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中国中医药图书情报杂志2023 年 11 月第 47 卷第 6 期 29 【引文格式】潘梓珊,王维强,冯敏瑶,等.基于GEO基因芯片联合网络药理学及分子对接探讨补肾健脾方治疗2型糖尿病作用机制J.中国中医药图书情报杂志,2023,47(6):29-36.信息技术与中医药 基于GEO基因芯片联合网络药理学及分子对接探讨补肾健脾方治疗2型糖尿病作用机制潘梓珊1，2，王维强 1，冯敏瑶1，2，李东玲1，2，刘峰 21.广州中医药大学，广东 广州 510405；2.广东祈福医院，广东 广州 511495摘要：目的基于GEO基因芯片、网络药理学及分子对接技术探讨补肾健脾方治疗2型糖尿病（T2D）的作用机制。方法通过SymMap、TCMID、TCMSP和TCM-ID数据库获取补肾健脾方有效成分及对应靶点，通过GeneCards、OMIM数据库获取T2D相关靶点，采用Cytoscape3.7.2软件构建蛋白相互作用（PPI）网络。利用GEO数据库筛选T2DM核心靶点基因并进行基因富集分析；通过STRING数据库筛选核心靶点，并进行GO功能和KEGG通路富集分析。最后运用AutoDock软件对有效成分与核心靶点进行分子对接验证。结果共筛选出补肾健脾方有效成分1 230种，靶点594个，主要活性成分包括-谷甾醇、山嵛酸酯、槲皮素等。预测得到补肾健脾方治疗T2D潜在作用靶点9个，包括VEGFA、IL1B、COL1A1、CXCL8等。GO功能及KEGG通路富集分析结果显示，补肾健脾方治疗T2D主要涉及糖尿病并发症中的AGE-RAGE信号通路、类风湿关节炎、非酒精性脂肪肝等通路。分子对接结果表明，有效成分-谷甾醇、槲皮素与VEGFA、IL1B、COL1A1等核心靶点有较强结合能力。结论补肾健脾方中多种活性成分可能通过AGE-RAGE、类风湿关节炎等信号通路，调控VEGFA、IL1B、COL1A1等靶点治疗T2D。关键词：补肾健脾方；2型糖尿病；GEO基因芯片；网络药理学；分子对接中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：2095-5707(2023)06-0029-08DOI：10.3969/j.issn.2095-5707.202303004开放科学（资源服务）标识码（OSID）：Exploration on the Mechanism of Bushen Jianpi Prescription in the Treatment of T2D Based on GEO Gene Chip,Network Pharmacology and Molecular DockingPAN Zishan1,2,WANG Weiqiang1,FENG Minyao1,2,LI Dongling1,2,LIU Feng2（1.Guangzhou University of Chinese Medicine,Guangzhou 510405,China;2.Clifford Hospital,Guangzhou 511495,China）Abstract:Objective To explore the mechanism of Bushen Jianpi Prescription in the treatment of type 2 diabetes(T2D)and its complications based on GEO genes chip,network pharmacology and molecular docking technology.Methods Through SymMap,TCMID,TCMSP and TCM-ID databases,the effective components and corresponding targets of Bushen Jianpi Prescription were screened.The disease targets of T2D were obtained from GeneCards and OMIM databases,and the PPI network was constructed through Cytoscape 3.7.2 software.T2D core target genes were screened through GEO database and gene set enrichment was analyzed.Then STRING database was used to filter core targets,and GO analysis and KEGG pathway analysis were conducted.Finally,AutoDock 基金项目：广东省中医药局项目（20191414）；广州市卫生健康科技项目（20202A011031）通讯作者：刘峰，E-mail：Chinese Journal of Library and Information Science for Traditional Chinese MedicineNov.2023 Vol.47 No.6 30 software was used for molecular docking to verify the prediction results.Results In this study,a total of 1 230 kinds of active components and 594 drug targets of Bushen Jianpi Prescription were screened out,and the key active components included beta-sitosterol,docosanoate and quercetin,etc.9 potential targets for the treatment of T2D were predicted,including VEGFA,IL1B,COL1A1,CXCL8,etc.The results of GO and KEGG pathway enrichment analysis showed that it mainly involved AGE-RAGE signaling pathway in diabetic complications,rheumatoid arthritis,non-alcoholic fatty liver disease and other pathways in diabetic complications.The results of molecular docking showed that the active components of beta-sitosterol and quercetin could form strong docking with core targets such as IL1B,VEGFA and COL1A1.Conclusion Many key active components in Bushen Jianpi Prescription may regulate VEGFA,COL1A1,IL1B and other core targets to treat T2D through AGE-RAGE signaling pathway in diabetic complications,rheumatoid arthritis and other signal pathways.Keywords:Bushen Jianpi Prescription;type 2 diabetes;GEO gene chip;network pharmacology;molecular docking2型糖尿病（type 2 diabetes，T2D），即非胰岛素依赖型糖尿病，是糖尿病最常见的形式，占糖尿病总人数的90%，其病理生理学特征为胰岛素抵抗伴胰岛分泌功能缺陷，导致机体调控葡萄糖能力下降1。长期高血糖状态及代谢功能异常会引起多器质性功能障碍及系统靶向性损伤，并多伴有心血管疾病、肾病、视网膜病变和周围神经病变等2。糖尿病可归属中医学“消渴”范畴。现代医家多认为消渴主要病机为阴虚燥热，其根本在脾肾。糖尿病中晚期患者多见脾肾亏损，水湿不化，阻遏气机，气机不畅，发为痰、湿、瘀血，日久成毒3，导致糖尿病并发症产生，故临床治疗主张从脾肾论治，以“补肾健脾，活血化瘀”为法。补肾健脾方为广东祈福医院内分泌科协定方，在临证治疗中取得了较好疗效。该方由黄芪、淫羊藿、山药、丹参、鹿角胶、沙苑子、制何首乌、半夏、黄精、葛根、熟大黄组成。以补气健脾升阳之黄芪、温补肾阳之淫羊藿为君药；鹿角胶增益温补肾阳之力，山药增益健脾益气之功，再兼以丹参活血祛瘀，为臣药；沙苑子补肾固精，黄精、制何首乌滋补肾阴以助阳，取“阴中求阳”之意，熟大黄助丹参活血化瘀，为佐药；葛根滋阴生津、升阳止渴，并加强益气健脾功效，半夏燥湿化痰、消痞散结，为使药。全方阴阳双补、补泻兼施，共奏健脾补肾、活血化瘀之功。前期实验及临床研究均表明，补肾健脾方在抑制胰岛细胞凋亡、改善胰岛素抵抗、调节糖脂代谢及骨代谢、改善血液流变学及降低糖尿病肾病尿微量白蛋白等方面具有良好疗效4-6。本研究通过网络药理学、分子对接及生物信息分析等方法，明确补肾健脾方治疗T2D的活性成分、作用靶点、信号通路等，阐述其分子作用机制，为后续相关研究提供理论依据。1资料与方法资料与方法1.1有效成分及靶点获取利用 TCM-ID（http:/tcm.cz3.nus.edu.sg/group/tcm-id/tcmid.asp）、SymMap（http:/www.symmap.org/）、TCMID（http:/119.3.41.228:8000/tcmid/）和TCMSP（https:/tcmsp- GeneCards（https:/www.genecards.org/）、OMIM（https:/omim.org/）数 据 库 以“Type 2 diabetes”为检索词，得到T2D相关靶点，分别整合、去重，再输入 UniProt 数据库（https:/www.uniprot.org/）匹配人类基因名称及蛋白。此外，在GEO数据库（https:/www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/）下载与T2D相关的转录组芯片数据集GSE29221（包括T2D患者12例、正常人12名），利用R软件的R包对芯片数据进行背景校正、归一化和表达值计算，并利用limma包计算T2D患者与正常人的差异表达基因，以P Value0.05、|log2FC|1.00 为筛选差异表达基因的标准。利用heatmap包对筛选得到的差异表达基因进行热图绘制及聚类分析，并将差异分析后数据的 P Value 进行-log10转换，根据log2FC将-log10P Value分为3组，即上调差异表达基因组、下调差异表达基因组和无统计学意义差异表达基因组，将处理后数据导入R软件绘制火山图。中国中医药图书情报杂志2023 年 11 月第 47 卷第 6 期 31 1.3基因集富集分析借助cluster profiler R包对上述T2D数据集中的基因集进行富集分析，选择“hallmark gene sets”进行对比，探索T2D基因集与正常基因集的生物功能差异。1.4交集靶点筛选及蛋白相互作用网络构建运用R语言及Perl语言将药物作用靶点、T2D疾病靶点和 T2D 差异表达基因取交集，将结果输入Venny2.1软件绘制韦恩图。同时导入STRING数据库（https:/string-db.org/）进行分析，将蛋白种类设置为“Homo sapiens”，Settings 设 为“higest confidence（0.400）”，隐藏无关系的靶点，其他参数保持默认设置。利用Cytoscape3.7.2软件绘制交集靶点蛋白相互作用（PPI）网络，并对结果进行拓扑分析以筛选核心靶点。1.5GO功能和KEGG通路富集分析应用R语言的cluster profiler R包及Perl语言对所得基因进行GO分析，包括细胞组分（CC）、分子功能（MF）和生物过程（BP）。应用cluster profiler R包进行KEGG通路富集分析，同时利用pathview包绘制相应信号通路图。1.6分子对接验证在 PubChem 数据库（https:/pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/）下载补肾健脾方组方中药有效成分的结构式，使用Chem3D软件对其进行3D优化。同时在PDB数据库（http:/www.rcsb.org/）下载核心蛋白结构，使用PyMOL软件对蛋白质进行去水、去磷酸根等操作，利用AutoDock Tools 1.5.6软件将有效成分与核心蛋白基因文件转换为pdbqt格式并寻找活性口袋，最后运行Vina进行分子对接，计算分子对接结合能并展示分子对接结果，Discovery Studio 2019寻找对接位点并计算柔性结合的LibDock Score，将输出的分子对接结果导入PyMOL软件以显示分子对接结构。结合能100表明两者可稳定对接。2结果结果2.1有效成分和对应靶点通过数据库检索、筛选后获得补肾健脾方组方药物有效成分1 230种，其中黄芪167种、淫羊藿158种、山药145种、丹参330种、鹿角胶2种、沙苑子144种、何首乌9种、黄精67种、半夏179种、葛根61种、大黄150种。去重后得到有效成分对应靶点594个，其中黄芪162个、淫羊藿105个、山药51个、丹参139个、鹿角胶2个、沙苑子145个、何首乌5个、黄精63个、半 夏 99 个、葛 根 240 个、大 黄 47 个。利 用Cytoscape3.7.2软件构建中药-有效成分-作用靶点网络，见图1。图中共有1 836个节点，2 479条边，对网络进行拓扑分析，得到核心有效成分，前10位成分依次为-谷甾醇（beta-sitosterol）、山嵛酸酯（docosanoate）、槲皮素（quercetin）、胡萝卜苷（daucosterol）、-谷甾醇（gamma-sitosterol）、山柰酚（kaempferol）、亚麻酸（linolenic acid）、棕榈酸（palmitic acid）、硬脂酸（stearic acid）、琥珀酸（succinic acid）。注：蓝绿色八边形代表复方，黄色圆形代表中药，蓝色倒三角形代表有效成分，绿色菱形代表靶点图1中药-有效成分-作用靶点网络Chinese Journal of Library and Information Science for Traditional Chinese MedicineNov.2023 Vol.47 No.6 32 2.2疾病靶点通过GeneCards、OMIM数据库检索，分别得到T2D靶点5 365、175个，经整理、去重后得到疾病靶点5 483个。2.3差异表达基因筛选经数据背景校正及标准化后，样本分布见图2A。根据P Value-5.0 kcal/mol外，-谷甾醇和槲皮素与核心靶点蛋白的对接结合能均低于-5.0 kcal/mol，表明均可实现稳定对注：A.Venn图；B.Degree值核心靶点PPI网络；C.Closeness值核心靶点PPI网络；D.Betweenness值核心靶点PPI网络图3补肾健脾方治疗T2D靶点基因网络图4补肾健脾方治疗T2D交集靶点GO功能富集分析ABCDChinese Journal of Library and Information Science for Traditional Chinese MedicineNov.2023 Vol.47 No.6 34 接。其中-谷甾醇、槲皮素均能与IL1B、VEGFA、COL1A1进行半柔性对接；VEGFA与-谷甾醇、槲皮素及COL1A1与-谷甾醇形成的对接模型LibDock Score均大于100。综合考虑其均方根偏差（RMSD）、结合能及LibDock Score，-谷甾醇与VEGFA对接结构最稳定，其次是槲皮素与VEGFA。分子对接展示见图6，对接结果见表1。3讨论讨论T2D患病率逐年增加，大多数T2D患者伴有胰岛素抵抗和胰岛素分泌缺陷。若T2D控制不佳，患者会同时出现多种并发症。许多危险因素和生物学过程已被证实影响T2D发生发展，如高糖、高胰岛素血症、胰岛素抵抗、肥胖、炎症等。目前临床干预T2D的主要策略是改变生活方式、西药治疗。尽管降糖药及胰岛素能快速控制血糖，但大多数药物存在胃肠道反应、过敏、水肿等不良反应。中医治疗T2D及其并发症具有一定优势。越来越多研究表明，中药及其活性成分具有抗糖尿病作用，且不良反应少。补肾健脾方治疗T2D疗效显著，但其作用机制尚不清楚。故本研究通过GEO芯片、网络药理学和分子对接技术探索其治疗T2D的潜在作用机制。补肾健脾方中-谷甾醇、槲皮素与核心靶点具有良好的结合能力，提示其可能是治疗T2D的关键成分。其中-谷甾醇具有抗糖尿病、降血脂、抗氧化、抗癌、保肝作用，可通过激活脂肪细胞中的胰岛素受体和葡萄糖转运蛋白4（GLUT-4）控制血糖和改善胰岛素抵抗，还可通过下调IKK/NF-B和JNK信号通路改善脂肪组织炎症反应，从而改善胰岛素抵抗7-8。槲皮素是一种植物类黄酮，具有降糖、降脂、抗氧化、抗炎、抗癌、肝保护等活性，可抑制晚期糖基化终末产物（AGEs）表达9。其作用机制与二甲双胍类似，可通过刺激骨骼肌和脂肪组织GLUT-4及AMPK表达抑制肝细胞葡萄糖-6-磷酸酶活力，从而调控葡萄糖稳态，提高胰岛素敏感性，改善胰岛细胞功能10-12。本研究发现，VEGFA、COL1A1、IL1B等核心靶点基因在补肾健脾方治疗T2D中起重要作用。血管生成是糖尿病微血管并发症进展的不利因素，血管内皮生长因子A（VEGFA）可促进内皮细胞增殖、分化、迁移及诱导血管舒张、增加血管通透性。VEGFA是胰岛血管发育的主要调节因子，血管化的延迟可能是胰图5补肾健脾方治疗T2D交集靶点KEGG通路富集分析注：A1A3.IL1B-谷甾醇；B1B3.IL1B-槲皮素；C1C3.VEGFA-谷甾醇；D1D3.VEGFA-槲皮素；E1E3.COL1A1-谷甾醇；F1F3.COL1A1-槲皮素图6补肾健脾方主要有效成分与核心靶点分子对接示意表1补肾健脾方主要有效成分与核心靶点分子对接结果靶点（结构域）IL1B（6Y8M）VEGFA（6D3O）COL1A1（5OU8）成分-谷甾醇山嵛酸酯槲皮素-谷甾醇山嵛酸酯槲皮素-谷甾醇山嵛酸酯槲皮素结合能/（kcal/mol）-6.0-3.2-5.7-7.1-3.8-7.1-7.5-4.0-6.4RMSD1.7882.2941.3291.2801.8790.6682.0863.1052.225LibDock Score47.200 691.257 773.885 0106.148 0121.732 0105.700 0101.546 0100.253 087.380 9中国中医药图书情报杂志2023 年 11 月第 47 卷第 6 期 35 岛细胞VEGFA水平降低的功能结果。在胰岛脉管系统方面，胰腺VEGFA表达对胰岛微血管网络的形成、胰岛细胞功能等至关重要13。有研究表明，VEGFA水平升高与微血管疾病风险增加有关，是糖尿病视网膜病变、糖尿病黄斑水肿和糖尿病肾病等糖尿病并发症的关键因素14-15。型胶原蛋白1链（COL1A1）在骨骼、角膜、真皮和肌腱中含量丰富。研究认为，COL1A1与糖尿病肾病、糖尿病视网膜病变等微血管病变密切相关，可能通过调节细胞迁移介导新生血管形成16。Patel等17研究发现，胰高血糖素样肽-1受体激动剂可通过抑制COL1A1表达增加超氧化物歧化酶和过氧化氢酶活性，抑制炎症、纤维化，从而改善肾组织紊乱，发挥肾保护作用。白细胞介素（IL）1B是一种多功能细胞因子，对细胞防御和组织修复至关重要，在免疫、炎症过程中发挥重要作用，被认为是T2D发病的重要因素。研究发现，糖尿病视网膜病变患者外周血单核细胞炎症小体成分IL1B基因和蛋白表达均升高，同时伴VEGF水平升高18。也有研究发现，IL1B在溃疡和已治愈的糖尿病足溃疡患者中表达明显高于无溃疡和未愈合的糖尿病足溃疡患者，可用于评估和调节糖尿病足溃疡进展19。GO分析结果显示，补肾健脾方治疗T2D及其并发症可能与氧化应激、炎症、血管生成、代谢、免疫、细胞凋亡等有关。KEGG分析显示，补肾健脾方可能通过介导AGE-RAGE信号通路、类风湿关节炎、非酒精性脂肪肝、阿米巴病、膀胱癌等途径治疗T2D。大量研究表明，持续高血糖状态下，过量葡萄糖进入内皮细胞，导致大量活性氧和AGEs生成，进一步刺激AGE-RAGE信号通路并激活下游NF-B、PI3K/AKT和 MAPK 信号通路9，产生炎症因子（IL1B、IL6、IL8、TNF-）、生长因子（转化生长因子-、VEGF）和促纤维化因子（COL1A1、细胞间黏附分子-1、血管细胞黏附分子-1）等，导致炎症细胞募集、氧化应激、纤维化、细胞凋亡、血管生成、血管通透性增加及内皮细胞功能障碍20，从而加剧糖尿病诱发的血管损伤21及肾脏等器官结构变化和功能丧失22-23，导致一系列并发症产生。糖尿病小鼠暴露于铅砷后，调节视网膜血管的AGEs/RAGE调控轴发生变化，并加重糖尿病视网膜病变，推测AGEs/RAGE调控轴可经CCM3及下游因子VEGFR2发挥对糖尿病视网膜病变的影响24。汪四海等25发现，丹蛭降糖胶囊可能通过下调AGEs/RAGE水平和肾脏转化生长因子-1、Smad3基因表达，延缓糖尿病大鼠肾脏纤维化，保护肾脏。类风湿关节炎是一种慢性自身免疫性关节疾病，持续炎症会影响骨骼重塑并导致进行性骨破坏。多项研究表明，参与类风湿关节炎的炎症介质与T2D相关26。有研 究 认 为，TGM2、NF-B、p38MAPK、TNF 和CEBPA是类风湿关节炎和T2D共享分子途径中的中枢调节因子27。几乎所有的T2D差异表达基因在类风湿关节炎和T2D中均上调，表明炎症因子在2种疾病中相互作用28，本研究同样验证这一点。本研究应用GEO芯片差异分析联合网络药理学及分子对接技术对补肾健脾方治疗T2D的关键成分、作用靶点、信号传导途径、生物学功能及可能作用机制进行初步探讨。结果显示，VEGFA、COL1A1、IL1B等核心靶点基因与AGE-RAGE、类风湿关节炎信号通路之间存在显著相关性。因此我们推测，补肾健脾方可能参与氧化应激、炎症、血管生成、代谢、免疫、细胞凋亡等生物进程，通过AGE-RAGE、类风湿关节炎等信号通路调控VEGFA、COL1A1、IL1B等关键靶点治疗T2D。本研究验证了补肾健脾方可能通过多成分、多靶点、多通路发挥对T2D的调控作用，可为后续实验研究验证及阐明中医药治疗T2D的科学内涵提供参考。但由于中药复方成分复杂，仍有部分成分-靶点-通路信息缺乏，因此，还需要更高质量的生物信息学、网络药理学信息平台提供支撑，以及更多的动物实验和临床研究给予验证和支持。参考文献：1 中华医学会糖尿病学分会.中国2型糖尿病防治指南(2020年版)(上)J.中国实用内科杂志,2021,41(8):668-695.2 Wu Y L,Ding,Y P,Tanaka,Y,et al.Risk factors contributing to type 2 diabetes and recent advances in the treatment and preventionJ.International Journal of Medical Sciences,2014,11(11):1185-1200.3 马昕瑞,杨宇峰,曲超,等.基于“脂毒”假说探讨中医消渴及脂代谢重编程机制研究J.辽宁中医药大学学报,2022,24(12):180-183.4 刘峰,罗冬强,王珍.补肾健脾方对db/db小鼠糖代谢及骨代谢的影响J.广州中医药大学学报,2022,39(10):2368-2373.5 谢政权,潘娟,季兵.基于miRNA探讨补肾健脾方治疗糖尿病肾病的机制研究J.临床和实验医学杂志,2021,20(15):1636-1639.6 徐泽民,刘峰.补肾健脾方配合常规西药治疗2型糖尿病的临床疗效及对血糖和血液流变学的影响J.实用中西医结合临床,2016,16(2):19-20.7 Jayaraman S,Devarajan N,Rajagopal P,et al.Beta-sitosterol circumvents obesity induced inflammation and insulin resistance by down-regulating IKK beta/NF-kappa B and JNK signaling pathway in adipocytes of type 2 diabetic ratsJ.Molecules,2021,26(7):2101.Chinese Journal of Library and Information Science for Traditional Chinese MedicineNov.2023 Vol.47 No.6 36 8 Ponnulakshmi R,Shyamaladevi B,Vijayalakshmi P,et al.In silico and in vivo analysis to identify the antidiabetic activity of beta sitosterol in adipose tissue of high fat diet and sucrose induced type-2 diabetic experimental ratsJ.Toxicology Mechanisms and Methods,2019,29(4):276-290.9 Wu X Q,Zhang D D,Wang Y N,et al.AGE/RAGE in diabetic kidney disease and ageing kidneyJ.Free Radical Biology and Medicine,2021,171:260-271.10 Eid H M,Nachar A,Thong F,et al.The molecular basis of the antidiabetic action of quercetin in cultured skeletal muscle cells and hepatocytesJ.Pharmacognosy Magazine,2015,11(41):74-81.11 Wang W,Wang C,Ding X Q,et al.Quercetin and allopurinol reduce liver thioredoxin-interacting protein to alleviate inflammation and lipid accumulation in diabetic ratsJ.British Journal of Pharmacology,2013,169(6):1352-1371.12 Yin B,Bi Y M,Fan G J,et al.Molecular mechanism of the effect of Huanglian Jiedu Decoction on type 2 diabetes mellitus based on network pharmacology and molecular dockingJ.Journal of Diabetes Research,2020,2020:5273914.13 Chittezhath M,Gunaseelan D,Zheng X F,et al.Islet macrophages are associated with islet vascular remodeling an compensatory hyperinsulinemia during diabetesJ.American Journal of Physiology-Endocrinology and Metabolism,2019,317(6):E1108-E1120.14 An W R,Huang Y Q,Chen S Q,et al.Mechanisms of Rhizoma Coptidis against type 2 diabetes mellitus explored by network pharmacology combined with molecular docking and experimental validationJ.Scientific Reports,2021,11(1):20849.15 Jeganathan V S E.Anti-angiogenesis drugs in diabetic retinopathyJ.Current Pharmaceutical Biotechnology,2011,12(3):369-372.16 Gu C F,Lhamo T S,Zou C,et al.Comprehensive analysis of angiogenesis-related genes and pathways in early diabetic retinopathyJ.Bmc Medical Genomics,2020,13(1):142.17 Patel V J,Joharapurkar A A,Kshirsagar,S G,et al.Coagonist of glucagon-like peptide-1 and glucagon receptors ameliorates kidney injury in murine models of obesity and diabetes mellitusJ.World Journal of Diabetes,2018,9(6):80-91.18 Wooff Y,Man S M,Aggio-Bruce R,et al.IL-1 family members mediate cell death,inflammation and angiogenesis in retinal degenerative diseasesJ.Frontiers in Immunology,2019,10:1618.19 Gan M S,Yang B,Fang D L,et al.IL-1B can serve as a healing process and is a critical regulator of diabetic foot ulcerJ.Annals of Translational Medicine,2022,10(4):179.20 Bhattamisra S K,Koh H M,Lim S Y,et al.Molecular and biochemical pathways of catalpol in alleviating diabetes mellitus and its complicationsJ.Biomolecules,2021,11(2):323.21 Liu J C,Liu S H,Yu Z M,et al.Uncovering the gene regulatory network of type 2 diabetes through multi-omic data integrationJ.Journal of Translational Medicine,2022,20(1):604.22 Darwish N M,Elnahas Y M,AlQahtany F S.Diabetes induced renal complications by leukocyte activation of nuclear factor kappa-B and its regulated genes expressionJ.Saudi Journal of Biological Sciences,2021,28(1):541-549.23 Sanajou D,Haghjo A G,Argani H,et al.AGE-RAGE axis blockade in diabetic nephropathy:Current status and future directionsJ.European Journal of Pharmacology,2018,833:158-164.24 柯志柱,梁旭,李雨蒙,等.AGE/RAGE调控轴在铅砷联合暴露糖尿病模型中的作用J.现代预防医学,2022,49(23):4272-4276,4299.25 汪四海,方朝晖,倪英群,等.丹蛭降糖胶囊对糖尿病肾病大鼠肾脏TGF-1/Smad3 信号通路和 AGEs/RAGE 水平的影响J.中华中医药杂志,2021,36(4):2019-2024.26 Nicolau J,Lequerre T,Bacquet H,et al.Rheumatoid arthritis,insulin resistance,and diabetesJ.Joint Bone Spine,2017,84(4):411-416.27 Niu X Y,Lu C,Xiao C,et al.The crosstalk of pathways involved in immune response maybe the shared molecular basis of rheumatoid arthritis and type 2 diabetesJ.PLoS One,2015,10(8):e0134990.28 Lin Y X,Li J J,Wu D,et al.Identification of hub genes in type 2 diabetes mellitus using bioinformatics analysisJ.Diabetes Metabolic Syndrome and Obesity-Targets and Therapy,2020,13:1793-1801.（收稿日期：2023-03-01）（修回日期：2023-04-05；编辑：郑宏）