微生物的实验室培养经典版.ppt

微生物微生物的类群的类群原生生物：原生生物：原核生物原核生物:真菌真菌:病毒病毒:如酵母菌如酵母菌单细胞的动植物单细胞的动植物如草履虫、单细胞藻类等如草履虫、单细胞藻类等微生物包含了除微生物包含了除植物界植物界和和动物界动物界以外的所有生物以外的所有生物无细胞结构无细胞结构真核细胞真核细胞细菌、蓝藻细菌、蓝藻原核细胞原核细胞1.课题课题1 微生物的实验室培养微生物的实验室培养1.提供营养和条件提供营养和条件2.防止污染防止污染2.一一.培养基培养基：微生物生存的环境和营养物质微生物生存的环境和营养物质1.基本成分基本成分：思考：微生物思考：微生物“吃吃”什么？什么？碳源、氮源、水、无机盐碳源、氮源、水、无机盐碳源碳源无机碳源：无机碳源：有机碳源：有机碳源：COCO2 2、COCO3 32 2-、HCOHCO3 3-牛肉膏、蛋白胨等牛肉膏、蛋白胨等自养微生物自养微生物异养微生物异养微生物氮源氮源无机氮源：无机氮源：有机氮源：有机氮源：NHNH4 4、NONO3 3-牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等注：含注：含CHONCHON的的有机物有机物为为异异养型微生物提供养型微生物提供碳源碳源、氮源氮源、能源能源概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。配制出供其生长繁殖的营养基质。3.一一.培养基培养基：微生物生存的环境和营养物质微生物生存的环境和营养物质1.基本成分基本成分：碳源、氮源、水、无机盐碳源、氮源、水、无机盐2.特殊营养特殊营养：维生素、碱基等维生素、碱基等（牛肉膏、酵母膏、蛋白胨中含有）（牛肉膏、酵母膏、蛋白胨中含有）3.pH、氧气的需求、氧气的需求：4.种类种类：固体培养基固体培养基液体培养基液体培养基有有无无 凝固剂琼脂凝固剂琼脂分离分离 鉴定鉴定工业工业 生产生产化学成分：化学成分：物理性质：物理性质：天然培养基天然培养基 合成培养基合成培养基4.标标准准培养基类型培养基类型配制特点配制特点主要应用主要应用物物理理性性质质固体培养基固体培养基加入琼脂较多加入琼脂较多微生物的分离、计微生物的分离、计数等数等半固体培养半固体培养基基加入琼脂较少加入琼脂较少观察微生物运动、观察微生物运动、鉴定菌种、保藏菌鉴定菌种、保藏菌种等种等液体培养基液体培养基不加入琼脂不加入琼脂工业生产，连续培工业生产，连续培养养化化学学组组成成合成培养基合成培养基由已知成分配制而成，由已知成分配制而成，培养基成分明确培养基成分明确菌种分类、鉴定菌种分类、鉴定天然培养基天然培养基由天然成分配制而成，由天然成分配制而成，培养基成分不明确培养基成分不明确工业生产工业生产目目的的用用途途鉴别培养基鉴别培养基添加某种指示剂或化学药添加某种指示剂或化学药品品鉴别不同种类的微鉴别不同种类的微生物生物选择培养基选择培养基添加（或缺少）某种化学添加（或缺少）某种化学物质物质 培养、分离出特定培养、分离出特定的微生物的微生物5.牛肉膏蛋白胨培养基牛肉膏蛋白胨培养基 是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基。是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基。1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的配方牛肉膏蛋白胨培养基的配方H2O 定容至定容至1000mlNacl 5g蛋白胨蛋白胨 10g牛肉膏牛肉膏 5g琼脂琼脂20.0g分析营养构成？分析营养构成？6.5.配制原则配制原则目的明确：目的明确：营养全面、浓度适宜、比例恰当营养全面、浓度适宜、比例恰当适宜的适宜的pH值：值：有机碳源有机碳源异养型：异养型：根据微生物的根据微生物的种类、培养目的种类、培养目的选择原料选择原料自养型：自养型：不加碳源不加碳源加入缓冲剂加入缓冲剂细菌偏碱，真菌偏酸细菌偏碱，真菌偏酸（CO2碳源）碳源）生产生产 科研科研7.巴氏消毒法巴氏消毒法耐高温需保持干燥耐高温需保持干燥的的 物品，物品，160170 12小时小时接种环、接种针等接种环、接种针等 金属用具金属用具7075、30min 80、15min100、56min消毒消毒灭菌灭菌定义定义方法方法较为较为温和温和理化方法理化方法杀死杀死部分有害菌体部分有害菌体（不不包括芽孢、孢子包括芽孢、孢子强烈强烈的理化方法，的理化方法，杀死杀死所有微生物所有微生物煮沸消毒法煮沸消毒法化学药剂化学药剂紫外线紫外线灼烧灭菌灼烧灭菌干热灭菌干热灭菌酒精、氯气、石炭酸等酒精、氯气、石炭酸等高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌培养基，培养基，100KPa、121、1530min二二.无菌技术：无菌技术：防止外来杂菌的污染防止外来杂菌的污染1.消毒与灭菌：消毒与灭菌：8.请你判断以下材料或用具是否需要消请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。方法。（1）培养细菌用的培养基与培养皿培养细菌用的培养基与培养皿（2）玻棒、试管、烧瓶和吸管玻棒、试管、烧瓶和吸管（3）实验操作者的双手实验操作者的双手9.练习练习:说出无菌技术及相应的具体方法说出无菌技术及相应的具体方法工作台工作台操作者的手、衣着操作者的手、衣着培养基培养基培养皿培养皿玻棒、玻棒、试管试管接种环接种环牛奶牛奶无菌水无菌水饮用水饮用水纱布纱布涂布器涂布器10.2.无菌范围：无菌范围：实验操作空间消毒实验操作空间消毒操作者的手、衣着消毒操作者的手、衣着消毒实验用具灭菌实验用具灭菌实验操作过程实验操作过程二二.无菌技术无菌技术：防止外来杂菌的污染防止外来杂菌的污染1.消毒与灭菌：消毒与灭菌：酒精灯旁操作酒精灯旁操作超净工作台超净工作台11.单个单个或少数菌体或少数菌体2.特征：特征：大小、形状、光泽度、大小、形状、光泽度、颜色、透明度等颜色、透明度等。3.功能：功能：1.定义：定义：三三.菌落菌落鉴定菌种鉴定菌种的重要依据的重要依据固体固体培养基上培养基上大量繁殖大量繁殖子细胞群体子细胞群体12.1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的配方牛肉膏蛋白胨培养基的配方H2O 定容至定容至1000mlNacl 5g蛋白胨蛋白胨 10g牛肉膏牛肉膏 5g琼脂琼脂20.0g四四.大肠杆菌的纯化培养：大肠杆菌的纯化培养：制备牛肉膏蛋白胨固体培养基制备牛肉膏蛋白胨固体培养基1.计算：计算：培养基用量培养基用量依配方计算各成分的用量依配方计算各成分的用量2.称量：称量：3.溶化：溶化：牛肉膏黏稠，用称量纸称取牛肉膏黏稠，用称量纸称取牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加盖牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加盖牛肉膏、称量纸牛肉膏、称量纸、少量水加热溶解、少量水加热溶解 取纸取纸蛋白胨、蛋白胨、NaCl 琼脂琼脂 补水定容补水定容4.调调pH、分装、封口：、分装、封口：5.灭菌：灭菌：6.倒平板：倒平板：培养基、培养皿培养基、培养皿分散成单个细胞分散成单个细胞,形成单个菌落形成单个菌落13.倒平板倒平板约约50防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染灼烧灭菌，灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基防止瓶口的微生物污染培养基14.四四.大肠杆菌的纯化培养：大肠杆菌的纯化培养：制备牛肉膏蛋白胨固体培养基制备牛肉膏蛋白胨固体培养基纯化大肠杆菌：纯化大肠杆菌：平板划线法：平板划线法：菌种菌种划划3个平板个平板1个不划线个不划线1.接种：接种：接种环接种环防止划破培养基防止划破培养基（重复实验）（重复实验）（空白对照）（空白对照）15.为什么在操作的第一步以及每次划线之为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？仍然需要灼烧接种环吗？为什么？操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物环上可能存在的微生物污染培养物杀死上次残留的菌种，保证使下一次划线杀死上次残留的菌种，保证使下一次划线时，菌种直接来源于上次划线的末端，从时，菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。种的数目逐渐减少，以便得到菌落。及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。污染环境和感染操作者。16.6支试管，分别加入支试管，分别加入9ml无菌水无菌水1ml1011ml1021ml1031ml1041ml1051ml106稀释涂布平板法：稀释涂布平板法：a.梯度稀释菌液：梯度稀释菌液：菌液菌液微量微量 移液移液器器17.稀释涂布平板法：稀释涂布平板法：a.梯度稀释菌液：梯度稀释菌液：b.涂布平板：涂布平板：不超过不超过0.1ml各梯度分别涂布各梯度分别涂布3个平板个平板1个不涂布作空白对照个不涂布作空白对照滴滴灼灼试试涂涂稀稀释释103倍倍稀稀释释104倍倍稀稀释释105倍倍18.平板划线法：平板划线法：四四.大肠杆菌的纯化培养：大肠杆菌的纯化培养：制备牛肉膏蛋白胨固体培养基制备牛肉膏蛋白胨固体培养基纯化大肠杆菌：纯化大肠杆菌：1.接种：接种：稀释涂布平板法：稀释涂布平板法：2.培养：培养：将将接种后接种后的培养基和一个的培养基和一个未接种未接种的培养基的培养基放入放入37恒温箱中培养恒温箱中培养12h24h后，后，观察并记录观察并记录19.五五.菌种的保藏：菌种的保藏：1.临时保藏：临时保藏：试管固体斜面培养基上试管固体斜面培养基上42.长期保存：长期保存：菌种易被污染、变异菌种易被污染、变异甘油管藏甘油管藏1ml甘油甘油1ml菌液菌液2020.一一.培养基培养基：微生物生存的环境和营养物质微生物生存的环境和营养物质1.基本成分基本成分：碳源、氮源、水、无机盐碳源、氮源、水、无机盐2.特殊营养特殊营养：维生素、碱基等维生素、碱基等（牛肉膏、酵母膏、蛋白胨中含有）（牛肉膏、酵母膏、蛋白胨中含有）3.pH、氧气的需求、氧气的需求：4.种类种类：固体培养基固体培养基液体培养基液体培养基有有无无 凝固剂琼脂凝固剂琼脂分离分离 鉴定鉴定工业工业 生产生产化学成分：化学成分：物理性质：物理性质：天然培养基天然培养基 合成培养基合成培养基21.一一.培养基培养基：1.基本成分：基本成分：2.特殊营养特殊营养：3.pH、氧气的需求、氧气的需求4.种类种类5.配制原则配制原则二二.无菌技术无菌技术 2.无菌范围无菌范围3.无菌种类及方法无菌种类及方法 1.无菌概念无菌概念 课题课题1 微生物的实验室培养微生物的实验室培养22.