催化胰岛素的二个特定肽键断裂肽酶催化胰岛素的二个特定肽键断裂肽酶催化胰岛素的二个特定肽键断裂肽酶催化胰岛素的二个特定肽键断裂)n nn血液凝固的机制血液凝固的机制血液凝固的机制血液凝固的机制血液凝固的机制血液凝固的机制n nn131313种凝血因子构成凝血系统种凝血因子构成凝血系统种凝血因子构成凝血系统种凝血因子构成凝血系统种凝血因子构成凝血系统种凝血因子构成凝血系统n nn血浆纤维蛋白原在凝血酶的激活作用下转变为不溶性血浆纤维蛋白原在凝血酶的激活作用下转变为不溶性血浆