实验五--植物组织总糖和还原糖含量的测定.ppt

11实验五植物组织总糖和还原糖含量的测实验五植物组织总糖和还原糖含量的测定（定（3,5-二硝基水杨酸法）二硝基水杨酸法）2021/3/29 星期一星期一12 （1）掌握还原糖和总糖测定的基本原理；掌握还原糖和总糖测定的基本原理；（2）学学习习用用3,5-二二硝硝基基水水杨杨酸酸法法测测定定还还原原糖糖的的方法。方法。一、实验目的一、实验目的2021/3/29 星期一星期一2二、实验原理二、实验原理 还还原原糖糖是是指指含含有有自自由由醛醛基基或或酮酮基基的的糖糖类类，单单糖糖都都是是还还原原糖糖，双双糖糖和和多多糖糖不不一一定定是是还还原原糖糖，其其中中乳乳糖糖和和麦麦芽芽糖糖是是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。利利用用糖糖的的溶溶解解度度不不同同，可可将将植植物物样样品品中中的的单单糖糖、双双糖糖和和多多糖糖分分别别提提取取出出来来，对对没没有有还还原原性性的的双双糖糖和和多多糖糖，可可用用酸水解法酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定。使其降解成有还原性的单糖进行测定。还还原原糖糖的的测测定定是是糖糖定定量量测测定定的的基基本本方方法法，其其基基本本原原理理是是用用比比色色法法对对还还原原性性的的单单糖糖进进行行测测定定，再再分分别别求求出出样样品品中中还原糖还原糖和和总糖总糖的含量。的含量。2021/3/29 星期一星期一3二、实验原理二、实验原理 在在碱碱性性条条件件下下，还还原原糖糖与与3,5-二二硝硝基基水水杨杨酸酸（DNS）共共热热，3,5-二二硝硝基基水水杨杨酸酸被被还还原原为为3-氨氨基基-5-硝硝基基水水杨杨酸酸（棕棕红红色色物物质质），还还原原糖糖则则被被氧氧化化成成糖糖酸酸及及其其他他产产物物。在在一一定定范范围围内内，还还原原糖糖的的量量与与棕棕红红色色物物质质颜颜色色深深浅浅的的程程度度成成一一定定的的比比例例关关系系，在在540nm波波长长下下测测定定棕棕红红色色物物质质的的吸吸光光值值，查查对对标标准准曲曲线线并并计计算算，就就可可以以分分别别求求出出样样品品中中还还原原糖糖和总糖的含量。和总糖的含量。NaOHNaOH黄色黄色棕红色棕红色加热加热2021/3/29 星期一星期一45三、仪器和试剂三、仪器和试剂1、仪器、仪器：电子天平、恒温水浴锅、电子天平、恒温水浴锅、分光光度计分光光度计（722型）。型）。2、试剂、试剂：2mg/mL葡萄糖标准液、蒸馏水、葡萄糖标准液、蒸馏水、3,5-二硝基水杨二硝基水杨酸、酸、6mol/L盐酸、盐酸、碘碘-碘化钾碘化钾、6mol/L氢氧化钠氢氧化钠2021/3/29 星期一星期一56四、实验步骤四、实验步骤1、葡萄糖标准曲线的绘制、葡萄糖标准曲线的绘制 取取6支试管，按表加入试剂。支试管，按表加入试剂。以葡萄糖含量（以葡萄糖含量（mg/mL）为横坐标，光吸收值（为横坐标，光吸收值（OD540）为纵坐标，绘制标准曲线。为纵坐标，绘制标准曲线。2021/3/29 星期一星期一67四、实验步骤四、实验步骤2、样品中还原糖的提取、样品中还原糖的提取 （1）称取）称取5g烟草叶片放入研钵中，加入烟草叶片放入研钵中，加入5mL蒸馏水研蒸馏水研磨成匀浆液。将匀浆液全部转移至锥形瓶里。磨成匀浆液。将匀浆液全部转移至锥形瓶里。（2）再用）再用10mL蒸馏水冲洗研钵，并将冲洗液全部转蒸馏水冲洗研钵，并将冲洗液全部转移至锥形瓶里。移至锥形瓶里。（3）往锥形瓶里加入）往锥形瓶里加入20mL蒸馏水，摇匀，于蒸馏水，摇匀，于50保保温温20min，不时搅拌。，不时搅拌。（4）用漏斗过滤，将滤液全部收集到烧杯中，最终用）用漏斗过滤，将滤液全部收集到烧杯中，最终用50mL容量瓶加蒸馏水定容至容量瓶加蒸馏水定容至50mL，即为，即为还原糖提取液还原糖提取液。2021/3/29 星期一星期一78四、实验步骤四、实验步骤3、样品中总糖的提取、样品中总糖的提取 （1）称取）称取0.5g烟草叶片放入研钵中，加入烟草叶片放入研钵中，加入5mL蒸馏水蒸馏水研磨成匀浆液。将匀浆液全部转移至锥形瓶里。研磨成匀浆液。将匀浆液全部转移至锥形瓶里。（2）再用）再用10mL蒸馏水冲洗研钵，并将冲洗液全部转蒸馏水冲洗研钵，并将冲洗液全部转移至锥形瓶里。移至锥形瓶里。（3）往锥形瓶里加入）往锥形瓶里加入10mL 6mol/L盐酸，摇匀，于沸盐酸，摇匀，于沸水浴中加热水浴中加热30min，不时搅拌。，不时搅拌。（4）取出）取出1-2滴置于白瓷板上，加滴置于白瓷板上，加1滴碘滴碘-碘化钾溶液碘化钾溶液检测水解是否完全。如水解完全，则不呈现蓝色。检测水解是否完全。如水解完全，则不呈现蓝色。2021/3/29 星期一星期一89四、实验步骤四、实验步骤3、样品中总糖的提取、样品中总糖的提取 （5）水解完毕后，用漏斗过滤，将滤液全部收集到烧）水解完毕后，用漏斗过滤，将滤液全部收集到烧杯中。冷却至室温后加入杯中。冷却至室温后加入6mL 6mol/L氢氧化钠溶液。氢氧化钠溶液。（6）最终用）最终用100mL容量瓶加蒸馏水定容至容量瓶加蒸馏水定容至100mL，即，即为为总糖提取液总糖提取液。2021/3/29 星期一星期一910四、实验步骤四、实验步骤4、样品中含糖量的测定、样品中含糖量的测定 取取5支试管，按表加入试剂。支试管，按表加入试剂。2021/3/29 星期一星期一1011五、实验结果与分析五、实验结果与分析 按下式计算出样品中还原糖和总糖的百分含量。按下式计算出样品中还原糖和总糖的百分含量。式式中中，C为为还还原原糖糖和和总总糖糖提提取取液液的的浓浓度度，mg/mL；V为还原糖和总糖提取液总体积为还原糖和总糖提取液总体积，mL；m为样品质量，为样品质量，g。2021/3/29 星期一星期一11