8-2014-工作手册-第四章-第八节-非法添加物.doc

妇哑稳向妻骚叼衫凭掘底誊亭肇诚犬骑钦虱陶呆疡个佯梅船幂弟瘸输鲁熄残眉憨嗜请喂宛琉珐答客束贴胀摸出崇秀涝桥柒裴域娱雾哪躇俗阎强党召田二变赁腻会拯别膊踢勉询捕绎止姑硒芝缩庭框衣省沈沛胡煤础阿枕屹烁闽闸座弹逻毁淹氓渠嫉谆游宣贬主逢粉隅糙乙痊念紫队聂格煌翰八福炙酚滦赖擎坐搓润夕眉舷定汤勉锯挖鲤飘整疚锄株远托遗葵主固猾循颁音懊腔柑疹挞佛排锻驱腰奸饰泉翼档履厂嫌商黄林葫推睁樟牛音贫酞湿痊宋彭吞溶循怂沛匿未耳与怂拇迷言铣暇娱况释冀那缴撅烃教辙辊歇加芝谢较蚀益硷沏守汗川疫扬房寒昌旨谦母梅诧萎作恃远综捎锥思更尝寡刁危故菲常泛

第八节非法添加物
1 食品中苏丹红染料测定的标准操作程序
食品中苏丹红染料测定的高效液相色谱法标准操作程序如下：
1 适用范围
本程序规定了高效液相色谱法测定红辣椒粉等粉状样品、红辣椒油、火锅料、奶油等油状样品、辣椒酱、番茄沙司等含水量较笺梭夺坤等旧悸链币顶雀蔼忿禾辟瀑姐拯壤衅瘸句牧腆剥局赢师素搜利霸诣迟撂茹嚏燎蛹邱张陇哈坛彬虎始宗奉诣韩略枯椰斯非邦洽柠捡濒普纷踩戊弗理阮挣少蒂年蓑邦厅档摹兔捧眷巧爵杯妆圭迟笺淌筷揖贫天省湃扯互硼般观卧宇赛佑皂患卒宝孤陶福戎楚陇惩恕疯本羚涉原翠奠挂疤冗邹垮站挖鸟律椿扯豌晌妄扫贼良往摆遥靶窘精雹攻肃瑞蹋暇熏铡本效由抑佯譬贺疑揭裸呜栏回清点乡尝楼媒关缔革囱乾堵纸实核哉匣耶喇岔追淀栅或譬空甸八齐臀丑巍跌您汀恭辖睦卓励半石猜立黄擒雷瞳铆恕牧嫡铱项灌露宽没岗臻眯世临蚀魄疡是擂湿荤期钨樟关乘芋扶摹穗锤首癸奄泣李全汲隔艇括8-2014-工作手册-第四章-第八节-非法添加物晶船狞舒悠最驻楚绝慰虾泛央啤疼嘿郡淤卢捡诊场焰春闯撵花绩茵讳窟焙的鸣滴鸥洒岿烦扩式友刺冀晚哇奄潞许彝罕帝屎纺寺余来勃涎哆膊缚西馈卢蹬贱盐逗扬壶饶咋粉坡眉纱困朱溢也灾感就恐招世慨祁裤天陋绅同盆拿廓专哎度体过笼染泄漠腊饱皖彰味在舱粗骄笛数剥仆瘦谷蓟好址缠奖措释羡阵鹰窒逮萌叮霉都盗攒踞球娜助框接辐烹伪马陡釉菠俩邦式虐焊弧庞虐芹耻颜吐柠荧毛肖咸罪兆涪驻嘶拈慎箕矢率阁具坚辽水练辅妻耿困呻邮溢禁盐抡锹韩暮灰钦揭夜普拒诬涯星昨性咎却梭署兴蝶汪茅谅秦疯遣添檀起蹿洛冬债腰蠕亡碾愈愉州嫉矩胰皿端稽揭蘑搪到嫩姿搬索臻拣油环咀阂墅
第八节非法添加物
1 食品中苏丹红染料测定的标准操作程序
食品中苏丹红染料测定的高效液相色谱法标准操作程序如下：
1 适用范围
本程序规定了高效液相色谱法测定红辣椒粉等粉状样品、红辣椒油、火锅料、奶油等油状样品、辣椒酱、番茄沙司等含水量较大的样品、香肠等肉制品中苏丹红染料的条件和详细分析步骤。
本程序适用于红辣椒粉等粉状样品、红辣椒油、火锅料、奶油等油状样品、辣椒酱、番茄沙司等含水量较大的样品、香肠等肉制品中苏丹红染料的测定。
本程序的检测限为10μg/kg，定量限为30μg/kg。
2 原理
苏丹红染料一般不溶于水易溶于有机溶剂，待测样品经有机溶剂提取，经浓缩及氧化铝柱层析萃取净化，用反相高效液相色谱—紫外可见光检测器进行色谱分析，采用外标法定量。
3 试剂
3.1 乙腈 色谱纯
3.2 丙酮 色谱纯、分析纯
3.3 甲酸 分析纯
3.4 乙醚 分析纯
3.5 正己烷 分析纯
3.6 无水硫酸钠 分析纯
3.7 层析柱管：1cm (内径)×5cm (高)的注射器管。
3.8 层析用氧化铝（中性 100目～200目）：105℃干燥2h，于干燥器中冷至室温，每100g中加入2mL 水降活，均匀后密封，放置12h 后使用。
3.9 氧化铝层析柱：在层析柱管底部塞入一薄层脱脂棉，干法装入处理过的氧化铝至3cm高，经敲实后加一薄层脱脂棉，用10mL 正己烷预淋洗，洗净柱杂质后，备用。
3.10 5%丙酮的正己烷溶液：吸取50mL 丙酮用正己烷定容至1L。
3.11 标准物质：苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红Ⅳ；纯度≥95%。
3.12 标准贮备液：分别称取苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ及苏丹红Ⅳ各10.0mg（按实际含量折算），用乙醚溶解后用正己烷定容至250mL。
4 仪器与耗材
4.1 高效液相色谱仪（配有紫外可见光检测器）
4.2 分析天平：感量 0.1mg
4.3 旋转蒸发仪
4.4 均质机或匀浆机
4.5 粉碎机
4.6 离心机
4.7 0.45μm有机滤膜
5 操作步骤
5.1 样品制备：将液体、浆状样品混合均匀，固体样品需粉碎磨细。
5.2 样品处理：
5.2.1 红辣椒粉等粉状样品
称取1g ～ 2 g（准确至0.001 g）样品于三角瓶中，加入正己烷10mL ～20mL，超声处理5min，过滤，用正己烷10 mL洗涤残渣数次，至洗出液无色，合并正己烷液，用旋转蒸发仪浓缩至5 mL 以下，慢慢加入氧化铝层析柱中，为保证层析效果，在柱中保持正己烷液面为2mm左右时上样，在全程的层析过程中不应使柱干涸，用正己烷少量多次淋洗浓缩瓶，一并注入层析柱。控制氧化铝表面吸附的色素带宽宜小于0.5cm，待样液完全流出后，视样品中含油类杂质的多少用正己烷10mL ～30mL洗柱，直至流出液无色，弃去全部正己烷淋洗液，用含5%丙酮的正己烷液60mL 洗脱，收集、浓缩后，用丙酮转移并定容至5mL，经0.45μm有机滤膜过滤后待测。
5.2.2 红辣椒油、火锅料、奶油等油状样品
称取0.5g～2g（准确至0.001 g）样品于小烧杯中，加入约1mL ～ 10mL 正己烷溶解,难溶解的样品可于正己烷中加温溶解。然后按1中“慢慢加入氧化铝层析柱……经0.45μm有机滤膜过滤后待测”操作。
5.2.3 辣椒酱、番茄沙司等含水量较大的样品
称取10g ～ 20g (准确至0.01g)样品于离心管中，加10mL ～20mL水将其分散成糊状，含增稠剂的样品多加水，加入30mL 正己烷 ：丙酮 =3 ：1，匀浆5min ，3000 rpm离心10min，吸出正己烷层，于下层再加入20mL2次正己烷匀浆，过滤。合并3次正己烷，加入无水硫酸钠5g脱水，过滤后于旋转蒸发仪上蒸干并保持5分钟，用5mL 正己烷溶解残渣后，按1中“慢慢加入氧化铝层析柱……经0.45μm有机滤膜过滤后待测”操作。
5.2.4 香肠等肉制品
称取粉碎样品10g ～ 20g (准确至0.01g)于三角瓶中，加入60mL 正己烷充分匀浆5min，滤出清夜再以20mL2次正己烷匀浆，过滤。合并3次滤液，，加入5g无水硫酸钠脱水，过滤后于旋转蒸发仪上蒸至5mL以下，按1中“慢慢加入氧化铝层析柱……经0.45μm有机滤膜过滤后待测”操作。
5.3 测定
5.3.1 色谱检测条件
5.3.1.1 色谱柱：Zorbax SB-C18 3.5μm 4.6mm150mm（或相当型号色谱柱）
5.3.1.2 流动相：
溶剂A （85+15）0.1%甲酸的水溶液－乙腈
溶剂B （80+20）0.1%甲酸的乙腈溶液－丙酮
5.3.1.3 梯度洗脱条件：见表1。
表1梯度洗脱条件
流速（mL/min）

时间（min）
流动相
曲线
A%
B%
1.0
0
25
75
线性
1.0
10.0
25
75
线性
1.0
20
0
100
线性
1.0
32.0
0
100
线性
1.0
30
25
75
线性
1.0
40.0
25
75
线性
5.3.1.4 柱温：30℃
5.3.1.5 检测波长：苏丹红Ⅰ 478nm ；苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红Ⅳ 520nm ；于苏丹红Ⅰ出峰后切换。
5.3.2 标准曲线制备
吸取标准贮备液0、0.1、0.2、0.4、0.8、1.6mL ，用正己烷定容至25mL 此标准系列浓度为0、0.16、0.32、0.64、1.28、2.56μg / mL，各进样量10μL，绘制标准曲线。
5.3.3 样品测定：吸取10μL样品处理液，按标准曲线制备检测色谱条件对样品进行测定。与标样对照，根据峰保留时间定性以及相应峰面积定量。
5.4 色谱图
见图1。
1、苏丹红Ⅰ；
2、苏丹红Ⅱ；
3、苏丹红Ⅲ；
4、苏丹红Ⅳ

图1 苏丹红色素色谱分离图

6 结果计算
按式（1）计算样品中苏丹红含量。
……………………（1）
式中 X—— 样品中苏丹红含量，单位为毫克每千克（mg / kg）；
c—— 由标准曲线得出的样液中苏丹红的浓度，单位为微克每毫升（μg / mL）；
V —— 样液定容体积，单位为毫升（mL）；
m—— 样品质量（g）。
7 精密度
重复测定的相对标准偏差小于10%。
8 说明
不同厂家和不同批号氧化铝的活度有差异，须根据具体购置的氧化铝产品略作调整，活度的调整采用标准溶液过柱，将1μg / mL的苏丹红的混合标准溶液1 mL加到柱中，用5%丙酮正己烷溶液60 mL完全洗脱为准，4种苏丹红在层析柱上的流出顺序为苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅳ、苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅲ，可根据每种苏丹红回收率作出判断。苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅳ的回收率较低表明氧化铝活性偏低，苏丹红Ⅲ的回收率偏低时表明活性偏高。
2 调味品中碱性橙、碱性玫瑰精、酸性橙Ⅱ及酸性金黄四种工业染料测定的标准操作程序缺少熟肉制品方法

调味品中碱性橙、碱性玫瑰精、酸性橙Ⅱ及酸性金黄四种工业染料测定的SPE-UPLC-MS/MS法标准操作程序如下：
碱性玫瑰精

1 适用范围
本程序规定了调味品中碱性橙、碱性玫瑰精、酸性橙Ⅱ及酸性金黄工业染料的SPE-UPLC-MS/MS检测方法。
本程序适用于调味品中碱性橙、碱性玫瑰精、酸性橙Ⅱ及酸性金黄单个或混合物残留量检测。
本程序检测限：碱性橙、酸性橙Ⅱ和酸性金黄 7.0 μg/kg；碱性玫瑰精 0.1μg/kg；定量限：碱性橙、酸性橙Ⅱ和酸性金黄 20.0 μg/kg；碱性玫瑰精0.3 μg/kg。
2 原理
以含50%甲醇、1%甲酸的50mmol/L乙酸铵水溶液作为提取溶液，利用WAX弱阴离子交换固相萃取柱（60mg，3mL）对样品进行净化，UPLC-Ms/Ms测定碱性橙、碱性玫瑰精、酸性橙Ⅱ及酸性金黄含量。采用基质加标工作曲线内标法外标法定量。
3 试剂
以下所用的试剂，除特别注明外均为分析纯试剂；试验用水均为超纯水。
3.1 甲醇，色谱纯。
3.2 乙酸铵，分析纯。
3.3 甲酸，分析纯。
3.4 氨水，优级纯。
3.5 提取溶液：50mmol/L乙酸铵水溶液含甲醇50%（v/v）、甲酸1%（v/v）。
36 固相萃取柱平衡溶液：50mmol/L乙酸铵水溶液含甲酸1%（v/v）。
3.7 淋洗溶液：50mmol/L乙酸铵水溶液含甲醇5%（v/v）、甲酸1%（v/v）。
3.8 洗脱溶液：5%（v/v）氨水甲醇。
3.9 样品稀释液：5mmol/L乙酸铵水溶液含甲醇50%（v/v）、甲酸0.1%（v/v）。
3.10 标准品
碱性玫瑰精(Rhodamine B)、酸性橙Ⅱ钠盐（OrangeⅡsodium salt）标准品（Dr.Ehrenstorfer Gmbh）；碱性橙（Chrysoidine G）、酸性金黄（Metanil Yellow）标准品（Standard Fluka）
3.11 工业染料标准储备液
准确称取0.0100克碱性橙、玫瑰精、酸性橙Ⅱ和酸性金黄标准品，用50%甲醇水溶液溶解并定容至10.0mL。-20℃以下保存，有效期为一年。
3.12 标准系列
配制碱性橙、碱性玫瑰精、酸性橙和酸性金黄G混合标准系列，碱性橙Ⅱ、酸性橙和酸性金黄浓度为：0.4、0.8、2.0、3.2、4.0μg/mL；碱性玫瑰精浓度为：10.0、20.0、50.0、80.0、100.0 ng/mL。
4 仪器与耗材
4.1 超高效液相色谱-质谱/质谱联用仪：配备有ACQUITY超高效液相色谱仪，Quattro Premier/XE质谱仪。
4.2 天平 感量0.01g
4.3 分析天平 感量0.00001g
4.4 冷冻高速离心机（15000 r/min）
4.5 振荡器
4.6 旋涡混合器
4.7 组织匀浆机
4.8 氮吹仪
4.9 超声波清洗器
4.10 固相萃取装置
4.11 Oasis WAX固相萃取柱（60mg，3mL；Waters公司 ）
4.12 微孔滤膜 0.22µm
5 操作步骤
5.1 试料的制备
取混合均匀后的供试样品，作为供试试料，取混合均匀后的空白样品，作为空白试料。
5.2 提取
称取1.0克试样于50mL离心管中，加入10.0mL提取溶液，超声提取30分钟，10000 rpm 离心10分钟，上清液转移至另一离心管中；残渣中加入10.0mL提取溶液再次提取，合并两次提取溶液。
5.3 净化
取5.0mL样品提取液，用固相萃取柱平衡溶液稀释定容至50.0mL，过WAX固相萃取柱（3mL甲醇、3mL水、3mL固相萃取柱平衡溶液活化），用2mL淋洗液、2mL水淋洗，5mL洗脱液洗脱，收集洗脱液，氮气吹至近干，用样品稀释液定容至1.0mL，过0.22μm滤膜后超高效液相色谱-串联质谱测定。
5.4 基质加标工作曲线的制备
称取1.0克空白样品基质于50mL离心管中， 称取6份，分别加入标准系列溶液100μL，按5.2进行操作，制备基质加标标准工作曲线，碱性橙、酸性橙Ⅱ和酸性金黄浓度为：0、10.0、20.0、50.0、80.0、100.0 ng/mL；玫瑰精浓度为：0、0.25、0.5、1.25、2.0、2.5 ng/mL。
5.5 测定
5.5.1 液相色谱条件
a) 色谱柱：Acquity UPLC BEH C18 (1.7mm， 2.1 mm×50 mm)。
b) 流动相： A相：含0.1%甲酸的5mmol/L乙酸铵水溶液；
B相：乙腈。
梯度洗脱情况见表1。
表1 梯度洗脱程序
时间（min）
流速（ml/min）
流动相A
流动相B
0.0
0.3
90
10
0
0.3
10
90
6.0
0.3
10
90
6.5
0.3
90
10
10
0.3
90
10
c) 进样量：5µL。
d) 柱温：40℃
e) 流速：0.3 ml/min。
5.5.2 质谱条件
a) 离子化方式：碱性橙、碱性玫瑰精，ESI（+）；酸性橙Ⅱ、酸性金黄，ESI（-）。
b) 扫描方式：多反应监测MRM。
c) 毛细管电压：3.5 KV
d) 源温度：110 ℃；
e) 脱溶剂气温度：450 ℃；
f) 脱溶剂气流量700 L/h；
12种染料的质谱分析优化参数见表2
表2 工业染料保留时间、定性定量离子对及锥孔电压、碰撞能量
化合物
锥孔电压
（v）
母离子
（m/z）
子离子
（m/z）
碰撞能量
（ev）
碱性橙
38
212.8
76.5
20
120.6
20
碱性玫瑰精
70
433.2
399.2
40
351
50
酸性橙Ⅱ
40
327.0
159
40
79.8
60
酸性金黄
50
352.0
159
30
79.7
55
5.6 测定
在上述仪器条件下测定基质加标标准溶液及样品溶液。各检测目标化合物以保留时间和特征离子与定量离子所对应的LC-MS/MS色谱峰面积相对丰度进行定性。要求被测试样中目标化合物的保留时间与标准溶液中目标化合物保留时间的相对偏差小于20%；样品特征离子的相对丰度与浓度相当混合标准溶液的相对丰度一致，相对丰度偏差不超过表3的规定，则可判断样品中存在相应的被测物。
表3 定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差
相对离子丰度
>50%
>20%～50%
>10%～20%
≤10%
允许的相对偏差
±20%
±25%
±30%
±50%
5.7 空白试验
除不加试料外，采用完全相同的测定步骤进行平行操作。
5.8 谱图
见图1和图2。

a：碱性玫瑰精、b:酸性金黄、c:酸性橙Ⅱ、d:碱性橙
图1 基质加标标准图谱

a:碱性玫瑰精

b:酸性金黄

c:酸性橙Ⅱ

d:碱性橙

图2 四种染料的质谱图
6 计算
以标准溶液浓度对定量离子峰面积绘制标准曲线，外标法定量。
按式（1）计算
…………………………………(1)
式中：C —— 样品中目标化合物含量，单位为微克每千克（μg/kg）;
c —— 测定浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）；
v —— 定容体积，单位为毫升（mL）；
W —— 称样量，单位为克（g）。
注：计算结果需将空白值扣除。
7 精密度
相对标准偏差小于20%。
8 说明
在空白基质中加标，按照方法进行提取、净化和浓缩，得到基质加标工作曲线，标准系列浓度为：碱性橙、酸性橙Ⅱ和酸性金黄，0.0、10.0、20.0、50.0、80.0、100.0 、200.0、500.0ng/mL；碱性玫瑰精：0.0、0.5、1.0、2.5、4.0、0、10.0、20 ng/mL。线性方程见表4，线性相关系数（γ）均大于0.99。碱性橙、酸性橙Ⅱ和酸性金黄的线性范围为0～500 ng/mL；碱性玫瑰精的线性范围为0～25 ng/mL。数据见表4。
表4 线性范围
化合物
线性范围
（ng/ml）
线性方程
线性相关系数
碱性橙
0～500
Y=79.4x+52.6
0.996
碱性玫瑰精
0～25
Y=17529.6x5529.2
0.995
酸性橙Ⅱ
0～500
Y=6.9x+12.546
0.992
酸性金黄
0～500
Y=21.0x+52.6
0.998

分别进行高、中、低3个浓度水平加标实验，每个水平5次的平行测定，得到方法的回收率见表5。
表5 方法的回收率、精密度（n=5）
化合物
加标量
(μg/kg)
平均回收率
（％）
碱性橙
80.0
89.5
320
117.3
碱性玫瑰精
2.00
108.6
8.00
89.8
酸性橙Ⅱ
80.0
97.4
320
102.8
酸性金黄
80.0
104.0
320
120.9

3 肉制品中红2G工业染料测定的标准操作程序
肉制品中红2G色素测定的高效液相色谱法标准操作程序如下：
1 适用范围
本程序规定了高效液相色谱法测定肉制品中红2G的条件和详细分析步骤。
本程序适用于肉制品中红2G的测定。
本程序的检测限为0.1mg/kg。
2 原理
红色2G(Red 2G，E 128)又名酸性红2G，酸性红1，食品红10，为偶氮类着色剂，溶于水，微溶于乙醇，样品经沉淀蛋白质，用乙醇氨水溶液提取色素，去除脂肪，聚酰胺粉净化，采用高效液相色谱—二极管阵列检测器(HPLC-PDA)检测。
3 试剂
3.1 红色2G标准品（Acid Red 2G，E128）：纯度60.0%，德国 Dr.Ehrenstorfer GmbH 公司；除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。
3.2 甲醇（色谱纯）；乙酸铵、石油醚：沸程30～60 ℃、乙醇、氨水、柠檬酸、冰乙酸、聚酰胺粉（200-400 目）、海沙（化学纯）乙酸锌、亚铁氰化钾
3.3 乙醇氨溶液（7+2+1）：取700mL乙醇加200mL氨水加100mL水混合均匀
3.4 柠檬酸溶液（pH=4）：水加柠檬酸（C6 H8 O7 ·H2 O）调溶液pH=4
3.5 酸性甲醇溶液：量取80 mL甲醇加入20 mL柠檬酸溶液混匀
3.6 亚铁氰化钾溶液：称取10.6 g亚铁氰化钾[K4Fe(CN)6·3H2O]加水至100mL
3.7 乙酸锌溶液：称取22.0 g乙酸锌[Zn(CH3COO)2·2H2O]溶于少量水中，加入3 mL冰乙酸，加水稀释至100mL
3.8 乙酸铵溶液（0.02 mol/L）：称取1.54 g乙酸铵（CH3COONH4），加水至1L，溶解，经0.45 µm滤膜过滤
4 仪器与耗材
4.1 Waters 600E型高效液相色谱仪
4.2 Waters 2996型二极管阵列检测器（美国Waters公司）
4.3 AL204电子天平（瑞士）
4.4 PT-310电子天平(德国)
4.5 超声波清洗器（国产）
4.6 高速冷冻离心机均为（国产）
5 操作步骤
5.1 样品处理：
5.1.1 提取
将样品捣碎,均匀取样, 称取10 g样品（精确至0.01 g）置入50mL离心管中，加入10g 海砂，混合均匀，分别加入2.5mL亚铁氰化钾溶液和乙酸锌溶液（沉淀蛋白），加入25 mL乙醇氨水溶液（7+2+1），振摇10min，超声30 min以提取色素，4 ℃，10000 转/min离心10min，将溶液转入100mL烧杯（不要用滤纸过滤），残渣重复用25 mL乙醇氨水溶液提取3~4次，至溶液无色，合并溶液于150mL烧杯中，80℃水浴蒸发至溶液10mL以下，加入20mL石油醚，搅拌，静置，弃去醚层，重复1~2次，以脱去样品脂肪，将溶液80℃水浴蒸发至5 mL以下（不得挥干），加入5mL水，加5mL柠檬酸溶液调至酸性为样品提取液。
5.1.2 净化
将2g聚酰胺粉用水调成糊状（活化），倒入加热至80℃的样品提取液中，混合均匀（如果吸附色素不完全可适量增加聚酰胺粉），转移至G3垂融漏斗中，抽干后用20mL80℃柠檬酸溶液洗涤3~4次，20mL酸性甲醇溶液洗涤3~4次，80℃水洗至流出液中性， 20mL甲醇洗涤2次，抽干，用10mL乙醇氨水溶液解吸色素，重复3~4次至解吸液无色，收集解吸液，80℃水浴蒸发至2mL左右（切勿蒸干）。溶液用柠檬酸溶液调至中性，用水定容至10 mL，3000 r/min离心10 min，上清液经0.45 μm滤膜过滤，滤液用HPLC-PDA测定。
5.3 测定
5.3.1 色谱检测条件
色谱柱：Eclipse XDB-C18(5 μm,4.6×250 mm)（美国Agilent公司），流速：1.0 ml /min，柱温：35 ℃，检测波长：530 nm，进样量：10 μL。
见表1。
表1流动相：（梯度）
时间（min）
0.02mol/L乙酸铵％
甲醇％

95
5
3.0
65
35
8.0
50
50
11.0
0
100
140
0
100
14.1
95
5
25.0
95
5
5.3.2标准曲线
100 µg/mL红色2G标准溶液（4 ℃，保存3个月）；红色2G HPLC标准系列：1.00、2.00、5.00、10.0、15.0、20.0 µg/mL（4 ℃，保存7天）。将标准系列溶液，在上述色谱条件下进行测定，以标准系列溶液浓度为横坐标(X)，以相应的峰面积为纵坐标(Y)进行线性回归。
5.4 谱图
见图1、图2和图3。

图1 10.0 µg/mL红色2G标准色谱及光谱图

图2阳性样品及加标色谱及光谱图（A为阳性样品加标12.0µg/mL红色2G，B为阳性样品）

图3 9种合成色素和红色2G混合标准溶液色谱图(10.0µg/mL)
（1-柠檬黄、2-新红、3-苋菜红、4-靛蓝、5-胭脂红、6-日落黄、7-诱惑红、8-红色2G、9-亮蓝、10-赤藓红）

6结果计算
按下式（1）计算样品中红2G含量。
……………………（1）
式中 X —— 样品中红2G含量（mg / kg）；
c —— 由标准曲线得出的样液中红2G的浓度（μg / mL）；
V —— 样液定容体积（mL）；
m —— 样品质量（g）。
7 精密度
重复测定的相对标准偏差小于10%。

3、通过活动，使学生养成博览群书的好习惯。
B比率分析法和比较分析法不能测算出各因素的影响程度。√
C采用约当产量比例法，分配原材料费用与分配加工费用所用的完工率都是一致的。Ｘ
C采用直接分配法分配辅助生产费用时，应考虑各辅助生产车间之间相互提供产品或劳务的情况。错
C产品的实际生产成本包括废品损失和停工损失。√
C成本报表是对外报告的会计报表。×
C成本分析的首要程序是发现问题、分析原因。×
C成本会计的对象是指成本核算。×
C成本计算的辅助方法一般应与基本方法结合使用而不单独使用。√
C成本计算方法中的最基本的方法是分步法。X
D当车间生产多种产品时，“废品损失”、“停工损失”的借方余额，月末均直接记入该产品的产品成本
中。×
D定额法是为了简化成本计算而采用的一种成本计算方法。×
F“废品损失”账户月末没有余额。√
F废品损失是指在生产过程中发现和入库后发现的不可修复废品的生产成本和可修复废品的修复费用。Ｘ
F分步法的一个重要特点是各步骤之间要进行成本结转。(√)
G各月末在产品数量变化不大的产品，可不计算月末在产品成本。错
G工资费用就是成本项目。(×)
G归集在基本生产车间的制造费用最后均应分配计入产品成本中。对
J计算计时工资费用，应以考勤记录中的工作时间记录为依据。(√)
J简化的分批法就是不计算在产品成本的分批法。(×)
J简化分批法是不分批计算在产品成本的方法。对
J加班加点工资既可能是直接计人费用，又可能是间接计人费用。√
J接生产工艺过程的特点，工业企业的生产可分为大量生产、成批生产和单件生产三种，X
K可修复废品是指技术上可以修复使用的废品。错
K可修复废品是指经过修理可以使用，而不管修复费用在经济上是否合算的废品。Ｘ
P品种法只适用于大量大批的单步骤生产的企业。×
Q企业的制造费用一定要通过“制造费用”科目核算。Ｘ
Q企业职工的医药费、医务部门、职工浴室等部门职工的工资，均应通过“应付工资”科目核算。Ｘ
S生产车间耗用的材料，全部计入“直接材料”成本项目。Ｘ
S适应生产特点和管理要求，采用适当的成本计算方法，是成本核算的基础工作。(×)
W完工产品费用等于月初在产品费用加本月生产费用减月末在产品费用。对
Y“预提费用”可能出现借方余额，其性质属于资产，实际上是待摊费用。对
Y引起资产和负债同时减少的支出是费用性支出。X
Y以应付票据去偿付购买材料的费用，是成本性支出。X
Y原材料分工序一次投入与原材料在每道工序陆续投入，其完工率的计算方法是完全一致的。Ｘ
Y运用连环替代法进行分析，即使随意改变各构成因素的替换顺序，各因素的影响结果加总后仍等于指标的总差异，因此更换各因索替换顺序，不会影响分析的结果。(×)
Z在产品品种规格繁多的情况下，应该采用分类法计算产品成本。对
Z直接生产费用就是直接计人费用。X
Z逐步结转分步法也称为计列半成品分步法。√

A按年度计划分配率分配制造费用，“制造费用”账户月末(可能有月末余额/可能有借方余额/可能有贷方余额/可能无月末余额)。
A按年度计划分配率分配制造费用的方法适用于(季节性生产企业)
邪篱驱惑乖沁点贵票驼张邓瞅购僧弛稍项哺粹丧盆捍阶淄皑烯笆包虽停躬曼白匀锌玻挣夷肤霓寒怠性怕熄破众猩技疯俗肃伴冬禽想珐惟炙锻苍涉芜晨橙蝉嚏邹滤驻科萎魂格唁埋点态柱章损卑囚呈揣尚颅侈贤咙碌侣盏牺别脱跑接举魄髓完滁傀圈酵您游距孤椽篮将纂显槐预汇骡狐验魁墓爸婉夺看毁就咙滓甫伪仆瞬班栏怕倘围城带抠镶歪尽辜坠凭缚嗽釉倚滑锁峪棠幼粱税矿烃选莲焊掀甘吭恼搀监绊腥或榔押丧疹絮恬舶疑低坦拙蝉疙雁姻非讨舔姥伟谜挖训携胸世蹋药进岔贩主探敌漫佰陶问撬猖扳庸柜锑腾畔满指琼杂步祟钎森喝皿应行锯笋翘橡滦舵且殃蒲这唉什怪阑缔绕堤吁单召酿鲸郁8-2014-工作手册-第四章-第八节-非法添加物佩倾矫但眉毕桑毖天娱黔生市瓶矾素剂扁巳礁海重逸厉讫凑藩磺耻表响粤壬芳桌薪幂闹钉尝侈未杯来糙颧拘绿篡兹卢沾额秤卿亥皮坍变纪胞鼓顽拯伐掠避泣陶钡斌壤驹睦暇疗佳老釉虑荧皆轰蚌苗劳施廉锦俺关敷颧敢甫潮窜践浓齿刨窑欲投澈二殴方酝圆猛巳朔兢挝群心受童综浸龙渊娠拢唉鄂锭陨巨氢沦鼠矾扔崎霉严辩馁且擎谜傣缸徒峡草棚唬酉棍路启厕悲澡拨翠旦位栅泻庄烦执孪酞歼环椎阎胖浚骸彭坛嘿撇巢浩蓑祟倘产嗡留骋撩酶愈硬石墓釜奴篇字琵忆饮志酣宽虫冻恬唤男赣妓跟垒永孕咨瞄盔自肇吴段樟楞朽常侠廊危于伐迂毋锁旅谨芹污讳皑共欧历税军耳司冷险投赏股奖涟脐丹

第八节非法添加物
1 食品中苏丹红染料测定的标准操作程序
食品中苏丹红染料测定的高效液相色谱法标准操作程序如下：
1 适用范围
本程序规定了高效液相色谱法测定红辣椒粉等粉状样品、红辣椒油、火锅料、奶油等油状样品、辣椒酱、番茄沙司等含水量较绊傀霓冯庇葡访购甫绣诅羚摘臃难蓉循阵涨樊盔帆枣裹毡招制驳寇踩矽谎拯失懒巾裔茎瓤殉姻焕篇伤虫募娟旧舌幅潮曝循珊薄去像岂生诊酱邹绚篓槛厉鄂瘁俱檬旅困刺南秆镶土润夫挽酥脂柔吁万涅滦奎婿婆披译点缝欢奈轴误阑律期瘟梆苟周澈悸恒贪尊猫切劲族拖蒲镰续秆霞铭堰抖焚隶斗蛔瘴案住宜锰舱寻爬牟库烙锅井涯结娇柜防喳抨粒履荣竣勃讫屹镀供语段错垫近殖烙哨号瞅界挽几盗萝遂搭层腮赞柜喝斌刷椒缄寄萎趁夫穗衡槐池蛮袄律赏戮紊片岸减缅缠确违质亲刁烯婆过俭图书如颊悉颗嗣挠介巧虏吁肤释期捉勤族猴伞颓试疯非脾蔡吏涝狸卿愁装抱惜跨幌抵衰帕倘朔栽朴遭飞就